МУК 4.1.4134-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тефлутрина в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 11.04.2025)
Примечание
Документ введен в действие с 11.07.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 11 апреля 2025 года
Дата введения 11 июля 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕФЛУТРИНА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4134-25
1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, Е.Ю. Панов, Е.Н. Тестова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения остаточных количеств тефлутрина в семенах и масле сои в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Тефлутрин — 2,3,5,6-тетрафтор-4-метилбензил(Z)-(1RS, 3RS)-3-(2-хлор-3,3,3-трифторпроп-1-енил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат <1>. Брутто-формула C17H14ClF7O2. Молекулярная масса 418,7 г/моль.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Давление насыщенного пара при температуре плюс 20 °C 8,4 мПа. Температура плавления плюс 44,6 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода KowlogP = 6,4. Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C 0,016 мг/дм3. Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C (г/дм3): ацетон, гексан, толуол, дихлорметан, этилацетат — 500; метанол — 262.
Вещество стабильно при хранении на воздухе и не гидролизуется при значениях pH 5 — 7 и слабо гидролизуется при значениях pH 9 (9,7% при 30-дневной экспозиции).
В биологически активных почвах в аэробных условиях период полураспада (ДТ50) тефлутрина составляет 24 дня при температуре плюс 20 °C и 17 дней при температуре плюс 30 °C.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая оральная токсичность для крыс более 21,8 мг/кг, дермальная токсичность для крыс 177 мг/кг, ингаляционная токсичность для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) 37 мг/м3. Тефлутрин вызывает слабое раздражение глаз и кожи у кроликов.
2.4 Область применения.
Тефлутрин инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов. Пары тефлутрина в течение нескольких минут проникают через органы дыхания (дыхальца, трахеи) и покровные ткани насекомого, вследствие чего у насекомых возникает угнетение пищевой активности, нарушения работы нервной системы, парализация. Эффективно подавляет развитие комплекса почвенных вредителей (особенно из отрядов жесткокрылых, двукрылых и чешуекрылых) таких культур, как кукуруза, сахарная свекла, яровая пшеница, подсолнечник, на которых применяется путем предпосевного протравливания семян или почвенного внесения.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Диапазон определяемых концентраций тефлутрина, значение показателя точности измерений
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовых концентраций тефлутрина выполняют методом ГЖХ с использованием электронно-захватного детектора (далее — ЭЗД).
4.2. Определение тефлутрина проводится после его экстракции из образцов семян сои водным ацетоном, из масла сои — ацетонитрилом, с дальнейшей очисткой экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также с последующей очисткой экстрактов на колонке с флорисилом.
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы 0,005 нг.
4.4. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.5. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Хроматограф газовый с ЭЗД | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Тефлутрин, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Азот газообразный | Особо чистый, ГОСТ 9293-74 |
| Ацетон | Химически чистый, ГОСТ 2603-79 |
| Ацетонитрил | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый | Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Натрий сернокислый | Химически чистый, ГОСТ 4166-76 |
| Натрий хлористый | Химически чистый, ГОСТ 4233-77 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силиката магния (флорисил) | Размер частиц 60 — 100 меш |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость 10 — 300 колебаний/мин |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556-81 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД, ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы конические стеклянные | Тип П или Кн, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К, Гр или О, ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла | Внутренний диаметр 0,32 мм, длина 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 95% метилполисилоксана и 5% фенилполисилоксана. Толщина пленки 0,25 мкм |
| Колонки хроматографические стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные быстро фильтрующие «красная лента» | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Холодильная/морозильная камера | ГОСТ 26678-85 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с флорисилом, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
8.2 Подготовка и очистка органических растворителей.
8.2.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
8.2.2. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов.
Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
8.2.3. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
8.2.4. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
8.3 Приготовление рабочих растворов.
8.3.1. Приготовление смеси ацетона с водой в соотношении 9:1 (по объему). В коническую колбу объемом 500 см3 помещают 450 см3 ацетона и добавляют 50 см3 дистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют при экстракции тефлутрина из семян сои. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.2. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 20 см3 ацетона и добавляют 80 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.3. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия. Переносят (400 +/- 0,9) г хлорида натрия в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор используют при очистке экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и хранят при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 12 месяцев.
8.4. Приготовление растворов аналитического стандарта тефлутрина. Если содержание основного вещества в аналитическом стандарте тефлутрина менее 95,0%, то навеску аналитического стандарта корректируют с учетом процентного содержания тефлутрина в аналитическом стандарте по формуле (1):
\text{Н}_{\text{факт}} = \frac{\text{Н } \times 100\%}{P} (1)
где: Нфакт — фактическая навеска аналитического стандарта тефлутрина, г;
Н — навеска аналитического стандарта тефлутрина без учета % содержания тефлутрина в аналитическом стандарте, г;
P — содержание тефлутрина в аналитическом стандарте, %.
8.4.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией тефлутрина 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г тефлутрина в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в гексане, используя ультразвуковую ванну, и доводят объем до метки гексаном. Полученный стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
8.4.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией тефлутрина 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.4.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией тефлутрина 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 2,5 см3, помещают в мерную колбу объемом 25 см3 и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
8.4.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией тефлутрина 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2,5 см3, помещают мерную колбу объемом 25 см3 и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 4 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
8.4.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией тефлутрина 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 5 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
8.4.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией тефлутрина 0,02 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 6 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
8.4.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией тефлутрина 0,01 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
8.4.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией тефлутрина 0,005 мкг/см3. Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 8 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
8.4.9. Стандартные растворы тефлутрина с концентрацией 1,0; 0,4; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц. Методом последовательного разведения гексаном стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,4; 0,2 и 0,1 мкг/см3 тефлутрина и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы семян и масла сои. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
8.5. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
8.5.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации тефлутрина в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки, приготовленным по п.п. 8.4.5 - 8.4.8, с концентрацией 0,05; 0,02; 0,01 и 0,005 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.5.2. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки.
Содержание тефлутрина должно охватывать весь диапазон концентраций 0,005 — 0,05 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (2):
\frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 10 , (2)
где: X — концентрация тефлутрина контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора тефлутрина в гексане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тефлутрина, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.5.1.
8.6. Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения тефлутрина на ней.
8.6.1. Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают (5 +/- 0,3) г флорисила и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флорисила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.
В день использования колонку последовательно промывают 10 см3 ацетона, далее колонку сушат, затем промывают 10 см3 гексана, элюаты отбрасывают.
8.6.2. Проверка хроматографического поведения тефлутрина на колонке с 5 г флорисила. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора тефлутрина в гексане с концентрацией 0,2 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток в колбе растворяют в 5 см3 гексана, тщательно обмывая стенки колбы, перемешивают и наносят на подготовленный колонку. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Колонку последовательно промывают четырьмя порциями по 5 см3 каждая смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 4 см3 гексана и 1 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие тефлутрин, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
Проверку хроматографического поведения тефлутрина на колонке с флорисилом следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.
<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.
<5> ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 18.12.1986 № 3979; ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный приказом Росстандарта от 28.11.2013 № 1254-ст; ГОСТ 17109-88 «Соя. Требования при заготовках и поставках», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 30.09.1988 № 3402; ГОСТ 31760-2012 «Масло соевое. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1630-ст.
9.2. Пробы семян сои подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
9.3. Пробы соевого масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 7 суток.
X. Выполнение измерений
10.1 Семена сои.
10.1.1. Экстракция. Навеску измельченных семян сои массой (10 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 смеси ацетона с водой в соотношении 9:1 (по объему) и помещают на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. По истечении времени экстракт фильтруют в мерный цилиндр объемом 100 см3 через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента». Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 30 см3 смеси ацетона с водой в соотношении 9:1 (по объему). Экстракты фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 100 см3. Объем экстракта в цилиндре доводят до метки 100 см3 смесью ацетона с водой в соотношении 9:1 (по объему). Экстракт переносят в плоскодонную колбу объемом 100 см3, перемешивают и отбирают аликвоту экстракта объемом 20 см3 (1/5 часть, по объему). Аликвоту помещают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. К водному остатку, полученному по п. 10.1.1, добавляют 20 см3 дистиллированной воды, обмывают стенки колбы, добавляют 10 см3 насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают содержимое в колбе и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Тефлутрин экстрагируют тремя порциями гексана по 15 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) собирают в отгонную колбу объемом 100 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают до маслянистого остатка при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.3. Очистка экстракта на колонке с флорисилом. Маслянистый остаток в колбе, полученный по п. 10.1.2, растворяют в 5 см3 гексана, тщательно обмывают стенки колбы, перемешивают и наносят на подготовленную по п. 8.6.1 колонку с флоризилом. Элюат отбрасывают.
Тефлутрин элюируют с колонки 15 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.4. Сухой остаток после очистки растворяют в 4 см3 гексана, помещают в виалу объемом 2 см3 и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.
10.2 Масло сои.
10.2.1. Экстракция. Навеску соевого масла массой (10 +/- 0,3) г помещают в химический стакан объемом 100 см3, прибавляют 25 см3 гексана, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Химический стакан обмывают еще одной порцией гексана объемом 25 см3 и объединяют с первым смывом в делительной воронке объемом 250 см3.
Тефлутрин экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см3 каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) собирают в мерный цилиндр объемом 100 см3. Верхний слой (гексан) отбрасывают. Объем экстракта в мерном цилиндре доводят ацетонитрилом до метки 100 см3, переносят в плоскодонную колбу объемом 100 см3, перемешивают. Затем отбирают аликвоту объемом 20 см3 (1/5 часть по объему), помещают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.1.3. Очистка экстракта на колонке с флорисилом.
Сухой остаток после очистки растворяют в 4 см3 гексана, помещают в виалу объемом 2 см3 и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.
10.3 Условия хроматографирования.
10.3.1 Измерения выполняют на газовом хроматографе с ЭЗД при следующих режимных параметрах <6>:
<6> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
- колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 95% диметилполисилоксана и 5% фенилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм;
- температура детектора плюс 300 °C, поток газа поддувки (азот) 25 см3/мин;
- температура испарителя плюс 280 °C, газ-носитель — гелий, режим с делением потока (сплит), деление потока 15:1, общий поток 28,6 см3/мин, поток обдува септы 3,0 см3/мин;
- температура колонки: градиентный нагрев колонки начиная с плюс 165 °C (выдержка 1 минута) по 5 град/мин до плюс 190 °C (выдержка 1,5 минуты), затем по 30 град/мин до плюс 300 °C (выдержка 0 минут). Поток газа-носителя (гелий) 1,6 см3/мин, скорость 33,8 см/сек;
- объем вводимой пробы 1 мм3.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор тефлутрина с концентрацией 0,05 мкг/см3, соответственно разбавляют гексаном.
В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания тефлутрина в пробах.
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Концентрацию тефлутрина в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по формуле (3) <7> без учета полноты извлечения вещества из проб:
<7> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
X_{1} = \frac{A \cdot V \cdot \text{К } \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m \cdot 1000} , (3)
где: A — концентрация тефлутрина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для семян и масла сои равен 4 см3);
m — масса анализируемого образца, г;
К — коэффициент, учитывающий объем экстракта, взятого для анализа (для семян и масла сои К = 5);
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (4):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (4)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат анализа представляют в виде формулы 5:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (5)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 , (6)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание тефлутрина в пробе менее 0,01 мг/кг» <8>.
<8> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации тефлутрина в семенах и масле сои.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <9>.
<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
3. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.
4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
15. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
16. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования».
17. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
18. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
19. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
20. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
21. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
22. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
23. ГОСТ 5556-81 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
24. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
25. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия»
26. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
27. ГОСТ 4166-76 «Натрий сернокислый. Технические условия».
28. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».
29. ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
30. ГОСТ 32190-2013 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
31. ГОСТ 17109-88 «Соя. Требования при заготовках и поставках».
32. ГОСТ 31760-2012 «Масло соевое. Технические условия».
33. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
| ББК 51.231 |
|---|