МУК 4.1.4255-26. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спиносада (спиносина А и спиносина Д) в плодоовощной продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 10.04.2026)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://www.rospotrebnadzor.ru/ по состоянию на 30.06.2026. Документ введен в действие с 10.07.2026.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 апреля 2026 года
Дата введения 10 июля 2026 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИНОСАДА (СПИНОСИНА А И СПИНОСИНА Д) В ПЛОДООВОЩНОЙ ПРОДУКЦИИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4255-26
1. Разработаны ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Н.Е. Федорова, А.А. Ивченкова, С.Д. Добрев).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «10» апреля 2026 г.
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием (далее — МС/МС) для определения массовой концентрации спиносада (суммы спиносина А и спиносина Д) в плодоовощной продукции: баклажанах, ягодах (землянике) и орехах (фисташках, лещине), в диапазоне: 0,01 — 0,10 мг/кг — без учета разбавления и 0,01 — 10,00 мг/кг — с учетом разбавления в 100 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
2.1. Спиносад — смесь (2R,3aR,5aR,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bR)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-O-метил- \alpha -L-манно-пиранозилокси)-13-(4-диметиламино-2,3,4,6-тетра-дезок-си- \beta -Д-эритропиранозилокси)-9-этил-2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b-гексадекогидро-14-метил-1H-8-оксациклододека-[b]as-индацен-7,15-диона и (2S,3aR,5aS,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bS)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-O-метил \alpha -L-манно-пиранозилокси)-13-(4-диметил-амино-2,3,4,6-тетрадезокси- \beta -Д-эритро-пиранозилокси)-9-этил-2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b-гексадеко-гидро-4,14-диметил-1H-8-оксациклододека[b]as-индацен-7,15-диона в соотношении от 50:50% до 95:5% <1>. Брутто-формула: спиносин А — C41H65NO10; спиносин Д — C42H67NO10. Молекулярная масса: спиносин А — 732,0 г/моль; спиносин Д — 746,0 г/моль. CAS № 168316-95-8.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Давление насыщенного пара при температуре плюс 25 °C: спиносин А — 3,0 x 10-5 мПа; спиносин Д — 2,0 x 10-5 мПа.
Температура плавления спиносина А и спиносина Д соответственно плюс 84,0 — 99,5 °C и плюс 161,5 — 170,0 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода Kowlog P: спиносин А — 2,8 (pH 5); 4,0 (pH 7); 5,2 (pH 9); спиносин Д — 3,2 (pH 5); 4,5 (pH 7); 5,2 (pH 9).
Растворимость в воде: спиносин А — 89 мг/дм3 (дистиллированная вода), 235 мг/дм3 при температуре плюс 20 °C и pH 7; и спиносин Д — 0,5 мг/дм3 (дистиллированная вода), 0,33 мг/дм3 при температуре плюс 20 °C и pH 7.
Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C (г/дм3):
- спиносин А: ацетон — 16,8; ацетонитрил — 13,4; хлористый метилен — 52,5; толуол — 45,7; ацетонитрил — 19,0; н-октанол — 0,926; гексан — 0,448;
- спиносин Д: хлористый метилен — 44,8; толуол — 15,2; ацетон — 1,01; гексан — 0,743; ацетонитрил — 0,255; н-октанол — 0,127.
Оба вещества устойчивы к гидролизу при pH 5 и pH 7; период полураспада (ДТ50) при pH 9 составляет 200 дней для спиносина А и 259 дней для спиносина Д. Фотодеградация в воде: период полураспада (ДТ50) при pH 7 составляет 0,93 дня для спиносина А и 0,82 дня для спиносина Д.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая оральная токсичность для самок крыс — 3783 мг/кг, для самцов крыс более 5000 мг/кг, дермальная токсичность для крыс более 5000 мг/кг, ингаляционная для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) более 5180 мг/м3 воздуха. Не вызывает раздражения кожи, отмечается лишь слабое покраснение глаз у кроликов. Не обладает мутагенными и нейротоксичными свойствами или репродуктивной токсичностью.
2.4 Область применения.
Спиносад — инсектицид контактного и кишечного действия из группы спиносинов, обладающий парализующим эффектом. Эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, бахромчатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых, плодовых, овощных и декоративных культур при норме расхода 5 — 40 г д.в./га. Препараты на основе спиносада используются также для борьбы с синантропными насекомыми и в ветеринарии.
III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Метрологические характеристики
IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ
4.1. Методика определения спиносада в орехах, баклажанах, ягодах основана на методе обращенно-фазовой ВЭЖХ-МС/МС.
4.2. Экстракцию вещества из анализируемых проб выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, цитрата натрия (натрий лимоннокислый трехзамещенный), натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного). Ацетонитрильный экстракт подвергают очистке сорбентами для дисперсионной твердофазной экстракции (ТФЭ).
Перед измерением экстракт фильтруют через шприцевой мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 5 пг.
4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной градуировки.
V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Весы лабораторные аналитические | Предел допустимой погрешности не более +/- 0,0005 г, ГОСТ OIML R 76-1-2011 |
| Весы лабораторные прецизионные | Предел допустимой погрешности не более +/- 0,01 г, ГОСТ OIML R 76-1-2011 |
| Дозаторы лабораторные одноканальные механические | Диапазон измерений 10 — 100, 100 — 1000, 500 — 5000 мм3. Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Колбы | 2-(10, 100, 500)-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Прибор для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Цилиндр мерный | (1,2)-(10, 250)-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Спиносин А | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Спиносин Д | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Азот/Аргон | В зависимости от требований производителя масс-спектрометра |
| Ацетонитрил | Для ВЭЖХ, чистота не менее 99,9% |
| Вода для лабораторного анализа (деионизованная), | 0,006 мСм/м, ГОСТ Р 52501-2005 |
| Муравьиная кислота | 99,7%, чистая для анализа, ГОСТ 5848-73 |
| Натрий хлористый (хлорид натрия) | Химически чистый, ГОСТ 4233-77 |
| Магний сернокислый (сульфат магния) | Безводный, химически чистый |
| Натрий лимоннокислый двузамещенный, 1,5-водный, химически чистый | Химически чистый |
| Натрий лимоннокислый трехзамещенный (цитрат натрия) | Чистый для анализа, ГОСТ 22280-76 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина | Площадь поверхности ~ 580 м2/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе октодецилсилана | Площадь поверхности ~ 547 м2/г, средний размер пор 64 А, средний размер частиц 58 мкм |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей. В качестве аналитического стандартного образца возможно использование смесевого образца спиносада А и спиносада Д с точно известным соотношением компонентов. | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств и материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Вихревой шейкер | Диапазон регулировки оборотов 50 — 3000 об/мин, орбита до 5 мм |
| Виалы стеклянные с крышками и септами | объем 2 см3 |
| Груша резиновая | - |
| Мельница лабораторная | - |
| Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками | Вместимостью 15, 50 см3 |
| Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца, PTFE (ПТФЭ) | Размер пор 0,45 мкм |
| Холодильник/морозильник бытовой | Обеспечивающий температуру плюс 2 — 6 °C для холодильной камеры и температуру не выше минус 18 °C для морозильной камеры, ГОСТ 26678-85 |
| Хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS эндкеппингом, зернением 4 мкм | - |
| Центрифуга лабораторная, роторная | Скорость вращения не ниже 4500 об/мин |
| Шприцы | Вместимостью 2 см3, ГОСТ ISO 7886-1-2011 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хромато-масс-спектрометры.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
VII. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ
7.1. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
8.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 25 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
IX. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
9.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка подвижной фазы, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление раствора для разбавления градуировочных растворов, приготовление растворов для градуировки и внесения, приготовление смесей солей для экстракции и сорбентов для очистки экстрактов, установление градуировочной характеристики, отбор и подготовка проб.
9.2. Приготовление 0,1% водного раствора муравьиной кислоты (компонент А подвижной фазы).
В мерную колбу вместимостью 500 см3 добавляют 200 см3 деионизованной воды, пипеткой на 1 см3 вносят 0,5 см3 концентрированной муравьиной кислоты и доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят не более 14 дней.
9.3 Кондиционирование хроматографической колонки.
Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А приготовлен по п. 9.2, компонент Б — ацетонитрил) 95:5 и скорости подачи растворителя 0,4 см3/мин не менее 15 минут.
9.4 Приготовление смеси солей для экстракции.
Для обработки одной пробы смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного. Для каждой пробы готовится отдельное количество смеси. Смеси хранят в индивидуальной герметичной упаковке (не более 6 месяцев) <4>.
<4> Примечание: допускается использование коммерческих наборов для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.
9.5. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов ягод и баклажанов. Для очистки одной аликвоты экстракта смешивают (150 +/- 5) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина и (900 +/- 5) мг магния сернокислого, закрывают в герметичную тару, хранят не более 6 месяцев <5>.
<5> Примечание: допускается использование коммерческих наборов для дисперсионной твердофазной экстракции (очистки экстрактов) для фруктов и овощей. При применении коммерческих наборов соблюдать инструкции производителя.
9.6 Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов орехов.
Для очистки одной аликвоты экстракта смешивают (900 +/- 10) мг магния сернокислого, (150 +/- 10) мг смеси первичных и вторичных аминов, (150 +/- 10) мг смеси твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают в герметичную тару, хранят не более 6 месяцев <6>.
<6> Примечание: допускается использование коммерческих наборов для дисперсионной твердофазной экстракции (очистки экстрактов) для фруктов и овощей с маслом и воском. При применении коммерческих наборов соблюдать инструкции производителя.
9.7 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.
9.7.1. Исходный раствор спиносина А и спиносина Д для градуировки (концентрация 1000 мкг/см3).
В две мерные колбы вместимостью 10 см3 помещают по (0,0100 +/- 0,0005) г каждого компонента отдельно, растворяют в 5 — 7 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.
Растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C в течение полугода.
Растворы № 1 — 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов спиносина А и спиносина Д для градуировки.
9.7.2. Раствор № 1 спиносада для внесения (концентрация спиносина А и спиносина Д по 5 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают по 0,05 см3 исходного раствора спиносина А и спиносина Д с концентрацией 1000 мкг/см3 (п. 9.7.1), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают.
Растворы хранят в герметично закрытой таре в морозильной камере (не выше минус 18 °C) 1 месяц.
Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов методом «добавок».
9.7.3. Раствор № 2 спиносада для градуировки (концентрация спиносина А и спиносина Д по 0,5 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают по 0,005 см3 индивидуального раствора спиносина А и спиносина Д с концентрацией 1000 мкг/см3, доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают.
9.7.4. Рабочие растворы № 3 — 7 спиносада для градуировки (концентрация 0,001 — 0,1 мкг/см3, концентрация спиносина А и спиносина Д по 0,0005 — 0,05 мкг/см3).
В 5 мерных колб вместимостью 10 см3 помещают по 1,0; 0,5; 0,1; 0,05; 0,01 см3 градуировочного раствора № 2 с концентрацией 1 мкг/см3 (п. 9.7.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 3 — 7 с концентрацией спиносада 0,1; 0,05; 0,01; 0,005 и 0,001 мкг/см3, соответственно концентрации спиносина А и спиносина Д по 0,05, 0,025, 0,005, 0,0025, 0,0005 мкг/см3. <7>
<7> Примечание: если при приготовлении исходного раствора используется аналитический стандарт, содержащий смесь спиносина А и Д, то в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г стандарта, растворяют в 5 — 7 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают, рассчитывая затем точное содержание каждого компонента на основе данных, предоставленных в сертификате. Далее проводят соответствующие разбавления ацетонитрилом для получения рабочих градуировочных растворов с суммарной концентрацией спиносина А и спиносина Д (спиносада) 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, 0,001 мкг/см3.
Растворы готовят при температуре плюс 20 — 25 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более недели.
9.8 Установление градуировочных характеристик.
Градуировочные характеристики спиносина А и спиносина Д, выражающие зависимость площади пика от концентрации спиносина А и спиносина Д устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки № 3 — 7.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 9.7.4 и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.2. Устанавливают площади пиков спиносина А и спиносина Д.
Строят градуировочные характеристики с учетом реального содержания спиносина А и спиносина Д (1:1 либо согласно сертификату).
9.8 Контроль стабильности градуировочных характеристик.
Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
Проводят измерения не менее двух образцов рабочих растворов для градуировки, содержание спиносина А и спиносина Д в которых должно входить в диапазон линейности градуировочных характеристик.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняются соотношения (1 - 2):
A = \frac{|X - C|}{C} \cdot 100 , (1)
где: A — величина расхождения, %;
X — концентрация спиносина А или спиносина Д в растворе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 20% при P = 0,95).
Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов спиносада, предусмотренными настоящим МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново в соответствии с п. 9.7.
X. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ
10.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с документами по стандартизации <8>, а также методическими документами <9>.
<8> ГОСТ 31821-2022 «Баклажаны свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.05.2022 № 426-ст; ГОСТ 33953-2016 «Земляника свежая. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2016 № 1851-ст; ГОСТ 32288-2013 «Орехи лещины. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 17.12.2013 № 2302-ст; ГОСТ 31788-2012 «Орехи фисташковые неочищенные. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1780-ст.
<9> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
10.2. Растительные пробы хранят при температуре плюс 2 — 6 °C не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед анализом образцы измельчают.
XI. ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
11.1. Измельченный образец баклажан, ягод земляники массой 10 г или орехов массой 5 г помещают в полипропиленовую пробирку на 50 см3. В пробы орехов вносят дополнительно 10 см3 воды и помещают на вихревой шейкер на 5 минут. Заливают 10 см3 ацетонитрила, ставят на вихревой шейкер на 10 минут. Вносят в пробирку смесь солей для экстракции (п. 9.4). Закрывают крышкой и помещают на вихревой шейкер на 2 минуты. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости вращения не менее 4500 об/мин. Помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 смесь сорбентов для очистки экстракта баклажан и ягод (п. 9.5), орехов (п. 9.6), добавляют 6 см3 верхнего слоя, встряхивают вручную до полного смачивания порошков и помещают на вихревой шейкер на 2 минуты. Образец повторно центрифугируют 5 минут при скорости вращения не менее 4500 об/мин. Экстракт (верхний слой в пробирке после центрифугирования) фильтруют через мембранный фильтр (размер пор не более 0,45 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.2.
11.2. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации при следующих режимных параметрах <10>:
<10> Примечание: параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
- режим ионизации: электроспрей (англ. Electrospray Ionization, ESI), электростатическое напряжение плюс 5500 В;
- полярность: положительная;
- режим работы: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, MRM);
Параметры масс-спектрометрического детектора приведены в таблице 11.1.
Параметры масс-спектрометрического детектора
- скорость сканирования: 100 мс;
- давление газовой завесы: 25 psi;
- давление газа 1: 50 psi;
- давление газа 2: 60 psi;
- температура осушающего газа: плюс 450 °C;
- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS эндкеппингом, зернением 4 мкм;
- температура колонки: плюс 40 °C;
- скорость потока элюента: 0,4 см3/минуту;
- объем вводимой пробы: 5 мм3;
- подвижная фаза: компонент А: 0,1% муравьиная кислота (приготовлена по п. 9.2); компонент Б: ацетонитрил.
Режим элюирования: градиентный, приведен в таблице 11.2.
| Компонент А, % | Суммарный расход элюентов, см3/минуту | Время, минут |
|---|---|---|
| 95 | 0,4 | 0 |
| 95 | 0,4 | 0,5 |
| 30 | 0,4 | 3,5 |
| 5 | 0,4 | 3,6 |
| 5 | 0,4 | 5,0 |
| 95 | 0,4 | 6,0 |
| 95 | 0,4 | 8,0 |
Линейный диапазон детектирования 5 — 500 пг.
Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,1 мкг/см3, разбавляют ацетонитрилом (не более чем в 100 раз).
XII. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
12.1 Содержание спиносина А и спиносина Д в образцах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):
X = \frac{C*V*\text{Кр}}{m*f} , (3)
где: C — концентрация спиносина А/спиносина Д, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем экстрагента, см3 (10 см3);
m — масса анализируемого образца, г (согласно п. 11.1);
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);
f — степень извлечения спиносина А и спиносина Д из проб, указанная в относительных единицах, определяется конкретной лабораторией в процессе внедрения метода и контролируется с каждой серией анализа.
Идентификация и расчет концентрации веществ в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
12.2. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, рассчитанного по формуле (4):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (4)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma r .
При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
13.1 Результат количественного анализа представляют в виде выражения (5):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (5)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):
\Delta = \delta \cdot X100 , (6)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
При необходимости определения содержания спиносада концентрации спиносина А и спиносина Д суммируют.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание спиносада (сумма спиносина А и спиносина Д) в пробах менее 0,01 мг/кг» <11>.
<11> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения спиносада в исследуемой продукции.
XIV. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
14.1 Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <12> и документами системы менеджмента качества лаборатории.
<12> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Технический регламент таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011).
4. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю).
5. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
6. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
11. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
12. ГОСТ OIML R 76-1-2011 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
13. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
14. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
15. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
16. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
17. ГОСТ ISO 7886-1-2011 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
18. ГОСТ 5848-73 «Кислота муравьиная. Технические условия».
19. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».
20. ГОСТ 22280-76 «Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия».
21. ГОСТ 25336-82 «Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
22. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
23. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
24. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
25. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
26. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
27. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
28. ГОСТ 33953-2016 «Земляника свежая. Технические условия».
29. ГОСТ 31821-2022 «Баклажаны свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия».
30. ГОСТ 32288-2013 «Орехи лещины. Технические условия».
31. ГОСТ 31788-2012 «Орехи фисташковые неочищенные. Технические условия».
32. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.