МУК 4.1.4137-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуопиколида в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, семенах подсолнечника и в растительных маслах методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 11.04.2025)
Примечание
Документ введен в действие с 11.07.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 11 апреля 2025 года
Дата введения 11 июля 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУОПИКОЛИДА В БОТВЕ И КОРНЕПЛОДАХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ, СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА И В РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4137-25
1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, А.С. Поликарпов, Е.Н. Тестова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения остаточных количеств флуопиколида в ботве и в корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0,01 — 0,2 мг/кг, а также в семенах и масле подсолнечника в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Флуопиколид — 2,6-дихлор-N-[3-хлор-5-(трифторметил)-2-пиридилметил]бензамид <1>. Брутто-формула C14H8Cl3F3N2O. Молекулярная масса 383,6 г/моль.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Твердое вещество белого или светло-бежевого цвета со слабым фенольным запахом. Давление насыщенного пара 3,03 x 10-4 мПа при температуре плюс 20 °C. Температура плавления плюс 150 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода при температуре плюс 20 °C KowlogP = 2,90. Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C 2,8 мг/дм3. Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C (г/дм3): дихлорметан — 126, ацетон — 74,7, этилацетат — 37,7, этанол — 19,2, н-гексан — 0,2.
Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой и щелочной средах (период полураспада (ДТ50) = 365 дней).
В присутствии света в водных фотолитических условиях флуопиколид достаточно устойчив с периодом полураспада 64,2 дня.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая оральная токсичность (ЛД50) для крыс более 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (ЛД50) для крыс 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (ЛК50) для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) более 5160 мг/м3.
2.4 Область применения.
Флуопиколид — контактно-системный фунгицид, проявляющий активность против грибов классов оомицеты и аскомицеты. Тормозит прорастание зооспор и конидий, подавляет спорообразование и развитие мицелия грибов в тканях растений.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Метрологические характеристики
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовых концентраций флуопиколида выполняют методом ГЖХ с использованием электронно-захватного детектора (далее — ЭЗД).
4.2. Определение флуопиколида в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, а также в семенах подсолнечника проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта на колонке с флорисилом.
4.3. Определение флуопиколида в масле подсолнечника проводится после его экстракции из образцов масла ацетонитрилом с последующей очисткой экстракта на колонке с флорисилом.
4.4 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы 0,005 нг.
4.5. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.6. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Хроматограф газовый с ЭЗД | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Флуопиколид аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Азот газообразный | Особо чистый, ГОСТ 9293-74 |
| Ацетон Химически чистый, ГОСТ 2603-75 | |
| Ацетонитрил | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый | Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый гранулированный безводный | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Натрий сернокислый | Химически чистый, ГОСТ 4166-76 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силиката магния (флорисил) | Размер частиц 60 — 100 меш |
| Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) | Чистый для анализа, ГОСТ 22300-76 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. | |
| Таблица 5.3 | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний/мин |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556-81 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД, ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы конические стеклянные | Тип П или Кн, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К, Гр или О, ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла | Внутренний диаметр 0,32 мм, длина 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксана. Толщина пленки 0,25 мкм |
| Колонки хроматографические стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные быстро фильтрующие «красная лента» | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Холодильная/морозильная камера | ГОСТ 26678-85 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с флорисилом, установление градуировочной характеристики.
8.2 Подготовка и очистка органических растворителей.
8.2.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
8.2.2. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
8.2.3. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
8.2.4. Этилацетат. Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Этилацетат перегоняют при температуре плюс 76,5 — 77,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 76,5 — 77,5 °C, отбрасывают.
8.3 Приготовление рабочих растворов.
8.3.1. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 90 см3 гексана и добавляют 10 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.2. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 7:3 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 70 см3 гексана и добавляют 30 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.3. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 50 см3 гексана и добавляют 50 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.4 Приготовление растворов аналитического стандарта флуопиколида.
8.4.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией флуопиколида 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г флуопиколида в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
8.4.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией флуопиколида 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией флуопиколида 2,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией флуопиколида 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией флуопиколида 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией флуопиколида 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используют для хроматографического исследования, для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией флуопиколида 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией флуопиколида 0,02 мкг/см3. Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 8 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.9. Стандартный раствор № 9 с концентрацией флуопиколида 0,01 мкг/см3. Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 9 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.10. Стандартный раствор № 10 с концентрацией флуопиколида 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора № 9 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 10 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.4.11. Стандартные растворы флуопиколида с концентрацией 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц. Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 флуопиколида, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц. Стандартные растворы флуопиколида для внесения хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
8.5. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
8.5.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации флуопиколида в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки с концентрацией 0,2; 0,05; 0,02; 0,01 и 0,005 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.5.2. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки. Содержание флуопиколида должно охватывать весь диапазон концентраций 0,005 — 0,2 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
\frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 10, (1)
где: X — концентрация флуопиколида контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора флуопиколида в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов флуопиколида, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.5.1.
8.6. Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения флуопиколида на ней.
8.6.1 Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта.
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают (5 +/- 0,3) г флорисила и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флорисила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.
В день использования колонку промывают 10 см3 этилацетата, 15 см3 гексана, смыв отбрасывают.
8.6.2. Проверка хроматографического поведения флуопиколида на колонке с 5 г флорисила. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора флуопиколида в ацетоне с концентрацией 0,1 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 этилацетата, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Колонку последовательно промывают 15 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1, 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 7:3 и тремя порциями по 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 10 см3 ацетона и 1 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие флуопиколид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
Проверку хроматографического поведения флуопиколида на колонке с флорисилом следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.
<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79: Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.
<5> ГОСТ 33884-2016 «Свекла сахарная. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 06.12.2016 № 1957-ст; ГОСТ ISO 6497-2014 «Корма. Отбор проб», введенный приказом Росстандарта от 18.05.2016 № 353-ст; ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 18.12.1986 № 3979; ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный приказом Росстандарта от 28.11.2013 № 1254-ст; ГОСТ 22391-2015 «Подсолнечник. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 24.07.2015 № 984-ст; ГОСТ 1129-2013 «Масло подсолнечное. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.10.2013 № 1253-ст.
9.2. Отобранные пробы ботвы и корнеплодов сахарной свеклы хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт.
Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.
9.3. Пробы семян подсолнечника подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом хорошо проветриваемом шкафу, не доступном для грызунов.
9.4. Пробы растительного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 7 суток.
X. Выполнение измерений
10.1 Ботва и корнеплоды сахарной свеклы.
10.1.1. Экстракция. Навеску массой (10 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут на ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента» в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.2. Очистка экстракта на колонке с флорисилом. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.1, растворяют в 1 см3 этилацетата, обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленную по п. 8.6.1 колонку. Элюат отбрасывают.
Колонку последовательно промывают 15 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1 и 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 7:3, элюат отбрасывают.
Флуопиколид элюируют с колонки 20 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.3. Сухой остаток в колбе растворяют в 10 см3 ацетона, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.
10.2 Семена подсолнечника.
10.2.1. Экстракция. Навеску массой (10 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут на ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента» в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще один раз в тех же условиях, используя 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку экстракта в соответствии с п. 10.1.2.
Сухой остаток после очистки растворяют в 10 см3 ацетона, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.
10.3 Масло подсолнечника.
10.3.1. Экстракция. Навеску подсолнечного масла массой (10 +/- 0,3) г помещают в химический стакан объемом 100 см3, прибавляют 30 см3 гексана, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Химический стакан обмывают еще одной порцией гексана объемом 30 см3 и объединяют с первым смывом в делительной воронке объемом 250 см3.
Флуопиколид экстрагируют двумя порциями ацетонитрила объемом по 50 см3 каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3 и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку экстракта в соответствии с п. 10.1.2.
Сухой остаток после очистки растворяют в 10 см3 ацетона, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.
10.4 Условия хроматографирования.
10.4.1 Измерения выполняют на газовом хроматографе с ЭЗД при следующих режимных параметрах <6>:
- колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм;
- температура детектора плюс 300 °C, поток газа поддувки (азот) 30 см3/мин;
- температура испарителя плюс 300 °C, газ-носитель — гелий, режим с делением потока (сплит), деление потока 40:1, общий поток 109,6 см3/мин;
- температура колонки: градиентный нагрев колонки начиная с плюс 200 °C (выдержка 1 минута) по 10 град/мин до 240 °C (выдержка 2 минуты), затем по 20 град/мин до плюс 300 °C (выдержка 2 минуты) и по 20 град/мин до плюс 320 °C (выдержка 1 минута). Поток газа-носителя (гелий) 2,6 см3/мин, средняя скорость 49,6 см/сек, режим — постоянный поток;
- объем вводимой пробы 1 мм3.
<6> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор флуопиколида с концентрацией 0,2 мкг/см3, соответственно, разбавляют ацетоном. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания флуопиколида в пробах.
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Концентрацию флуопиколида в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по формуле (2) <7> без учета полноты извлечения вещества из проб:
X_{1} = \frac{C \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (2)
где: A — концентрация флуопиколида в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для всей исследуемой продукции равен 10 см3);
m — масса анализируемого образца, г;
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
<7> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (3)
X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат анализа представляют в виде формулы (4):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95, (4)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}/100, (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание флуопиколида в пробе менее 0,01 мг/кг» <8>.
<8> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации флуопиколида в ботве, корнеплодах сахарной свеклы, семенах подсолнечника и в растительных маслах.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <9>.
<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.
4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
15. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
16. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования».
17. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
18. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
19. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
20. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
21. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
22. ГОСТ 5556-81 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
23. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
24. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия».
25. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
26. ГОСТ 4166-76 «Натрий сернокислый. Технические условия».
27. ГОСТ 22300-76 «Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
28. ГОСТ 33884-2016 «Свекла сахарная. Технические условия».
29. ГОСТ ISO 6497-2014 «Корма. Отбор проб».
30. ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
31. ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
32. ГОСТ 22391-2015 «Подсолнечник. Технические условия».
33. ГОСТ 1129-2013 «Масло подсолнечное. Технические условия».
34. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.