Определение севина в плодово-ягодных культурах и консервах. Методическое указание

(утв. Минздравом СССР 31.07.1973)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЕВИНА В ПЛОДОВО-ЯГОДНЫХ КУЛЬТУРАХ И КОНСЕРВАХ

(МЕТОДИЧЕСКОЕ УКАЗАНИЕ)

Севин (1-нафтил-N-метилкарбамат) обладает широким диапазоном инсектицидного действия. Рекомендуется для опрыскивания садов в очагах массового размножения плодожорки, а также для борьбы с вредителями хлопчатника и кукурузы. Норма расхода 85-процентного смачивающегося порошка севина 1 — 2,5 кг/га.

Краткие сведения о физико-химических свойствах препарата

Химически чистый севин — кристаллическое вещество белого цвета, без специфического запаха, имеющее температуру плавления 142 °C, давление паров менее 0,005 мм рт. ст. при 26 °C. Севин слаборастворим в воде (менее 0,1%), несколько лучше в углеводородах и спиртах, умеренно (до 40%) в органических растворителях (ацетоне, циклогексаноле), хорошо — в полярных растворителях, таких как диметилформамид и диметилсульфоксид. Устойчив к воздействию ультрафиолетового излучения. В щелочной среде севин быстро гидролизуется, образуя 1-нафтол, метиламин и соответствующий карбонат.

Принцип метода

Севин извлекают из растительных пищевых продуктов хлороформом. Освобождение от примесей осуществляют в метаноловом растворе добавлением водного раствора хлористого аммония с последующим фильтрованием через бумажный фильтр и хроматографированием через слой окиси алюминия.

Выделенный севин гидролизуют едким кали, и образующийся 1-нафтол сочетают с хлористым п-нитрофенилдиазонием, в результате чего образуется азосоединение — в кислой среде оранжевого, в щелочной — синего цвета.

Чувствительность определения в щелочной среде 0,05 мг, в кислой — 0,1 мг/кг. Точность метода +/- 5 — 10%.

Реактивы и растворы

Хлороформ, х.ч.

Метанол, х.ч.

Аммоний хлористый, х.ч. 2-процентный водный раствор.

Уксусная кислота ледяная, х.ч.

Смесь метанола и 2-процентного водного раствора хлористого аммония (1:1).

Алюминия окись для хроматографирования П активности.

Натрий сернокислый безводный, х.ч.

Калий едкий 0,1 н. растворов в метаноле.

Натрия нитрит, х.ч., 0,8-процентный водный раствор.

п-Нитроанилин.

п-Нитрофенил хлористый, свежеприготовленный. К 0,02-процентному раствору п-нитроанилина в 0,1 г соляной кислоте доливают в 10 раз меньшее количество 0,8-процентного водного раствора нитрита натрия. Раствор готовят в колбе, погруженной в ледяную воду.

Стандартный раствор севина: 10 мг севина, х.ч., растворяют в 100 мл хлороформа. 10 мл этого раствора переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят до метки хлороформом. 1 мл раствора содержит 10 мкг севина.

Химически чистый севин можно получить путем перекристаллизации технического. Для этого последний растворяют в горячем этиловом спирте (растворимость препарата около 40%), фильтруют через бумажный фильтр, используя воронку для горячего фильтрования, фильтрат охлаждают до 0°. Выпавшие кристаллы отделяют от маточного раствора, промывают холодным спиртом и сушат. В случае необходимости перекристаллизацию можно повторить.

Приборы и посуда

Фотоэлектроколориметр.

Устройство для отгона растворителей.

Установка для хроматографирования, состоящая из колонки (стеклянная трубка, зауженная книзу, 17 х 400 мм) и колбы Бунзена. В колонку помещают ватный тампон, затем слой окиси алюминия 5 — 7 см и затем слой безводного сульфата натрия 1,5 — 2 см. Подготовленную колонку промывают хлороформом (10 — 15 мл).

Центрифуга.

Аппарат для встряхивания.

Воронки делительные емкостью 150 — 250 мл.

Колбы конические емкостью 50, 100 и 250 мл.

Цилиндры мерные на 25, 50, 250 и 500 мл.

Пипетки на 1, 5 и 10 мл.

Сосуды для экстракции емкостью 1,5 — 2 л.

Ход анализа

Пробку исследуемого растительного продукта весом 1 — 1,5 кг измельчают, тщательно перемешивают и навеску в 200 г (для 2-х параллельных анализов) заливают хлороформом и оставляют на 16 — 18 часов. Полученный экстракт фильтруют через бумажный фильтр, измеряют объем фильтра и часть его, соответствующую 100 г пробы, помещают в колбу и отгоняют хлороформ. Последние порции растворителя отгоняют без нагревания.

Для растворения сухого остатка в колбу приливают 10 мл метанола, осторожно потирая дно стеклянной палочкой. Затем добавляют 10 мл 2-процентного раствора хлористого аммония и помещают колбу в холодильник (лучше в замораживатель) на 20 — 30 минут.

В результате добавления водного раствора хлористого аммония растворимость восков и пигментов в метаноле резко уменьшается и они выделяются в виде хлопьев. После охлаждения содержимое колбы фильтруют через бумажный мелкопористый фильтр. Фильтрование лучше проводить с помощью водоструйного насоса. Для этого стеклянную воронку с пробкой и плотно прилегающим фильтром (лучше двойным) вставляют в пробирку с отводом, которую подключают к водоструйному насосу.

Содержимое колбы количественно переносят на воронку, ополаскивая колбу дважды по 3 — 5 мл охлажденной смесью метанола и 2-процентного раствора хлористого аммония (1:1). Фильтрат из пробирки переносят в делительную воронку и экстрагируют севин хлороформом, энергично встряхивая первый раз с 25 мл, второй — с 15 мл. Хлороформный экстракт хроматографируют через колонку, заполненную окисью алюминия и б/в сульфатом натрия, предварительно промытую хлороформом. Сначала пропускают первую порцию экстракта — 25 мл, затем вторую — 15 мл и промывают колонку 15 мл хлороформа. Полученный фильтрат количественно переносят в колбу и отгоняют хлороформ досуха.

К сухому остатку прибавляют 5 мл 0,1 н. метанолового раствора едкого кали и, помешивая стеклянной палочкой, оставляют на 5 мин.

Полученный в результате гидролиза севина 1-нафтол может быть определен двумя способами: а) в щелочной и б) в кислой среде.

При определении 1-нафтола в щелочной среде в колбу, где протекал гидролиз севина, добавляют 1 мл солянокислого раствора п-нитрофенилдиазония, приготовленного перед употреблением, как указано в разделе «Реактивы и растворы». При взаимодействии в щелочной среде 1-нафтола и хлористого п-нитрофенилдиазония образуется азосоединение синего цвета. В колбочку доливают еще 5 мл метанола и помещают ее в холодильник на 30 мин. Затем раствор фильтруют через бумажный фильтр и колориметрируют при оранжевом светофильтре и длине волны 590 ммк в кювете с расстоянием между гранями 1 см.

В случае, если конечная окраска искажена до фиолетовой или красной, определение рекомендуется проводить в кислой среде. Для этого в колбу, где протекал щелочной гидролиз севина, приливают 14 мл ледяной уксусной кислоты и 1 мл свежеприготовленного солянокислого раствора п-нитрофенилдиазония. В кислой среде образуется азосоединение оранжевого цвета. Полученный раствор оставляют на 30 мин. при комнатной температуре, затем фильтруют через бумажный фильтр и колориметрируют при зеленом светофильтре и длине волны 475 ммк в кювете с расстоянием между гранями 2 см.

В качестве холостой пробы при колориметрировании в обоих случаях используется дистиллированная вода.

Определение севина в фруктово-ягодных компотах и маринадах

100 г исследуемой пробы (учитывать соотношение сиропа и ягод) после измельчения и тщательного перемешивания количественно переносят в колбу с притертой пробкой и заливают хлороформом с таким расчетом, чтобы покрыть навеску. Экстрагируют севин путем встряхивания в течение 30 мин. В случае образования стойкой эмульсии для разделения слоев следует воспользоваться центрифугой. Центрифугирование проводят в течение 30 мин. со скоростью 2500 об./мин. После центрифугирования удаляют верхний слой (сироп и ягоды) с помощью пипетки Мора и резиновой груши, а нижний — хлороформный — сушат с помощью безводного сульфата натрия. Высушенный экстракт помещают в колбу для отгона растворителей и удаляют хлороформ. Дальнейший ход анализа аналогичен определению содержания севина в сырых ягодах и фруктах.

Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в колбы вносят последовательно 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 7,5 и 10 мл стандартного раствора, содержащего 10 мкг севина в мл. Растворитель осторожно удаляют и далее поступают, как описано для определения севина в растительной пробе, начиная с гидролиза пестицида.

Содержание севина в мг/кг продукта вычисляют по следующей формуле:

                                  С

Х = -, Р

где:

Х — количество севина в продукте, мг/кг;

С — количество севина, найденное по калибровочному графику, мкг;

В щелочной среде			В кислой среде
количество внесенного севина	количество обнаруженного севина	% определения	количество внесенного севина	количество обнаруженного севина	% определения
в мкг			в мкг
5	5	100	20	19	94
5	5	100	20	20	100
10	9	90	20	21	105
10	10	100	40	40	100
20	18	92	40	40	100
20	19	95	80	80	100
40	38	95	80	82	102
40	40	100	100	100	100
50	47	94	100	97	97
50	46	92

Метод может быть использован для определения остаточного содержания севина в землянике, черной смородине, крыжовнике, сливах, яблоках, а также компотах и маринадах из плодов перечисленных культур.

---