МУК 4.1.4274-26. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в зеленой массе растений, зерне кукурузы, бобах сои, семенах подсолнечника, рапса, растительных маслах, клубнях картофеля и капусте методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 10.04.2026)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://www.rospotrebnadzor.ru/ по состоянию на 30.06.2026. Документ введен в действие с 10.09.2026.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 апреля 2026 года
Дата введения 10 сентября 2026 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИФЛУБЕНЗУРОНА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАСТЕНИЙ, ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, БОБАХ СОИ, СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА, РАПСА, РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ И КАПУСТЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4274-26
1. Разработаны ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений» (В.В. Человечкова, Т.Д. Черменская, А.С. Комарова, О.В. Долженко) и ООО «Инновационный центр защиты растений» (Е.Ю. Алексеев, С.Б. Левченко).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 10 апреля 2026 г.
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения массовой концентрации дифлубензурона в зеленой массе растений, зерне кукурузы, бобах сои, семенах подсолнечника, рапса, растительных маслах, клубнях картофеля и капусте в диапазоне концентраций от 0,01 до 0,1 мг/кг, включительно — без разбавления и от 0,01 до 5,0 мг/кг, включительно — с учетом разбавления в 50 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
2.1. Дифлубензурон — 1-(4-хлорфенил)-3-(2,6-дифторбензоил) мочевина <1>. Брутто формула: C14H9ClF2N2O2. CAS № 35367-38-5. Молекулярная масса: 310,7.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Бесцветные кристаллы. Температура плавления плюс 228 °C. Давление паров 1,2 x 10-4 мПа (при температуре плюс 25 °C). Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода Kow lgP = 3,89. Растворимость в воде (при температуре плюс 25 °C и pH 7): 0,08 мг/дм3. Растворимость в органических растворителях (г/дм3, при температуре плюс 20 °C): гексан — менее 0,063; метанол — 1,1; толуол — 0,29; ацетон — 6,98; дихлорметан — 1,8; ацетонитрил — 2,0. В водных растворах при температуре плюс 20 °C период полураспада при pH 5 — 7 более 150 дней, при pH 9 — 42 дня. Светочувствителен в растворах, но стабилен к солнечному свету в твердом состоянии. Менее 0,5% разрушается при хранении в течение 1 дня при температуре плюс 100 °C, менее 0,5% разрушается при хранении в течение 7 дней при температуре плюс 50 °C.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность для крыс и мышей (ЛД50) более 4640 мг/кг, острая дермальная токсичность для крыс (ЛД50) более 10000 мг/кг, для кроликов более 2000 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу, не раздражает глаза.
2.4 Область применения.
Инсектицид. Несистемный регулятор роста насекомых контактного и кишечного действия.
III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Метрологические характеристики
Полнота извлечения дифлубензурона, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений для n = 20, P = 0,95 приведены в таблице 3.2.
Объект анализа, предел определения, диапазон определяемых концентраций, полнота извлечения дифлубензурона, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений для n = 20, P = 0,95
IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ
4.1. Метод основан на определении дифлубензурона методом ВЭЖХ с использованием детектора на диодной матрице после извлечения из образцов ацетонитрилом, очистке ацетонитрильных экстрактов сорбентами для твердофазной экстракции и на концентрирующем патроне. Идентификация дифлубензурона проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки. Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
4.2. Нижний предел измерения содержания дифлубензурона в анализируемом объеме пробы — 0,2 нг.
V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Жидкостный хроматограф с диодно-матричным детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Максимальное рабочее давление 100 МПа, диапазон длин волн детектора 190 — 800 нм, предел детектирования (по антрацену) 2,0 x 10-9 г/см3. Относительное среднее квадратическое отклонение выходного сигнала хроматографа, %, не более: - по площади пика 1,0%; - по времени удерживания 0,3% |
| Весы лабораторные аналитические | Наибольший предел взвешивания 81/210 г, предел допустимой погрешности 0,1/0,3 мг, ГОСТ OIML R 76-1-2011 |
| Весы лабораторные общего назначения | Наибольший предел взвешивания 150 г, предел допустимой погрешности 5 мг, ГОСТ OIML R 76-1-2011 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Дозаторы пипеточные переменного объема | 10 — 100, 100 — 1000, 1000 — 10000 мм3, ГОСТ 28311-2021 |
| Колбы мерные | 2-ого класса точности, вместимостью 10, 50, 100 и 1000 см3, ГОСТ 1770-74 |
| Цилиндры мерные | 2-ого класса точности, вместимостью 50, 100 и 500 см3, ГОСТ 1770-74 |
| Прибор/приборы для измерения параметров микроклимата (атмосферное давление, температура и относительная влажность воздуха) | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Ацетонитрил | Для ВЭЖХ |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Дифлубензурон, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 98% |
| Калий углекислый (карбонат калия) | Химически чистый, ГОСТ 4221-76 |
| Кислота ортофосфорная | Чистая для анализа, ГОСТ 6552-80 |
| Магний сернокислый безводный | Содержание основного вещества не менее 97% |
| Натрий лимоннокислый двузамещенный, 1,5-водный | Содержание основного вещества не менее 99,0% |
| Натрий лимоннокислый трехзамещенный, 2-водный | Содержание основного вещества не менее 99,0% |
| Натрий хлористый | Чистый для анализа, ГОСТ 4233-77 |
| Гексан | Оптическая плотность при 200 нм не более 0,6 о.е./см |
| Оксид (V) фосфора (пентоксид фосфора) | Содержание основного вещества не менее 98% |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми первичными и вторичными аминными группами (англ. Primary Secondary Amine, PSA) | Площадь поверхности ~ 500 м2/г, средний размер пор 70Е , средний размер частиц 50 мкм |
| Эндкепированный сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами (C18-E) | Средний размер частиц 40 — 63 мкм |
| Этилацетат | Химически чистый, ГОСТ 22300-76 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. При анализе можно использовать «Набор для пробоподготовки по методу QuEChERS для фруктов и овощей» и «Набор для пробоподготовки по методу QuEChERS с эндкепированным октадецилсиланом для продуктов, содержащих масла». | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств и материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Аналитическая колонка | Стальная, длиной 100 мм и внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная неполярным обращенно-фазным сорбентом с привитыми группами C18, зернением 1,7 мкм |
| Установка вакуумной фильтрации для работы с патронами для твердофазной экстракции | Снабженная вакуумным насосом, обеспечивающим вакуум до 100 мбар |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 35 кГц |
| Виалы хроматографические | Вместимостью 2 см3 |
| Измельчитель лабораторный (типа — блендер или кутер) | С ножами из нержавеющей стали |
| Испаритель | Состоящий из термостата (300 Вт, макс. температура плюс 130 °C), газодозатора (макс. давление 0,5 бар) и компрессора (макс. давление 2,4 бар) |
| Колбы круглодонные на шлифе | Вместимостью 10 см3, тип Гр-1-10-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы плоскодонные | Вместимостью 100 см3, тип Кн-1-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82 |
| Мельница зерновая | - |
| Морозильная камера | Температура не выше минус 18 °C |
| Патроны концентрирующие для твердофазной экстракции | Заполненные гидрофильным слабокислотным сорбентом на основе силикагеля с постоянной активностью (0,6 г) |
| Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками | Вместимостью 15 и 50 см3 |
| Пробирки стеклянные | Вместимостью 15 см3, тип П2-14-100 ХС, ГОСТ 25336-82 |
| Ротационный вакуумный испаритель | С мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар, и водяной баней |
| Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении | - |
| Устройство перемешивающее | С орбитальным движением платформы, 50 — 200 колеб./мин, амплитуда 20 мм |
| Фильтры мембранные | Для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,2 мкм, диаметр 25 мм, мембрана из целлюлозы |
| Холодильник | Температура от 0 до плюс 10 °C |
| Холодильник водяной обратный | Тип ХШ-1-300-29/32 ХС, ГОСТ 25336-82 |
| Центрифуга | Частота вращения не менее 4000 об/мин |
| Шприцы медицинские одноразовые | Вместимостью 2 см3, ГОСТ ISO 7886-1-2011 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
6.1. При выполнении измерений следует соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда <3>.
<3> Постановление Правительства Российской Федерации от 24.12.2021 № 2464 «О порядке обучения по охране труда и проверки знания требований охраны труда».
6.3. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ
7.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.
<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
<5> ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный постановлением Госстандарта СССР от 18.12.1986 № 3979; ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный приказом Росстандарта от 28.10.2013 № 1254-ст; ГОСТ 7176-2017 «Картофель продовольственный. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.11.2017 № 1843-ст; ГОСТ 33494-2015 «Капуста белокочанная свежая для промышленной переработки. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 01.12.2015 № 2097-ст.
Зеленую массу растений, клубней картофеля и капусту хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C до анализа не более 1 месяца. Зерно кукурузы, бобы сои, семена рапса и подсолнечника хранят при комнатной температуре в бумажной или тканевой упаковке. Сухие образцы могут храниться в течение года. Пробы масла хранят в холодильнике при температуре от 0 до плюс 10 °C в герметично закрытой стеклянной таре не более 2 месяцев.
VIII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
8.1 При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
IX. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
9.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), кондиционирование хроматографической колонки, приготовление подвижной фазы, приготовление растворов, установление градуировочной характеристики или проверка ее стабильности, подготовка концентрирующего патрона, проверка хроматографического поведения дифлубензурона на концентрирующем патроне, подготовка проб.
9.2 Очистка органических растворителей.
Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют. Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
9.2.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил (1 дм3) кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (20 г) не менее 1 ч, после чего перегоняют. Непосредственно перед использованием ацетонитрил (1 дм3) повторно перегоняют над карбонатом калия (10 г).
9.2.2. Гексан. Гексан (1 дм3) кипятят с обратным холодильником над карбонатом калия (20 г) не менее 1 ч, после чего перегоняют.
9.2.3. Этилацетат. Этилацетат (1 дм3) кипятят с обратным холодильником над карбонатом калия (20 г) не менее 1 ч, после чего перегоняют.
9.3 Кондиционирование колонки.
Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы 0,1 — 0,2 см3/мин до стабилизации нулевой линии.
9.4 Приготовление растворов.
9.4.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,50 +/- 0,01) г ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки.
Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) при комнатной температуре не более 14 дней.
9.4.2. Для приготовления подвижной фазы для ВЭЖХ в мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 ацетонитрила и доводят до метки 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты.
Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) при комнатной температуре не более 14 дней.
9.4.3. Приготовление элюента № 1 (смесь гексан-этилацетат 9:1): в плоскодонную колбу вместимостью 100 см3 мерным цилиндром вносят 90 см3 гексана и 10 см3 этилацетата.
Смесь используется в день приготовления.
9.4.4. Приготовление элюента № 2 (смесь гексан-этилацетат 1:1): в плоскодонную колбу вместимостью 100 см3 мерным цилиндром вносят 50 см3 гексана и 50 см3 этилацетата.
Смесь используется в день приготовления.
9.5 Приготовление основного, рабочего и градуировочных растворов.
9.5.1 Приготовление основного раствора.
Основной раствор дифлубензурона с концентрацией 0,2 мг/см3: точную навеску дифлубензурона (10 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
9.5.2 Приготовление рабочего раствора.
Рабочий раствор с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 дозатором вносят 0,5 см3 основного раствора дифлубензурона и доводят до метки подвижной фазой.
9.5.3 Приготовление градуировочных растворов.
Градуировочные растворы с концентрациями дифлубензурона 0,015, 0,05, 0,1 и 0,2 мкг/см3 соответственно готовят методом последовательного разбавления по объему, используя подвижную фазу.
9.5.3.1. Раствор № 1 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 2,0 см3 рабочего раствора и доводят до метки подвижной фазой.
9.5.3.2. Раствор № 2 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 1,0 см3 рабочего раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.
9.5.3.3. Раствор № 3 с концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 5,0 см3 раствора № 2 и доводят объем до метки подвижной фазой.
9.5.3.4. Раствор № 4 с концентрацией 0,015 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 1,5 см3 раствора № 2 и доводят объем до метки подвижной фазой.
Основной раствор дифлубензурона можно хранить в холодильнике при температуре от 0 до плюс 10 °C в течение 6 месяцев, рабочий и градуировочные растворы — в течение недели.
При изучении полноты определения дифлубензурона используют ацетонитрильные растворы веществ, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
9.6 Установление градуировочной характеристики.
Для установления градуировочной характеристики (площадь пика — концентрация дифлубензурона в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4. Определяют площади пиков вещества, строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе, на основании которого устанавливают градуировочную зависимость. Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику проверяют перед началом измерений, при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля стабильности градуировочной характеристики.
9.7 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят перед серией измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
Градуировочную характеристику признают стабильной при выполнении следующего условия (1):
\frac{|C - C_{\text{К}}|}{\text{С}} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.}, (1)
где: C — известная концентрация дифлубензурона в градуировочном растворе, взятом для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
CК — концентрация дифлубензурона в градуировочном растворе при контрольном измерении, мкг/см3;
\lambda_{\text{контр}.} — норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( \lambda_{\text{контр}.} = 10\% при P = 0,95).
Если расхождение превышает 10%, то повторяют контроль стабильности градуировочной характеристики с использованием других градуировочных растворов дифлубензурона. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики делают вывод о невозможности ее применения и устанавливают заново. При этом, целесообразно выяснить и устранить причины нестабильности градуировочной характеристики.
9.8 Подготовка концентрирующего патрона для твердофазной экстракции.
Концентрирующий патрон промывают 2,5 см3 элюента № 2 и затем 3 см3 элюента № 1 со скоростью 1 — 2 капли/сек.
9.9. Проверка хроматографического поведения дифлубензурона на концентрирующем патроне.
В круглодонную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором помещают 1,0 см3 рабочего раствора дифлубензурона с концентрацией 1 мкг/см3 (п. 9.5.2). Растворитель упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C, к сухому остатку дозатором добавляют в 1 см3 элюента № 1 и помещают в ультразвуковую ванну на 10 сек. Раствор наносят на патрон, подготовленный по п. 9.8, колбу омывают еще 1 см3 элюента № 1 и раствор вносят на патрон. Промывают патрон 5 см3 элюента № 1 со скоростью 1 — 2 капли/сек, элюат отбрасывают. Затем через патрон пропускают 10 см3 элюента № 2, отбирая последовательно по 2 см3 элюата в стеклянные пробирки. Растворы в пробирках упаривают досуха в испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. К сухому остатку дозатором добавляют 1 см3 подвижной фазы, растворяют и переносят в виалы для хроматографирования. Далее анализируют на содержание дифлубензурона по п. 10.4.
По результатам обнаружения дифлубензурона в каждой из фракций определяют объем элюента, необходимый для полного вымывания дифлубензурона с патрона.
X. ВЫПОЛНЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
10.1. Экстракция дифлубензурона из зеленой массы, капусты и клубней картофеля.
Навеску гомогенизированной в измельчителе пробы (10 г) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, последовательно добавляют пипеточным дозатором 10 см3 ацетонитрила, 4 г безводного сульфата магния, 1 г хлористого натрия, 1 г лимоннокислого натрия трехзамещенного 2-водного и 0,5 г лимоннокислого натрия двузамещенного 1,5-водного. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при 4000 об/мин. От верхнего ацетонитрильного слоя пипеточным дозатором отбирают 5 см3 экстракта, переносят в центрифужную пробирку вместимостью 15 см3, содержащую 150 мг сорбента для твердофазной экстракции (PSA) и 900 мг безводного сульфата магния. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при 4000 об/мин. От верхнего ацетонитрильного слоя пипеточным дозатором отбирают 2 см3 (аликвота, соответствующая 2 г), переносят в стеклянную пробирку и упаривают досуха в испарителе в токе воздуха при температуре не выше плюс 40 °C. Сухой остаток очищают на патроне для твердофазной экстракции (п. 10.3).
10.2. Экстракция дифлубензурона из зерна кукурузы, бобов сои, семян подсолнечника, рапса и растительного масла.
Навеску растительного масла или измельченной в лабораторной мельнице пробы (10 г) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, последовательно пипеточным дозатором добавляют 10 см3 ацетонитрила, 1 г хлористого натрия и 5 см3 дистиллированной воды. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при 4000 об/мин. От верхнего ацетонитрильного слоя пипеточным дозатором отбирают 5 см3, переносят в центрифужную пробирку вместимостью 15 см3, содержащую 150 мг сорбента для твердофазной экстракции (PSA), 150 мг эндкепированого сорбента для твердофазной экстракции (C18-E) и 900 мг безводного сульфата магния. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при 4000 об/мин. От верхнего слоя пипеточным дозатором отбирают 2 см3 (аликвота, соответствующая 2 г), переносят в стеклянную пробирку и упаривают досуха в испарителе в токе воздуха при температуре не более 40 °C. Сухой остаток очищают на патроне для твердофазной экстракции (п. 10.3).
10.3 Очистка экстракта на патронах для твердофазной экстракции.
Сухой остаток, полученный по п. 10.1 и 10.2, растворяют в 1 см3 элюента № 1 и наносят на предварительно кондиционированный патрон (п. 9.8). Колбу ополаскивают еще 1 см3 элюента № 1, который также наносят на патрон. Патрон промывают 5 см3 элюента № 1, элюат отбрасывают. Дифлубензурон элюируют 6 см3 элюента № 2, элюат собирают и упаривают досуха в испарителе в токе воздуха при температуре не выше плюс 40 °C. К сухому остатку дозатором добавляют 1 см3 подвижной фазы. Полученный раствор с помощью шприца фильтруют через мембранный фильтр в виалу для хроматографирования и анализируют по п. 10.4.
10.4 Условия хроматографирования <6>.
<6> Примечание: условия хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
Жидкостный хроматограф с диодно-матричным детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Стальная аналитическая колонка длинной 100 мм и внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная неполярным обращенно-фазным сорбентом с привитыми группами C18, зернением 1,7 мкм. Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50. Скорость потока элюента 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны детектора 260 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Приблизительное время удерживания 5,4 мин.
XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА
11.1 Содержание дифлубензурона в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле (2):
X = \frac{C \times V \times K \times 100}{M \times f} , (2)
где: C — концентрация дифлубензурона, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3 (1 см3);
M — окончательная масса анализируемого образца, г (аликвота, равная 2 г);
f — полнота извлечения дифлубензурона, приведенная в табл. 3.2, %;
Содержание дифлубензурона в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор дифлубензурона с концентрацией 0,2 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой не более чем в 50 раз. Коэффициент разбавления при этом учитывают при расчете по формуле (2).
XII. ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ
12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):
\frac{2 \cdot |\text{Х}_{1} - \text{Х}_{2}| \cdot 100}{(\text{Х}_{1} + \text{Х}_{2})} \leq r, (3)
где: X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (приведено в таблице 3.1).
При невыполнении условия (3) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
13.1 Результат анализа представляют в виде выражения (4):
(X_{\text{ср}} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, (4)
где: Xср — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):
\Delta = \frac{\delta \times X_{\text{ср}}}{100} , (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, приведена в таблицах 3.1), %.
В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание дифлубензурона в пробе — менее 0,01 мг/кг <7>».
<7> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации дифлубензурона в исследуемой продукции.
XIV. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
14.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <8>.
<8> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Постановление Правительства Российской Федерации от 24.12.2021 № 2464 «О порядке обучения по охране труда и проверке знания требований охраны труда».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
4. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
9. ГОСТ OIML R 76-1-2011 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
10. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3-3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
11. ГОСТ 28311-2021 «Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний».
12. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
13. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
14. ГОСТ 4221-76 «Калий углекислый. Технические условия».
15. ГОСТ 6552-80 «Кислота ортофосфорная. Технические условия».
16. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».
17. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
18. ГОСТ ISO 7886-1-2011 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
19. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
20. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
21. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
22. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
23. ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
24. ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
25. ГОСТ 7176-2017 «Картофель продовольственный. Технические условия».
26. ГОСТ 33494-2015 «Капуста белокочанная свежая для промышленной переработки. Технические условия».
27. ГОСТ 22300-76 «Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
28. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.