Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.10.2001 № 291-22/144
Актуально на 03.11.2026.
Как цитировать: <Письмо> Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.10.2001 N 291-22/144. 291-22/144. 29.10.2001. https://bukva.ai/docs/pismo-291-22144
<Об изменении к Государственной фармакопеи XI издания>
(вместе с «Изменением № 2 к статье Государственной фармакопеи XI издания „Методы микробиологического контроля лекарственных средств“ (ГФ ХI, вып. 2, С. 187)»)
Примечание
По вопросу применения данного документа см. Письмо Минздрава РФ от 28.05.2002 № 294-10/1282. Изменение № 2 вступило в силу с 1 января 2002 года.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ДЕПАРТАМЕНТ ГОСУДАРСТВЕННОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА, ЭФФЕКТИВНОСТИ, БЕЗОПАСНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ И МЕДИЦИНСКОЙ ТЕХНИКИ
ПИСЬМО
от 29 октября 2001 г. № 291-22/144
Департамент государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств и медицинской техники направляет к сведению и руководству изменение № 2 к статье Государственной фармакопеи XI издания «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» (ГФ ХI, вып. 2, с. 187) и просит предусмотреть с 1 января 2002 года разделы «Микробиологическая чистота» и «Стерильность» в стандартах качества лекарственных средств, направляемых на регистрацию (перерегистрацию), в соответствии с указанным изменением.
Заместитель руководителя Департамента Д. В. Рейхарт
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
Утверждаю Заместитель руководителя Департамента государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств и медицинской техники Д. В. Рейхарт
ИЗМЕНЕНИЕ № 2 К СТАТЬЕ ГОСФАРМАКОПЕИ XI ИЗДАНИЯ «МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ»
(ГФ ХI, вып. 2, с. 187)
Срок введения Изменения с 01.01.2002 г.
РАЗДЕЛ 1 ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЧИСТОТЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, СУБСТАНЦИЙ И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА СУБСТАНЦИЙ И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Примечания к таблицам 1 и 2:
- В фармакопейных статьях предприятия (ФСП) могут быть указаны в виде исключения и другие нормативы
- При обнаружении других патогенных бактерий, кроме указанных выше, считают, что качество лекарственных средств, субстанций и вспомогательного материала не соответствует требованиям по показателю «Микробиологическая чистота»
РАЗДЕЛ 2 ИСПЫТАНИЕ НА Enterobacteriaceae
Дополнение к разделу: «Выявление и идентификация семейства Enterobacteriaceae» общей ФС «Испытание на микробиологическую чистоту» ГФXI издания, выпуск 2, стр. 197 — 198.
2.1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ЗА ИСКЛЮЧЕНИЕМ Escherichia coli и Salmonella
10 г или 10 мл испытуемого образца помещают в 100 мл среды № 11, гомогенизируют и инкубируют при температуре 32.5 +/- 2.5 град. C в течение, как правило, двух часов, но не более пяти. В случае, если лекарственное средство — суппозитории или растворы в маслах, в среду № 11 добавляют стерильный Твин-80 в количестве не более 5% и стеклянные бусы для эмульгирования.
Гомогенат перемешивают и готовят разведения 1:10 и 1:100, используя для этого среду № 3. В три пробирки с 10 мл среды № 3 вносят 1 мл гомогената в первую, 1 мл разведения 1:10 во вторую и 1 мл разведения 1:100 в третью, то есть соответственно 0.1 г, 0.01 г, 0.001 г образца. Посевы инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 24 — 48 ч. При наличии роста делают пересев петлей на плотную среду № 4 (агар Эндо) и инкубируют чашки Петри при той же температуре в течение 18 — 24 ч. В случае появления характерных для Enterobacteriaceae колоний грамотрицательных палочек определяют количество энтеробактерий в 1 г или в 1 мл образца по Таблице 3.
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
| Обозначения: | + | - наличие роста бактерий |
| - | - отсутствие роста бактерий |
Количество клеток E.coli в 1 г (мл) исследуемого лекарственного средства определяют, пользуясь также данной таблицей.
2.2. ИСПЫТАНИЕ НА НАЛИЧИЕ Escherichia coli и Salmonella
10 г (мл) образца лекарственного средства вносят в 100 мл питательной среды № 11 (лактозный бульон). В случае, если лекарственное средство — жидкость, количество среды уменьшают до 90 мл. Инкубируют при температуре (32.5+2.5) град. С в течение 2 — 5 ч. 10 мл среды № 11 переносят в 100 мл среды № 3, перемешивают и инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 18 — 24 ч. При отсутствии роста на среде № 3 (среда прозрачная, цвет не изменился) считают, что в лекарственном средстве не содержатся бактерии сем. Enterobacteriaceae. При наличии роста испытания продолжают.
2.2.1 ИСПЫТАНИЕ НА E.coli
Со среды № 3 делают пересев петлей на среду № 4 (агар Эндо) и инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. C в течение 18 — 24 ч. На среде № 4 E.coli образуют, как правило, характерные малиновые колонии с металлическим блеском или без него, диаметром 2 — 4 мм. Подозрительные на принадлежность к E.coli колонии микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отсевают на скошенную в пробирках среду № 1 и инкубируют при температуре (32,5 +/- 2.5) град. С в течение 18 — 24 ч. Из пробирок с чистой культурой делают пересевы на среды № 14 (агар Симмонса) и № 15 (бульон Хоттингера), а также используют для теста на цитохромоксидазу. Через 18 — 24 ч инкубации при (32,5 +/- 2.5) град. С отмечают бактериальный рост или его отсутствие на средах № 14 и № 15. Утилизацию цитрата устанавливают по изменению цвета среды № 14 из зеленого в синий. Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности среды № 15 при добавлении реактива Ковача или Эрлиха.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не утилизирующие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминировано Escherichia coli.
2.2.2 ИСПЫТАНИЕ НА ВИДЫ Salmonella
1 мл обогащенной культуры на среде № 3 вносят в пробирку с 10 мл среды № 12 (селенитовая среда) и инкубируют при (32,5 +/- 2,5) град. С в течение 16 — 18 ч. Делают пересев петлей на среду № 5 (висмут-сульфит агар) и инкубируют при температуре (32,5 +/- 2.5) град. С в течение 24 — 48 часов. На среде № 5 Salmonella образует, как правило, типичные черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом участок среды под колонией прокрашивается в черный цвет. Подозрительные на принадлежность к Salmonella колонии микроскопируют и при обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отсевают на среду № 13 (трехсахарный агар с солями железа), нанося большое количество культуры петлей сначала на скошенную часть агара, а потом уколом в столбик. Параллельно ставят тест на цитохромоксидазу, используя чистую культуру со среды № 1. Через 18 — 24 часа инкубации при (32,5 +/- 2.5) град. С отмечают изменение цвета среды из красного в желтый только в столбике питательной среды. Почернение среды свидетельствует об образовании сероводорода — типичном признаке видов Salmonella.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не ферментирующие сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано Salmonella.
2.3 ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ <*> И РЕАКТИВЫ
2. Среда № 12 (селенитовая среда сухая) — для накопления и выделения сальмонелл.
Готовят согласно прописи на этикетке.
______________________________________________________________
Рн после стерилизации 7.3 +/- 0.2. Разливают в пробирки по 5 — 7 мл. Стерилизуют при 121 град. С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2 — 2,5 см.
Приготовление: агар расплавляют при нагревании в свежеприготовленной дистиллированной воде. Все соли сначала растворяют в небольшом объеме воды, затем раствор добавляют к расплавленному агару и доводят водой до 1000 мл. Устанавливают рН, добавляют индикатор в виде 0,2% водного раствора в объеме 40 мл, хорошо перемешивают и разливают в пробирки по 5 — 7 мл. Стерилизуют при 121 град. С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2 — 2,5 см.
5. Среда № 15 (бульон Хоттингера) — для определения индола.
Примечание: <*> — для испытания на микробиологическую чистоту можно использовать аналогичные сухие питательные среды отечественных и зарубежных производителей после их валидации.
В пробирку со средой № 15, в которой выросла исследуемая культура, вносят 0,5 мл реактива Ковача или Эрлиха и слегка встряхивают. При наличии индола наблюдают появление красного кольца на поверхности среды в пробирке.
| Реактив Ковача: | |||
| Спирт амиловый или изоамиловый | - | 75 мл | |
| Пара-диметиламинобензальдегид | - | 5 г | |
| Кислота хлористоводородная, конц. | - | 20 мл | |
Навеску альдегида растворяют в спирте при легком нагревании (в водяной бане при 50 — 55 град. С), остужают и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном от света месте. Реактив должен быть желтого цвета.
| Реактив Эрлиха: | |||
| Спирт этиловый 96% | - | 95 мл | |
| Пара-диметиламинобензальдегид | - | 1 г | |
| Кислота хлористоводородная, конц. | - | 20 мл | |
Навеску альдегида растворяют в спирте и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном от света месте.
РАЗДЕЛ 3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕСТЕРИЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Лекарственные средства, обладающие антимикробным действием, могут подавлять рост отдельных видов бактерий и грибов. Если исследуемое лекарственное средство оказывает ингибирующее действие на микроорганизмы, которые выявляют в нестерильных лекарственных средствах, необходимо адекватно инактивировать его во избежание неправильной оценки результатов испытания на микробиологическую чистоту. Определение антимикробного действия нестерильных лекарственных средств проводят с использованием тест-микроорганизмов, полученных из Государственных коллекций.
3.1. ПОДГОТОВКА ТЕСТ-ШТАММОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕСТЕРИЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
| 1. Тест-микроорганизмы | |
| Bacillus cereus | ATCC1 10702 (NCTC2 8035) |
| Escherichia coli | ATCC 25922 |
| Pseudomonas aeruginosa | ГИСК4 453 |
| Staphylococcus aureus | ATCC 6538-P (FDA3 209-P) |
| Candida albicans | ATCC 885-653 |
| Aspergillus niger | BKM5 F-1119 |
| ______________________________________________________________ | |
| ATCC1 — Американская коллекция типовых культур | |
| NCTC2 — Национальная коллекция типовых культур, Великобритания | |
| FDA3 — Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств, США | |
| ГИСК4 — Всероссийский музей патогенных бактерий (ГИСК им. Л.А. Тарасевича), Россия | |
| BKM5 — Всероссийская коллекция микроорганизмов РАН, Россия | |
Тест-штаммы В. cereus, E. coli, P. aeruginosa, S. aureus получают из Государственной Коллекции патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Штамм C.albicans получают из Российского Микологического Центра (г. Санкт-Петербург), штамм A.niger — из ВКМ — Всероссийской Коллекции микроорганизмов РАН (г. Москва). Культуры тест-микроорганизмов могут быть получены также из ВКПМ — Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов. Используемые тест-штаммы должны быть типичными по культурально-морфологическим и биохимическим свойствам.
Тест-культуру C.albicans хранят под слоем вазелинового масла на среде № 2 (агар Сабуро), в которой количество агара уменьшено до 1%. Тест-культуру A.niger хранят на среде № 2 (агар Сабуро) (Госфармакопея, вып. 2, с. 200), делая пересевы через каждые 3 месяца. Лиофилизированную культуру тест-штамма из ампулы или культуру со среды хранения переносят в пробирки с питательным бульоном: среда № 8 для бактерий, жидкая среда Сабуро — для C.albicans. Посевы на среде № 8 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течении 18 — 24 ч, посевы на жидкой среде Сабуро — при температуре (22.5 +/- 2.5) град. С в течение 48 ч — для C.albicans. Посевы A.niger на среде № 2 инкубируют при температуре (22.5 +/- 2.5) град. С до появления черных или темно-коричневых экзогенных спор (конидий) в течении 5 — 7 сут.
Перед определением антимикробного действия нестерильных лекарственных средств культуры тест-штаммов бактерий отсевают на среду № 8 (питательный бульон) и инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 18 — 24 ч.
Культуры грибов выращивают заранее: C.albicans — на жидкой среде Сабуро за 48 ч, а A.niger — на среде № 2 за 5 — 7 сут до начала определения.
3.2. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РАСТВОРЫ
(Государственная фармакопея XI издания, выпуск 2, с. 193, 201, 208 — 209)
| Среда № 8 | - | для выращивания бактерий. | |
| Жидкая среда Сабуро | - | для выращивания Candida albicans. | |
| Среда № 2 (агар Сабуро) | - | для выращивания Aspergillus niger. | |
| Среды NN 3 — 5 | - | для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae. | |
| Среда № 9 | - | для идентификации Pseudomonas aeruginosa. | |
| Среда № 10 | - | для идентификации Staphylococcus aureus. |
Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном, рН 7.0
3.3. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
Готовят разведения лекарственного средства 1:10, 1:20, 1:50, 1:100, 1:200, 1:500, используя фосфатный буферный раствор (для приготовления эмульсий в раствор добавляют не более 5% Твина-80).
Бульонные культуры бактерий и C.albicans разводят фосфатным буферным раствором не менее, чем 1:1000. Культуру A.niger смывают со скошенного агара фосфатным буферным раствором с 0.05% Твина-80. Определяют количество конидий в 1 мл смыва, используя камеру Горяева или чашечный агаровый метод, и разводят до концентрации 103 — 104 КОЕ/мл.
Испытание проводят представленными в 3.3.1 и 3.3.2 методами определения антимикробного действия.
3.3.1 МОДИФИКАЦИЯ МЕТОДА ГОСФАРМАКОПЕИ XI
Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1 мл в чашки Петри диаметром 90 мм, в одни из которых добавляют по 0.2 мл взвеси культуры B.cereus, а в оставшиеся — по 0.2 мл культуры C.albicans и A.niger. В чашки с B.cereus вносят по 7 — 10 мл расплавленной среды № 1 при температуре (47.5 +/- 2.5) град. С, в чашки с культурами C.albicans и A.niger — то же количество среды № 2.
Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1 мл в пробирки с 10 мл жидкой среды — № 3 и № 8. В пробирки со средой № 3 добавляют по 1 мл взвеси культуры E.coli, в пробирки со средой № 8 — по 1 мл взвеси культур P.aeruginosa и S.aureus, каждую отдельно. В контрольные чашки и пробирки вместо разведений лекарственного средства вносят такое же количество буферного раствора.
Посевы на средах № 1, 3, 8 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 2 сут (среды № 3, 8) и 5 сут (среда № 1). Посевы на среде № 2 инкубируют при температуре (22.5 +/-2.5) град. C в течение 5 сут. В случае, если при внесении лекарственного средства в жидкие питательные среды (N 3, № 8) образуется помутнение, препятствующее учету результатов, делают пересев со среды № 3 на среду № 4 (агар Эндо), а со среды № 8 — на среды № 9 и № 10. При росте типичных колоний E.coli (среда № 4), P.aeruginosa (среда № 9) и S.aureus (среда № 10) отмечают наличие роста тест-микроорганизма.
3.3.2. МЕТОД РЕПЛИКАЦИЙ (для водонерастворимых лекарственных средств). В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл каждого разведения исследуемого лекарственного средства. В контрольные чашки вносят по 1 мл растворителя, который используют для получения разведения. В чашки Петри (как в эксперименте, так и в контроле) добавляют по 15 — 20 мл расплавленной и охлажденной до (47.5 +/- 2,5) град. С среды № 1, в другие — такое же количество среды № 2 и быстро перемешивают. После застывания агара чашки подсушивают для удаления конденсата с поверхности среды.
На поверхность агара бактериологической петлей или репликатором наносят бляшками инокулят каждого тест-штамма бактерий и грибов на среды № 1 и № 2 соответственно.
Чашки со средой № 1 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 48 ч. Чашки со средой № 2 инкубируют при температуре (22.5 +/- 2.5) град. С в течение — 3 - 5 сут.
Учет результатов. После окончания сроков инкубации посевов (появление типичного роста тест-микроорганизмов в контрольных чашках без лекарственного средства) отмечают наличие или отсутствие роста тест-штаммов бактерий и грибов на средах, в которые вносили различные разведения лекарственного средства.
Наличие такого же роста тест-микроорганизма, как в контроле, обозначают знаком «+», отсутствие роста — знаком «-», слабый или замедленный рост — знаком «+/-».
Отсутствие роста тест-микроорганизма на среде с препаратом свидетельствует о том, что исследуемый препарат в данном разведении обладает антимикробным действием в отношении определенного тест-микроорганизма.
3.3.3 НЕЙТРАЛИЗАЦИЯ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ
Для устранения антимикробного действия лекарственного средства используют различные методы: — 1) увеличивают разведение лекарственного средства, 2) добавляют необходимое количество соответствующего специфического инактиватора, нейтрализующего антимикробное действие лекарственного средства, но не угнетающего рост микроорганизмов-контаминантов (например, бета-лактамазу — для пенициллинов и цефалоспоринов, пара-аминобензойную кислоту — для сульфаниламидов), 3) применяют неспецифический инактиватор следующего состава, используемого в качестве растворителя:
Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин. Если антимикробное действие полностью не устраняется, увеличивают концентрацию Твина-80 или лецитина.
Директор ИГКЛС НЦЭГКЛС Минздрава России профессор, академик МАИ Н. С. Евтушенко 10 апреля 2001 года
Председатель Государственного Фармакопейного комитета, профессор, чл.-корр. РАМН А. П. Арзамасцев 4 июля 2001 года
Главный Ученый секретарь Государственного Фармакопейного комитета, доктор фарм. наук В. Л. Багирова 4 июля 2001 года