МУК 4.1.4146-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хизалофоп-П-этила в семенах гречихи и кориандра по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте методом газожидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
Актуально на 03.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.4146-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хизалофоп-П-этила в семенах гречихи и кориандра по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте методом газожидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля". МУК 4.1.4146-25. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-4146-25
(утв. Роспотребнадзором 11.04.2025)
Примечание
Документ введен в действие с 11.07.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 11 апреля 2025 года
Дата введения 11 июля 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХИЗАЛОФОП-П-ЭТИЛА В СЕМЕНАХ ГРЕЧИХИ И КОРИАНДРА ПО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ ХИЗАЛОФОП-П КИСЛОТЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4146-25
1. Разработаны факультетом почвоведения Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова (Р.А. Стрелецкий, В.С. Горбатов).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) с электронозахватным детектором для определения остаточных количеств Хизалофоп-П-этила по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте в семенах гречихи в диапазоне 0,005 — 0,05 мг/кг и в кориандре в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Хизалофоп-П-этил — класс арилоксифеноксипропионатов. CAS № 100646-51-3. Этил-(R)-2-[4-(6-хлорохиноксалин-2-илокси)фенокси]пропаноат <1>. Брутто-формула: C19H17ClN2O4. Молекулярная масса: 372,8 г/моль.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физико-химические свойства хизалофоп-П-этила.
Кристаллическое вещество белого цвета. Температура плавления плюс 75 °C. Давление паров при температуре плюс 20 °C: 0,0001 мПа. Хорошо растворим в органических растворителях. Растворимость при температуре плюс 20 °C (г/дм3): в ацетоне — 650, этаноле — 22, гексане — 5, ксилоле — 360. Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C — 0,4 мг/дм3. Хизалофоп-П-этил устойчив к свету, разлагается до хизалофоп-П кислоты под действием разбавленных кислот и щелочей. DT50 в почве: 2 суток.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Вещество умеренно токсично для теплокровных и дождевых червей, ЛД50 для крыс 1480 — 1670 мг/кг. Не раздражает кожу, вызывает раздражение слизистых оболочек глаз.
2.4 Область применения.
Хизалофоп-П-этил — системный послевсходовый гербицид, эффективно подавляющий рост и развитие малолетних и многолетних злаковых сорных растений. Ингибирует синтез жирных кислот. Он быстро адсорбируется через поверхность листа, гидролизуется до Флуазифопа-П и переносится через флоэму и ксилему, накапливаясь в ризомах и столонах многолетних злаков, а также в меристемах однолетних и многолетних злаковых растений.
Хизалофоп-П-этил обладает гербицидной активностью системного действия. Эффективен против однолетних и многолетних злаковых сорняков в период их активного роста
2.5. Хизалофоп-П кислота — основной метаболит хизалофоп-П-этила <2>. CAS № 94051-08-8. (R)-2-[4-(6-хлорхиноксалин-2-ил-окси)фенокси]пропионовая кислота. Брутто-формула: C17H13ClN2O4. Молекулярная масса: 344,79 г/моль.
<2> В соответствии с классификацией ИЮПАК.
2.6 Физико-химические свойства хизалофоп-П кислоты.
Кристаллические вещество белого цвета. Давление паров при температуре плюс 20 °C: 8,7 * 10-7 мПа. Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: Kowlog P = 4,4 (при температуре плюс 20 °C). Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C — 3 мг/дм3. Хорошо растворима в метаноле, этаноле, ацетоне, ксилоле и умеренно — в ацетонитриле. Относительно стабильна в кислой среде, период полураспада в почве до 60 дней.
2.7 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность (ЛД50) для крыс — более 1000 мг/кг, для птиц — более 2000 мг/кг.
2.8 Область применения.
Хизалофоп-П кислота — основной метаболит хизалофоп-П-этила, подавляет синтез липидов на стадии фермента ацетил-CoA-карбоксилазы.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность (и ее составляющие) <3> результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<3> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Метрологические характеристики
IV. Метод измерений
4.1. Измерение концентраций Хизалофоп-П-этила выполняют методом капиллярной ГЖХ с использованием электронно-захватного детектора (далее — ЭЗД) после метилирования диазометаном.
4.2. Определение Хизалофоп-П-этила в семенах гречихи проводится по основному метаболиту Хизалофоп-П кислоте после экстракции смесью ацетонитрила с подкисленной водой, очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей, дериватизации очищенной пробы с получением хизалофоп-П-метила и последующей очистки на колонке с флорисилом.
4.3. Определение Хизалофоп-П кислоты в семенах кориандра проводится по основному метаболиту Хизалофоп-П кислоте после экстракции смесью ацетонитрила с подкисленной водой, очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей, затем на картриджах C16, дериватизации очищенной пробы с получением хизалофоп-П-метила и последующей очистки на колонке с флорисилом.
4.4. Нижний предел измерения Хизалофоп-П-этила в анализируемом объеме пробы — 0,1 нг. Средняя полнота извлечения — 86,9% из семян гречихи и 81,7% из семян кориандра.
4.5. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий программирования.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Хизалофоп-П-этил | Аналитический стандарт с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Хизалофоп-П кислота | Содержание основного вещества не менее 95% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Вода для лабораторного анализа 1 степени чистоты | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Азот | Особая чистота, сжатый, ГОСТ 9293-74 |
| Ацетон | Химически чистый, ГОСТ 2603-79 |
| Ацетонитрил | Химически чистый, чистота не менее 99,85% |
| Гексан, химически чистый | Химически чистый, чистота не менее 99,0% |
| Диэтиловый эфир | Химически чистый |
| Метилен хлористый | Химически чистый, чистота не менее 99,85% |
| Этилацетат | Химически чистый, ГОСТ 22300-76 |
| Калий марганцовокислый (перманганат) | Химически чистый, ГОСТ 20490-75 |
| Калий углекислый (карбонат калия, поташ) | Химически чистый, ГОСТ 4221-76 |
| Кислота серная (концентрированная) | Химически чистая, ГОСТ 4204-77 |
| Гидроксид натрия | Чистый для анализа, ГОСТ 4328-77 |
| N-нитрозометилмочевина | Химически чистая, чистота не менее 95% |
| Гидроксид калия | Химически чистый, ГОСТ 24363-80 |
| Изооктан | Химически чистый, чистота не менее 99,5% |
| Уксусная кислота | Химически чистая, ГОСТ 61-75 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей | |
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Аппарат для встряхивания проб с орбитальным типом колебаний | Максимальная загрузка 8 кг, амплитуда колебаний 20 мм, скорость до 400 колебаний |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силиката магния (флорисил) | 60 — 100 меш |
| Виалы | Объем 2 см3, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой |
| Ванна ультразвуковая | Потребляемая мощность 150 Вт, рабочей частотой 40 кГц, рабочим объемом 2,0 дм3 |
| Вата хлопковая медицинская | - |
| Воронки делительные | Вместимостью 100 см3, 250 см3, 500 см3, 1000 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Испаритель ротационный вакуумный | С ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Колбы конические плоскодонные | Тип Кн, исполнение 2, 250 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы для упаривания (концентраторы) | Круглодонные со шлифом, тип К, исполнение 1, вместимостью 250 см3, 1000 см3, 2000 см3, 4000 см3. Остродонные со шлифом, тип О, вместимостью 50 см3, 100 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные | ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая | DB-5 длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщиной пленки (5% дифенил- и 95% диметилполисилоксана) 1 мкм |
| Колонка стеклянная для препаративной колоночной хроматографии | Длина не менее 10 см, внутренний диаметр 5 мм |
| Стаканы стеклянные, термостойкие | Вместимостью 100 — 500 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Химические бутыли с завинчивающейся крышкой | Вместимостью 1 дм3, ГОСТ 34037-2016 |
| Фильтры «красная лента» | ГОСТ 12026-76 |
| Вакуумная установка для твердофазной экстракции (манифолд) | - |
| Насос диафрагменный | Химически стойкий на 100%, с мощностью электропривода 180 Вт, предельным вакуумом 7 мбар и скоростью откачки 2 м3/час |
| Концентрирующие патроны | C16 на основе силикагеля с привитыми гексадецильными группами, масса сорбента 500 мг |
| Шприцы стеклянные | Вместимостью 1 см3, ГОСТ 22967-90 |
| Мельница электрическая лабораторная | - |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс газового хроматографа.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <4>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.
<4> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 15.12.2020 № 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с ЭЗД, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 25 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе с ЭЗД проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.
8.2 Подготовка органических растворителей.
При использовании растворителей необходимой чистоты дополнительной очистки не требуется.
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре плюс 40 °C до объема 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетона 10 г перманганата калия и 2 г карбоната калия). Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2% раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
8.3 Приготовление растворов для проведения анализа.
8.3.1 Приготовление 2% (по объему) раствора этилацетата в гексане.
В мерную колбу на 1000 см3 вносят 500 см3 гексана, приливают 20 см3 этилацетата, перемешивают и доводят до метки гексаном.
8.3.2 Приготовление 20% (по объему) раствора ацетонитрила в воде.
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 воды, прибавляют 200 см3 ацетонитрила, перемешивают, объем доводят до метки водой.
8.3.3 Приготовление 10% (по объему) раствора этилацетата в гексане.
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 гексана, прибавляют 100 см3 этилацетата, перемешивают и доводят до метки гексаном.
8.3.4 Приготовление 50% (по объему) раствора ацетонитрила в воде.
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 воды, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают.
8.3.5 Приготовление 1% (по объему) раствора уксусной кислоты в воде.
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 воды, прибавляют 10 см3 уксусной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки водой.
8.3.6. Приготовление 0,1% (по объему) раствора уксусной кислоты в воде.
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 воды, прибавляют 1 см3 уксусной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки водой.
8.3.7. Приготовление 80% (по объему) раствора ацетонитрила в подкисленной воде.
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 200 см3 1% уксусной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.
8.3.8 Приготовление 50% раствора гидроксида калия в воде.
В плоскодонную колбу помещают 50 г гидроксида калия и растворяют в 50 см3 дистиллированной воды.
8.3.9. Приготовление 5% (по объему) раствора ацетонитрила в подкисленной воде.
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 0,1% раствора уксусной кислоты, прибавляют 50 см3 ацетонитрила, перемешивают, объем доводят до метки 0,1% раствором уксусной кислоты.
8.3.10. Приготовление 2% раствора гидроксида натрия. 20 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу на 1000 см3, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.
8.3.11 Раствор с концентрацией Хизалофоп-П-кислоты 0,1 мкг/см3.
Взвешивают (10 +/- 0,005) мг Хизалофоп-П-кислоты в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор используется для приготовления растворов для проверки поведения на патроне C16. Стандартный раствор хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
8.3.12 Раствор с концентрацией Хизалофоп-П-кислоты 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора (п. 8.3.11) отбирают пипеткой 1 см3 и помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Доводят объем до метки ацетоном при перемешивании. Полученный стандартный раствор используется для проверки поведения на патроне C16. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
8.4 Приготовление градуировочных растворов.
8.4.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Хизалофоп-П-этила 1,0 мг/см3.
Взвешивают (10 +/- 0,005) мг Хизалофоп-П-этила в мерной колбе объемом 10 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
8.4.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Хизалофоп-П-этила 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3 и помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Доводят объем до метки ацетоном при перемешивании. Стандартный раствор № 2 используется для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике не более 2 месяцев.
8.4.3. Стандартный раствор № 3 Хизалофоп-П-этила с концентрацией Хизалофоп-П-этила 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток. Для проведения метилирования 1 см3 данного раствора переносят в хроматографическую виалу, отгоняют досуха в токе азота. Затем в виалу приливают 1,5 см3 диэтилового эфира насыщенного диазометаном. Виалу плотно закрывают завинчивающейся крышкой с тефлоновой прокладкой и помещают на 8 — 12 часов в холодильник при температуре плюс 4 °C. Затем эфир в виале отгоняют досуха в вытяжном шкафу в токе азота. В виалу приливают 1 см3 изооктана. Стандартный раствор после метилирования хранится в холодильнике не более двух недель.
Стандартный раствор № 3 также используется для внесения в контрольные образцы кориандра для установления метрологических параметров. Раствор вносят в объеме 1 см3, без предварительной дериватизации.
8.4.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Хизалофоп-П-этила 0,50 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток. Метилирование проводят в соответствии с п. 8.4.3. Стандартный раствор после метилирования хранится в холодильнике не более двух недель.
Стандартный раствор № 4 также используется для внесения в контрольные образцы кориандра и гречихи для установления метрологических параметров. Раствор вносят в объеме 1 см3, без предварительной дериватизации.
8.4.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Хизалофоп-П-этила 0,2 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток. Метилирование проводят в соответствии с п. 8.4.3. Стандартный раствор после метилирования хранится в холодильнике не более двух недель.
Стандартный раствор № 5 также используется для внесения в контрольные образцы кориандра для установления метрологических параметров. Раствор вносят в объеме 1 см3, без предварительной дериватизации.
8.4.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией Хизалофоп-П-этила 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток. Метилирование проводят в соответствии с п. 8.4.3. Стандартный раствор после метилирования хранится в холодильнике не более двух недель.
Стандартный раствор № 6 также используется для внесения в контрольные образцы кориандра и гречихи для установления метрологических параметров. Раствор вносят в объеме 1 см3, без предварительной дериватизации.
8.4.7. Стандартные растворы Хизалофоп-П-этила с концентрацией по 0,05; 0,25 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы семян гречихи.
Методом последовательного разведения ацетоном раствора № 3 готовят растворы, содержащие 0,05 и 0,25 мкг/см3 хизалофоп-П-этила и вносят 1 см3 этих растворов в контрольные образцы.
8.5 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую отношение площади пика метилового эфира Хизалофопа-П (Гц x сек) от концентрации Хизалофоп-П-этила в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 растворам для градуировки.
Градуировочную зависимость для определения Хизалофоп-П-этила в семенах гречихи и кориандра устанавливают по 4 растворам метилового эфира Хизалофопа-П для градуировки с концентрацией 0,1, 0,2, 0,5 и 1 мкг/см3, приготовленным в соответствии с п.п. 8.4.3 - 8.4.6.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора метилового эфира хизалофопа-П и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.6 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов метилового эфира Хизалофопа-П.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора величина расхождения (A), рассчитанная по формуле (1), не превышает норматива контроля погрешности (B) - соотношение (2):
\text{А } = \frac{|(X - C)|}{C} \cdot 100 ; (1)
где: X — концентрация Хизалофоп-П-этила контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора метилового эфира Хизалофоп-П в изооктане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).
Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием двух градуировочных растворов метилового эфира Хизалофопа-П, предусмотренных п.п. 8.4.3 - 8.4.6. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.5.
8.7. Подготовка флорисила для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения метилового эфира Хизалофопа-П на них.
8.7.1 Подготовка флорисила для очистки экстракта.
Предварительно прокаленный в течение 6 часов при температуре плюс 125 °C флорисил массой 2,0 г помещается в стеклянную колонку длиной 10 см и внутренним диаметром 5 мм, в нижнюю часть которой предварительно помещается небольшое количество медицинской хлопковой ваты, слоем около 0,5 см.
Кондиционирование: флорисил промывают последовательно 2 см3 этилацетата и 4 см3 гексана, элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
8.7.2. Проверка хроматографического поведения метилового эфира Хизалофопа-П на флорисиле.
В остродонную колбу объемом 50 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора метилового эфира Хизалофоп-П в изооктане с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 50 °C.
Сухой остаток растворяют в 2 см3 гексана, помещают концентратор на 2 минуты в ультразвуковую ванну, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный сорбент. Элюат собирают в отдельный концентратор объемом 50 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
На сорбент вносят 8 см3 2% раствора этилацетата в гексане (п. 8.3.1) и собирают элюат в отдельный концентратор объемом 50 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
После этого на патрон вносят 25 см3 10% раствора этилацетата в гексане (п. 8.3.3), собирают элюат в отдельные концентраторы объемом 50 см3 порциями по 5 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 изооктана и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Хизалофоп-П-этил в виде метилового эфира Хизалофопа-П, полноту смывания с сорбента и необходимый объем элюента.
Изучение поведения метилового эфира Хизалофопа-П на флорисиле необходимо каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии сорбента.
8.8. Подготовка картриджей C16 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения Хизалофоп-П-кислоты на них.
8.8.1 Подготовка картриджей C16 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 1 капля/сек.
Патрон C16 устанавливают в манифолд.
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 ацетонитрила, затем 5 см3 0,1% раствора уксусной кислоты в воде (п. 8.3.6). Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
8.8.2. Проверка хроматографического поведения Хизалофоп-П-кислоты на концентрирующих патронах C16.
В концентратор объемом 100 см3 вносят 1 см3 раствора Хизалофоп-П-кислоты в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см3 (п. 8.3.12) и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 50 °C.
В концентратор помещают 10 см3 5% раствора ацетонитрила в 0,1% уксусной кислоте (п. 8.3.9), обрабатывают концентратор 2 минуты в ультразвуковой ванне, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный патрон. Пропускают элюат, собирая его в отдельный концентратор объемом 100 см3 и упаривая досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 50 °C.
На патрон вносят 10 см3 20% раствора ацетонитрила в воде (п. 8.3.2) и собирают элюат в отдельный концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 50 °C.
После этого на патрон вносят 5 см3 50% ацетонитрила в воде (п. 8.3.4), собирают элюат в отдельный концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 50 °C.
Затем наносят на патрон 3 см3 ацетонитрила, собирают элюат в отдельный концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 50 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 ацетона, обрабатывая колбы в ультразвуковой ванне в течение 2 минут, переносят в хроматографическую виалу объемом 2 см3 и метилируют согласно п. 8.4.3. Остаток в виале после метилирования растворяют в 1 см3 изооктана и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Хизалофоп-П-этил в виде Хизалофоп-П-кислоты, и полноту смывания с сорбента.
Изучение поведения вещества на концентрирующих патронах типа C16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
8.9. Получение эфирного раствора диазометана (порция для двух проб). N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 4 см3 с плотно прилегающей завинчивающейся крышкой с резиновой прокладкой. Этиловый эфир объемом 4,0 см3 вносят в другой флакон емкостью 5,0 мл с плотно прилегающей завинчивающейся крышкой с резиновой прокладкой и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.
После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5 — 2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен также иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50% водный раствор гидроокиси калия (п. 8.3.8) (0,3 см3) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо обязательно проводить в работающем вытяжном шкафу.
8.10. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии.
Капиллярную кварцевую колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не присоединяя к детектору, кондиционируют при температуре плюс 290 °C и скорости газа носителя 2 см3/мин в течение 8 — 10 часов.
IX. Отбор проб и хранение
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <5>.
<5> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
9.2. Пробы семян гречихи и кориандра хранят в сухом, защищенном от света месте, перед проведением анализа размалывают на мельнице.
X. Выполнение определения
10.1 Семена гречихи.
10.1.1 Экстракция.
Образец измельченных семян гречихи массой 10 г помещают в плоскодонную колбу объемом 250 см3, добавляют 40 см3 80% раствора ацетонитрила в подкисленной воде (п. 8.3.7) и помещают на 10 минут на аппарат для встряхивания проб, а затем на 10 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт отстаивают в течение 5 минут и пропускают через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют. Экстракт отгоняют на ротационном вакуумном испарителе до полного улетучивания ацетонитрила при температуре плюс 50 °C.
10.1.2. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
К экстракту в концентраторе (п. 10.1.1) добавляют 10 см3 1% раствора уксусной кислоты в воде (п. 8.3.5), обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 2 минут и переносят в делительную воронку объемом 100 см3. Затем в делительную воронку добавляется 20 см3 хлористого метилена. Производят экстракцию интенсивным встряхиванием в течение 2 минут. Затем дают жидкости в колбе расслоиться и отбирают нижний органический слой в колбу концентратор объемом 100 см3. Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют. Экстракт отгоняют на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не выше плюс 30 °C.
10.1.3 Метилирование экстракта.
К экстракту (п. 10.1.2) приливают 1 см3 ацетона, обрабатывают колбу в ультразвуковой ванне в течение 2 минут, и переносят в хроматографическую виалу объемом 2 см3. Экстракт в виале выпаривают досуха в вытяжном шкафу в токе азота. Затем в виалу приливаются 1,5 см3 диэтилового эфира насыщенного диазометаном (п. 8.9). Виалу плотно закрывают завинчивающейся крышкой с тефлоновой прокладкой и помещают на 8 — 12 часов в холодильник при температуре плюс 4 °C. Затем эфир в виале отгоняют досуха в вытяжном шкафу в токе азота.
10.1.4 Очистка полученного экстракта при помощи колонок с флорисилом.
Остаток в виале (п. 10.1.3) растворяется в 2 см3 гексана и переносят на предварительно подготовленную колонку с флорисилом (п. 8.7.1). Через сорбент пропускают 8 см3 2% раствора этилацетата в гексане (п. 8.3.1), элюат отбрасывают.
После этого на сорбент вносят 25 см3 10% раствора этилацетата в гексане (п. 8.3.1.3), собирают элюат в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Остаток в виале после улетучивания эфира растворяют в 1 см3 изооктана и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Условия хроматографирования приведены в таблице 10.1.
10.2 Семена кориандра.
10.2.1 Экстракция.
Образец измельченных семян кориандра массой 10 г помещают в плоскодонную колбу объемом 250 см3, добавляют 40 см3 80% раствора ацетонитрила в подкисленной воде (п. 8.3.7) и помещают на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт отстаивают в течение 5 минут и пропускают через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют. Экстракт отгоняют на ротационном вакуумном испарителе до полного улетучивания ацетонитрила при температуре плюс 50 °C.
10.2.2. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Экстракт (п. 10.2.1) подготавливается в соответствии с п. 10.1.2.
10.2.3 Очистка полученного экстракта при помощи картриджей C16.
К сухому остатку в отгонной колбе (п. 10.2.3) приливают 10 см3 5% раствора ацетонитрила в 0,1% уксусной кислоте (п. 8.3.9), колбу обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 30 секунд. Экстракт наносят на предварительно подготовленный (п. 8.6.1) картридж C16, элюат отбрасывают. Далее картридж промывают последовательно 10 см3 20% раствора ацетонитрила в воде (п. 8.3.2) и 5 см3 50% раствора ацетонитрила в воде (п. 8.3.4), элюаты отбрасывают. Искомое вещество смывают 3 см3 ацетонитрила в отгонную колбу объемом 25 см3 и упаривают досуха при температуре плюс 40 °C.
10.2.4 Метилирование экстракта.
Метилирование экстракта проводят в соответствии с п. 10.1.3.
10.2.5 Очистка полученного экстракта при помощи колонок с флорисилом.
Экстракт (п. 10.2.4) подготавливают в соответствии с п. 10.1.4. Остаток в виале после улетучивания эфира растворяют в 1 см3 изооктана и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Условия хроматографирования приведены в табл. 10.1.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют изооктана, не более чем в 10 раз.
XI. Обработка результатов
11.1 Содержание Хизалофоп-П-этила в образцах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):
X = \frac{\text{С } \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (3)
где: C — концентрация Хизалофоп-П-этила, найденная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
Кр — кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
11.2. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, условие (4):
\frac{2 \times |X_{1} - X_{2}|}{X_{1} + X_{2}} \times 100 \leq r , (4)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом X = 2,8 \times \sigma_{r} .
При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов
12.1 Результат количественного анализа представляют в виде выражения (5):
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, (5)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):
\Delta = \frac{\delta \times X}{100} , (6)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «менее 0,005 мг/кг» для семян гречихи и «менее 0,01 мг/кг» для семян кориандра.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1 Контроль достоверности результатов (точность и прецизионность) осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <6>. Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.
<6> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
3. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
4. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
5. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
6. ГОСТ 12026-76 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».
7. ГОСТ 22967-90 «Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний».
8. ГОСТ 34037-2016 «Упаковка стеклянная для химических реактивов и особо чистых химических веществ. Общие технические условия».
9. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
10. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
11. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
12. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия».
13. ГОСТ 22300-76 «Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
14. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
15. ГОСТ 4221-76 «Калий углекислый. Технические условия».
16. ГОСТ 4204-77 «Кислота серная. Технические условия».
17. ГОСТ 4328-77 «Натрия гидроокись». Технические условия».
18. ГОСТ 24363-80 «Калия гидроокись. Технические условия».
19. ГОСТ 61-75 «Кислота уксусная. Технические условия».
20. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
21. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
| ББК 51.231 |
|---|