МУК 4.1.4136-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуоксастробина и его геометрического Z-изомера в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 11.04.2025)
Примечание
Документ введен в действие с 11.07.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 11 апреля 2025 года
Дата введения 11 июля 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУОКСАСТРОБИНА И ЕГО ГЕОМЕТРИЧЕСКОГО Z-ИЗОМЕРА В БОТВЕ И КОРНЕПЛОДАХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4136-25
1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова, Н.В. Устименко).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения остаточных количеств флуоксастробина и его геометрического Z-изомера в ботве сахарной свеклы в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, а также в корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Флуоксастробин — (E)-{2-[6-(2-хлорофенокси)-5-фторпиримидин-4-илокси]фенил}(5,6-дигидро-1,4,2-диоксазин-3-ил)метанон O-метилоксим <1>. Брутто-формула C21H16ClFN4O5. Молекулярная масса 458,83 г/моль.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства флуоксастробина.
Белое кристаллическое вещество со слабым нехарактерным запахом, состоит из двух оптических изомеров E и Z. Давление насыщенного пара при температуре плюс 20 °C 6 x 10-7 мПа. Температура плавления плюс 103 — 108 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода при pH 7 и температуре плюс 25 °C KowlogP = 2,86. Растворимость в воде при температуре 20 °C 0,0023 г/дм3. Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C (г/дм3): н-гептан — 0,04; толуол — 3,7; 2-пропанол — 6,7; ксилол — 38,1; ацетон, ацетонитрил, дихлорметан, этилацетат — все более 250.
Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой и щелочной средах (период полураспада (ДТ50) больше 1 года). В присутствии света в водных фотолитических условиях флуоксастробин достаточно быстро деградирует с периодом полураспада 4,1 дня. В биологически активных почвах в аэробных условиях флуоксастробин разрушается достаточно медленно: период полураспада варьирует от нескольких дней до нескольких недель.
2.3. Геометрический Z-изомер флуоксастробина-Z)-{2-[6-(2-хлорофенокси)-5-фторпиримидин-4-илокси]фенил}(5,6-дигидро-1,4,2-диоксазин-3-ил)метанон O-метилоксим <2>. Брутто-формула C21H16ClFN4O5. Молекулярная масса 458,83 г/моль.
2.4 Физические и химические свойства Z-изомера флуоксастробина.
Белое кристаллическое вещество со слабым нехарактерным запахом.
2.5 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая оральная токсичность (ЛД50) для крыс более 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (ЛД50) для крыс более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (ЛК50) для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) 4998 мг/м3 воздуха. Вещество не обладает раздражающим действием на слизистую оболочку глаз кролика и сенсибилизирующими свойствами. Нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей, дафний и водорослей.
2.6 Область применения.
Флуоксастробин — системный синтетический фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба Strobilurus tenacellus. Вещество обладает защитным и искореняющим действием. При обработке вегетирующих растений подавляет развитие возбудителей ржавчины, септориоза, мучнистой росы, ломкости стеблей и пятнистости листьев на посевах ячменя, пшеницы и других культур, а при протравливании семян зерновых колосовых культур в дозах 50 — 100 г/т защищает последние от заражения твердой и пыльной головней и фузариозной корневой гнилью.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <3> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<3> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Метрологические характеристики
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовых концентраций флуоксастробина и его геометрического Z-изомера выполняют методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора.
4.2. Определение флуоксастробина и его геометрического Z-изомера в ботве сахарной свеклы проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами на концентрирующих патронах № 1 и на колонках с оксидом алюминия.
4.3. Определение флуоксастробина и его геометрического Z-изомера в корнеплодах сахарной свеклы проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта на колонках с оксидом алюминия.
4.4 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы 1 нг.
4.5. Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.6. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором хроматографических колонок различной полярности.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Хроматограф жидкостной с диодно-матричным детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Флуоксастробин, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Геометрический Z-изомер флуоксастробина, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Ацетон Химически чистый, ГОСТ 2603-75 | |
| Ацетонитрил | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый | Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый гранулированный безводный | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены слабоосновным сорбентом с постоянной активностью с размером частиц 63 — 200 мкм с привитыми аминогруппами (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Натрий сернокислый | Химически чистый, ГОСТ 4166-76 |
| Натрий хлористый | Химически чистый, ГОСТ 4233-77 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе оксида алюминия | Нейтральный, размер частиц 50 — 200 мкм |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. | |
| Таблица 5.3 | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Алонж прямой стеклянный | Тип АО, ГОСТ 25336-82 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний/мин |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556-81 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД, ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы конические стеклянные | Тип П или Кн, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К, Гр или О, ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 150 мм x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Колонки хроматографические стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум до 10 мбар |
| Предколонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 12,5 мм x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные быстро фильтрующие «красная лента» | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Фильтры мембранные для очистки растворителей | Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм |
| Холодильная/морозильная камера ГОСТ 26678-82 | |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3, ГОСТ 22967-90 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками | |
| VI. Требования безопасности | |
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения веществ на колонке с оксидом алюминия и на концентрирующих патронах № 1, установление градуировочных характеристик.
8.2 Подготовка и очистка органических растворителей.
8.2.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
8.2.2. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
8.2.3. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
8.2.4. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
8.3 Приготовление рабочих растворов.
8.3.1. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия. Переносят (400 +/- 0,9) г хлорида натрия в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12 месяцев.
8.3.2. Приготовление смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 50 см3 ацетонитрила и добавляют 50 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют для приготовления градуировочных стандартов и разведения проб. Раствор хранится при комнатной температуре не более семи дней.
8.3.3. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 20 см3 ацетона и добавляют 80 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.4 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил или ацетонитрил для ВЭЖХ и бидистиллированную воду, которые предварительно фильтруют через мембранные фильтры для очистки растворителей.
В плоскодонную колбу объемом 1000 см3 помещают 450 см3 бидистиллированной воды и 550 см3 ацетонитрила. Смесь тщательно перемешивают.
При использовании градиентного режима хроматографирования компоненты подвижной фазы помещают в разные емкости.
В случае отсутствия в составе хроматографической системы автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см3/мин в течение 5 минут, после чего его помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
8.5. Приготовление растворов аналитических стандартов флуоксастробина и его геометрического Z-изомера.
8.5.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией флуоксастробина 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г флуоксастробина в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
8.5.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией геометрического Z-изомера флуоксастробина 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г геометрического Z-изомера флуоксастробина в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
Стандартные растворы № 1 и № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочных характеристик и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 6 месяцев.
8.5.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией флуоксастробина и его геометрического Z-изомера по 10,0 мкг/см3. В мерную колбу объемом 10 см3 помещают по 1,0 см3 стандартного раствора № 1 и № 2, доводят объем до метки ацетонитрилом и перемешивают. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Раствор № 3 хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией флуоксастробина и его геометрического Z-изомера по 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3 раствора и помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 4 используют для установления градуировочных характеристик и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией флуоксастробина и его геометрического Z-изомера по 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 5 используют для установления градуировочных характеристик и хранят при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией флуоксастробина и его геометрического Z-изомера по 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 6 используют для установления градуировочных характеристик и хранят при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией флуоксастробина и его геометрического Z-изомера по 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 7 используют для установления градуировочных характеристик и хранят при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией флуоксастробина и его геометрического Z-изомера по 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 8 используют для установления градуировочных характеристик и хранят при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.5.9. Стандартные растворы флуоксастробина и его геометрического Z-изомера с концентрацией по 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; 0,25 и 0,2 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы ботвы и корнеплодов сахарной свеклы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 3 готовят растворы, содержащие по 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; 0,25 и 0,2 мкг/см3 флуоксастробина и его геометрического Z-изомера и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы ботвы и корнеплодов сахарной свеклы. Стандартные растворы для внесения хранят при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.6. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
8.6.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки, приготовленным по п.п. 8.5.4 - 8.5.8, с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 и 0,05 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.6.2. Контроль стабильности градуировочных характеристик. Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание флуоксастробина и его геометрического Z-изомера в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
\frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 10 (1)
где: X — концентрация флуоксастробина или его геометрического Z-изомера контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора флуоксастробина или его геометрического Z-изомера в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, приготовленной по п. 8.3.2, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов флуоксастробина и его геометрического Z-изомера, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.6.1.
8.7. Подготовка колонки с 3 или 5 г оксида алюминия для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения флуоксастробина и его геометрического Z-изомера на ней.
8.7.1. Подготовка колонки с 3 или 5 г оксида алюминия для очистки экстракта. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают (3 +/- 0,3) г или (5 +/- 0,3) г оксида алюминия и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила.
8.7.2. Проверка хроматографического поведения флуоксастробина и его геометрического Z-изомера на колонке с 3 или 5 г оксида алюминия. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора флуоксастробина и его геометрического Z-изомера в ацетонитриле с концентрацией каждого вещества по 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетонитрила, обмывают стенки колбы и вносят раствор на подготовленную колонку. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают двумя порциями по 10 см3 ацетонитрила и вносят растворы на колонку. Элюаты собирают в чистые отгонные колбы объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и 20 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие флуоксастробин и его геометрический Z-изомер, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Проверку хроматографического поведения флуоксастробина и его геометрического Z-изомера на колонке с оксидом алюминия следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8.8. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения флуоксастробина и его геометрического Z-изомера на них.
8.8.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, а затем 10 см3 гексана. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
8.8.2. Проверка хроматографического поведения флуоксастробина и его геометрического Z-изомера на концентрирующих патронах № 1. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора флуоксастробина и его геометрического Z-изомера в ацетонитриле с концентрацией каждого вещества по 1 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают двумя порциями по 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и вносят растворы на патрон. Элюаты собирают в чистые отгонные колбы объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и 20 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие флуоксастробин и его геометрический Z-изомер, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Проверку хроматографического поведения флуоксастробина и его геометрического Z-изомера на концентрирующих патронах № 1 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8.9 Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки.
Хроматографическую колонку устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 30 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой, приготовленной по п. 8.4 (смесь ацетонитрила с водой в соотношении 55:45, по объему), при скорости подачи растворителя 1,0 см3/мин.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.
<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.
<5> ГОСТ 33884-2016 «Свекла сахарная. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 06.12.2016 № 1957-ст; ГОСТ ISO 6497-2014 «Корма. Отбор проб», введенный приказом Росстандарта от 18.05.2016 № 353-ст.
9.2. Пробы ботвы и корнеплодов сахарной свеклы хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.
X. Выполнение измерений
10.1 Ботва сахарной свеклы
10.1.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Образец измельченной ботвы сахарной свеклы массой (5 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 40 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента» в делительную воронку объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 30 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в делительной воронке объемом 250 см3.
К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 50 см3 гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний ацетонитрильный слой возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру очистки еще один раз, используя 30 см3 гексана. Верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, а затем упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.1, растворяют в 5 см3 ацетонитрила, прибавляют 50 см3 воды и 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3.
Флуоксастробин и его геометрический Z-изомер экстрагируют двумя порциями гексана по 30 см3 каждая, первой порцией гексана обмывая исходную колбу, и встряхивают делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) объединяют в конической колбе объемом 250 см3.
Гексан из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 см3 и экстрагируют флуоксастробин и его геометрический Z-изомер тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 см3, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 см3 ацетонитрила, смыв объединяют с основным экстрактом и выпаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1. Сухой остаток, полученный по п. 10.1.2, растворяют в 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный по п. 8.8.1 патрон № 1. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3.
Исходную колбу обмывают 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и вносят раствор на патрон. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.4. Очистка экстракта на колонке с 5 г оксида алюминия. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.3, растворяют в 10 см3 ацетонитрила, обмывают стенки колбы и вносят раствор на подготовленную по п. 8.7.1 колонку с 5 г оксида алюминия. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3.
Исходную колбу обмывают 10 см3 ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.5. Сухой остаток растворяют в 2,5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), приготовленной по п. 8.3.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.
10.2 Корнеплоды сахарной свеклы.
10.2.1. Экстракция. Образец измельченных корнеплодов сахарной свеклы массой (20 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента» в коническую колбу объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в конической колбе объемом 250 см3 с 10 г сухого хлористого натрия, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 минут.
Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку объемом 250 см3 (нерастворившуюся соль оставляют в колбе), оставляют до полного разделения слоев и нижний (водный) слой отбрасывают. Верхний (ацетонитрильный) слой собирают через слой безводного сульфата натрия в отгонную колбу объемом 250 см3, осушитель обмывают 10 см3 ацетонитрила, смыв объединяют с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.2.2. Очистка экстракта на колонке с 3 г оксида алюминия. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.2.1, растворяют в 10 см3 ацетонитрила, обмывают стенки колбы и вносят раствор на подготовленную по п. 8.7.1 колонку с 3 г оксида алюминия. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3.
Исходную колбу обмывают 10 см3 ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.2.3. Сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), приготовленной по п. 8.3.2, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.
10.3 Условия хроматографирования.
10.3.1. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с диодно-матричным детектором при следующих режимных параметрах <6>:
<6> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
- колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- температура колонки плюс 30 °C.
- подвижная фаза: смесь ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 55:45 (по объему) при хроматографировании в изократическом режиме;
- скорость потока элюента 1,0 см3/мин;
- длина волны 254 нм;
- чувствительность не менее 10 миллиединиц абсорбции на шкалу;
- объем вводимой пробы 20 мм3.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор флуоксастробина и его геометрического Z-изомера с концентрацией 1 мкг/см3, соответственно разбавляют смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), приготовленной по п. 8.3.2. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания флуоксастробина и/или его геометрического Z-изомера в пробах.
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Концентрацию флуоксастробина и/или его геометрического Z-изомера в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по формуле (2) <7> без учета полноты извлечения вещества из проб:
<7> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
X = \frac{\text{С } \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (2)
где: A — концентрация флуоксастробина и (или) его геометрического Z-изомера в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для ботвы сахарной свеклы равен 2,5 см3, для корнеплодов сахарной свеклы равен 2 см3);
m — масса анализируемого образца, г;
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (3)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат анализа представляют в виде формулы (4):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (4)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 , (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание флуоксастробина или его геометрического Z-изомера в пробе менее 0,05 мг/кг; в корнеплодах сахарной свеклы менее 0,01 мг/кг» <8>.
<8> Примечание: 0,05 и 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации флуоксастробина или его геометрического Z-изомера в ботве сахарной свеклы и в корнеплодах сахарной свеклы соответственно.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <9>.
<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.
4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
| ББК 51.231 |
|---|