МУК 4.1.4271-26. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флубендиамида в зеленой массе растений, зерне кукурузы и нута, в семенах масличных культур (подсолнечника, сои и рапса) и в растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля

№ МУК 4.1.4271-26Действующий акт

(утв. Роспотребнадзором 10.04.2026)

Примечание

Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://www.rospotrebnadzor.ru/ по состоянию на 30.06.2026. Документ введен в действие с 10.09.2026.

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 апреля 2026 года

Дата введения 10 сентября 2026 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУБЕНДИАМИДА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАСТЕНИЙ, ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ И НУТА, В СЕМЕНАХ МАСЛИЧНЫХ КУЛЬТУР (ПОДСОЛНЕЧНИКА, СОИ И РАПСА) И В РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4271-26

1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова, Н.В. Устименко).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «10» апреля 2026 г.

3. Введены впервые.

I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения массовых концентраций флубендиамида в зеленой массе растений в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, в зерне кукурузы, нута, семенах и масле подсолнечника и рапса в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг, а также в семенах и масле сои в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг — без учета разбавления и 0,01 — 1,0 мг/кг — с учетом разбавления в 10 раз.

1.2 МУК носят рекомендательный характер.

II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

2.1. Флубендиамид — 1-N-[4-(1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан-2-ил)-2-метилфенил]-3-йодо-2-N-(2-метил-1-метилсульфонилпропан-2-ил)бензол-1,2-дикарбокса <1>. Брутто-формула: C23H22N2O4F7IS. CAS № 272451-65-7. Молекулярная масса: 682,4.

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2 Физические и химические свойства.

Белое кристаллическое вещество без характерного запаха. Давление насыщенного пара 1 x 10-4 Па (при температуре плюс 25 °C). Температура плавления плюс 217,5 — 220,7 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 4,14 (при температуре плюс 20 °C). Растворимость в воде 0,029 мг/дм3 (при температуре плюс 20 °C). Растворимость в органических растворителях (г/дм3): ацетон — 102; этилацетат — 29,4; метанол — 26; 1,2-дихлорметан — 8,12; п-ксилол — 0,488; н-гептан — 0,000835 (при температуре плюс 20 °C).

Слабо подвержен гидролизу в диапазоне pH 4 — 9.

2.3 Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (ЛД₅₀) для крыс — более 2000 мг/кг. Острая дермальная токсичность (ЛД₅₀) для крыс — более 2000 мг/кг. Острая ингаляционная токсичность (ЛК50) для крыс — 69 мг/м3 воздуха (при 4 часовой экспозиции).

2.4 Область применения.

Флубендиамид — инсектицид, принадлежащий к химическому классу бензолдикарбоксамидов (диамидов фталевой кислоты), рекомендуется для борьбы с широким спектром насекомых на различных сельскохозяйственных культурах (например, фрукты, овощи, виноград).

III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ

3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).

Таблица 3.1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), \pm \delta , %	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях) R, %, (P = 0,95)
Зеленая масса кукурузы	0,05 — 0,5	50	4,9	6,9	14	19
Зерно кукурузы	0,01 — 0,1	50	5,0	7,0	14	20
Масло кукурузы	0,01 — 0,1	50	3,3	4,6	9	13
Зерно нута	0,01 — 0,1	50	4,9	6,9	14	19
Семена подсолнечника	0,01 — 0,1	50	3,6	5,0	10	14
Масло подсолнечника	0,01 — 0,1	50	4,0	5,6	11	16
Семена сои	0,01 — 1,0	50	3,5	4,9	10	14
Масло сои	0,01 — 1,0	50	5,2	7,2	14	20
Семена рапса	0,01 — 0,1	50	4,6	6,4	13	18
Масло рапса	0,01 — 0,1	50	4,3	6,0	12	17
Примечание: диапазон определяемых концентраций, указанный в таблице 3.1 для семян и масла сои, приведен с учетом разбавления образца в 10 раз

IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ

4.1. Измерения массовых концентраций флубендиамида выполняют методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора.

4.2. Определение флубендиамида в зеленой массе растений проводится после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 3 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами.

4.3. Определение флубендиамида в зерне кукурузы, а также в семенах рапса и сои, проводится после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта на колонках с окисью алюминия, на концентрирующих патронах № 1 с гидрофильным слабокислым сорбентом (C-силикагель) и на концентрирующих патронах № 2 с гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными группами (C16).

4.4. Определение флубендиамида в зерне нута проводится после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на концентрирующих патронах № 1 с гидрофильным слабокислым сорбентом (C-силикагель) и на колонках с окисью алюминия.

4.5. Определение флубендиамида в семенах подсолнечника проводится после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 1 с гидрофильным слабокислым сорбентом (C-силикагель).

4.6. Определение флубендиамида в кукурузном, подсолнечном и соевом масле проводится после его экстракции из растворенных в гексане образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия на концентрирующих патронах № 1 с гидрофильным слабокислым сорбентом (C-силикагель) и на концентрирующих патронах № 2 с гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными группами (C16).

4.7. Определение флубендиамида в рапсовом масле проводится после его экстракции из растворенных в гексане образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на концентрирующих патронах № 1 с гидрофильным слабокислым сорбентом (C-силикагель) и на колонках с окисью алюминия.

4.8 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 2,1 нг.

4.9. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.

4.10. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором хроматографических колонок различной полярности.

V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

Таблица 5.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Хроматограф жидкостной с диодно-матричным детектором	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы аналитические	Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ OIML R-76-1-2011
Весы лабораторные	Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ OIML R-76-1-2011
Колбы мерные	Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1-2009
Пипетки градуированные	Тип 1-₂-2-₁, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91
Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Цилиндры мерные	Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 5.2

Реактивы

Наименование реактивов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Флубендиамид	Аналитический стандарт с содержанием основного вещества не менее 98,0%
Ацетон	Химически чистый, ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил	Содержание основного вещества не менее 99,8%
Вода дистиллированная	ГОСТ Р 58144-2018
Вода для лабораторного анализа	ГОСТ Р 52501-2005
Гелий очищенный	Содержание основного вещества не менее 99,9%
н-Гексан	Содержание основного вещества не менее 99%
Калий марганцовокислый	Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый гранулированный безводный	Содержание основного вещества не менее 99%
Кислота соляная	Химически чистая, ГОСТ 3118-77
Концентрирующие патроны для пробоподготовки методом твердофазной экстракции (патрон № 1)	Корпус из инертной полиэтиленовой или полипропиленовой оболочки, заполнены гидрофильным слабокислотным сорбентом с постоянной активностью на силикагелевой матрице (C) с размером частиц 40 — 63 мкм с фиксированным слоем сорбента объемом 1 см3
Концентрирующие патроны для пробоподготовки методом твердофазной экстракции (патрон № 2)	Корпус из инертной полиэтиленовой или полипропиленовой оболочки, заполнены гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными (C16) группами с размером частиц 63 — 200 мкм (количество сорбента — 1 см3)
Концентрирующие патроны для пробоподготовки методом твердофазной экстракции (патрон № 3)	Корпус из инертной полиэтиленовой или полипропиленовой оболочки, заполнены гидрофильным слабокислым сорбентом с постоянной активностью с привитыми аминогруппами (количество сорбента — 1 см3)
Натрий сернокислый	Химически чистый, ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый	Химически чистый, ГОСТ 4233-77
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат)	Чистый для анализа, ГОСТ 22300-76
Сорбент для твердофазной экстракции на основе оксида алюминия	Нейтральный, размер частиц 50 — 200 мкм
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Таблица 5.3

Вспомогательное оборудование, устройства и материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств и материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Алонж прямой стеклянный	Тип АО, ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб	Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний/минуту
Банки полипропиленовые с крышками для экстракции	Вместимость 250 см3
Ванна ультразвуковая	Рабочая частота 50 Гц
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная	ГОСТ 5556-2022
Виалы с завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлоновой резиновой прокладкой, для жидких проб	Вместимость 2 см3
Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой	Вместимость не менее 40 см3
Воронки делительные	Тип ВД, вместимость 250 см3, ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные	Тип В, ГОСТ 25336-82
Колбы конические	Тип Кн, вместимость 100 — 1000 см3, ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные (для упаривания)	Тип К, вместимость 100 и 250 см3, ГОСТ 25336-82
Колонка хроматографическая стальная	Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; длина 150 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, размер частиц 5 мкм
Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые	Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм
Мельница лабораторная	-
Насос мембранный вакуумный	Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар
Ножницы кухонные	-
Печь микроволновая	С регулируемой мощностью от 100 ватт
Предколонка хроматографическая стальная	Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; длина 12,5 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, размер частиц 5 мкм
Ротационный вакуумный испаритель	С регулируемой скоростью вращения штока, с водяной баней с антикоррозионным покрытием с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C
Стаканы	Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3, ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей	С круглодонной колбой из термически стойкого стекла типа ТС вместимостью 4000 см3 и приемной конической колбой вместимостью 1000 см3
Фильтры мембранные для очистки растворителей	Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм
Фильтры бумажные	Обеззоленные, нейтральные, быстро фильтрующие, типа «Красная лента», диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г
Холодильная/морозильная камера	ГОСТ 26678-85
Шприц инъекционный однократного применения	Вместимость 10 см3, ГОСТ ISO 7886-1-2011
Электроплитка бытовая с закрытой спиралью	ГОСТ 14919-83
Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

VIII. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка лабораторной посуды, очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с оксидом алюминия, проверка хроматографического поведения вещества на патронах № 1, № 2 и № 3, установление градуировочной характеристики.

8.2. Подготовка лабораторной посуды. Вся посуда и стеклянное оборудование должны быть тщательно вымыты. Для мойки используют растворы подходящих детергентов. После мойки в растворе любого моющего средства посуду и оборудование промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и тщательно высушивают.

8.3 Подготовка и очистка органических растворителей.

8.3.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.

8.3.2. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.

8.3.3. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.

8.3.4. Этилацетат. Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Этилацетат перегоняют при температуре плюс 76,5 — 77,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 76,5 — 77,5 °C, отбрасывают.

8.3.5. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.

8.4 Приготовление рабочих растворов.

8.4.1. Приготовление смеси ацетонитрила с соляной кислотой в соотношении 100:0,01 (по объему) <3>. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 0,1 см3 соляной кислоты, перемешивают и доводят ацетонитрилом объем в колбе до метки. Раствор используют при экстракции флубендиамида из образцов матриц и готовят непосредственно перед использованием.

<3> Примечание: приготовление раствора проводится в работающей тяге.

8.4.2. Приготовление смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 50 см3 ацетонитрила и 50 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют для приготовления градуировочных стандартов и разведения проб перед анализом, а также при очистке экстрактов на патронах № 2. Раствор хранится при комнатной температуре не более семи дней.

8.4.3. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 80 см3 гексана и добавляют 20 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают.

8.4.4. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:2 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 25 см3 гексана и добавляют 50 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают.

Растворы, приготовленные по п.п. 8.4.3 - 8.4.4, используют при очистке экстрактов на патронах № 1 и № 3 и готовят непосредственно перед использованием.

8.4.5. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 90 см3 гексана и добавляют 10 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на патронах № 3. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

8.4.6. Приготовление смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:4 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 20 см3 ацетонитрила и 80 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают.

8.4.7. Приготовление смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:2 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 25 см3 ацетонитрила и 50 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают.

Растворы, приготовленные по п.п. 8.4.6 - 8.4.7, используют при очистке экстрактов на патронах № 2 и готовят непосредственно перед использованием.

8.5. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и бидистиллированную воду, которые предварительно фильтруют через мембранные фильтры для очистки растворителей.

В коническую колбу вместимостью 1000 см3 помещают 400 см3 бидистиллированной воды и 600 см3 ацетонитрила. Смесь тщательно перемешивают.

При использовании градиентного режима хроматографирования компоненты подвижной фазы помещают в разные емкости.

В случае отсутствия в составе хроматографической системе автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см3/минуту в течение 5 минут, после чего его помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.

Приготовленный раствор подвижной фазы хранится при комнатной температуре не более пяти дней.

8.6 Приготовление растворов аналитического стандарта флубендиамида.

8.6.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией флубендиамида 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г флубендиамида в мерной колбе вместимостью 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

8.6.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией флубендиамида 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Стандартные растворы № 1 и 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 3 месяцев.

8.6.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией флубендиамида 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией флубендиамида 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией флубендиамида 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией флубендиамида 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией флубендиамида 0,07 мкг/см3. Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 7 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

Стандартные растворы № 3 — 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 3 месяцев.

8.6.8. Стандартные растворы флубендиамида с концентрацией 10,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; 0,25; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матрицы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом из стандартного раствора № 1 готовят растворы, содержащие по 10,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; 0,25; 0,2 и 0,1 мкг/см3 флубендиамида и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матрицы.

8.6.9. Стандартные растворы флубендиамида с концентрацией 10,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы растительных масел. Методом последовательного разведения ацетоном из стандартного раствора № 1 готовят растворы, содержащие по 10,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 флубендиамида и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы растительных масел.

Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 3 месяцев.

8.7. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.

8.7.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки, приготовленным по п.п. 8.6.3 - 8.6.7.

В инжектор хроматографа вводят по 30 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.7. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.7.2. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения растворов для градуировки с концентрацией 0,07 и 1,0 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):

\frac{|X - C| \times 100}{C} \leq 10 , (1)

где: X — концентрация флубендиамида контрольного измерения, мкг/см3;

C — известная концентрация флубендиамида в градуировочном растворе, мкг/см3;

10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов флубендиамида, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.7.1.

8.8. Подготовка патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения флубендиамида на них.

8.8.1. Подготовка патронов № 1 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/минуту.

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер вместимостью не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: патрон промывают 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1, затем 5 см3 гексана. Сливы отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

8.8.2. Проверка хроматографического поведения флубендиамида на патронах № 1. В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора флубендиамида в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 см3 этилацетата, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и двумя порциями по 10 см3 каждая смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:2 и последовательно вносят эти растворы на патрон. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные чистые круглодонные колбы вместимостью по 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.2, и 30 мм3 хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие флубендиамид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Проверку хроматографического поведения флубендиамида на патронах № 1 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8.9. Подготовка патронов № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения флубендиамида на них.

8.9.1. Подготовка патронов № 2 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/минуту.

Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер вместимостью не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: патрон промывают 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, затем 10 см3 бидистиллированной воды. Сливы отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

8.9.2. Проверка хроматографического поведения флубендиамида на патронах № 2. В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора флубендиамида в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 бидистиллированной воды, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:4, затем 10 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:2 и тремя порциями по 10 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:1 и последовательно вносят эти растворы на патрон. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные чистые круглодонные колбы вместимостью по 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.2, и 30 мм3 хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие флубендиамид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Проверку хроматографического поведения флубендиамида на патронах № 2 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8.10. Подготовка патронов № 3 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения флубендиамида на них.

8.10.1. Подготовка патронов № 3 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/минуту.

Патрон № 3 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер вместимостью не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: патрон промывают 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1, затем 5 см3 гексана. Сливы отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

8.10.2. Проверка хроматографического поведения флубендиамида на патронах № 1. В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора флубендиамида в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1, 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и двумя порциями по 10 см3 каждая смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:2 и последовательно вносят эти растворы на патрон. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные чистые круглодонные колбы вместимостью по 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.2, и 30 мм3 хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие флубендиамид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Проверку хроматографического поведения флубендиамида на патронах № 3 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8.11. Подготовка колонки с оксидом алюминия (3 или 5 г) для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения флубендиамида на ней.

8.11.1. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстрактов. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают (3,0 +/- 0,3) г или (5,0 +/- 0,3) г оксида алюминия и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила, слив отбрасывают.

8.11.2. Проверка хроматографического поведения флубендиамида на колонке с оксидом алюминия. В круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора флубендиамида в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывая стенки колбы и помещая в ультразвуковую ванну на 5 секунд, и наносят раствор на подготовленную колонку. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу последовательно обмывают двумя порциями по 10 см3 каждая ацетонитрила и последовательно вносят их на колонку. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные круглодонные колбы для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.2, и 30 мм3 хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие флубендиамид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Проверку хроматографического поведения флубендиамида на колонках с оксидом алюминия следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8.12 Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки.

Хроматографическую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 30 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой, приготовленной по п. 8.5. (смесь ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 60:40, по объему) при скорости подачи растворителя 0,9 см3/минуту.

IX. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.

<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.

<5> ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный постановлением Госстандарта СССР от 18.12.1986 № 3979; ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный приказом Росстандарта от 28.10.2013 № 1254-ст; ГОСТ 17109-88 «Соя. Требования при заготовках и поставках», введенный постановлением Госстандарта СССР от 30.09.1988 № 3402; ГОСТ 31760-2012 «Масло соевое. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1630-ст; ГОСТ 22391-2015 «Подсолнечник. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 24.07.2015 № 984-ст; ГОСТ 1129-2013 «Масло подсолнечное. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.10.2013 № 1253-ст; ГОСТ 10583-76 «Рапс для промышленной переработки. Технические условия», введенный постановлением Госстандарта СССР от 19.04.1976 № 857; ГОСТ 31759-2012 «Масло рапсовое. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1631-ст; ГОСТ ISO 6497-2014 «Корма. Отбор проб», введенный приказом Росстандарта от 18.05.2016 № 353-ст; ГОСТ 13586.3-2015 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», введенный приказом Росстандарта от 31.08.2015 № 1236-ст; ГОСТ 8758-2025 «Нут. Требования при заготовках и поставках», введенный приказом Росстандарта от 07.07.2025 № 693-ст; ГОСТ 35245-2025 «Зерно кукурузы. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 07.07.2025 № 694-ст; ГОСТ Р 53903-2010 «Кукуруза кормовая. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.10.2010 № 339-ст; ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное. Технические условия», введенный постановлением Госстандарта России от 26.07.2001 № 291-ст.

9.2. Отобранные пробы зеленой массы хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.

9.3. Отобранные пробы зерна и семян подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

9.4. Пробы растительных масел хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.

X. ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

10.1 Зеленая масса растений.

10.1.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Образец измельченной зеленой массы растений массой (5,0 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции вместимостью 250 см3, прибавляют 80 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1, перемешивают и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку вместимостью 250 см3. Экстракцию повторяют еще один раз в тех же условиях, используя 80 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1. Экстракты фильтруют, объединяют в делительной воронке вместимостью 250 см3.

Объединенный ацетонитрильный экстракт промывают двумя порциями гексана по 70 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

10.1.2. Очистка экстракта на колонке с 5 г оксида алюминия. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.1, растворяют 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывая стенки колбы и помещая в ультразвуковую ванну на 5 секунд, и наносят раствор на подготовленную по п. 8.11.1 колонку с 5 г оксида алюминия. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3.

Исходную колбу обмывают 10 см3 ацетонитрила и также вносят на колонку, Элюат собирают, объединяя с предыдущим в круглодонной колбе для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

10.1.3. Очистка экстракта на патронах № 3. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.2, растворяют в 1 см3 этилацетата, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный по п. 8.10.1 патрон № 3. Слив отбрасывают.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1 и 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и последовательно вносят эти растворы на патрон, сливы отбрасывают.

Флубендиамид элюируют с патрона 10 см3 каждая смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:2. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

10.1.4. Сухой остаток растворяют 2,5 см3 в смеси, приготовленной по п. 8.4.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.7.

10.2 Зерно кукурузы, семена сои и рапса.

10.2.1. Экстракция. Образец измельченной матрицы массой (20,0 +/- 0,3) г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, прибавляют 80 см3 смеси, приготовленной по п. 8.3.1, перемешивают, помещают колбу в микроволновую печь и нагревают 2 минуты при мощности 300 ватт. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 80 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1, экстракт фильтруют. Остаток в колбе промывают 20 см3 смеси приготовленной по п. 8.4.1. Экстракты фильтруют, объединяют в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3 и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

10.2.2. Очистка экстракта на колонке с 3 г оксида алюминия. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.2.1, растворяют 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывая стенки колбы и помещая в ультразвуковую ванну на 5 секунд, и наносят раствор на подготовленную по п. 8.11.1 колонку с 3 г оксида алюминия. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3.

Исходную колбу обмывают 10 см3 ацетонитрила и также вносят на колонку, Элюат собирают, объединяя с предыдущим в круглодонной колбе для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

10.2.3. Очистка экстракта на патронах № 1. Остаток в колбе, полученный по п. 10.2.2, растворяют в 1 см3 этилацетата, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный по п. 8.8.1 патрон № 1. Слив отбрасывают.

Исходную колбу обмывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и вносят на патрон, слив отбрасывают.

10.2.4. Очистка экстракта на патронах № 2. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.2.3, растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 бидистиллированной воды, перемешивают и вносят на подготовленный п. 8.9.1 патрон по патрон № 2. Слив отбрасывают.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:4 и 10 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:2 и последовательно вносят растворы на патрон. Сливы отбрасывают.

Флубендиамид элюируют с патрона 20 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:1, элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

10.2.5. Сухой остаток растворяют 2 см3 в смеси, приготовленной по п. 8.4.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.7.

10.3 Зерно нута.

10.3.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Образец измельченного зерна нута массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции вместимостью 250 см3, прибавляют 50 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1, перемешивают и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку вместимостью 250 см3. Экстракцию повторяют еще один раз в тех же условиях, используя 50 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1. Экстракты фильтруют, объединяют в делительной воронке вместимостью 250 см3.

Объединенный ацетонитрильный экстракт промывают двумя порциями гексана по 50 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

10.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.3.1, растворяют в 50 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы и переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3.

Ацетонитрильный экстракт промывают двумя порциями гексана по 30 см3 каждая, интенсивно встряхивая каждый раз воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

10.3.3. Далее проводят очистку экстракта в соответствии с п.п. 10.2.3, 10.2.2.

10.3.4. Сухой остаток растворяют 1 см3 в смеси, приготовленной по п. 8.4.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.7.

10.4 Семена подсолнечника.

10.4.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Образец измельченных семян подсолнечника массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, прибавляют 50 см3 смеси, приготовленной по п. 8.3.1, перемешивают, помещают колбу в микроволновую печь и нагревают 2 минуты при мощности 300 ватт. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в делительную воронку вместимостью 250 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 50 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.1, экстракт фильтруют. Остаток в колбе промывают 20 см3 смеси приготовленной по п. 8.4.1. Экстракты фильтруют, объединяют в делительной воронке вместимостью 250 см3.

Объединенный ацетонитрильный экстракт промывают двумя порциями гексана по 50 см3, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3 и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

10.4.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Маслянистый остаток в колбе, полученный по п. 10.4.1, растворяют в 50 см3 гексана, тщательно обмывают стенки колбы и переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3. Исходную колбу обмывают 20 см3 ацетонитрила, переносят в делительную воронку объемом 250 см3 и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3.

Флубендиамид экстрагируют еще двумя порциями ацетонитрила по 20 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой объединяют в круглодонной колбе для упаривания 250 см3 и выпаривают до маслянистого остатка при температуре не выше 40 °C.

10.4.3. Далее проводят очистку экстракта в соответствии с п.п. 10.2.2, 10.2.3.

10.4.4. Сухой остаток растворяют 1 см3 в смеси, приготовленной по п. 8.4.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.7.

10.5 Кукурузное и соевое масло.

10.5.1. Экстракция. Навеску масла массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в стакан вместимостью 100 см3. Переносят ее в делительную воронку вместимостью 250 см3 двумя порциями гексана объемом по 25 см3.

Исходный стакан обмывают 30 см3 ацетонитрила, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3 и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3.

Флубендиамид экстрагируют еще двумя порциями ацетонитрила по 30 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой объединяют в круглодонной колбе для упаривания вместимостью 250 см3 и выпаривают до маслянистого остатка при температуре не выше 40 °C.

10.5.2. Далее проводят очистку экстракта в соответствии с п.п. 10.2.2, 10.2.3, 10.2.4, 10.3.2.

10.5.3. Сухой остаток растворяют 1 см3 в смеси, приготовленной по п. 8.4.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.7.

10.6 Рапсовое и подсолнечное масло.

10.6.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Навеску масла массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в стакан вместимостью 100 см3. Переносят ее в делительную воронку вместимостью 250 см3 двумя порциями гексана объемом по 25 см3.

Исходный стакан обмывают 30 см3 ацетонитрила, переносят в делительную воронку объемом 250 см3 и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в коническую колбу вместимостью 250 см3. Флубендиамид экстрагируют еще двумя порциями ацетонитрила по 30 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой объединяют в конической колбе вместимостью 250 см3.

Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3 и промывают 100 см3 гексана, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3 и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

10.6.2. Для рапсового масла: далее проводят очистку экстракта в соответствии с п.п. 10.2.3, 10.2.2.

10.6.3. Для подсолнечного масла: далее проводят очистку экстракта в соответствии с п.п. 10.2.3, 10.2.2, 10.2.4, 10.4.2.

10.6.4. Сухой остаток растворяют 1 см3 в смеси, приготовленной по п. 8.4.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.7.

10.7 Условия хроматографирования.

10.7.1. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с диодно-матричным детектором при следующих режимных параметрах <6>:

<6> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.

колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
температура колонки: плюс 30 °C.
подвижная фаза: смесь ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 60:40 (по объему) со скоростью потока элюента 0,9 см3/минуту при хроматографировании в изократическом режиме. Соотношение в режиме градиентного элюирования ацетонитрила с бидистиллированной водой (%, по объему): до 10 минут — 60:40; к 11 минуте — 90:10, скорость потока элюента 0,9 см3/минуту; с 11 по 14 минуту — 90:10, скорость потока элюента 1,0 см3/минуту; к 17 минуте — 60:40, скорость потока элюента 0,9 см3/минуту; с 17 по 20 минуту — 60:40.
длина волны: 254 нм;
чувствительность не менее 10 единиц абсорбции на шкалу;
объем вводимой пробы: 30 мм3.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор флубендиамида с концентрацией 1 мкг/см3, соответственно разбавляют смесью, приготовленной по п. 8.4.2. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания флубендиамида в пробах.

XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

11.1. Концентрацию флубендиамида в пробах (X, мг/кг) рассчитывают без учета полноты извлечения вещества из проб по формуле (2) <7>:

<7> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

X = \frac{A \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (2)

где: A — концентрация флубендиамида в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;

V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для зеленой массы равен 2,5; для зерна кукурузы, семян сои и рапса равен 2; для зерна нута, семян подсолнечника и растительных масел равен 1);

m — масса анализируемого образца, г;

Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):

\frac{2*|X_{1} - X_{2}|*100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (3)

где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

12.1 Результат анализа представляют в виде выражения (4):

(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (4)

где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):

\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 , (5)

где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание флубендиамида в пробе — менее 0,05 или 0,01 мг/кг» <8>.

<8> Примечание: 0,05 мг/кг — предел количественного определения концентрации флубендиамида в зеленой массе, 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации флубендиамида в остальной исследуемой продукции.

XIII. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <9>.

<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.

Периодичность и формы контроля определяется системой менеджмента качества лаборатории.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».

3. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.

4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».

5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».

6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».

7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».

8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».

9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».

10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».

14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».

15. ГОСТ OIML R-76-1-2011 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

16. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования».

17. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».

18. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

19. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

20. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».

21. ГОСТ ISO 7886-1-2011 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».

22. ГОСТ 14919-83 «Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия».

23. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».

24. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

25. ГОСТ 5556-2022 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».

26. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия».

27. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».

28. ГОСТ 3118-77 «Кислота соляная. Технические условия».

29. ГОСТ 4166-76 «Натрий сернокислый. Технические условия».

30. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».

31. ГОСТ 22300-76 «Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».

32. ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».

33. ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».

34. ГОСТ ISO 6497-2014 «Корма. Отбор проб».

35. ГОСТ 22391-2015 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках».

36. ГОСТ 1129-2013 «Масло подсолнечное. Технические условия».

37. ГОСТ 10583-76 «Рапс для промышленной переработки. Технические условия».

38. ГОСТ 31759-2012 «Масло рапсовое. Технические условия».

39. ГОСТ 17109-88 «Соя. Требования при заготовках и поставках».

40. ГОСТ 31760-2012 «Масло соевое. Технические условия».

41. ГОСТ 13586.3-2015 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб».

42. ГОСТ 8758-2025 «Нут. Требования при заготовках и поставках».

43. ГОСТ 35245-2025 «Зерно кукурузы. Технические условия».

44. ГОСТ Р 53903-2010 «Кукуруза кормовая. Технические условия».

45. ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное. Технические условия».

46. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.