МУК 4.1.4269-26. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств новалурона в плодах яблони и сливы, ягодах винограда, в яблочном, сливовом и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля

№ МУК 4.1.4269-26Действующий акт

(утв. Роспотребнадзором 10.04.2026)

Примечание

Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://www.rospotrebnadzor.ru/ по состоянию на 30.06.2026. Документ введен в действие с 10.09.2026.

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 апреля 2026 года

Дата введения 10 сентября 2026 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ НОВАЛУРОНА В ПЛОДАХ ЯБЛОНИ И СЛИВЫ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, В ЯБЛОЧНОМ, СЛИВОВОМ И ВИНОГРАДНОМ СОКАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4269-26

1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, А.С. Поликарпов, Е.Н. Тестова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 10 апреля 2026 г.

3. Введены впервые.

I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения массовых концентраций новалурона в плодах сливы и сливовом соке в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, в ягодах винограда и виноградном соке в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг, а также в плодах яблони и яблочном соке в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг — без учета разбавления и 0,05 — 5,0 мг/кг — с учетом разбавления в 10 раз.

1.2 МУК носят рекомендательный характер.

II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

2.1. Новалурон — N-[[3-хлор-4-[1,1,2-трифтор-2-(трифторметокси)этокси]фенил]карбамоил]-2,6-дифторбензамид <1>. Брутто-формула: C17H9ClF8N2O4. CAS № 116714-46-6. Молекулярная масса: 492,7.

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2 Физические и химические свойства.

Кристаллы белого или бледно-розового цвета без запаха. Давление насыщенного пара менее 1,6 x 10-2 мПа (при температуре плюс 25 °C). Температура плавления плюс 177,5 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 4,3 (при температуре плюс 20 °C). Растворимость в воде 0,003 мг/дм3 (при температуре плюс 20 °C). Растворимость в органических растворителях (г/дм3): этилацетат — 113,0, дихлорэтан — 2,85, ксилол — 1,88, н-гептан — менее 0,01 (при температуре плюс 20 °C).

Устойчив к фотолизу, при pH 7 период полураспада (ДТ50) составляет 139 дней и устойчив к водному гидролизу, при pH 5 — 7, в щелочных условиях (pH 9) период полураспада (ДТ50) составляет 101 день. Вещество среднеустойчиво в почве со значением период полураспада (ДТ50) составляет до 96 дней.

2.3 Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (ЛД₅₀) для крыс — более 5000 мг/кг. Острая дермальная токсичность (ЛД₅₀) для крыс — более 2000 мг/кг. Острая ингаляционная токсичность (ЛК50) для крыс — 5150 мг/м3 воздуха (при 4-часовой экспозиции).

2.4 Область применения.

Новалурон — инсектицид, ингибитор синтеза хитина и роста насекомых, включая чешуекрылых, жесткокрылых и двукрылых.

III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ

3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).

Таблица 3.1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), \pm \delta , %	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)
Плоды яблони	0,05 — 5,0	50	3,3	4,6	9	13
Плоды сливы	0,05 — 0,5	50	4,5	6,3	12	17
Ягоды винограда	0,01 — 0,1	50	2,3	3,2	6	9
Яблочный сок	0,05 — 5,0	50	2,7	3,8	8	11
Сливовый сок	0,05 — 0,5	50	2,9	4,1	8	11
Виноградный сок	0,01 — 0,1	50	3,3	4,6	9	13
Примечание: диапазон определяемых концентраций, указанный в таблице 3.1 для плодов яблони и яблочного сока, приведен с учетом разбавления образца в 10 раз.

IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ

4.1. Измерения массовых концентраций новалурона выполняют методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора.

4.2. Определение новалурона в яблоках, ягодах винограда и сливах проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 и на концентрирующих патронах № 2.

4.3. Определение новалурона в яблочном, виноградном и сливовом соках проводится после его экстракции из образцов хлористым метиленом и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 и на концентрирующих патронах № 2.

4.4 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 1,0 нг.

4.5. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.

4.6. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором хроматографических колонок различной полярности.

V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

Таблица 5.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Хроматограф жидкостной с диодно-матричным детектором	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы аналитические	Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ OIML R-76-1-2011
Весы лабораторные	Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ OIML R-76-1-2011
Колбы мерные	Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1-2009
Пипетки градуированные	Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91
Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Цилиндры мерные	Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 5.2

Реактивы

Наименование реактива	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Новалурон	Аналитический стандарт с содержанием основного вещества не менее 95,0%
Ацетонитрил	Содержание основного вещества не менее 99,8%
Вода дистиллированная	ГОСТ Р 58144-2018
Вода для лабораторного анализа	ГОСТ Р 52501-2005
Гелий очищенный	Содержание основного вещества не менее 99,9%
н-Гексан	Содержание основного вещества не менее 99%
Калий марганцовокислый	Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый гранулированный безводный	Содержание основного вещества не менее 99%
Кислота уксусная	Химически чистая ледяная, ГОСТ 61-75
Концентрирующие патроны для пробоподготовки методом твердофазной экстракции (патрон № 1)	Корпус из инертной полиэтиленовой или полипропиленовой оболочки, заполненный гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными (C16) группами с размером частиц 63 — 200 мкм (количество сорбента — 1 см3)
Концентрирующие патроны для пробоподготовки методом твердофазной экстракции (патрон № 2)	Корпус из инертной полиэтиленовой или полипропиленовой оболочки, заполненный гидрофильным слабокислым сорбентом (C) (количество сорбента — 1 см3)
Метилен хлористый	Содержание основного вещества не менее 99%
Натрий сернокислый	Химически чистый, ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый кислый	Химически чистый, ГОСТ 4201-79
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат)	Чистый для анализа, ГОСТ 22300-76
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Таблица 5.3

Вспомогательное оборудование, устройства и материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств и материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Аллонж прямой стеклянный	Тип АО, ГОСТ 25336-82
Банки полипропиленовые с крышками для экстракции	Вместимость 250 см3
Ванна ультразвуковая	Рабочая частота 50 Гц
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная	ГОСТ 5556-2022
Виалы с завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлоновой резиновой прокладкой, для жидких проб	Вместимость 2 см3
Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой	Вместимость не менее 40 см3
Воронки делительные	Тип ВД, вместимость 250 см3, ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные	Тип В, ГОСТ 25336-82
Колбы конические	Тип П или Кн, вместимость 100 — 1000 см3, ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные (для упаривания)	Тип К, Гр или О, вместимость 100 и 250 см3, ГОСТ 25336-82
Колонка хроматографическая стальная	Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C₁₈; длина 150 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, размер частиц 5 мкм
Насос мембранный вакуумный	Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар
Предколонка хроматографическая стальная	Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; длина 12,5 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, размер частиц 5 мкм
Ротационный вакуумный испаритель	С регулируемой скоростью вращения штока, с водяной баней с антикоррозионным покрытием с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C
Терка для овощей	-
Стаканы	Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3, ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей	С круглодонной колбой из термически стойкого стекла типа ТС вместимостью 4000 см3 и приемной конической колбой вместимостью 1000 см3
Фильтры мембранные для очистки растворителей	Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм
Фильтры бумажные	Обеззоленные, нейтральные, быстро фильтрующие, типа «Красная лента», диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г
Холодильная/морозильная камера	ГОСТ 26678-85
Шприц инъекционный однократного применения	Вместимость 10 см3, ГОСТ ISO 7886-1-2011
Электроплитка бытовая с закрытой спиралью	ГОСТ 14919-83
Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

VIII. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка лабораторной посуды, очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения новалурона на патронах № 1 и № 2, установление градуировочной характеристики.

8.2. Подготовка лабораторной посуды. Вся посуда и стеклянное оборудование должны быть тщательно вымыты. Для мойки используют растворы подходящих детергентов. После мойки в растворе любого моющего средства посуду и оборудование промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и тщательно высушивают.

8.3 Подготовка и очистка органических растворителей.

8.3.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.

8.3.2. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.

8.3.3. Хлористый метилен. Хлористый метилен промывают равным объемом 5% раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 39,5 — 40,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 39,5 — 40,5 °C, отбрасывают.

8.3.4. Этилацетат. Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Этилацетат перегоняют при температуре плюс 76,5 — 77,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 76,5 — 77,5 °C, отбрасывают.

8.3.5. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.

8.4 Приготовление рабочих растворов.

8.4.1. Приготовление 5% раствора натрия углекислого кислого. Переносят (50,0 +/- 0,3) г натрия углекислого кислого в мерную колбу вместимостью 1000 см3, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используют для очистки хлористого метилена и хранят при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12 месяцев.

8.4.2. Приготовление смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 50 см3 ацетонитрила и 50 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют для приготовления градуировочных стандартов и разведения проб. Раствор хранится при комнатной температуре не более семи дней.

8.4.3. Приготовление смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 2:8 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 20 см3 ацетонитрила и 80 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают.

8.4.4. Приготовление смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 3:7 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 30 см3 ацетонитрила и 70 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают.

8.4.5. Приготовление 0,01% раствора уксусной кислоты в ацетонитриле. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 0,1 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают и доводят ацетонитрилом объем в колбе до метки.

Растворы, приготовленные по пп. 8.4.3 - 8.4.5, используют при очистке экстрактов на патронах № 1 и готовят непосредственно перед использованием.

8.4.6. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 80 см3 гексана и добавляют 20 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают.

8.4.7. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5 (по объему). В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают 95 см3 гексана и добавляют 5 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают.

Растворы, приготовленные по пп. 8.4.6 - 8.4.7, используют при очистке экстрактов на патронах № 2 и готовят непосредственно перед использованием.

8.5. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и бидистиллированную воду, которые предварительно фильтруют через мембранные фильтры для очистки растворителей.

В коническую колбу вместимостью 1000 см3 помещают 300 см3 бидистиллированной воды и 700 см3 ацетонитрила. Смесь тщательно перемешивают.

При использовании градиентного режима хроматографирования компоненты подвижной фазы помещают в разные емкости.

В случае отсутствия в составе хроматографической системы автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см3/минуту в течение 5 минут, после чего его помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.

Приготовленный раствор подвижной фазы хранится при комнатной температуре не более пяти дней.

8.6 Приготовление растворов аналитического стандарта новалурона.

8.6.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией новалурона 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г новалурона в мерной колбе вместимостью 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

8.6.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией новалурона 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Стандартные растворы № 1 и 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 3 месяцев.

8.6.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией новалурона 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией новалурона 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией новалурона 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией новалурона 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

8.6.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией новалурона 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2.

Стандартные растворы № 3 — 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

8.6.8. Стандартные растворы новалурона с концентрацией 50,0; 5,0; 2,5; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матрицы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом из стандартного раствора № 1 готовят растворы, содержащие по 50,0; 5,0; 2,5; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 новалурона и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матрицы. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

8.7. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.

8.7.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки, приготовленным по пп. 8.6.3 - 8.6.7.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.7.2. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения растворов для градуировки № 3 и № 7, содержание новалурона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций 0,05 — 1,0 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение (1):

\frac{|X - C| \times 100}{C} \leq 10, (1)

где: X — концентрация новалурона при контрольном измерении, мкг/см3;

C — известная концентрация новалурона в градуировочном растворе, мкг/см3;

10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов новалурона, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.7.1.

8.8. Подготовка патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения новалурона на них.

8.8.1. Подготовка патронов № 1 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/минуту.

Патрон № 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер вместимостью не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: патрон промывают 10 см3 ацетонитрила, затем 10 см3 бидистиллированной воды. Сливы отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

8.8.2. Проверка хроматографического поведения новалурона на патронах № 1. В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора новалурона в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 бидистиллированной воды, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 2:8, 10 см3 смеси ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 3:7 и четырьмя порциями по 5 см3 каждая 0,01% раствора уксусной кислоты в ацетонитриле и последовательно вносят эти растворы на патрон. Элюаты собирают в отдельные чистые круглодонные колбы вместимостью по 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.2, и 20 мм3 хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие новалурон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Проверку хроматографического поведения новалурона на патронах № 1 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8.9. Подготовка патронов № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения новалурона на них.

8.9.1. Подготовка патронов № 2 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/минуту.

Патрон № 2 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер вместимостью не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: патрон промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1, затем 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5. Сливы отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

8.9.2. Проверка хроматографического поведения новалурона на патронах № 2. В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора новалурона в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5, тщательно обмывают стенки колбы и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5 и двумя порциями по 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и последовательно вносят эти растворы на патрон. Элюаты собирают в отдельные чистые круглодонные колбы вместимостью по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси, приготовленной по п. 8.4.2, и 20 мм3 хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие новалурон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Проверку хроматографического поведения новалурона на патронах № 2 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8.10 Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки.

Хроматографическую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 30 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой, приготовленной по п. 8.5 (смесь ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 700:300, по объему) при скорости подачи растворителя 0,7 см3/минуту.

IX. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <3>, а также документами по стандартизации <4>.

<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.

<4> ГОСТ 34314-2017 «Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 15.12.2017 № 2006-ст; ГОСТ 27572-2017 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 24.11.2017 № 1830-ст; ГОСТ 32786-2014 «Виноград столовый свежий. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.10.2014 № 1472-ст; ГОСТ 21920-2015 «Слива свежая для промышленной переработки. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 01.12.2015 № 2090-ст; ГОСТ 32101-2013 «Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.06.2013 № 333-ст.

9.2. Пробы плодов яблони, сливы и ягод винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение суток и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.

9.3. Пробы яблочного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 5 суток.

X. ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

10.1 Плоды яблони, сливы и ягоды винограда.

10.1.1. Экстракция. Образец измельченной матрицы массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции вместимостью 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента» в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, каждый раз используя по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в круглодонной колбе для упаривания вместимостью 250 см3 и выпаривают до неупариваемого остатка при температуре не выше плюс 40 °C.

10.1.2. Очистка экстракта на патронах № 1. Остаток в колбе, полученный по п. 10.1.1, растворяют в 1 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 бидистиллированной воды, перемешивают и вносят раствор на подготовленный по п. 8.8.1 патрон № 1. Слив отбрасывают.

Новалурон элюируют с патрона 15 см3 0,01% раствора уксусной кислоты в ацетонитриле. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

10.1.3. Очистка экстракта на патронах № 2. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.2, растворяют в 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5, тщательно обмывают стенки колбы и вносят раствор на подготовленный по п. 8.9.1 патрон № 2. Слив отбрасывают.

Исходную колбу обмывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5 и вносят на патрон, слив отбрасывают.

Новалурон элюируют с патрона 5 см3 гексана с этилацетатом в соотношении 4:1. Элюат собирают в чистую круглодонную колбу для упаривания вместимостью 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

10.1.4. Сухой остаток растворяют в смеси, приготовленной по п. 8.4.2: в 5 см3 — для плодов яблони и сливы, 1 см3 — для ягод винограда, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

10.2 Яблочный, сливовый и виноградный соки.

10.2.1. Экстракция. Навеску сока массой (10,0 +/- 0,3) г помещают в стакан вместимостью 100 см3 и переносят ее в делительную воронку вместимостью 250 см3 двумя порциями по 50 см3 дистиллированной воды.

Новалурон экстрагируют тремя порциями хлористого метилена по 50 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают и объединяют в конической колбе вместимостью 250 см3. Хлористый метилен переносят в чистую делительную воронку вместимостью 250 см3. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.

10.2.2. Далее проводят очистку экстракта в соответствии с пп. 10.1.2 - 10.1.3.

10.1.4. Сухой остаток растворяют в смеси, приготовленной по п. 8.4.2: в 5 см3 — для яблочного и сливового сока, 1 см3 — для виноградного сока, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

10.3 Условия хроматографирования.

10.3.1. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с диодно-матричным детектором при следующих режимных параметрах <5>:

колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
температура колонки: плюс 30 °C;
подвижная фаза: смесь ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 700:300 (по объему) при хроматографировании в изократическом режиме;
скорость потока элюента: 0,7 см3/минуту;
длина волны: 253 нм;
чувствительность не менее 10 единиц абсорбции на шкалу;
объем вводимой пробы: 20 мм3.

<5> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор новалурона с концентрацией 1 мкг/см3 соответственно, разбавляют смесью, приготовленной по п. 8.4.2. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания новалурона в пробах.

XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

11.1. Концентрацию новалурона в пробах (X, мг/кг) рассчитывают без учета полноты извлечения вещества из проб по формуле (2) <6>:

X = \frac{A \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (2)

где: A — концентрация новалурона в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;

V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для плодов яблони и сливы, яблочного и сливового сока равен 5; для ягод и сока винограда равен 1);

m — масса анализируемого образца, г;

Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

<6> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):

\frac{2*|\text{Х}_{1} - \text{Х}_{2}|*100}{(\text{Х}_{1} + \text{Х}_{2})} \leq r, (3)

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .

При невыполнении условия (3) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

12.1 Результат анализа представляют в виде выражения (4):

(\overline{X} \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг}, при вероятности P = 0,95, (4)

где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):

\Delta = \delta \cdot \overline{X}/100, (5)

где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание новалурона в пробе — менее 0,01 или 0,05 мг/кг» <7>.

<7> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации новалурона в ягодах винограда и виноградном соке; 0,05 мг/кг — предел количественного определения концентрации новалурона в плодах яблони, сливы, в яблочном и сливовом соке.

XIII. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <8>.

<8> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.

Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».

3. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.

4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».

5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».

6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».

7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».

8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».

9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».

10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».

14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».

15. ГОСТ OIML R-76-1-2011 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

16. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования».

17. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».

18. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

19. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

20. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».

21. ГОСТ ISO 7886-1-2011 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».

22. ГОСТ 14919-83 «Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия».

23. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».

24. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

25. ГОСТ 5556-2022 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».

26. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».

27. ГОСТ 61-75 «Кислота уксусная. Технические условия».

28. ГОСТ 4166-76 «Натрий сернокислый. Технические условия».

29. ГОСТ 4201-79 «Натрий углекислый кислый. Технические условия».

30. ГОСТ 22300-76 «Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».

31. ГОСТ 34314-2017 «Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия».

32. ГОСТ 27572-2017 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия».

33. ГОСТ 21920-2015 «Слива свежая для промышленной переработки. Технические условия».

34. ГОСТ 32786-2014 «Виноград столовый свежий. Технические условия».

35. ГОСТ 32101-2013 «Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия».

36. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.