МУК 4.2.4097-24. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Метод микробиологического определения концентрации препарата Фитоспорин-К10 в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе городских и сельских поселений. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 25.12.2024)
Примечание
Документ введен в действие с 25.03.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 25 декабря 2024 года
Дата введения 25 марта 2025 года
4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ПРЕПАРАТА ФИТОСПОРИН-К10 В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ И АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ ГОРОДСКИХ И СЕЛЬСКИХ ПОСЕЛЕНИЙ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.2.4097-24
1. Разработаны Федеральным государственным автономным образовательным учреждением высшего образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (д.б.н. Н.И. Шеина), Федеральным бюджетным учреждением науки «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (к.м.н. А.Л. Мишина).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 25 декабря 2024 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода микробиологического количественного определения концентрации штамма препарата Фитоспорин-К10 (далее — микробиологический препарат) в воздухе рабочей зоны и в атмосферном воздухе городских и сельских поселений в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Биологическая характеристика микробиологического препарата
2.1. Препарат является микробиологическим удобрением. Применяется в сельскохозяйственном производстве и в личных подсобных хозяйствах для предпосевной (предпосадочной) обработки семян (посадочного материала), полива почвы, некорневой и корневой подкормки вегетирующих растений, выращиваемых на различных типах почв в открытом и защищенном грунте.
2.2. Препарат представляет собой непрозрачную жидкость от светло-коричневого до темно-коричневого цвета со специфическим запахом.
2.3. В состав препарата входит консорциум следующих микроорганизмов: Bacillus subtilis шт. 3Н в концентрации 1x1010 КОЕ/мл; Bacillus amyloliquefaciens шт. B-11265 и Bacillus megaterium шт. 132 ВКПМ B-3778 в концентрации 1x108 КОЕ/мл; Bacillus subtilis шт. 26 Д, Bacillus subtilis шт. 1К, 3К, 7К, 8К, 3/28 и Pseudomonas aureofaciens шт. ИМВ 2687 ВКПМ B-2883 в концентрации 1x106 КОЕ/мл.
2.4. Штаммы имеют паспорта и депонированы в Биоресурсном центре Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) Национального исследовательского центра «Курчатовский институт».
2.5. Оптимальной твердой средой для выращивания и размножения штамма является мясо-пептонный агар (далее — МПА). Оптимальная температура роста плюс (28 +/- 2) °C, культивирование 24 — 48 часов.
2.5. Штаммы Bacillus subtilis шт. 3Н, Bacillus amyloliquefaciens шт. B-11265 и Bacillus megaterium шт. 132, Bacillus subtilis шт. 26 Д, Bacillus subtilis шт. 1К, 3К, 7К, 8К, 3/28 и Pseudomonas aureofaciens шт. ИМВ 2687, входящие в состав препарата Фитоспорин-К10, не являются фито- и зоопатогенными, выделены из почвы, а также не входят в состав 4 групп патогенности <1>. Работа со штаммами не требует специальных мер предосторожности.
<1> Приложение 1 СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней», утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 № 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный № 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.02.2022 № 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный № 67587); от 25.05.2022 № 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный № 68934) (далее — СанПиН 3.3686-21).
III. Методы определения
3.1. Метод основан на аспирации из воздуха колониеобразующих клеток приоритетного микроорганизма Bacillus subtilis штамм 3Н и подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам штамма на агаризованной среде (МПА). При наличии в воздухе высоких концентраций штамма микробиологического препарата возможно использование седиментационного метода Коха.
IV. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы, питательные среды и материалы
4.1. При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы, питательные среды и материалы, приведенные в табл. 4.1 - 4.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Барометр-анероид | Диапазон измерения атмосферного давления 5 — 790 мм рт. ст., предел допустимой погрешности +/- 2,5 мм рт. ст. |
| Весы лабораторные аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности +/- 0,2 мг, ГОСТ Р 53228-2008 |
| Колбы мерные лабораторные конические КН-2-50-34, КН-2-250-50, КН-2-500-50, КН-2-1000-50 | ГОСТ 1770-74 |
| Пипетки градуированные 2-го класса точности | Вместимостью 1,0; 2,0, 5,0, 10 см3, ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные | 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3, ГОСТ 1770-74 |
| Термометр лабораторный шкальный | Пределы измерения от 0 до плюс 55 °C |
| Аспирационный бактериологический пробоотборник | Скорость до 40 л/мин, расход регулируется по ротаметру, диаметр чашек Петри 90, 100, 120 мм, определение в диапазоне 25 — 10000 КОЕ/м3 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
Вспомогательные устройства и материалы
| Наименование вспомогательных устройств и материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Шкаф сушильный стерилизационный | Поддерживающий температуру плюс (160 +/- 5) °C |
| Термостаты | Поддерживающие рабочую температуру плюс 28 +/- 2) °C и плюс (37 +/- 2) °C |
| Автоклав электрический | ГОСТ 9586-75 |
| Стерилизаторы паровые медицинские | ГОСТ Р ЕН 13060-2011, ГОСТ 31598-2012 |
| Дистиллятор | - |
| Облучатель бактерицидный настенный | - |
| Холодильник бытовой | ГОСТ 26678-85 |
| Микроскоп биологический с иммерсионной системой | - |
| Лупа с увеличением x10 | ГОСТ 25706-83 |
| Пробирки типов П1, П2 | ГОСТ 25336-82 |
| Спиртовки лабораторные стеклянные | ГОСТ 23932-90 |
| Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов | ГОСТ 23932-90 |
| Воронки конусные | Диаметром 40 — 45 мм, ГОСТ 25336-82 |
| Груша резиновая | - |
| Петля бактериологическая | - |
| Марля медицинская | ГОСТ 9412-2021 |
| Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-2022 | |
| Бумага фильтровальная лабораторная | ГОСТ 12026-76 |
| Примечание: допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
| Таблица 4.3 | |
| Наименование реактивов и питательных сред | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Агар микробиологический | ГОСТ 17206-96 |
| Вода дистиллированная ГОСТ 6709-90 | |
| Мясо-пептонный бульон (далее — МПБ) | ГОСТ 20730-75 |
| Спирт этиловый технический | ГОСТ 17299-78 |
| Спирт этиловый ректификованный | ГОСТ 5962-2013 |
| Примечание: допускается использование других питательных сред, диагностических препаратов и реактивов с аналогичными характеристиками. | |
| V. Требования безопасности | |
5.1. Определение концентрации клеток микроорганизма в воздухе рабочей зоны и в атмосферном воздухе осуществляют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <2>, методическими документами <3>, а также документами по стандартизации <4>.
<2> Глава IV СанПиН 3.3686-21.
<3> МУК 4.2.1054-01 «Измерение концентраций микроорганизмов-продуцентов, бактериальных препаратов и их компонентов в атмосферном воздухе населенных мест», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 06.06.2001 (далее — МУК 4.2.1054-01).
<4> ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны», утвержденный и введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 № 3388.
5.2. При выполнении определения необходимо соблюдать требования по электробезопасности при работе с электроустановками <5> и инструкцию по эксплуатации прибора.
<5> ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты», введенный приказом Росстандарта от 07.11.2018 № 941-ст; ГОСТ 12.1.009-2017 «Электробезопасность. Термины и определения», введенный приказом Росстандарта от 07.11.2018 № 942-ст.
5.3. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
5.4. К выполнению определения и обработке результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
VI. Условия определения концентрации штамма
6.1 Приготовление сред, подготовку к определению концентрации штамма в воздухе проводят в следующих условиях:
- температура воздуха — плюс (20 +/- 5) °C;
- атмосферное давление — (760 +/- 20) мм. рт. ст.;
- влажность воздуха — не более 80%.
VII. Приготовление агаризованной среды
7.1. При проведении исследований в МПБ добавляют агар микробиологический из расчета 15 г на 1 дм3 МПБ и нагревают до полного растворения агара.
7.2. Приготовленную среду (МПА) разливают в стерильные колбы по 250 — 500 см3 и автоклавируют при плюс 120 °C в течение 15 — 20 мин, остужают и разливают по стерильным чашкам Петри.
7.3. Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше плюс 8 °C не более 10 дней.
VIII. Проведение определения концентрации штамма в воздухе
8.1. Отбор проб воздуха. Отбор проб воздуха проводят в соответствии с методическими документами <6>, а также документами по стандартизации <7>.
<6> МУК 4.2.1054-01.
<7> ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений», введенный приказом Ростехрегулирования от 15.12.2009 № 1253-ст.
Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависят от предполагаемой концентрации микроорганизма (табл. 8.1).
Время и скорость отбора проб воздуха
Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96%-м этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
8.2 Выполнение определения концентрации штамма.
8.2.1. При выполнении определения концентрации штамма в воздухе стерильную агаризованную среду (МПА) расплавляют, остужают до температуры плюс 50 — 60 °C и разливают в чашки Петри.
8.2.2. Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с методическими документами <8>. Для этого чашки с застывшей средой помещают в термостат при температуре плюс 37 °C не менее чем на 18 часов. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температуре плюс 2 — 8 °C не более 10 дней.
<8> Подпункт 7.1.1 МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред», утвержденных Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.01.2008 (далее — МУК 4.2.2316-08).
8.2.3. После отбора проб воздуха чашки Петри культивируют при температуре (28 +/- 2) °C. Через 2 — 4 суток производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам. При необходимости возможно генотипирование штаммов методом ДРИМ (двойное расщепление, избирательное мечение).
8.2.4. Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения определения концентрации штамма в воздухе в соответствии ростовыми свойствами питательных сред <9>. Для этого музейный штамм высевают на 2 — 3 чашки используемой среды.
<9> Пункт 7 МУК 4.2.2316-08.
8.2.5. Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 — 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств.
IX. Вычисление результатов определения
9.1 Расчет концентрации клеток штамма производят по формуле (1):
\text{К } = \frac{\text{П } \times 1000}{\text{С } \times \text{Т}} , (1)
где: К — концентрация штамма в воздухе, КОЕ/м3;
П — количество типичных колоний, выросших на чашке Петри;
1000 — коэффициент пересчета дм3 на м3 воздуха;
С — скорость аспирации воздуха, дм3/мин;
X. Оформление результатов определения
10.1. Результаты определения концентрации штамма в воздухе оформляют протоколом <10>. Протокол испытания должен включать:
- всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;
- используемый метод испытаний;
- все детали испытания, не установленные настоящим документом;
- полученные результаты и соотношение их с уровнем ПДКр.з или ПДКа.в.
<10> Пункты 7.3, 7.8 ГОСТ ISO 17025-2019 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий», введенного приказом Росстандарта от 15.07.2019 № 385-ст.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».
3. МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред».
4. МУК 4.2.1054-01 «Измерение концентраций микроорганизмов-продуцентов, бактериальных препаратов и их компонентов в атмосферном воздухе населенных мест».
5. ГОСТ 12.1.009-2017 «Электробезопасность. Термины и определения».
6. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1 Метрологические и технические требования. Испытания».
7. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
8. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования»
9. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
10. ГОСТ 31598-2012 «Стерилизаторы паровые большие. Общие технические требования и методы испытаний».
11. ГОСТ Р ЕН 13060-2011 «Стерилизаторы паровые малые».
12. ГОСТ 22340-89 «Аквадистилляторы медицинские электрические. Общие технические требования и методы испытаний».
13. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
14. ГОСТ 25706-83 «Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования».
15. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
16. ГОСТ 23932-90 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия».
17. ГОСТ 9412-2021 «Марля медицинская. Общие технические условия».
18. ГОСТ 5556-2022 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
19. ГОСТ 12026-76 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».
20. ГОСТ 17206-96 «Агар микробиологический. Технические условия».
21. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
22. ГОСТ 17299-78 «Спирт этиловый технический. Технические условия».
23. ГОСТ 5962-2013 «Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия».
24. ГОСТ ISO 17025-2019 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».
25. ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
| ББК 51.214+51.242 |
|---|