---
title: "<Письмо> Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.10.2001 N 291-22/144"
number: "291-22/144"
issued_on: 2001-10-29
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/pismo-291-22144"
---

## <Письмо> Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.10.2001 N 291-22/144

# <Письмо> Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.10.2001 N 291-22/144

<Об изменении к Государственной фармакопеи XI издания>

(вместе с "Изменением N 2 к статье Государственной фармакопеи XI издания "Методы микробиологического контроля лекарственных средств" (ГФ ХI, вып. 2, С. 187)")

> [!IMPORTANT]
> По вопросу применения данного документа см. [Письмо](https://bukva.ai/docs/pismo-294-101282) Минздрава РФ от 28.05.2002 N 294-10/1282.
> Изменение N 2 [вступило](#p100017) в силу с 1 января 2002 года.


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ДЕПАРТАМЕНТ ГОСУДАРСТВЕННОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА,**
**ЭФФЕКТИВНОСТИ, БЕЗОПАСНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ И**
**МЕДИЦИНСКОЙ ТЕХНИКИ**


## <a id="p100003"></a>ПИСЬМО

<a id="p100004"></a>от 29 октября 2001 г. N 291-22/144

<a id="p100007"></a>Департамент государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств и медицинской техники направляет к сведению и руководству [изменение N 2](#p100015) к статье Государственной фармакопеи XI издания "Методы микробиологического контроля лекарственных средств" (ГФ ХI, вып. 2, с. 187) и просит предусмотреть с 1 января 2002 года разделы "Микробиологическая чистота" и "Стерильность" в стандартах качества лекарственных средств, направляемых на регистрацию (перерегистрацию), в соответствии с указанным изменением.

<a id="p100011"></a>Заместитель руководителя Департамента
**Д.В.РЕЙХАРТ**





<a id="p100012"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100013"></a>**ФАРМАКОПЕЙНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ**

<a id="p100014"></a>Утверждаю
Заместитель руководителя Департамента
государственного контроля качества,
эффективности, безопасности
лекарственных средств и
медицинской техники
**Д.В.РЕЙХАРТ**


## <a id="p100015"></a>ИЗМЕНЕНИЕ N 2 К СТАТЬЕ ГОСФАРМАКОПЕИ XI ИЗДАНИЯ "МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ"

(ГФ ХI, вып. 2, с. 187)

<a id="p100017"></a>Срок введения Изменения с 01.01.2002 г.

<a id="p100018"></a>**РАЗДЕЛ 1**
**ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ**
**ЧИСТОТЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, СУБСТАНЦИЙ**
**И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ**

<a id="p100019"></a>Таблица 1

<a id="p100020"></a>**МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ**


<table>
<colgroup><col width="17%"><col width="43%"><col width="40%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100022"></a>Категория</td><td>Применение</td><td>Рекомендуемые нормы для Госфармакопеи XII издания</td></tr>
<tr><td><a id="p100025"></a>1</td><td>2</td><td>3</td></tr>
<tr><td><a id="p100027"></a>1.</td><td>- Для парентерального введения<br>- Глазные лекарственные средства<br>- Для нанесения на открытые раны и ожоги<br>- Другие лекарственные средства, к которым предъявляется требование "стерильность"</td><td>Стерильность</td></tr>
<tr><td><a id="p100038"></a>2.</td><td>- Для применения местно, трансдермально<br>- Для применения интравагинально<br>- Для введения в полости уха, носа<br>- Для введения в дыхательные пути (за исключением тех лекарственных средств, которые должны быть стерильными)</td><td>- Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) - не более 102 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100054"></a>3.</td><td>Для приема внутрь или введения ректально<br>А. Лекарственные средства из субстанций синтетического происхождения</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 103 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее число грибов - не более 102 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td>Б. Лекарственные средства из субстанций природного происхождения (растительного, животного или минерального), за исключением лекарственных средств, включенных в Категорию 4</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 104 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее, число грибов - не более 102 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл<br>- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл<br>- Энтеробактерий - не более 102 в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td>В. Детские лекарственные средства</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 500 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее число грибов - не более 50 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100105"></a>4.</td><td>Лекарственные средства, состоящие из одного вида сырья (фасованная продукция) или нескольких (сборы), а также растительное сырье "ангро"</td><td></td></tr>
<tr><td>А. Лекарственные растительные средства или лекарственное сырье "ангро", применяемые в виде настоев и отваров, приготовленные с использованием термической обработки</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 107 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее число грибов - не более 105 в 1 г или в 1 мл<br>- Escherichia coli - не более 102 в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td>Б. Лекарственные растительные средства или растительное сырье "ангро", применяемые без термической обработки</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 105 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее число грибов - не более 104 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Escherichia coli - в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл<br>- Энтеробактерий - не более 103 в 1 г или в 1 мл</td></tr>
</table>


<a id="p100142"></a>Таблица 2

<a id="p100143"></a>**МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА**
**СУБСТАНЦИЙ И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ**
**ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ**


<table>
<colgroup><col width="17%"><col width="43%"><col width="40%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100145"></a>Категория</td><td>Применение</td><td>Рекомендуемые нормы для Госфармакопеи XII издания</td></tr>
<tr><td><a id="p100148"></a>1</td><td>2</td><td>3</td></tr>
<tr><td rowspan="4"><a id="p100150"></a>1.2.</td><td>Субстанции для производства:</td><td></td></tr>
<tr><td>- Стерильных лекарственных, средств</td><td rowspan="2">- Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) не более 102 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td>- Нестерильных лекарственных средств, относящихся к Категории 2</td></tr>
<tr><td>- Нестерильных лекарственных средств, относящихся к Категории 3 В</td><td>- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td><a id="p100170"></a>2.2.</td><td>Субстанции синтетического происхождения для производства нестерильных лекарственных средств</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 103 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее число грибов - не более 102 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Escherichia coli - в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td><a id="p100181"></a>3.2.</td><td>Субстанции природного происхождения (растительного, животного или минерального)</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 104 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее число грибов - не более 102 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Escherichia coli - в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл<br>- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл<br>- Энтеробактерий - не более 102 в 1 г или в 1 мл</td></tr>
<tr><td><a id="p100204"></a>4.2.</td><td>Вспомогательные материалы (мука пшеничная, крахмал, тальк и т.д.)</td><td>- Общее число аэробных бактерий не более 103 в 1 г или в 1 мл<br>- Общее число грибов - не более 102 в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Escherichia coli - в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл<br>- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл<br>- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл<br>- Энтеробактерий - не более 102 в 1 г или в 1 мл</td></tr>
</table>


<a id="p100228"></a>Примечания к [таблицам 1](#p100020) и [2](#p100143):
- <a id="p100229"></a>В фармакопейных статьях предприятия (ФСП) могут быть указаны в виде исключения и другие нормативы
- <a id="p100230"></a>При обнаружении других патогенных бактерий, кроме указанных выше, считают, что качество лекарственных средств, субстанций и вспомогательного материала не соответствует требованиям по показателю "Микробиологическая чистота"

<a id="p100231"></a>**РАЗДЕЛ 2**
ИСПЫТАНИЕ НА Enterobacteriaceae

<a id="p100232"></a>Дополнение к разделу: "Выявление и идентификация семейства Enterobacteriaceae" общей ФС "Испытание на микробиологическую чистоту" ГФXI издания, выпуск 2, стр. 197 - 198.


#### <a id="p100233"></a>2.1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ЗА ИСКЛЮЧЕНИЕМ Escherichia coli и Salmonella


<a id="p100235"></a>10 г или 10 мл испытуемого образца помещают в 100 мл среды N 11, гомогенизируют и инкубируют при температуре 32.5 +/- 2.5 град. C в течение, как правило, двух часов, но не более пяти. В случае, если лекарственное средство - суппозитории или растворы в маслах, в среду N 11 добавляют стерильный Твин-80 в количестве не более 5% и стеклянные бусы для эмульгирования.
<a id="p100236"></a>Гомогенат перемешивают и готовят разведения 1:10 и 1:100, используя для этого среду N 3. В три пробирки с 10 мл среды N 3 вносят 1 мл гомогената в первую, 1 мл разведения 1:10 во вторую и 1 мл разведения 1:100 в третью, то есть соответственно 0.1 г, 0.01 г, 0.001 г образца. Посевы инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 24 - 48 ч. При наличии роста делают пересев петлей на плотную среду N 4 (агар Эндо) и инкубируют чашки Петри при той же температуре в течение 18 - 24 ч. В случае появления характерных для Enterobacteriaceae колоний грамотрицательных палочек определяют количество энтеробактерий в 1 г или в 1 мл образца по Таблице 3.

<a id="p100237"></a>Таблица 3

<a id="p100238"></a>**КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ**


<table>
<colgroup><col width="16%"><col width="25%"><col width="25%"><col width="34%"></colgroup>
<tr><td colspan="3"><a id="p100240"></a>Количество испытуемого образца</td><td>Вероятное количество бактерий в 1 г (мл)</td></tr>
<tr><td><a id="p100243"></a>0.1 г (мл)</td><td>0.01 г (мл)</td><td>0.001 г (мл)</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100245"></a>1 мл гомогената</td><td>1 мл гомогената<br>в разведении 1:10</td><td>1 мл гомогената<br>в разведении 1:100</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100249"></a>+</td><td>+</td><td>+</td><td>Более 1000</td></tr>
<tr><td><a id="p100251"></a>+</td><td>+</td><td>-</td><td>От 100 до 1000</td></tr>
<tr><td><a id="p100253"></a>+</td><td>-</td><td>-</td><td>От 10 до 100</td></tr>
<tr><td><a id="p100255"></a>-</td><td>-</td><td>-</td><td>Менее 10</td></tr>
</table>



<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="18%"><col width="60%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100257"></a>Обозначения:</td><td>+</td><td>- наличие роста бактерий</td></tr>
<tr><td>-</td><td>- отсутствие роста бактерий</td></tr>
</table>


<a id="p100259"></a>Количество клеток E.coli в 1 г (мл) исследуемого лекарственного средства определяют, пользуясь также данной таблицей.


#### <a id="p100260"></a>2.2. ИСПЫТАНИЕ НА НАЛИЧИЕ Escherichia coli и Salmonella


<a id="p100261"></a>10 г (мл) образца лекарственного средства вносят в 100 мл питательной среды N 11 (лактозный бульон). В случае, если лекарственное средство - жидкость, количество среды уменьшают до 90 мл. Инкубируют при температуре (32.5+2.5) град. С в течение 2 - 5 ч. 10 мл среды N 11 переносят в 100 мл среды N 3, перемешивают и инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 18 - 24 ч. При отсутствии роста на среде N 3 (среда прозрачная, цвет не изменился) считают, что в лекарственном средстве не содержатся бактерии сем. Enterobacteriaceae. При наличии роста испытания продолжают.


##### <a id="p100262"></a>2.2.1 ИСПЫТАНИЕ НА E.coli


<a id="p100263"></a>Со среды N 3 делают пересев петлей на среду N 4 (агар Эндо) и инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. C в течение 18 - 24 ч. На среде N 4 E.coli образуют, как правило, характерные малиновые колонии с металлическим блеском или без него, диаметром 2 - 4 мм. Подозрительные на принадлежность к E.coli колонии микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отсевают на скошенную в пробирках среду N 1 и инкубируют при температуре (32,5 +/- 2.5) град. С в течение 18 - 24 ч. Из пробирок с чистой культурой делают пересевы на среды N 14 (агар Симмонса) и N 15 (бульон Хоттингера), а также используют для теста на цитохромоксидазу. Через 18 - 24 ч инкубации при (32,5 +/- 2.5) град. С отмечают бактериальный рост или его отсутствие на средах N 14 и N 15. Утилизацию цитрата устанавливают по изменению цвета среды N 14 из зеленого в синий. Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности среды N 15 при добавлении реактива Ковача или Эрлиха.
<a id="p100264"></a>Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не утилизирующие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминировано Escherichia coli.


##### <a id="p100265"></a>2.2.2 ИСПЫТАНИЕ НА ВИДЫ Salmonella


<a id="p100266"></a>1 мл обогащенной культуры на среде N 3 вносят в пробирку с 10 мл среды N 12 (селенитовая среда) и инкубируют при (32,5 +/- 2,5) град. С в течение 16 - 18 ч. Делают пересев петлей на среду N 5 (висмут-сульфит агар) и инкубируют при температуре (32,5 +/- 2.5) град. С в течение 24 - 48 часов. На среде N 5 Salmonella образует, как правило, типичные черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом участок среды под колонией прокрашивается в черный цвет. Подозрительные на принадлежность к Salmonella колонии микроскопируют и при обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отсевают на среду N 13 (трехсахарный агар с солями железа), нанося большое количество культуры петлей сначала на скошенную часть агара, а потом уколом в столбик. Параллельно ставят тест на цитохромоксидазу, используя чистую культуру со среды N 1. Через 18 - 24 часа инкубации при (32,5 +/- 2.5) град. С отмечают изменение цвета среды из красного в желтый только в столбике питательной среды. Почернение среды свидетельствует об образовании сероводорода - типичном признаке видов Salmonella.
<a id="p100267"></a>Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не ферментирующие сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано Salmonella.


#### <a id="p100268"></a>2.3 ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ [<*>](#p100310) И РЕАКТИВЫ



<table>
<colgroup><col width="4%"><col width="37%"><col width="10%"><col width="5%"><col width="44%"></colgroup>
<tr><td colspan="5"><a id="p100269"></a>1. Среда N 11 (лактозный бульон) - для предварительного обогащения энтеробактерий</td></tr>
<tr><td rowspan="6"></td><td colspan="4">Состав:</td></tr>
<tr><td colspan="2">Пептон ферментативный сухой</td><td>-</td><td>8 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Лактоза</td><td>-</td><td>5 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Вода дистиллированная</td><td>-</td><td>1000 мл</td></tr>
<tr><td colspan="4">____________________________________________________________</td></tr>
<tr><td>рН после стерилизации</td><td colspan="3">6,9 +/- 0,1</td></tr>
</table>


2. <a id="p100277"></a>Среда N 12 (селенитовая среда сухая) - для накопления и выделения сальмонелл.

<a id="p100278"></a>Готовят согласно прописи на этикетке.


<table>
<colgroup><col width="4%"><col width="48%"><col width="5%"><col width="44%"></colgroup>
<tr><td colspan="4"><a id="p100279"></a>3. Среда N 13 (трехсахарный агар с солями железа) - для выявления сероводорода</td></tr>
<tr><td rowspan="13"></td><td colspan="3">Состав:</td></tr>
<tr><td>Мясной экстракт</td><td>-</td><td>3 г</td></tr>
<tr><td>Дрожжевой экстракт</td><td>-</td><td>3 г</td></tr>
<tr><td>Пептон</td><td>-</td><td>20 г</td></tr>
<tr><td>Лактоза</td><td>-</td><td>10 г</td></tr>
<tr><td>Сахароза</td><td>-</td><td>10 г</td></tr>
<tr><td>Глюкоза</td><td>-</td><td>1 г</td></tr>
<tr><td>Железа сульфат</td><td>-</td><td>0,2 г</td></tr>
<tr><td>Натрия хлорид</td><td>-</td><td>5 г</td></tr>
<tr><td>Натрия тиосульфат</td><td>-</td><td>0,3 г</td></tr>
<tr><td>Феноловый красный</td><td>-</td><td>0,024 г</td></tr>
<tr><td>Агар</td><td>-</td><td>15 г</td></tr>
<tr><td>Вода дистиллированная</td><td>-</td><td>1000 мл</td></tr>
</table>

<a id="p100294"></a>______________________________________________________________
<a id="p100295"></a>Рн после стерилизации 7.3 +/- 0.2. Разливают в пробирки по 5 - 7 мл. Стерилизуют при 121 град. С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2 - 2,5 см.


<table>
<colgroup><col width="5%"><col width="38%"><col width="9%"><col width="5%"><col width="44%"></colgroup>
<tr><td colspan="5"><a id="p100296"></a>4. Среда N 14 (цитратный агар Симмонса)</td></tr>
<tr><td rowspan="11"></td><td colspan="4">Состав:</td></tr>
<tr><td colspan="2">Натрия хлорид</td><td>-</td><td>5 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Магния сульфат</td><td>-</td><td>0,2 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Аммония дигидрофосфат</td><td>-</td><td>1 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Калия гидрофосфат</td><td>-</td><td>1 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Натрия цитрат</td><td>-</td><td>3 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Бромтимоловый синий</td><td>-</td><td>0,08 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Агар</td><td>-</td><td>20 г</td></tr>
<tr><td colspan="2">Вода дистиллированная</td><td>-</td><td>1000 мл</td></tr>
<tr><td colspan="4">____________________________________________________________</td></tr>
<tr><td>рН после стерилизации</td><td colspan="3">7,2 +/- 0.1</td></tr>
</table>


<a id="p100308"></a>Приготовление: агар расплавляют при нагревании в свежеприготовленной дистиллированной воде. Все соли сначала растворяют в небольшом объеме воды, затем раствор добавляют к расплавленному агару и доводят водой до 1000 мл. Устанавливают рН, добавляют индикатор в виде 0,2% водного раствора в объеме 40 мл, хорошо перемешивают и разливают в пробирки по 5 - 7 мл. Стерилизуют при 121 град. С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2 - 2,5 см.

5. <a id="p100309"></a>Среда N 15 (бульон Хоттингера) - для определения индола.

<a id="p100310"></a>Примечание: <*> - для испытания на микробиологическую чистоту можно использовать аналогичные сухие питательные среды отечественных и зарубежных производителей после их валидации.

<a id="p100311"></a>Тест на индол

<a id="p100312"></a>В пробирку со средой N 15, в которой выросла исследуемая культура, вносят 0,5 мл реактива Ковача или Эрлиха и слегка встряхивают. При наличии индола наблюдают появление красного кольца на поверхности среды в пробирке.


<table>
<colgroup><col width="5%"><col width="53%"><col width="6%"><col width="36%"></colgroup>
<tr><td colspan="4"><a id="p100313"></a>Реактив Ковача:</td></tr>
<tr><td rowspan="3"></td><td>Спирт амиловый или изоамиловый</td><td>-</td><td>75 мл</td></tr>
<tr><td>Пара-диметиламинобензальдегид</td><td>-</td><td>5 г</td></tr>
<tr><td>Кислота хлористоводородная, конц.</td><td>-</td><td>20 мл</td></tr>
</table>


<a id="p100317"></a>Навеску альдегида растворяют в спирте при легком нагревании (в водяной бане при 50 - 55 град. С), остужают и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном от света месте. Реактив должен быть желтого цвета.


<table>
<colgroup><col width="5%"><col width="58%"><col width="6%"><col width="30%"></colgroup>
<tr><td colspan="4"><a id="p100318"></a>Реактив Эрлиха:</td></tr>
<tr><td rowspan="3"></td><td>Спирт этиловый 96%</td><td>-</td><td>95 мл</td></tr>
<tr><td>Пара-диметиламинобензальдегид</td><td>-</td><td>1 г</td></tr>
<tr><td>Кислота хлористоводородная, конц.</td><td>-</td><td>20 мл</td></tr>
</table>


<a id="p100322"></a>Навеску альдегида растворяют в спирте и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном от света месте.

<a id="p100323"></a>**РАЗДЕЛ 3**
**ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕСТЕРИЛЬНЫХ**
**ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ**

<a id="p100324"></a>Лекарственные средства, обладающие антимикробным действием, могут подавлять рост отдельных видов бактерий и грибов. Если исследуемое лекарственное средство оказывает ингибирующее действие на микроорганизмы, которые выявляют в нестерильных лекарственных средствах, необходимо адекватно инактивировать его во избежание неправильной оценки результатов испытания на микробиологическую чистоту. Определение антимикробного действия нестерильных лекарственных средств проводят с использованием тест-микроорганизмов, полученных из Государственных коллекций.


#### <a id="p100325"></a>3.1. ПОДГОТОВКА ТЕСТ-ШТАММОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕСТЕРИЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ



<table>
<colgroup><col width="39%"><col width="61%"></colgroup>
<tr><td colspan="2">1. Тест-микроорганизмы</td></tr>
<tr><td>Bacillus cereus</td><td>ATCC1 10702 (NCTC2 8035)</td></tr>
<tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC 25922</td></tr>
<tr><td>Pseudomonas aeruginosa</td><td>ГИСК4 453</td></tr>
<tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC 6538-P (FDA3 209-P)</td></tr>
<tr><td>Candida albicans</td><td>ATCC 885-653</td></tr>
<tr><td>Aspergillus niger</td><td>BKM5 F-1119</td></tr>
<tr><td colspan="2">______________________________________________________________</td></tr>
<tr><td colspan="2">ATCC1 - Американская коллекция типовых культур</td></tr>
<tr><td colspan="2">NCTC2 - Национальная коллекция типовых культур, Великобритания</td></tr>
<tr><td colspan="2">FDA3 - Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств, США</td></tr>
<tr><td colspan="2">ГИСК4 - Всероссийский музей патогенных бактерий (ГИСК им. Л.А. Тарасевича), Россия</td></tr>
<tr><td colspan="2">BKM5 - Всероссийская коллекция микроорганизмов РАН, Россия</td></tr>
</table>


<a id="p100352"></a>Тест-штаммы В. cereus, E. coli, P. aeruginosa, S. aureus получают из Государственной Коллекции патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Штамм C.albicans получают из Российского Микологического Центра (г. Санкт-Петербург), штамм A.niger - из ВКМ - Всероссийской Коллекции микроорганизмов РАН (г. Москва). Культуры тест-микроорганизмов могут быть получены также из ВКПМ - Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов. Используемые тест-штаммы должны быть типичными по культурально-морфологическим и биохимическим свойствам.


<table>
<colgroup><col width="4%"><col width="38%"><col width="29%"><col width="17%"><col width="13%"></colgroup>
<tr><td colspan="5"><a id="p100353"></a>Тест-штаммы бактерий хранят при температуре (5 +/- 1) град. С в лиофилизированном состоянии или под слоем стерильного вазелинового масла на среде Романова следующего состава:</td></tr>
<tr><td rowspan="6"></td><td colspan="2">Панкреатический гидролизат казеина</td><td>8.0 г</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Натрия хлорид</td><td>5.0 г</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Агар</td><td>10.0 г</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Вода дистиллированная</td><td>1000.0 г</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="4">______________________________________________________________</td></tr>
<tr><td>рН после стерилизации</td><td colspan="3">7.1 +/- 0.1</td></tr>
</table>


<a id="p100362"></a>Тест-культуру C.albicans хранят под слоем вазелинового масла на среде N 2 (агар Сабуро), в которой количество агара уменьшено до 1%. Тест-культуру A.niger хранят на среде N 2 (агар Сабуро) (Госфармакопея, вып. 2, с. 200), делая пересевы через каждые 3 месяца. Лиофилизированную культуру тест-штамма из ампулы или культуру со среды хранения переносят в пробирки с питательным бульоном: среда N 8 для бактерий, жидкая среда Сабуро - для C.albicans. Посевы на среде N 8 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течении 18 - 24 ч, посевы на жидкой среде Сабуро - при температуре (22.5 +/- 2.5) град. С в течение 48 ч - для C.albicans. Посевы A.niger на среде N 2 инкубируют при температуре (22.5 +/- 2.5) град. С до появления черных или темно-коричневых экзогенных спор (конидий) в течении 5 - 7 сут.
<a id="p100363"></a>Перед определением антимикробного действия нестерильных лекарственных средств культуры тест-штаммов бактерий отсевают на среду N 8 (питательный бульон) и инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 18 - 24 ч.
<a id="p100364"></a>Культуры грибов выращивают заранее: C.albicans - на жидкой среде Сабуро за 48 ч, а A.niger - на среде N 2 за 5 - 7 сут до начала определения.


#### <a id="p100365"></a>3.2. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РАСТВОРЫ

(Государственная фармакопея XI издания, выпуск 2, с. 193, 201, 208 - 209)


<table>
<colgroup><col width="5%"><col width="36%"><col width="4%"><col width="54%"></colgroup>
<tr><td rowspan="6"></td><td>Среда N 8</td><td>-</td><td>для выращивания бактерий.</td></tr>
<tr><td>Жидкая среда Сабуро</td><td>-</td><td>для выращивания Candida albicans.</td></tr>
<tr><td>Среда N 2 (агар Сабуро)</td><td>-</td><td>для выращивания Aspergillus niger.</td></tr>
<tr><td>Среды NN 3 - 5</td><td>-</td><td>для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae.</td></tr>
<tr><td>Среда N 9</td><td>-</td><td>для идентификации Pseudomonas aeruginosa.</td></tr>
<tr><td>Среда N 10</td><td>-</td><td>для идентификации Staphylococcus aureus.</td></tr>
</table>


<a id="p100377"></a>Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном, рН 7.0


#### <a id="p100378"></a>3.3. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ


<a id="p100379"></a>Готовят разведения лекарственного средства 1:10, 1:20, 1:50, 1:100, 1:200, 1:500, используя фосфатный буферный раствор (для приготовления эмульсий в раствор добавляют не более 5% Твина-80).
<a id="p100380"></a>Бульонные культуры бактерий и C.albicans разводят фосфатным буферным раствором не менее, чем 1:1000. Культуру A.niger смывают со скошенного агара фосфатным буферным раствором с 0.05% Твина-80. Определяют количество конидий в 1 мл смыва, используя камеру Горяева или чашечный агаровый метод, и разводят до концентрации 103 - 104 КОЕ/мл.
<a id="p100384"></a>Испытание проводят представленными в 3.3.1 и [3.3.2](#p100389) методами определения антимикробного действия.


##### <a id="p100385"></a>3.3.1 МОДИФИКАЦИЯ МЕТОДА ГОСФАРМАКОПЕИ XI


<a id="p100386"></a>Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1 мл в чашки Петри диаметром 90 мм, в одни из которых добавляют по 0.2 мл взвеси культуры B.cereus, а в оставшиеся - по 0.2 мл культуры C.albicans и A.niger. В чашки с B.cereus вносят по 7 - 10 мл расплавленной среды N 1 при температуре (47.5 +/- 2.5) град. С, в чашки с культурами C.albicans и A.niger - то же количество среды N 2.
<a id="p100387"></a>Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1 мл в пробирки с 10 мл жидкой среды - N 3 и N 8. В пробирки со средой N 3 добавляют по 1 мл взвеси культуры E.coli, в пробирки со средой N 8 - по 1 мл взвеси культур P.aeruginosa и S.aureus, каждую отдельно. В контрольные чашки и пробирки вместо разведений лекарственного средства вносят такое же количество буферного раствора.
<a id="p100388"></a>Посевы на средах N 1, 3, 8 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 2 сут (среды N 3, 8) и 5 сут (среда N 1). Посевы на среде N 2 инкубируют при температуре (22.5 +/-2.5) град. C в течение 5 сут. В случае, если при внесении лекарственного средства в жидкие питательные среды (N 3, N 8) образуется помутнение, препятствующее учету результатов, делают пересев со среды N 3 на среду N 4 (агар Эндо), а со среды N 8 - на среды N 9 и N 10. При росте типичных колоний E.coli (среда N 4), P.aeruginosa (среда N 9) и S.aureus (среда N 10) отмечают наличие роста тест-микроорганизма.

<a id="p100389"></a>3.3.2. МЕТОД РЕПЛИКАЦИЙ (для водонерастворимых лекарственных средств). В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл каждого разведения исследуемого лекарственного средства. В контрольные чашки вносят по 1 мл растворителя, который используют для получения разведения. В чашки Петри (как в эксперименте, так и в контроле) добавляют по 15 - 20 мл расплавленной и охлажденной до (47.5 +/- 2,5) град. С среды N 1, в другие - такое же количество среды N 2 и быстро перемешивают. После застывания агара чашки подсушивают для удаления конденсата с поверхности среды.
<a id="p100390"></a>На поверхность агара бактериологической петлей или репликатором наносят бляшками инокулят каждого тест-штамма бактерий и грибов на среды N 1 и N 2 соответственно.
<a id="p100391"></a>Чашки со средой N 1 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 48 ч. Чашки со средой N 2 инкубируют при температуре (22.5 +/- 2.5) град. С в течение - 3 - 5 сут.
<a id="p100392"></a>Учет результатов. После окончания сроков инкубации посевов (появление типичного роста тест-микроорганизмов в контрольных чашках без лекарственного средства) отмечают наличие или отсутствие роста тест-штаммов бактерий и грибов на средах, в которые вносили различные разведения лекарственного средства.
<a id="p100393"></a>Наличие такого же роста тест-микроорганизма, как в контроле, обозначают знаком "+", отсутствие роста - знаком "-", слабый или замедленный рост - знаком "+/-".
<a id="p100394"></a>Отсутствие роста тест-микроорганизма на среде с препаратом свидетельствует о том, что исследуемый препарат в данном разведении обладает антимикробным действием в отношении определенного тест-микроорганизма.


##### <a id="p100395"></a>3.3.3 НЕЙТРАЛИЗАЦИЯ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ


<a id="p100396"></a>Для устранения антимикробного действия лекарственного средства используют различные методы: - 1) увеличивают разведение лекарственного средства, 2) добавляют необходимое количество соответствующего специфического инактиватора, нейтрализующего антимикробное действие лекарственного средства, но не угнетающего рост микроорганизмов-контаминантов (например, бета-лактамазу - для пенициллинов и цефалоспоринов, пара-аминобензойную кислоту - для сульфаниламидов), 3) применяют неспецифический инактиватор следующего состава, используемого в качестве растворителя:


<table>
<colgroup><col width="6%"><col width="56%"><col width="6%"><col width="32%"></colgroup>
<tr><td rowspan="8"></td><td><a id="p100397"></a>Твин-80</td><td>-</td><td>30 г</td></tr>
<tr><td>Лецитин яичный</td><td>-</td><td>3 г</td></tr>
<tr><td>L-гистидина гидрохлорид</td><td>-</td><td>1 г</td></tr>
<tr><td>Пептон (мясной или казеиновый)</td><td>-</td><td>1 г</td></tr>
<tr><td>Натрия хлорид</td><td>-</td><td>4.3 г</td></tr>
<tr><td>Калия фосфат однозамещенный</td><td>-</td><td>3.6 г</td></tr>
<tr><td>Натрия фосфат двузамещенный</td><td>-</td><td>7.2 г</td></tr>
<tr><td>Воды дистиллированной</td><td>-</td><td>1000.0 мл</td></tr>
</table>


<a id="p100405"></a>Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин. Если антимикробное действие полностью не устраняется, увеличивают концентрацию Твина-80 или лецитина.

<a id="p100406"></a>Директор ИГКЛС НЦЭГКЛС
Минздрава России
профессор, академик МАИ
**Н.С.ЕВТУШЕНКО**
10 апреля 2001 года

<a id="p100407"></a>Председатель Государственного
Фармакопейного комитета,
профессор, чл.-корр. РАМН
**А.П.АРЗАМАСЦЕВ**
4 июля 2001 года

<a id="p100408"></a>Главный Ученый секретарь
Государственного Фармакопейного
комитета, доктор фарм. наук
**В.Л.БАГИРОВА**
4 июля 2001 года



---