МУК 4.1.4133-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спинозинов А и Д в листовых овощных культурах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля
Актуально на 31.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.4133-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спинозинов А и Д в листовых овощных культурах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля". МУК 4.1.4133-25. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-4133-25
(утв. Роспотребнадзором 11.04.2025)
Примечание
Документ введен в действие с 11.07.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 11 апреля 2025 года
Дата введения 11 июля 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИНОЗИНОВ А И Д В ЛИСТОВЫХ ОВОЩНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4133-25
1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС) для определения остаточных количеств спинозинов А и Д в листовых овощных культурах в диапазонах: 0,005 — 0,05 мг/кг (каждого), 0,01 — 0,1 мг/кг (по сумме спинозинов А и Д) без учета разбавления и 0,005 — 5,0 мг/кг (каждого), 0,01 — 10,0 мг/кг (по сумме спинозинов А и Д) с учетом разбавления в 100 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Спиносад — смесь (2R,3aR,5aR,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bR)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-O-метил- \alpha -L-манно-пиранозилокси)-13-(4-диметиламино-2,3,4,6-тетра-дезокси- \beta -Д-эритропиранозилокси)-9-этил-2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b-гексадекогидро-14-метил-1H-8-оксациклододека-[b]as-индацен-7,15-диона и (2S,3aR,5aS,5bS,9S,13S,14R, 16aS,16bS)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-O-метил- \alpha -L-манно-пиранозилокси)-13-(4-диметил-амино-2,3,4,6-тетрадезокси- \beta -Д-эритро-пиранозил-окси)-9-этил-2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b-гексадеко-гидро-4,14-диметил-1H-8-оксациклододека[b]as-индацен-7,15-диона в соотношении от 50 — 95% до 50 — 5% <1>. Брутто-формула: спинозин А — C41H65NO10; спинозин Д — C42H67NO10. Молекулярная масса: спинозин А — 732,0; спинозин Д — 746,0.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Светло-серый или белый порошок. Давление насыщенного пара при температуре плюс 25 °C: 3,0 x 10-5 мПа — спинозин А; 2,0 x 10-5 мПа — спинозин Д. Температура плавления: спинозин А — плюс 84,0 — 99,5 °C; спинозин Д — плюс 161,5 — 170,0 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода:
- спинозин А — Kowlog P 2,8 (pH 5), 4,0 (pH 7), 5,2 (pH 9);
- спинозин Д — Kowlog P 3,2 (pH 5), 4,5 (pH 7), 5,2 (pH 9).
- спинозин А — 89 мг/дм3 (дистиллированная вода), 235 мг/дм3 при температуре плюс 20 °C и pH 7;
- спинозин Д — 0,5 мг/дм3 (дистиллированная вода), 0,33 мг/дм3 при температуре плюс 20 °C и pH 7.
Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C (г/дм3):
- спинозин А: ацетон — 16,8; ацетонитрил — 13,4; хлористый метилен — 52,5; толуол — 45,7; ацетонитрил — 19,0; н-октанол — 0,926; гексан — 0,448;
- спинозин Д: хлористый метилен — 44,8; толуол — 15,2; ацетон — 1,01; гексан — 0,743; ацетонитрил — 0,255; н-октанол — 0,127.
Оба вещества устойчивы к гидролизу при pH 5 и pH 7; период полураспада (ДТ50) при pH 9 составляет 200 дней для спинозина А и 259 дней для спинозина Д. Фотодеградация в воде: период полураспада (ДТ50) при pH 7 составляет 0,93 дня для спинозина А и 0,82 дня для спинозина Д.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность (LD50) для самок крыс — 3783 мг/кг, для самцов крыс — более 5000 мг/кг; дермальная токсичность (LD50) для крыс — более 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) — более 5180 мг/м3 воздуха. Не вызывает раздражения кожи, отмечается лишь слабое покраснение глаз у кроликов. Не обладает мутагенными и нейротоксичными свойствами или репродуктивной токсичностью.
2.4 Область применения.
Спиносад — инсектицид контактного и кишечного действия из группы спинозинов, обладающий парализующим эффектом. Эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, бахромчатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых, плодовых, овощных и декоративных культур при норме расхода 5 — 40 г д.в./га. Препараты на основе спиносада используются также для борьбы с синантропными насекомыми и в ветеринарии.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 184-ФЗ.
Диапазон определяемых концентраций спинозинов А и Д, значение показателя точности измерений
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовых концентраций спинозинов А и Д выполняют методом ВЭЖХ-МС.
4.2. Определение спинозинов А и Д в листовых овощных культурах проводится после их экстракции из образцов ацетонитрилом и очистки аликвоты экстракта на концентрирующих патронах № 1 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами и на концентрирующих патронах № 2 с гидрофильным слабокислотным сорбентом (силикагель).
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 0,0025 нг.
4.4. Идентификация спинозинов А и Д проводится по времени удерживания, наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов, количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.5. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометрического детектора.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Хроматограф жидкостной с масс-спектрометрическим детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10 по ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Спинозин А аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Спинозин Д аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Азот газообразный | Особо чистый, ГОСТ 9293-74 |
| Ацетон | Химически чистый, ГОСТ 2603-79 |
| Ацетонитрил | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501-2005 |
| н-Гексан | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| Калий марганцовокислый | Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый гранулированный безводный | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Кислота муравьиная для анализа | Содержание основного вещества не менее 98% |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами с размером частиц 100 мкм (объем — 0,6 см3, масса сорбента — 0,5 г) |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 2) | Заполнены гидрофильным слабокислотным сорбентом (силикагель) с размером частиц 100 мкм (объем — 0,6 см3, масса сорбента — 0,5 г) |
| Метилен хлористый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Натрий углекислый кислый | Химически чистый, ГОСТ 4201-79 |
| Спирт метиловый (метанол) | Химически чистый, ГОСТ 6995-77 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Алонж прямой стеклянный | Тип АО, ГОСТ 25336-82 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний/мин |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 20 см3 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В, ГОСТ 25336-82 |
| Груша резиновая | - |
| Колбы конические стеклянные | Тип П или Кн, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К, Гр или О, ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 100 мм x 4,6 мм, размер частиц 3,5 мкм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум до 10 мбар |
| Предколонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 12,5 мм x 2,1 мм, размер частиц 5 мкм |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3, ГОСТ 25336-82 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры мембранные для очистки растворителей | Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм |
| Фильтры обеззоленные нейтральные быстро фильтрующие «красная лента» | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Холодильная/морозильная камера | ГОСТ 26678-85 |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3, ГОСТ 22967-90 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс жидкостного хроматографа с масс-спектрометрическим детектором.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах № 1 и № 2, установление градуировочных характеристик.
8.2 Подготовка и очистка органических растворителей.
8.2.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
8.2.2. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
8.2.3. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
8.2.4. Хлористый метилен. Хлористый метилен промывают равным объемом 5% раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 39,5 — 40,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 39,5 — 40,5 °C, отбрасывают.
8.2.5. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
8.3 Приготовление рабочих растворов.
8.3.1. Приготовление компонента A подвижной фазы. В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 бидистиллированной воды, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
8.3.2. Приготовление компонента B подвижной фазы. В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом. Раствор используется как компонент подвижной фазы и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
8.3.3. Приготовление смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу объемом 250 см3 помещают 100 см3 ацетонитрила, 100 см3 бидистиллированной воды и перемешивают. Раствор используется для приготовления градуировочных стандартов и растворения проб и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
8.3.4. Приготовление 5%-го раствора натрия углекислого кислого. (50 +/- 0,3) г натрия углекислого кислого переносят в мерную колбу объемом 1000 см3, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используется для очистки хлористого метилена (при необходимости) и хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 12 месяцев.
8.3.5. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 10 см3 ацетона и добавляют 90 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.6. Приготовление смеси ацетонитрила с метанолом в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 50 см3 ацетонитрила и добавляют 50 см3 метанола. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах № 2. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.4. Приготовление растворов аналитических стандартов спинозина А и спинозина Д.
Стандартные растворы спинозина А и спинозина Д в ацетонитриле и в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
8.4.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией спинозина А 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г спинозина А в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
8.4.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией спинозина Д 100,0 мкг/см3. Взвешивают (0,0100 +/- 0,0010) г спинозина Д в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
8.4.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 10,0 мкг/см3. В мерную колбу объемом 100 см3 помещают по 10,0 см3 стандартных растворов № 1 и № 2, доводят объем до метки ацетонитрилом и перемешивают.
8.4.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 10 см3 и помещают в мерную колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки ацетонитрилом и перемешивают.
Растворы № 1, 2, 3 и 4 используют для хроматографического исследования, для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок, а также для приготовления стандартных растворов для установления градуировочных характеристик.
8.4.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 100,0 нг/см3. В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 10,0 см3 стандартного раствора № 4 и доводят объем до метки ацетонитрилом и перемешивают. Полученный стандартный раствор № 5 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и для проверки хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах № 1 и № 2.
8.4.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 20,0 нг/см3. Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 2,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
8.4.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 10,0 нг/см3. Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 2,5 см3, помешают в мерную колбу объемом 25 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
8.4.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 5,0 нг/см3. Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 5,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
8.4.9. Стандартный раствор № 9 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 2,0 нг/см3. Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 2,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
8.4.10. Стандартный раствор № 10 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 1,0 нг/см3. Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 1,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
8.4.11. Стандартный раствор № 11 с концентрацией спинозина А и спинозина Д по 0,5 нг/см3. Из стандартного раствора № 10 отбирают пипеткой 5,0 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают.
Стандартные растворы № 6, 7, 8, 9, 10 и 11 используются для установления градуировочной характеристики.
8.5. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
8.5.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочные характеристики, выражающие зависимость откликов фрагментарных ионов, используемых для количественного определения, от концентрации спинозина А и спинозина Д в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 и 20,0 нг/см3 каждого компонента.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
Производят расчет параметров градуировочных характеристик (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации спинозина А и спинозина Д в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0,995, и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20% для каждого уровня градуировочной характеристики.
Если линейность градуировочных характеристик была продемонстрирована, то при анализе серий образцов допускается устанавливать градуировочные характеристики методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5 и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений. Данные для построения градуировочных зависимостей набираются перед началом серии анализов и после ее окончания (рамочные калибровки; не менее 10 измерений не менее чем по пяти уровням концентраций). По полученным данным производят расчет параметров градуировочных характеристик. Рекомендуется в серию анализов образцов включать не более 12 инъекций.
8.5.2. Контроль стабильности градуировочной характеристики <4>. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
<4> Примечание: в случае, если градуировочная характеристика устанавливается при анализе каждой серии образцов по п. 8.5.1, контроль стабильности градуировочной характеристики не проводится.
При контроле стабильности градуировочных характеристик проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание спинозина А и спинозина Д в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,5 до 20,0 нг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
\frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 20 , (1)
где: X — концентрация спинозина А или спинозина Д контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора спинозина А или спинозина Д в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), приготовленной по п. 8.3.3, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, нг/см3;
20 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов спинозина А и спинозина Д, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.5.1.
8.6. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на них.
8.6.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1 (по объему). Элюат отбрасывают.
8.6.2. Проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах № 1.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора спинозина А и спинозина Д с концентрацией 100 нг/см3 каждого компонента в ацетонитриле и упаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
К сухому остатку в колбе прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
В исходную колбу прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и анализируют на содержание спинозина А и спинозина Д в условиях хроматографирования по п. 10.2.
Определяют фракции, содержащие спинозин А и спинозин Д, полноту смывания с концентрирующего патрона и необходимый объем элюентов.
Проверку хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах № 1 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8.7. Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на них.
8.7.1. Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 гексана. Элюат отбрасывают.
8.7.2. Проверка хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах № 2. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора спинозина А и спинозина Д с концентрацией 100 нг/см3 каждого компонента в ацетонитриле и упаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
К сухому остатку в колбе прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки концентратора, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
В исходную колбу прибавляют 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, прибавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в отдельную отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Патрон последовательно промывают 10 см3 хлористого метилена, 2 см3 ацетонитрила и 2 порциями по 10 см3 смеси ацетонитрила с метанолом в соотношении 1:1. Элюаты после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельные чистые отгонные колбы объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему) и анализируют на содержание спинозина А и спинозина Д в условиях хроматографирования по п. 10.2.
Определяют фракции, содержащие спинозин А и спинозин Д, полноту смывания с концентрирующего патрона и необходимый объем элюентов.
Проверку хроматографического поведения спинозина А и спинозина Д на концентрирующих патронах № 2 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8.8. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.
Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 40 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой (смесь компонентов A и B, приготовленных по п. 8.3, в соотношении 95:5) при скорости подачи растворителя 0,3 см3/мин.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <5>, а также документами по стандартизации <6>.
<5> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.
<6> ГОСТ 34215-2017 «Овощи листовые свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 08.12.2017 № 1896-ст; ГОСТ 34301-2017 «Щавель и шпинат свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.11.2017 № 1855-ст; ГОСТ 33985-2016 «Салат-латук, эндивий кудрявый, эндивий эскариол свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 31.10.2016 № 1528-ст.
9.2. Пробы листовых овощей хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток и/или в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2 лет.
X. Выполнение измерений
10.1 Листовые овощные культуры.
10.1.1. Экстракция. Измельченный образец массой (10 +/- 0,3) г помещают в плоскодонную стеклянную колбу объемом 100 см3, прибавляют 25 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, затем на аппарат для встряхивания проб на 5 минут. Экстракт фильтруют в мерный цилиндр объемом 50 см3 через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента». Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 25 см3 ацетонитрила. Экстракт фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 50 см3. Объем экстракта в мерном цилиндре доводят ацетонитрилом до метки 50 см3.
Экстракт переносят в плоскодонную колбу объемом 100 см3, перемешивают и отбирают аликвоту экстракта объемом 5 см3 (1/10 часть по объему). Аликвоту помещают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1. Сухой остаток, полученный по п. 10.1.1, растворяют в 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на концентрирующий патрон № 1, подготовленный по п. 8.6.1. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3.
Исходную колбу обмывают 1 см3 ацетона, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на патрон. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и подвергают дальнейшей очистке на концентрирующих патронах № 2.
10.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2.
Элюат, полученный по п. 10.1.2, наносят на подготовленный по п. 8.7.1 концентрирующий патрон № 2. Элюат отбрасывают.
Патрон последовательно промывают 10 см3 хлористого метилена и 2 см3 ацетонитрила, элюаты отбрасывают.
Спинозины элюируют с патрона 10 см3 смеси ацетонитрила с метанолом в соотношении 1:1, элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
10.1.4. Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), приготовленной по п. 8.3.3. Затем пробу переносят в виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание спинозина А и спинозина Д в условиях хроматографирования по п. 10.2.
10.2 Хроматографические и масс-спектрометрические условия.
10.2.1. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройной квадруполь при следующих режимных параметрах <7>.
<7> Примечание: параметры хроматографирования и масс-спектрометрические условия могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
10.2.2 Хроматографические условия:
- колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18;
- температура колонки плюс 40 °C;
- объем вводимой пробы 5 мм3;
- скорость потока элюента 0,3 см3/мин;
- подвижная фаза: компонент A — 0,1%-й водный раствор муравьиной кислоты (приготовлен по п. 8.3.1), компонент B — 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле (приготовлен по п. 8.3.2);
- режим элюирования градиентный, приведен в табл. 10.1.
Градиентный режим элюирования при определении
| Время (минуты) | Компонент A, % | Компонент B, % |
|---|---|---|
| 0 | 95 | 5 |
| 7 | 30 | 70 |
| 11 | 20 | 80 |
| 13 | 0 | 100 |
| 16 | 0 | 100 |
| 16.1 | 95 | 5 |
| 23 | 95 | 5 |
10.2.3 Масс-спектрометрические условия.
Источник ионов — электроспрей.
Газ-осушитель — азот с температурой плюс 325 °C, расход 10 м3/мин.
Расход газа периферийного слоя 11 м3/мин.
Температура газа периферийного слоя плюс 300 °C.
Давление в распылителе 206,8 кПа.
Напряжение на входе в капилляр 3500 В.
Режим ионизации — положительный.
Режим сканирования — мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, MRM).
- спинозин А: 732,5 \rightarrow 142,1 — количественный переход, энергия соударения — 32 В; 732,5 \rightarrow 98 — качественный переход, энергия соударения — 88 В. Энергия фрагментации 167 В, время сканирования 200 мс, напряжение на ускорителе ячейки 5 В;
- спинозин Д: 746,5 \rightarrow 142,1 — количественный переход, энергия соударения — 32 В; 746,5 \rightarrow 98 — качественный переход, энергия соударения — 96 В. Энергия фрагментации 162 В, время сканирования 200 мс, напряжение на ускорителе ячейки 5 В.
Образцы, дающие пики больше, чем градуировочные растворы спинозина А и спинозина Д с концентрацией 20,0 нг/см3 каждого компонента, соответственно разбавляют смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (не более чем в 100 раз). В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания спинозина А и спинозина Д в пробах.
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Концентрацию спинозина А и (или) спинозина Д в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по формуле (2) <8> без учета полноты извлечения вещества из проб:
<8> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
X_{1} = \frac{A \cdot V \cdot \text{К } \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m \cdot 1000} , (2)
где: A — концентрация спинозина А и/или спинозина Д в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, нг/см3;
V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для листовых овощей равен 5 см3);
m — масса анализируемого образца, г;
К — коэффициент, учитывающий объем экстракта, взятого для анализа (для листовых овощей К = 10);
1000 — коэффициент перевода нг/см3 в мг/кг.
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (3)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 13.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат анализа представляют в виде формулы (4):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (4)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 , (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание спиносада (сумма спинозина А и спинозина Д) в пробе менее 0,01 мг/кг» <9>.
<9> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации спиносада в исследуемой продукции.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <10>.
<10> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
15. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
16. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
17. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования».
18. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
19. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
20. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
21. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
22. ГОСТ 22967-90 «Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний».
23. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
24. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
25. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
26. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия».
27. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
28. ГОСТ 6995-77 «Метанол-яд. Технические условия».
29. ГОСТ 4201-79 «Натрий углекислый кислый. Технические условия».
30. ГОСТ 34215-2017 «Овощи листовые свежие. Технические условия».
31. ГОСТ 34301-2017 «Щавель и шпинат свежие. Технические условия».
32. ГОСТ 33985-2016 «Салат-латук, эндивий кудрявый, эндивий эскариол свежие. Технические условия».
33. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
| ББК 51.231 |
|---|