МУК 4.1.4167-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств люфенурона в зеленом луке и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 25.07.2025)
Примечание
Документ введен в действие с 25.10.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 25 июля 2025 года
Дата введения 25 октября 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЛЮФЕНУРОНА В ЗЕЛЕНОМ ЛУКЕ И ЛУКЕ-РЕПКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4167-25
1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, А.С. Поликарпов, Е.Н. Тестова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 25 июля 2025 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения массовых концентраций люфенурона в зеленом луке и в луке-репке в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг без учета разбавления и 0,01 — 1,0 мг/кг с учетом разбавления в 10 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Люфенурон — 1-/2,5-дихлор-4-(1,1,2,3,3,3-гексафтор-пропокси)-фенил-3-(2,6-дифтор-бензоил)-мочевина <1>. Брутто-формула C17H8Cl2F8N2O3. Молекулярная масса 511,2 г/моль.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Белое или бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Давление насыщенного пара при температуре плюс 20 °C 4,0 x 10-6 мПа. Температура плавления плюс 168,7 — 169,4 °C. Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C 0,046 мг/дм3. Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C (г/дм3): ацетон — 460; этилацетат — 330; толуол — 72; этанол — 41; гексан — 0,13.
Вещество стабильно на воздухе и на свету, медленно гидролизуется в водных растворах при pH 5 — 9: период полураспада (ДТ50) 160 дней (pH 5), 70 дней (pH 7) и 32 дня (pH 9).
В биологически активных почвах в аэробных условиях люфенурон быстро разлагается: период полураспада (ДТ50) 13 — 20 дней.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая оральная токсичность для крыс более 2000 мг/кг, дермальная токсичность для крыс более 2000 мг/кг, ингаляционная токсичность для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) 2350 мг/м3 воздуха. Люфенурон не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кроликов. Не токсичен для диких животных, птиц, пчел, земляных червей, почвенных микроорганизмов и токсичен для дафний.
2.4 Область применения.
Люфенурон — инсектоакарицид из группы ингибиторов синтеза хитина, эффективно уничтожает листогрызущие личинки чешуекрылых и жесткокрылых, эриофиидных клещей на хлопчатнике, сое, овощных культурах, винограде, семечковых плодовых, картофеле и кукурузе в течение вегетационного периода.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации № 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Диапазон определяемых концентраций люфенурона, значение показателя точности измерений
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (границы относительной погрешности P = 0,95), \pm \delta , % |
| Зеленый лук | 0,01 — 1,0 | 50 |
| Лук-репка | 0,01 — 1,0 | 50 |
| Примечание: диапазон определяемых концентраций, указанный в табл. 3.1, приведен с учетом разбавления образца в 10 раз. | ||
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовых концентраций люфенурона выполняют методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора.
4.2. Определение люфенурона в зеленом луке и в луке-репке проводится после его экстракции из образцов ацетоном, дальнейшей очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей и очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1.
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы 1,0 нг.
4.4. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.5. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором хроматографических колонок различной полярности.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Люфенурон аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Ацетон | Химически чистый, ГОСТ 2603-79 |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый | Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый гранулированный безводный | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены гидрофильным слабокислым сорбентом (C) с размером частиц 63 — 200 мкм (объем 1 см3, масса сорбента 0,6 г) |
| Метилен хлористый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Натрий сернокислый | Химически чистый, ГОСТ 4166-76 |
| Натрий углекислый кислый | Химически чистый, ГОСТ 4201-79 |
| Натрий хлористый | Химически чистый, ГОСТ 4233-77 |
| Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) | Чистый для анализа, ГОСТ 22300-76 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Аллонж прямой стеклянный | Тип АО, ГОСТ 25336-82 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний/мин |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556-81 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД, ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы конические стеклянные | Тип П или Кн, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К, Гр или О, ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 150 мм x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум до 10 мбар |
| Предколонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 12,5 мм x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс (20 — 100) °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость (100 — 800 см3), ГОСТ 25336-82 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры мембранные для очистки растворителей | Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм |
| Холодильная/морозильная камера ГОСТ 26678-82 | |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3, ГОСТ 22967-90 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
| VI. Требования безопасности | |
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения люфенурона на концентрирующих патронах № 1, установление градуировочной характеристики.
8.2 Подготовка и очистка органических растворителей.
8.2.1. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
8.2.2. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
8.2.3. Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 39,5 — 40,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 39,5 — 40,5 °C, отбрасывают.
8.2.4. Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Этилацетат перегоняют при температуре плюс 76,5 — 77,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 76,5 — 77,5 °C, отбрасывают.
8.2.5. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
8.3 Приготовление рабочих растворов.
8.3.1 Приготовление 5%-го раствора натрия углекислого кислого.
В мерную колбу объемом 1000 см3 переносят (50 +/- 0,3) г натрия углекислого кислого, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используется для очистки хлористого метилена и хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 12 месяцев.
8.3.2 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.
В стеклянную емкость объемом 1000 см3 переносят (400 +/- 0,9) г хлорида натрия, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 12 месяцев.
8.3.3. Приготовление смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 (по объему).
В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 70 см3 ацетонитрила для ВЭЖХ и добавляют 30 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют для приготовления градуировочных растворов стандартов и разведения проб. Раствор хранится при комнатной температуре не более семи дней.
8.3.4. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5 (по объему).
В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 5 см3 этилацетата и добавляют 95 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.5. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 (по объему).
В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 20 см3 этилацетата и добавляют 80 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрируюших патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.4 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.
Для приготовления подвижной фазы используют ацетонитрил для ВЭЖХ и бидистиллированную воду, которые предварительно фильтруют через мембранные фильтры для очистки растворителей.
В плоскодонную колбу объемом 1000 см3 помещают 300 см3 бидистиллированной воды и 700 см3 ацетонитрила для ВЭЖХ. Смесь тщательно перемешивают.
При использовании градиентного режима хроматографирования компоненты подвижной фазы помещают в разные емкости.
В случае отсутствия в составе хроматографической системы автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см3/мин в течение 5 минут, после чего его помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
8.5 Приготовление растворов аналитического стандарта люфенурона.
8.5.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией люфенурона 100,0 мкг/см3.
Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г люфенурона в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
8.5.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией люфенурона 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
8.5.3 Стандартный раствор № 3 с концентрацией люфенурона 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.3.3. Стандартный раствор № 3 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.4 Стандартный раствор № 4 с концентрацией люфенурона 0,5 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.3.3. Стандартный раствор № 4 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.5 Стандартный раствор № 5 с концентрацией люфенурона 0,2 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.3.3. Стандартный раствор № 5 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.6 Стандартный раствор № 6 с концентрацией люфенурона 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.3.3. Стандартный раствор № 6 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией люфенурона 0,05 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью, приготовленной по п. 8.3.3. Стандартный раствор № 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.8. Стандартные растворы люфенурона с концентрацией 10,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом из стандартного раствора № 1 готовят растворы, содержащие по 10,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 люфенурона, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.6. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
8.6.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки, приготовленным по п.п. 8.5.3 - 8.5.7, с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0,05 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.6.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание люфенурона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
\frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 10, (1)
где: X — концентрация люфенурона контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора люфенурона в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3, приготовленной по п. 8.3.3, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов люфенурона, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.6.1.
8.7. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения люфенурона на них.
8.7.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 (по объему), а затем 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5 (по объему). Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
8.7.2. Проверка хроматографического поведения люфенурона на концентрирующих патронах № 1.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора люфенурона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5, тщательно обмывают стенки колбы, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Патрон последовательно промывают 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5, а затем двумя порциями по 5 см3 каждая смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1. Элюаты после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные отгонные колбы объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 (по объему) и 20 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие люфенурон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Проверку хроматографического поведения люфенурона на концентрирующих патронах № 1 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8.8 Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки.
Хроматографическую колонку устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 30 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой, приготовленной по п. 8.4 (смесь ацетонитрила с водой в соотношении 70:30 по объему), при скорости подачи растворителя 1,0 см3/мин.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб производится в соответствии с документами по стандартизации <3>, а также методическими документами <4>.
<3> ГОСТ 34306-2017 «Лук репчатый свежий. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.11.2017 № 1844-ст; ГОСТ 1723-2015 «Лук репчатый свежий для промышленной переработки. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 12.11.2015 № 1764-ст; ГОСТ 34214-2017 «Лук свежий зеленый. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 01.12.2017 № 1867-ст.
<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.
9.2. Пробы зеленого лука и лука-репки хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.
X. Выполнение измерений
10.1 Зеленый лук и лук-репка.
10.1.1 Экстракция.
Образец измельченного зеленого лука или лука-репки массой (10 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетона и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют через ватный тампон в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще один раз в тех же условиях, используя 50 см3 ацетона. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
К водному остатку в колбе, полученному по п. 10.1.1, добавляют 50 см3 воды и 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3.
Люфенурон экстрагируют тремя порциями хлористого метилена по 30 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.2, растворяют в 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5, тщательно обмывают стенки колбы, перемешивают и вносят на подготовленный по п. 8.7.1 патрон. Элюат отбрасывают.
Люфенурон элюируют с патрона 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1, элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.5. Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 7:3 (по объему), приготовленной по п. 8.3.3, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.2.
10.2 Условия хроматографирования.
10.2.1. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с диодно-матричным детектором при следующих режимных параметрах <5>:
- колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- температура колонки: плюс 30 °C;
- подвижная фаза: смесь ацетонитрила с водой в соотношении 70:30 (по объему) при хроматографировании в изократическом режиме. При хроматографировании проб исследуемой продукции длительность инъекций должна быть не менее 30 минут при работе в изократическом режиме в указанных выше условиях хроматографирования для того, чтобы выходящие в этот интервал времени матричные пики не искажали результат следующего хроматографического анализа;
- скорость потока элюента 1,0 см3/мин;
- длина волны 254 нм;
- чувствительность не менее 10 миллиединиц абсорбции на шкалу;
- объем вводимой пробы 20 мм3.
<5> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор люфенурона с концентрацией 1 мкг/см3, разбавляют смесью, приготовленной по п. 8.3.3 (не более чем в 10 раз). В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания люфенурона в пробах.
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Концентрацию люфенурона в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по формуле (2) <6> без учета полноты извлечения вещества из проб:
X_{1} = \frac{A \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (2)
где: A — концентрация люфенурона в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для всей исследуемой продукции равен 1 см3);
m — масса анализируемого образца, г (см3);
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
<6> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (3)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 13.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат анализа представляют в виде выражения (4):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95, (4)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}/100, (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание люфенурона в зеленом луке и луке-репке менее 0,01 мг/кг» <7>.
<7> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации люфенурона в зеленом луке и луке-репке.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <8>.
<8> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
13.2. Показатели повторяемости и воспроизводимости, пределы повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95 приведены в табл. 13.1.
Метрологические характеристики
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Технический регламент Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011).
4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
15. ГОСТ 12.0.004 «Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
16. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
17. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования».
18. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
19. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
20. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
21. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
22. ГОСТ 22967-90 «Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний».
23. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
24. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
25. ГОСТ 5556-81 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
26. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия».
27. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
28. ГОСТ 4166-76 «Натрий сернокислый. Технические условия».
29. ГОСТ 4201-79 «Натрий углекислый кислый. Технические условия».
30. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».
31. ГОСТ 22300-76 «Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
32. ГОСТ 34306-2017 «Лук репчатый свежий. Технические условия».
33. ГОСТ 1723-2015 «Лук репчатый свежий для промышленной переработки. Технические условия».
34. ГОСТ 34214-2017 «Лук свежий зеленый. Технические условия».
35. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
36. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.