---
title: "Письмо Минздрава РСФСР от 12.10.1989 N 21-08/11-297"
number: "21-08/11-297"
issuer: "Министерство здравоохранения РСФСР"
issued_on: 1989-10-12
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/pismo-21-0811-297"
---

## Письмо Минздрава РСФСР от 12.10.1989 N 21-08/11-297

# Письмо Минздрава РСФСР от 12.10.1989 N 21-08/11-297

"О повышении качества люминесцентно-микроскопических исследований материала для обнаружения микобактерий туберкулеза (МБТ)"


<a id="p100001"></a>МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

<div align="center">

<a id="p100002"></a>**ПИСЬМО**<br>
**от 12 октября 1989 г. N 21-08/11-297**

<a id="p100005"></a>**О ПОВЫШЕНИИ КАЧЕСТВА ЛЮМИНЕСЦЕНТНО-МИКРОСКОПИЧЕСКИХ**<br>
**ИССЛЕДОВАНИЙ МАТЕРИАЛА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ**<br>
**МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА (МБТ)**

<a id="p100006"></a>**Практическими и научно-исследовательскими учреждениями приобретен достаточно большой положительный опыт по совершенствованию люминесцентной микроскопии для диагностики бактериовыделения у больных туберкулезом, позволяющий повысить результативность указанного анализа, сократить затраты рабочего времени в отдельных моментах исследования и обезопасить персонал при работе с вирулентной культурой.**

</div>

<a id="p100007"></a>Руководителем микробиологической лаборатории НПО "Фтизиопульмонология" д-р мед. наук В.М. Должанским, зав. лабораторией Московского противотуберкулезного диспансера N 4 Н.Ф. Жаком и врачом Е.М. Морель на основании анализа опыта применения люминесцентной микроскопии в противотуберкулезных учреждениях подготовлены предложения по совершенствованию существующего метода.
<a id="p100008"></a>В зависимости от возможностей лабораторий окраска мазка производится по Хагеманну или по Бою. Последний метод нашел меньшее число последователей из-за дефицитности и высокой стоимости одного из основных красителей (родамина), поэтому в настоящем письме акцент сделан на окраску по Хагеманну, но учтены и особенности окраски по Бою.
<a id="p100009"></a>Окраска по Бою сложнее окраски по Хагеманну и много дороже. Ее внедрение во многих лабораториях определяется большим объемом информации, получаемой микроскопистом при использовании данной методики: снижается риск выдачи положительного ответа при обнаружении сапрофитной флоры, появляется возможность дифференцировать возраст микобактериальных клеток и т.д. Однако тонкая дифференцировка, достигаемая при окраске по Бою, требует и дополнительных затрат времени. Так, при изготовлении мазка из осадка материала, подготовленного для посева, необходимо прямо на предметном стекле проверить pH суспензии и добиться его значения в 6,5 - 7,0 единиц (проверяется мелкими лакмусовыми бумажками). Для подщелачивания используют 0,5% раствор NaOH, для подкисления - 0,5% раствор HCl. Для окраски по Хагеманну эта процедура необязательна.
<a id="p100010"></a>При всех видах окраски абсолютно необходима плотная фиксация мазка на стекле. Жидкий материал (мочу, экскрет после ингаляций, ликвор и т.д.) обязательно наносят на предметные стекла, предварительно смазанные взбитым яичным белком. В условиях холодильника такие стекла хранятся неограничено долго и могут заготавливаться впрок.
<a id="p100011"></a>Не следует спешить с термальной фиксацией мазка. Вначале мазок подсушивают на воздухе - на нем не должно оставаться мелких капель - затем фиксируют в сухожаровом шкафу при 90 град. C в течение 30 минут. Отсчет времени начинают с момента достижения температуры 90 град. При этом происходит не только хорошая фиксация материала, но и дальнейшая работа с мазком становится безопасной.
<a id="p100012"></a>Оригинальный метод окраски разработан в Московском противотуберкулезном диспансере N 4. В настоящее время этим простым и надежным методом пользуются практически все лаборатории Москвы.


| <a id="p100013"></a>Реактивы: | 1) | 10% раствор Na3PO4 |
| --- | --- | --- |
|  | 2) | 5% раствор карболовой кислоты |
|  | 3) | 0,1% раствор аурамина |


<a id="p100016"></a>Для лучшего растворения аурамин в течение суток выдерживается в термостате. Перед употреблением растворы аурамина и карболовой кислоты профильтровываются через обеззоленный бумажный фильтр. Эти растворы готовят из расчета недельной потребности.


<table>
<colgroup><col width="24%"><col width="5%"><col width="71%"></colgroup>
<tr><td></td><td>4)</td><td>3% солянокислый спирт</td></tr>
<tr><td></td><td>5)</td><td>Раствор кислого фуксина: 390 мл дистиллированной</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100035"></a>воды, 1 грамм кислого фуксина и 10 мл ледяной уксусной кислоты. Перед употреблением кислый фуксин профильтровать через обеззоленный бумажный фильтр. Растворы солянокислого спирта и кислого фуксина можно готовить впрок.</td></tr>
</table>


<a id="p100019"></a>Отличием от рутинного метода Хагеманна нужно считать 2 основных момента: а) раствор аурамина готовят без добавления карболовой кислоты и б) мазок перед окраской заливают раствором карболовой кислоты, что выравнивает pH всей поверхности мазка, улучшает и ускоряет проникновение краски в клетку возбудителя, а это способствует хорошему свечению клеток по всей просматриваемой площади.
<a id="p100020"></a>Ход работы (экономный вариант). Материал обрабатывается 10% раствором Na3PO4 18 - 24 часа в термостате.
<a id="p100021"></a>На следующий день из плевательниц осторожно сливают верхний слой жидкости, горлышко плевательницы фламбируют на пламени горелки, осторожно перемешивают содержимое плевательницы и разливают по центрифужным пробиркам. Горлышко центрифужки фламбируют на пламени горелки. Если материал идет на посев и бактериоскопию, содержимое плевательницы разливают в две центрифужки.

<div align="center">

<a id="p100022"></a>**Приготовление мазков**

</div>


<a id="p100023"></a>Центрифугирование - 2000 об./мин. 15 минут. Надосадочную жидкость полностью сливают. Горлышко центрифужки фламбируют на пламени горелки.
<a id="p100024"></a>Осадок энергично взбалтывают и 1 - 2 капли через край наносят на предметное стекло. Горлышко центрифужки фламбируют на пламени. Донышком центрифужки на предметном стекле делают не толстый круглый или овальный мазок.
<a id="p100025"></a>Окраска: а) мазки раскладывают на рельсы и заливают 5% раствором карболовой кислоты на 2 минуты. Через 2 минуты р-р карболовой кислоты с мазков сливают, торец стекла высушить фильтровальной бумагой;
<a id="p100026"></a>б) без промывки мазков на них наносят 0,1 р-р аурамина на 2 минуты;
<a id="p100027"></a>в) мазки промывают с тыльной стороны проточной водой;
<a id="p100028"></a>г) обесцвечивание 3% солянокислым спиртом дважды по 2 минуты;
<a id="p100029"></a>д) промывка с тыльной стороны струйкой воды;
<a id="p100030"></a>е) мазки заливают р-ром кислого фуксина на 2 минуты;
<a id="p100031"></a>ж) промывка стекол с мазками с тыльной стороны. Сушка на воздухе.

<div align="center">

<a id="p100032"></a>**Микроскопия**

</div>


<a id="p100033"></a>Аналогично можно готовить мазки для окраски по Цилю-Нильсену взамен исследования флотационного кольца, но при этом исключается обработка мазков карболовой кислотой.
<a id="p100034"></a>Метод информативен, прост, позволяет экономить лабораторную посуду, повысить производительность труда, рекомендуется к повсеместному внедрению.



---