---
title: "\"МУК 4.1.4133-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спинозинов А и Д в листовых овощных культурах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля\""
number: "МУК 4.1.4133-25"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-4133-25"
---

## "МУК 4.1.4133-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спинозинов А и Д в листовых овощных культурах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля"

# "МУК 4.1.4133-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спинозинов А и Д в листовых овощных культурах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля"

(утв. Роспотребнадзором 11.04.2025)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 11.07.2025.


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
11 апреля 2025 года

<a id="p100002"></a>Дата введения
11 июля 2025 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИНОЗИНОВ А И Д В ЛИСТОВЫХ**
**ОВОЩНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ**
**ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ**
**МУК 4.1.4133-25**

1. <a id="p100006"></a>Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


### <a id="p100009"></a>I. Общие положения и область применения


<a id="p100010"></a>1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее - МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее - ВЭЖХ-МС) для определения остаточных количеств спинозинов А и Д в листовых овощных культурах в диапазонах: 0,005 - 0,05 мг/кг (каждого), 0,01 - 0,1 мг/кг (по сумме спинозинов А и Д) без учета разбавления и 0,005 - 5,0 мг/кг (каждого), 0,01 - 10,0 мг/кг (по сумме спинозинов А и Д) с учетом разбавления в 100 раз.

#### <a id="p100011"></a>1.2 МУК носят рекомендательный характер.



### <a id="p100012"></a>II. Физико-химические свойства


<a id="p100013"></a>2.1. Спиносад - смесь (2R,3aR,5aR,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bR)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-O-метил- $\alpha$ -L-манно-пиранозилокси)-13-(4-диметиламино-2,3,4,6-тетра-дезокси- $\beta$ -Д-эритропиранозилокси)-9-этил-2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b-гексадекогидро-14-метил-1H-8-оксациклододека-[b]as-индацен-7,15-диона и (2S,3aR,5aS,5bS,9S,13S,14R, 16aS,16bS)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-O-метил- $\alpha$ -L-манно-пиранозилокси)-13-(4-диметил-амино-2,3,4,6-тетрадезокси- $\beta$ -Д-эритро-пиранозил-окси)-9-этил-2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b-гексадеко-гидро-4,14-диметил-1H-8-оксациклододека[b]as-индацен-7,15-диона в соотношении от 50 - 95% до 50 - 5% <1>. Брутто-формула: спинозин А - C41H65NO10; спинозин Д - C42H67NO10. Молекулярная масса: спинозин А - 732,0; спинозин Д - 746,0.

<a id="p100014"></a>

---

<a id="p100015"></a><1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).


#### <a id="p100016"></a>2.2 Физические и химические свойства.

<a id="p100017"></a>Светло-серый или белый порошок. Давление насыщенного пара при температуре плюс 25 °C: 3,0 x 10-5 мПа - спинозин А; 2,0 x 10-5 мПа - спинозин Д. Температура плавления: спинозин А - плюс 84,0 - 99,5 °C; спинозин Д - плюс 161,5 - 170,0 °C.
<a id="p100018"></a>Коэффициент распределения в системе октанол/вода:
- <a id="p100019"></a>спинозин А - Kowlog P 2,8 (pH 5), 4,0 (pH 7), 5,2 (pH 9);
- <a id="p100020"></a>спинозин Д - Kowlog P 3,2 (pH 5), 4,5 (pH 7), 5,2 (pH 9).
<a id="p100021"></a>Растворимость в воде:
- <a id="p100022"></a>спинозин А - 89 мг/дм3 (дистиллированная вода), 235 мг/дм3 при температуре плюс 20 °C и pH 7;
- <a id="p100023"></a>спинозин Д - 0,5 мг/дм3 (дистиллированная вода), 0,33 мг/дм3 при температуре плюс 20 °C и pH 7.
<a id="p100024"></a>Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C (г/дм3):
- <a id="p100025"></a>спинозин А: ацетон - 16,8; ацетонитрил - 13,4; хлористый метилен - 52,5; толуол - 45,7; ацетонитрил - 19,0; н-октанол - 0,926; гексан - 0,448;
- <a id="p100026"></a>спинозин Д: хлористый метилен - 44,8; толуол - 15,2; ацетон - 1,01; гексан - 0,743; ацетонитрил - 0,255; н-октанол - 0,127.
<a id="p100027"></a>Оба вещества устойчивы к гидролизу при pH 5 и pH 7; период полураспада (ДТ50) при pH 9 составляет 200 дней для спинозина А и 259 дней для спинозина Д. Фотодеградация в воде: период полураспада (ДТ50) при pH 7 составляет 0,93 дня для спинозина А и 0,82 дня для спинозина Д.

#### <a id="p100028"></a>2.3 Краткая токсикологическая характеристика.

<a id="p100029"></a>Острая пероральная токсичность (LD50) для самок крыс - 3783 мг/кг, для самцов крыс - более 5000 мг/кг; дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) - более 5180 мг/м3 воздуха. Не вызывает раздражения кожи, отмечается лишь слабое покраснение глаз у кроликов. Не обладает мутагенными и нейротоксичными свойствами или репродуктивной токсичностью.

#### <a id="p100030"></a>2.4 Область применения.

<a id="p100031"></a>Спиносад - инсектицид контактного и кишечного действия из группы спинозинов, обладающий парализующим эффектом. Эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, бахромчатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых, плодовых, овощных и декоративных культур при норме расхода 5 - 40 г д.в./га. Препараты на основе спиносада используются также для борьбы с синантропными насекомыми и в ветеринарии.


### <a id="p100032"></a>III. Погрешность измерений


<a id="p100033"></a>3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в [табл. 3.1](#p100037) для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100034"></a>

---

<a id="p100035"></a><2> [ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 184-ФЗ.

<a id="p100036"></a>Таблица 3.1

<a id="p100037"></a>Диапазон определяемых концентраций спинозинов А и Д,
значение показателя точности измерений


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="13%"><col width="12%"><col width="13%"><col width="14%"><col width="16%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100038"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100039"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100040"></a>Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), $\pm \delta$ , %</td><td><a id="p100041"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100042"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100043"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %</td><td><a id="p100044"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, %</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100045"></a>Спинозин А</td></tr>
<tr><td><a id="p100046"></a>Листовые овощные культуры</td><td><a id="p100047"></a>0,005 - 5,0</td><td><a id="p100048"></a>50</td><td><a id="p100049"></a>10,5</td><td><a id="p100050"></a>21</td><td><a id="p100051"></a>29</td><td><a id="p100052"></a>10,5</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100053"></a>Спинозин Д</td></tr>
<tr><td><a id="p100054"></a>Листовые овощные культуры</td><td><a id="p100055"></a>0,005 - 5,0</td><td><a id="p100056"></a>50</td><td><a id="p100057"></a>3,9</td><td><a id="p100058"></a>5,5</td><td><a id="p100059"></a>11</td><td><a id="p100060"></a>15</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100061"></a>Примечание: диапазон определяемых концентраций приведен с учетом разбавления образца в 100 раз</td></tr>
</table>



### <a id="p100062"></a>IV. Метод измерений


<a id="p100063"></a>4.1. Измерения массовых концентраций спинозинов А и Д выполняют методом ВЭЖХ-МС.
<a id="p100064"></a>4.2. Определение спинозинов А и Д в листовых овощных культурах проводится после их экстракции из образцов ацетонитрилом и очистки аликвоты экстракта на концентрирующих патронах N 1 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами и на концентрирующих патронах N 2 с гидрофильным слабокислотным сорбентом (силикагель).

#### <a id="p100065"></a>4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,0025 нг.

<a id="p100066"></a>4.4. Идентификация спинозинов А и Д проводится по времени удерживания, наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100067"></a>4.5. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометрического детектора.


### <a id="p100068"></a>V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы


<a id="p100069"></a>5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в [табл. 5.1](#p100071) - [5.3](#p100135).

<a id="p100070"></a>Таблица 5.1

<a id="p100071"></a>Средства измерений


<table>
<colgroup><col width="40%"><col width="60%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100072"></a>Наименование средств измерения</td><td><a id="p100073"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100074"></a>1</td><td><a id="p100075"></a>2</td></tr>
<tr><td><a id="p100076"></a>Хроматограф жидкостной с масс-спектрометрическим детектором</td><td><a id="p100077"></a>Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений</td></tr>
<tr><td><a id="p100078"></a>Весы аналитические</td><td><a id="p100079"></a>Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228-2008</td></tr>
<tr><td><a id="p100080"></a>Весы лабораторные</td><td><a id="p100081"></a>Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228-2008</td></tr>
<tr><td><a id="p100082"></a>Колбы мерные лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100083"></a>Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, <a href="https://bukva.ai/docs/gost-1770-74">ГОСТ 1770-74</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100084"></a>Меры массы</td><td><a id="p100085"></a>ГОСТ OIML R 111-1-2009</td></tr>
<tr><td><a id="p100086"></a>Пипетки градуированные лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100087"></a>Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10 по <a href="https://bukva.ai/docs/gost-29227-91">ГОСТ 29227-91</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100088"></a>Цилиндры мерные лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100089"></a>Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, <a href="https://bukva.ai/docs/gost-1770-74">ГОСТ 1770-74</a></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100090"></a>Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками</td></tr>
</table>


<a id="p100091"></a>Таблица 5.2

<a id="p100092"></a>Реактивы


<table>
<colgroup><col width="40%"><col width="60%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100093"></a>Наименование реактивов</td><td><a id="p100094"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100095"></a>1</td><td><a id="p100096"></a>2</td></tr>
<tr><td><a id="p100097"></a>Спинозин А аналитический стандарт</td><td><a id="p100098"></a>Содержание основного вещества не менее 95,0%</td></tr>
<tr><td><a id="p100099"></a>Спинозин Д аналитический стандарт</td><td><a id="p100100"></a>Содержание основного вещества не менее 95,0%</td></tr>
<tr><td><a id="p100101"></a>Азот газообразный</td><td><a id="p100102"></a>Особо чистый, ГОСТ 9293-74</td></tr>
<tr><td><a id="p100103"></a>Ацетон</td><td><a id="p100104"></a>Химически чистый, ГОСТ 2603-79</td></tr>
<tr><td><a id="p100105"></a>Ацетонитрил</td><td><a id="p100106"></a>Содержание основного вещества не менее 99,8%</td></tr>
<tr><td><a id="p100107"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ</td><td><a id="p100108"></a>Содержание основного вещества не менее 99,9%</td></tr>
<tr><td><a id="p100109"></a>Вода дистиллированная</td><td><a id="p100110"></a><a href="https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-r-58144-2018">ГОСТ Р 58144-2018</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100111"></a>Вода для лабораторного анализа</td><td><a id="p100112"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005">ГОСТ Р 52501-2005</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100113"></a>н-Гексан</td><td><a id="p100114"></a>Содержание основного вещества не менее 99%</td></tr>
<tr><td><a id="p100115"></a>Гелий очищенный</td><td><a id="p100116"></a>Содержание основного вещества не менее 99,9%</td></tr>
<tr><td><a id="p100117"></a>Калий марганцовокислый</td><td><a id="p100118"></a>Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100119"></a>Кальций хлористый гранулированный безводный</td><td><a id="p100120"></a>Содержание основного вещества не менее 99%</td></tr>
<tr><td><a id="p100121"></a>Кислота муравьиная для анализа</td><td><a id="p100122"></a>Содержание основного вещества не менее 98%</td></tr>
<tr><td><a id="p100123"></a>Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон N 1)</td><td><a id="p100124"></a>Заполнены слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами с размером частиц 100 мкм (объем - 0,6 см3, масса сорбента - 0,5 г)</td></tr>
<tr><td><a id="p100125"></a>Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон N 2)</td><td><a id="p100126"></a>Заполнены гидрофильным слабокислотным сорбентом (силикагель) с размером частиц 100 мкм (объем - 0,6 см3, масса сорбента - 0,5 г)</td></tr>
<tr><td><a id="p100127"></a>Метилен хлористый</td><td><a id="p100128"></a>Содержание основного вещества не менее 99%</td></tr>
<tr><td><a id="p100129"></a>Натрий углекислый кислый</td><td><a id="p100130"></a>Химически чистый, <a href="https://bukva.ai/docs/gost-4201-79">ГОСТ 4201-79</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100131"></a>Спирт метиловый (метанол)</td><td><a id="p100132"></a>Химически чистый, <a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77">ГОСТ 6995-77</a></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100133"></a>Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей</td></tr>
</table>


<a id="p100134"></a>Таблица 5.3

<a id="p100135"></a>Вспомогательное оборудование, устройства и материалы


<table>
<colgroup><col width="40%"><col width="60%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100136"></a>Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов</td><td><a id="p100137"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100138"></a>1</td><td><a id="p100139"></a>2</td></tr>
<tr><td><a id="p100140"></a>Алонж прямой стеклянный</td><td><a id="p100141"></a>Тип АО, ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100142"></a>Аппарат для встряхивания проб</td><td><a id="p100143"></a>Направление колебаний возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний/мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100144"></a>Ванна ультразвуковая</td><td><a id="p100145"></a>Рабочая частота <sub>50</sub> Гц</td></tr>
<tr><td><a id="p100146"></a>Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб</td><td><a id="p100147"></a>Объем <sub>2</sub> см<sub>3</sub></td></tr>
<tr><td><a id="p100148"></a>Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой</td><td><a id="p100149"></a>Объем не менее 20 см3</td></tr>
<tr><td><a id="p100150"></a>Воронки лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100151"></a>Тип В, ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100152"></a>Груша резиновая</td><td><a id="p100153"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100154"></a>Колбы конические стеклянные</td><td><a id="p100155"></a>Тип П или Кн, ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100156"></a>Колбы круглодонные стеклянные</td><td><a id="p100157"></a>Тип К, Гр или О, ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100158"></a>Колонка хроматографическая стальная</td><td><a id="p100159"></a>Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 100 мм x 4,6 мм, размер частиц 3,5 мкм</td></tr>
<tr><td><a id="p100160"></a>Насос мембранный вакуумный</td><td><a id="p100161"></a>Обеспечивающий вакуум до 10 мбар</td></tr>
<tr><td><a id="p100162"></a>Предколонка хроматографическая стальная</td><td><a id="p100163"></a>Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 12,5 мм x 2,1 мм, размер частиц 5 мкм</td></tr>
<tr><td><a id="p100164"></a>Ротационный вакуумный испаритель</td><td><a id="p100165"></a>Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 - 100 °C</td></tr>
<tr><td><a id="p100166"></a>Стаканы лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100167"></a>Тип В, номинальная вместимость 100 - 800 см3, ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100168"></a>Установка для перегонки растворителей</td><td><a id="p100169"></a>С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3</td></tr>
<tr><td><a id="p100170"></a>Фильтры мембранные для очистки растворителей</td><td><a id="p100171"></a>Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм</td></tr>
<tr><td><a id="p100172"></a>Фильтры обеззоленные нейтральные быстро фильтрующие "красная лента"</td><td><a id="p100173"></a>Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г</td></tr>
<tr><td><a id="p100174"></a>Холодильная/морозильная камера</td><td><a id="p100175"></a>ГОСТ 26678-85</td></tr>
<tr><td><a id="p100176"></a>Шприц инъекционный многократного применения</td><td><a id="p100177"></a>Объем 10 см3, <a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-22967-90">ГОСТ 22967-90</a></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100178"></a>Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками</td></tr>
</table>



### <a id="p100179"></a>VI. Требования безопасности


<a id="p100180"></a>6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс жидкостного хроматографа с масс-спектрометрическим детектором.
<a id="p100181"></a>6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
<a id="p100182"></a>6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

<a id="p100183"></a>

---

<a id="p100184"></a><3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

<a id="p100185"></a>6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.


### <a id="p100186"></a>VII. Условия измерений



#### <a id="p100187"></a>7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- <a id="p100188"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100189"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.


### <a id="p100190"></a>VIII. Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100191"></a>8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах N 1 и N 2, установление градуировочных характеристик.

#### <a id="p100192"></a>8.2 Подготовка и очистка органических растворителей.

<a id="p100193"></a>8.2.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 - 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 - 82,0 °C, отбрасывают.
<a id="p100194"></a>8.2.2. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 - 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 - 56,5 °C, отбрасывают.
<a id="p100195"></a>8.2.3. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 - 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 - 69,0 °C, отбрасывают.
<a id="p100196"></a>8.2.4. Хлористый метилен. Хлористый метилен промывают равным объемом 5% раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 39,5 - 40,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 39,5 - 40,5 °C, отбрасывают.
<a id="p100197"></a>8.2.5. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 - 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 - 100,0 °C, отбрасывают.

#### <a id="p100198"></a>8.3 Приготовление рабочих растворов.

<a id="p100199"></a>8.3.1. Приготовление компонента A подвижной фазы. В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 бидистиллированной воды, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
<a id="p100200"></a>8.3.2. Приготовление компонента B подвижной фазы. В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом. Раствор используется как компонент подвижной фазы и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
<a id="p100201"></a>8.3.3. Приготовление смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу объемом 250 см3 помещают 100 см3 ацетонитрила, 100 см3 бидистиллированной воды и перемешивают. Раствор используется для приготовления градуировочных стандартов и растворения проб и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
<a id="p100202"></a>8.3.4. Приготовление 5%-го раствора натрия углекислого кислого. (50 +/- 0,3) г натрия углекислого кислого переносят в мерную колбу объемом 1000 см3, добавляют 200 - 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используется для очистки хлористого метилена (при необходимости) и хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 12 месяцев.
<a id="p100203"></a>8.3.5. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 10 см3 ацетона и добавляют 90 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах N 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
<a id="p100204"></a>8.3.6. Приготовление смеси ацетонитрила с метанолом в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 50 см3 ацетонитрила и добавляют 50 см3 метанола. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах N 2. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
<a id="p100205"></a>8.4. Приготовление растворов аналитических стандартов спинозина А и спинозина Д.
<a id="p100206"></a>Стандартные растворы спинозина А и спинозина Д в ацетонитриле и в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
<a id="p100207"></a>8.4.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией спинозина А 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г спинозина А в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
<a id="p100208"></a>8.4.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией спинозина Д 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г спинозина Д в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
<a id="p100209"></a>8.4.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 10,0 мкг/см3. В мерную колбу объемом 100 см3 помещают по 10,0 см3 стандартных растворов N 1 и N 2, доводят объем до метки ацетонитрилом и перемешивают.
<a id="p100210"></a>8.4.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 10 см3 и помещают в мерную колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки ацетонитрилом и перемешивают.
<a id="p100211"></a>Растворы N 1, 2, 3 и 4 используют для хроматографического исследования, для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок, а также для приготовления стандартных растворов для установления градуировочных характеристик.
<a id="p100212"></a>8.4.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 100,0 нг/см3. В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 10,0 см3 стандартного раствора N 4 и доводят объем до метки ацетонитрилом и перемешивают. Полученный стандартный раствор N 5 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и для проверки хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах N 1 и N 2.
<a id="p100213"></a>8.4.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 20,0 нг/см3. Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 2,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
<a id="p100214"></a>8.4.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 10,0 нг/см3. Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 2,5 см3, помешают в мерную колбу объемом 25 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
<a id="p100215"></a>8.4.8. Стандартный раствор N 8 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 5,0 нг/см3. Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 5,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
<a id="p100216"></a>8.4.9. Стандартный раствор N 9 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 2,0 нг/см3. Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 2,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
<a id="p100217"></a>8.4.10. Стандартный раствор N 10 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 1,0 нг/см3. Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 1,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
<a id="p100218"></a>8.4.11. Стандартный раствор N 11 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 0,5 нг/см3. Из стандартного раствора N 10 отбирают пипеткой 5,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
<a id="p100219"></a>Стандартные растворы N 6, 7, 8, 9, 10 и 11 используются для установления градуировочной характеристики.
<a id="p100220"></a>8.5. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
<a id="p100221"></a>8.5.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочные характеристики, выражающие зависимость откликов фрагментарных ионов, используемых для количественного определения, от концентрации спинозина А и спинозина Д в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 и 20,0 нг/см3 каждого компонента.
<a id="p100222"></a>В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 10.2](#p100276). Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
<a id="p100223"></a>Производят расчет параметров градуировочных характеристик (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации спинозина А и спинозина Д в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0,995, и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20% для каждого уровня градуировочной характеристики.
<a id="p100224"></a>Если линейность градуировочных характеристик была продемонстрирована, то при анализе серий образцов допускается устанавливать градуировочные характеристики методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5 и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений. Данные для построения градуировочных зависимостей набираются перед началом серии анализов и после ее окончания (рамочные калибровки; не менее 10 измерений не менее чем по пяти уровням концентраций). По полученным данным производят расчет параметров градуировочных характеристик. Рекомендуется в серию анализов образцов включать не более 12 инъекций.
<a id="p100225"></a>8.5.2. Контроль стабильности градуировочной характеристики <4>. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

<a id="p100226"></a>

---

<a id="p100227"></a><4> Примечание: в случае, если градуировочная характеристика устанавливается при анализе каждой серии образцов по [п. 8.5.1](#p100221), контроль стабильности градуировочной характеристики не проводится.

<a id="p100228"></a>При контроле стабильности градуировочных характеристик проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание спинозина А и спинозина Д в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,5 до 20,0 нг/см3.
<a id="p100229"></a>Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется [соотношение (1)](#p100230):

<a id="p100230"></a> $\frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 20$ , (1)

<a id="p100231"></a>где: X - концентрация спинозина А или спинозина Д контрольного измерения, мкг/см3;
<a id="p100232"></a>C - известная концентрация градуировочного раствора спинозина А или спинозина Д в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), приготовленной по [п. 8.3.3](#p100201), взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, нг/см3;
<a id="p100233"></a>20 - допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
<a id="p100234"></a>Если величина расхождения превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов спинозина А и спинозина Д, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с [п. 8.5.1](#p100221).
<a id="p100235"></a>8.6. Подготовка концентрирующих патронов N 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на них.
<a id="p100236"></a>8.6.1. Подготовка концентрирующих патронов N 1 для очистки экстрактов. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
<a id="p100237"></a>Патрон N 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100238"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1 (по объему). Элюат отбрасывают.
<a id="p100239"></a>8.6.2. Проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах N 1.
<a id="p100240"></a>В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора спинозина А и спинозина Д с концентрацией 100 нг/см3 каждого компонента в ацетонитриле и упаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100241"></a>К сухому остатку в колбе прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100242"></a>В исходную колбу прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100243"></a>Сухой остаток каждой фракции растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и анализируют на содержание спинозина А и спинозина Д в условиях хроматографирования по [п. 10.2](#p100276).
<a id="p100244"></a>Определяют фракции, содержащие спинозин А и спинозин Д, полноту смывания с концентрирующего патрона и необходимый объем элюентов.
<a id="p100245"></a>Проверку хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах N 1 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
<a id="p100246"></a>8.7. Подготовка концентрирующих патронов N 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на них.
<a id="p100247"></a>8.7.1. Подготовка концентрирующих патронов N 2 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
<a id="p100248"></a>Патрон N 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100249"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 гексана. Элюат отбрасывают.
<a id="p100250"></a>8.7.2. Проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах N 2. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора спинозина А и спинозина Д с концентрацией 100 нг/см3 каждого компонента в ацетонитриле и упаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100251"></a>К сухому остатку в колбе прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100252"></a>В исходную колбу прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в отдельную отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100253"></a>Патрон последовательно промывают 10 см3 хлористого метилена, 2 см3 ацетонитрила и 2 порциями по 10 см3 смеси ацетонитрила с метанолом в соотношении 1:1. Элюаты после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные чистые отгонные колбы объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100254"></a>Сухой остаток каждой фракции растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и анализируют на содержание спинозина А и спинозина Д в условиях хроматографирования по [п. 10.2](#p100276).
<a id="p100255"></a>Определяют фракции, содержащие спинозин А и спинозин Д, полноту смывания с концентрирующего патрона и необходимый объем элюентов.
<a id="p100256"></a>Проверку хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах N 2 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
<a id="p100257"></a>8.8. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.
<a id="p100258"></a>Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 40 °C в течение 3 - 4 часов, промывая подвижной фазой (смесь компонентов A и B, приготовленных по [п. 8.3](#p100198), в соотношении 95:5) при скорости подачи растворителя 0,3 см3/мин.


### <a id="p100259"></a>IX. Отбор и хранение проб


<a id="p100260"></a>9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <5>, а также документами по стандартизации <6>.

<a id="p100261"></a>

---

<a id="p100262"></a><5> Унифицированные [правила](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 N 12.
<a id="p100263"></a><6> [ГОСТ 34215-2017](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-34215-2017) "Овощи листовые свежие. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 08.12.2017 N 1896-ст; [ГОСТ 34301-2017](https://bukva.ai/docs/standart-gost-34301-2017) "Щавель и шпинат свежие. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 30.11.2017 N 1855-ст; [ГОСТ 33985-2016](https://bukva.ai/docs/standart-gost-33985-2016) "Салат-латук, эндивий кудрявый, эндивий эскариол свежие. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 31.10.2016 N 1528-ст.

<a id="p100264"></a>9.2. Пробы листовых овощей хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток и/или в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.


### <a id="p100265"></a>X. Выполнение измерений



#### <a id="p100266"></a>10.1 Листовые овощные культуры.

<a id="p100267"></a>10.1.1. Экстракция. Измельченный образец массой (10 +/- 0,3) г помещают в плоскодонную стеклянную колбу объемом 100 см3, прибавляют 25 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, затем на аппарат для встряхивания проб на 5 минут. Экстракт фильтруют в мерный цилиндр объемом 50 см3 через бумажный фильтр низкой плотности "красная лента". Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 25 см3 ацетонитрила. Экстракт фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 50 см3. Объем экстракта в мерном цилиндре доводят ацетонитрилом до метки 50 см3.
<a id="p100268"></a>Экстракт переносят в плоскодонную колбу объемом 100 см3, перемешивают и отбирают аликвоту экстракта объемом 5 см3 (1/10 часть по объему). Аликвоту помещают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100269"></a>10.1.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах N 1. Сухой остаток, полученный по [п. 10.1.1](#p100267), растворяют в 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на концентрирующий патрон N 1, подготовленный по [п. 8.6.1](#p100236). Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3.
<a id="p100270"></a>Исходную колбу обмывают 1 см3 ацетона, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на патрон. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и подвергают дальнейшей очистке на концентрирующих патронах N 2.

##### <a id="p100271"></a>10.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах N 2.

<a id="p100272"></a>Элюат, полученный по [п. 10.1.2](#p100269), наносят на подготовленный по [п. 8.7.1](#p100247) концентрирующий патрон N 2. Элюат отбрасывают.
<a id="p100273"></a>Патрон последовательно промывают 10 см3 хлористого метилена и 2 см3 ацетонитрила, элюаты отбрасывают.
<a id="p100274"></a>Спинозины элюируют с патрона 10 см3 смеси ацетонитрила с метанолом в соотношении 1:1, элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
<a id="p100275"></a>10.1.4. Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), приготовленной по [п. 8.3.3](#p100201). Затем пробу переносят в виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание спинозина А и спинозина Д в условиях хроматографирования по [п. 10.2](#p100276).

#### <a id="p100276"></a>10.2 Хроматографические и масс-спектрометрические условия.

<a id="p100277"></a>10.2.1. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройной квадруполь при следующих режимных параметрах <7>.

<a id="p100278"></a>

---

<a id="p100279"></a><7> Примечание: параметры хроматографирования и масс-спектрометрические условия могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.


##### <a id="p100280"></a>10.2.2 Хроматографические условия:

- <a id="p100281"></a>колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- <a id="p100282"></a>предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- <a id="p100283"></a>температура колонки плюс 40 °C;
- <a id="p100284"></a>объем вводимой пробы 5 мм3;
- <a id="p100285"></a>скорость потока элюента 0,3 см3/мин;
- <a id="p100286"></a>подвижная фаза: компонент A - 0,1%-й водный раствор муравьиной кислоты (приготовлен по [п. 8.3.1](#p100199)), компонент B - 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле (приготовлен по [п. 8.3.2](#p100200));
- <a id="p100287"></a>режим элюирования градиентный, приведен в [табл. 10.1](#p100289).

<a id="p100288"></a>Таблица 10.1

<a id="p100289"></a>Градиентный режим элюирования при определении


| <a id="p100290"></a>Время (минуты) | <a id="p100291"></a>Компонент A, % | <a id="p100292"></a>Компонент B, % |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100293"></a>0 | <a id="p100294"></a>95 | <a id="p100295"></a>5 |
| <a id="p100296"></a>7 | <a id="p100297"></a>30 | <a id="p100298"></a>70 |
| <a id="p100299"></a>11 | <a id="p100300"></a>20 | <a id="p100301"></a>80 |
| <a id="p100302"></a>13 | <a id="p100303"></a>0 | <a id="p100304"></a>100 |
| <a id="p100305"></a>16 | <a id="p100306"></a>0 | <a id="p100307"></a>100 |
| <a id="p100308"></a>16.1 | <a id="p100309"></a>95 | <a id="p100310"></a>5 |
| <a id="p100311"></a>23 | <a id="p100312"></a>95 | <a id="p100313"></a>5 |



##### <a id="p100314"></a>10.2.3 Масс-спектрометрические условия.

<a id="p100315"></a>Источник ионов - электроспрей.
<a id="p100316"></a>Газ-осушитель - азот с температурой плюс 325 °C, расход 10 м3/мин.
<a id="p100317"></a>Расход газа периферийного слоя 11 м3/мин.
<a id="p100318"></a>Температура газа периферийного слоя плюс 300 °C.
<a id="p100319"></a>Давление в распылителе 206,8 кПа.
<a id="p100320"></a>Напряжение на входе в капилляр 3500 В.
<a id="p100321"></a>Режим ионизации - положительный.
<a id="p100322"></a>Режим сканирования - мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, MRM).
<a id="p100323"></a>Детектируемые переходы:
- <a id="p100324"></a>спинозин А: $732,5 \rightarrow 142,1$ - количественный переход, энергия соударения - 32 В; $732,5 \rightarrow 98$ - качественный переход, энергия соударения - 88 В. Энергия фрагментации 167 В, время сканирования 200 мс, напряжение на ускорителе ячейки 5 В;
- <a id="p100325"></a>спинозин Д: $746,5 \rightarrow 142,1$ - количественный переход, энергия соударения - 32 В; $746,5 \rightarrow 98$ - качественный переход, энергия соударения - 96 В. Энергия фрагментации 162 В, время сканирования 200 мс, напряжение на ускорителе ячейки 5 В.
<a id="p100326"></a>Образцы, дающие пики больше, чем градуировочные растворы спинозина А и спинозина Д с концентрацией 20,0 нг/см3 каждого компонента, соответственно разбавляют смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (не более чем в 100 раз). В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания спинозина А и спинозина Д в пробах.


### <a id="p100327"></a>XI. Обработка результатов анализа


<a id="p100328"></a>11.1. Концентрацию спинозина А и (или) спинозина Д в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по [формуле (2)](#p100331) <8> без учета полноты извлечения вещества из проб:

<a id="p100329"></a>

---

<a id="p100330"></a><8> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

<a id="p100331"></a> $X_{1} = \frac{A \cdot V \cdot \text{К } \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m \cdot 1000}$ , (2)

<a id="p100332"></a>где: A - концентрация спинозина А и/или спинозина Д в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, нг/см3;
<a id="p100333"></a>V - объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для листовых овощей равен 5 см3);
<a id="p100334"></a>m - масса анализируемого образца, г;
<a id="p100335"></a>К - коэффициент, учитывающий объем экстракта, взятого для анализа (для листовых овощей К = 10);
<a id="p100336"></a>1000 - коэффициент перевода нг/см3 в мг/кг.
<a id="p100337"></a>Кр - коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

#### <a id="p100338"></a>11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

<a id="p100339"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, [формула (3)](#p100340):

<a id="p100340"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , (3)

<a id="p100341"></a>где: X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100342"></a>r - значение предела повторяемости [(табл. 13.1)](#p100037), при этом $r = 2,8 \cdot \sigma_{r}$ .
<a id="p100343"></a>При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


### <a id="p100344"></a>XII. Оформление результатов измерений



#### <a id="p100345"></a>12.1 Результат анализа представляют в виде [формулы (4)](#p100346):


<a id="p100346"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ , мг/кг при вероятности P = 0,95, (4)

<a id="p100347"></a>где: $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100348"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по [формуле (5)](#p100349):

<a id="p100349"></a> $\Delta = \delta \cdot \overline{X}100$ , (5)

<a id="p100350"></a>где: $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 3.1](#p100037)), %.
<a id="p100351"></a>Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
<a id="p100352"></a>Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание спиносада (сумма спинозина А и спинозина Д) в пробе менее 0,01 мг/кг" <9>.

<a id="p100353"></a>

---

<a id="p100354"></a><9> Примечание: 0,01 мг/кг - предел количественного определения концентрации спиносада в исследуемой продукции.


### <a id="p100355"></a>XIII. Контроль качества результатов измерений


<a id="p100356"></a>13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <10>.

<a id="p100357"></a>

---

<a id="p100358"></a><10> [ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002); [ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-2-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; [ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-3-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; [ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; [ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-5-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; [ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст.

<a id="p100359"></a>Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.






## <a id="p100360"></a>Библиографические ссылки


1. <a id="p100361"></a>Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2. <a id="p100362"></a>Федеральный закон от 19.07.1997 N 109-ФЗ "О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами".
3. <a id="p100363"></a>Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
4. <a id="p100364"></a>[ГОСТ Р 8.563-2009](https://bukva.ai/docs/gost-r-8-563-2009) "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений".
5. <a id="p100365"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".
6. <a id="p100366"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-2-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".
7. <a id="p100367"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-3-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".
8. <a id="p100368"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".
9. <a id="p100369"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-5-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".
10. <a id="p100370"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".
11. <a id="p100371"></a>ГОСТ 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".
12. <a id="p100372"></a>ГОСТ 12.1.019-2017 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
13. <a id="p100373"></a>ГОСТ 12.1.004-91 "Пожарная безопасность. Общие требования".
14. <a id="p100374"></a>ГОСТ 12.4.009-83 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".
15. <a id="p100375"></a>ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".
16. <a id="p100376"></a>ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".
17. <a id="p100377"></a>ГОСТ OIML R 111-1-2009 "Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования".
18. <a id="p100378"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".
19. <a id="p100379"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".
20. <a id="p100380"></a>ГОСТ 25336-82 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".
21. <a id="p100381"></a>ГОСТ 26678-85 "Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия".
22. <a id="p100382"></a>[ГОСТ 22967-90](https://bukva.ai/docs/standart-gost-22967-90) "Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний".
23. <a id="p100383"></a>[ГОСТ Р 58144-2018](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-r-58144-2018) "Вода дистиллированная. Технические условия".
24. <a id="p100384"></a>[ГОСТ Р 52501-2005](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".
25. <a id="p100385"></a>ГОСТ 9293-74 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".
26. <a id="p100386"></a>ГОСТ 2603-79 "Ацетон. Технические условия".
27. <a id="p100387"></a>ГОСТ 20490-75 "Калий марганцовокислый. Технические условия".
28. <a id="p100388"></a>[ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) "Метанол-яд. Технические условия".
29. <a id="p100389"></a>[ГОСТ 4201-79](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79) "Натрий углекислый кислый. Технические условия".
30. <a id="p100390"></a>[ГОСТ 34215-2017](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-34215-2017) "Овощи листовые свежие. Технические условия".
31. <a id="p100391"></a>[ГОСТ 34301-2017](https://bukva.ai/docs/standart-gost-34301-2017) "Щавель и шпинат свежие. Технические условия".
32. <a id="p100392"></a>[ГОСТ 33985-2016](https://bukva.ai/docs/standart-gost-33985-2016) "Салат-латук, эндивий кудрявый, эндивий эскариол свежие. Технические условия".
33. <a id="p100393"></a>Унифицированные [правила](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.






| <a id="p100394"></a>ББК 51.231 |
| --- |




<a id="p100395"></a>

---