МУК 4.1.4132-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пропиконазола в клубнях картофеля и луке-репке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.4132-25. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пропиконазола в клубнях картофеля и луке-репке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля". МУК 4.1.4132-25. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-4132-25
(утв. Роспотребнадзором 11.04.2025)
Примечание
Документ введен в действие с 11.07.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 11 апреля 2025 года
Дата введения 11 июля 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОПИКОНАЗОЛА В КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ И ЛУКЕ-РЕПКЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4132-25
1. Разработаны ФГБОУ ВО РГАУ — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, Е.Н. Тестова, Н.С. Фролова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения остаточных количеств пропиконазола в клубнях картофеля и луке-репке в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Пропиконазол — (+/-)-1-[[2-(2,4-дихлорфенил)-4-пропил-1,3-диоксолан-2-ил]метил]-1H-1,2,4-триазол <1>. Брутто-формула: C15H17Cl2N3O2. Молекулярная масса: 342,2 г/моль.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Желтоватая вязкая жидкость. Давление насыщенного пара 2,7 x 10-2 мПа при температуре плюс 20 °C, 5,6 x 10-2 мПа при температуре плюс 25 °C. Температура плавления плюс 180 °C при 13,3 Па. Коэффициент распределения в системе октанол/вода при температуре плюс 25 °C и pH 6,6: KowlogP = 3,72. Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C — 100 мг/дм3. При температуре плюс 25 °C растворим в большинстве органических растворителей (этанол, ацетон, толуол), в гексане — 47 г/дм3.
Пропиконазол не существенно гидролизуется в щелочной и кислой средах.
Период полураспада в почве при температуре плюс 20 — 25 °C от 29 до 70 дней, в воде — 6,4 дня.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая оральная токсичность (LD50) для крыс — 1517 мг/кг, для мышей — 1490 мг/кг, острая дермальная токсичность (LD50) для крыс — более 4000 мг/кг, для кроликов — более 6000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) — более 5800 мг/м3.
2.4 Область применения.
Пропиконазол — системный фунгицид широкого спектра действия. Ингибирует биосинтез эргостерина и угнетает спорообразование, обладает высокой активностью против возбудителей мучнистой росы, пятнистостей и ржавчины.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).
Диапазон определяемых концентраций пропиконазола, значение показателя точности измерений
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовых концентраций пропиконазола выполняют методом ГЖХ с использованием электронно-захватного детектора (далее — ЭЗД).
4.2. Определение пропиконазола в клубнях картофеля и луке-репке проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей, на колонке с флорисилом и на концентрирующих патронах № 1.
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 0,05 нг.
4.4. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.5. В условиях проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средства измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Хроматограф газовый с ЭЗД | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,3 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228-2008 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Пропиконазол, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Азот газообразный | Особо чистый, ГОСТ 9293-74 |
| Ацетон Химически чистый, ГОСТ 2603-75 | |
| Ацетонитрил | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый | Чистый для анализа, ГОСТ 20490-75 |
| Кальций хлористый гранулированный безводный | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены гидрофобным сорбентом с привитыми октильными группами (C8) с размером частиц 63 — 200 мкм (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Натрий сернокислый | Химически чистый, ГОСТ 4166-76 |
| Натрий хлористый | Химически чистый, ГОСТ 4233-77 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силиката магния (флорисил) | Размер частиц 60 — 100 меш |
| Хлороформ | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. | |
| Таблица 5.3 | |
Вспомогательное оборудование, устройства и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Алонж прямой стеклянный | Тип АО, ГОСТ 25336-82 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний/минуту |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556-81 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД, ГОСТ 25336-82 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы конические стеклянные | Тип П или Кн, ГОСТ 25336-82 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К, Гр или О, ГОСТ 25336-82 |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла | Внутренний диаметр 0,25 мм, длина 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм |
| Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость (100 — 800 см3), ГОСТ 25336-82 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие «красная лента» | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Холодильная/морозильная камера | ГОСТ 26678-85 |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3, ГОСТ 22967-90 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с флорисилом и на концентрирующих патронах № 1, установление градуировочной характеристики.
8.2 Подготовка и очистка органических растворителей.
8.2.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
8.2.2. Ацетон. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов.
Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают
8.2.3. Гексан. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
8.2.4. Хлороформ. Хлороформ, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов.
Затем хлороформ сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлороформ перегоняют при температуре плюс 61,0 — 61,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 61,0 — 61,5 °C, отбрасывают.
8.2.5. Бидистиллированная вода. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
8.3 Приготовление рабочих растворов.
8.3.1. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 80 см3 гексана и добавляют 20 см3 ацетона. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.2. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 10 см3 гексана и добавляют 60 см3 ацетона. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.3. Приготовление смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:3 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 20 см3 ацетонитрила и добавляют 60 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.3.4. Приготовление смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). В коническую колбу объемом 100 см3 помещают 50 см3 ацетонитрила и добавляют 50 см3 бидистиллированной воды. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстрактов на концентрирующих патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
8.4 Приготовление растворов аналитического стандарта пропиконазола.
8.4.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией пропиконазола 1 мг/см3. Взвешивают (0,0500 +/- 0,0010) г пропиконазола в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 6 месяцев.
8.4.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией пропиконазола 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.
8.4.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией пропиконазола 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 14 дней.
8.4.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией пропиконазола 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 14 дней.
8.4.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией пропиконазола 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 14 дней.
8.4.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией пропиконазола 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 14 дней.
8.4.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией пропиконазола 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 14 дней.
8.4.8. Стандартные растворы пропиконазола с концентрацией 1,0; 0,4; 0,2; 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц. Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,4; 0,2; 0,1 мкг/см3 пропиконазола и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц. Стандартные растворы пропиконазола для внесения хранят в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 14 дней.
8.5. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
8.5.1. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость суммы площадей (высот) двух характерных пиков от концентрации пропиконазола в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки, приготовленным по п.п. 8.4.4 - 8.4.7, с концентрацией по 0,5; 0,2 и 0,1 и 0,05 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.5.2. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки.
Содержание пропиконазола должно охватывать весь диапазон концентраций 0,05 — 0,5 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
\frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 10 , (1)
где: X — концентрация пропиконазола контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора пропиконазола в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — допустимая величина расхождения градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов пропиконазола, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново в соответствии с п. 8.5.1.
8.6. Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения пропиконазола на ней.
8.6.1. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают (5 +/- 0,3) г флорисила и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флорисила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.
Колонку промывают 20 см3 ацетона и высушивают, смыв отбрасывают.
Перед использованием колонку промывают 10 см3 гексана, смыв отбрасывают.
8.6.2. Проверка хроматографического поведения пропиконазола на колонке с 5 г флорисила. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора пропиконазола в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Колонку последовательно промывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и пятью порциями по 5 см3 каждая смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 ацетона и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие пропиконазол, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
Проверку хроматографического поведения пропиконазола на колонке с флорисилом следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8.7. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения пропиконазола.
8.7.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума.
Кондиционирование: концентрирующий патрон последовательно промывают 10 см3 ацетонитрила и 10 см3 воды. Элюаты отбрасывают.
8.7.2. Проверка хроматографического поведения пропиконазола на концентрирующих патронах № 1. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора пропиконазола в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 воды, перемешивают и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Патрон последовательно промывают 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:3 и тремя порциями по 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 ацетона и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие пропиконазол, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.
Проверку хроматографического поведения пропиконазола на концентрирующих патронах № 1 следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.
<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом Минсельхоза России, протокол от 08.05.2024 № 12.
<5> ГОСТ 7176-2017 «Картофель продовольственный. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.11.2017 № 1843-ст; ГОСТ 34306-2017 «Лук репчатый свежий. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.11.2017 № 1844-ст; ГОСТ 1723-2015 «Лук репчатый свежий для промышленной переработки. Технические условия», введенный в действие приказом Росстандарта от 12.11.2015 № 1764-ст.
9.2. Отобранные пробы клубней картофеля и лука-репки хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток и/или в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт.
Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 2-х лет.
X. Выполнение измерений
10.1 Клубни картофеля и лук-репка.
10.1.1. Экстракция. Навеску измельченных клубней картофеля или лука-репки массой (10 +/- 0,3) г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 20 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности «красная лента» в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C <6>.
<6> Примечание: выпаривание проводить с осторожностью, возможно вспенивание ацетонитрильного экстракта и заброс его в приемную колбу испарителя.
10.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Сухой остаток, полученный по п. 10.1.1, растворяют в 2 см3 ацетона, добавляют 50 см3 дистиллированной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. В случае лука-репки добавляют в делительную воронку (0,5000 — 0,6000 +/- 0,0010) г хлорида натрия, содержимое перемешивают.
К водной фазе в делительной воронке добавляют 30 см3 хлороформа. Делительную воронку встряхивают 2 минуты и после полного разделения фаз нижний слой (хлороформ) собирают в чистую отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 см3 хлороформа. Экстракты объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
10.1.3. Очистка экстракта на колонке с флорисилом. Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.2, растворяют в 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленную по п. 8.6.1 колонку. Элюат отбрасывают.
Колонку последовательно промывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6. Элюаты отбрасывают.
Пропиконазол элюируют с колонки 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6, элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
10.1.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.3, растворяют в 1 см3 ацетонитрила, обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 воды, перемешивают и вносят раствор на подготовленный по п. 8.7.1 патрон № 1. Элюат отбрасывают.
Патрон промывают 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:3, элюат отбрасывают.
Пропиконазол элюируют с патрона 20 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
10.1.5. Сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетона, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.2.
10.2 Условия хроматографирования.
10.2.1 Измерения выполняют на газовом хроматографе с ЭЗД при следующих режимных параметрах <7>:
<7> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
- колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренним диаметром 0,25 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм;
- температура детектора плюс 300 °C, поток газа поддувки (азот) — 30 см3/мин;
- температура испарителя плюс 260 °C, газ-носитель — гелий, режим с делением потока (сплит), деление потока 80:1, общий поток 165 см3/мин;
- температура колонки: градиентный нагрев колонки, начиная с плюс 210 °C (выдержка 1 минута) по 2 град/мин до 230 °C, затем по 10 град/мин до плюс 260 °C (выдержка 2 минуты). Поток газа-носителя (гелий) — 2,0 см3/мин, средняя скорость 48,5 см/сек, режим постоянный поток;
- объем вводимой пробы 1 мм3.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор пропиконазола с концентрацией 0,5 мкг/см3, соответственно разбавляют ацетоном. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания пропиконазола в пробах.
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Концентрацию пропиконазола в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по формуле (2) <8>, без учета полноты извлечения вещества из проб:
<8> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
X_{1} = \frac{A \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (2)
где: A — концентрация пропиконазола, в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см3 (для всей исследуемой продукции равен 2 см3);
m — масса анализируемого образца, г;
Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (3)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 13.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат анализа представляют в виде формулы (4):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (4)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (5):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 , (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание пропиконазола в пробе — менее 0,01 мг/кг».
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации.
Периодичность и формы контроля определяется системой менеджмента качества лаборатории.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
3. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть.
4. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
11. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
12. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
13. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
14. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
15. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
16. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 и M3. Часть 1. Метрологические и технические требования»
17. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
18. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
19. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
20. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
21. ГОСТ 22967-90 «Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний».
22. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
23. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
24. ГОСТ 5556-81 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
25. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
26. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия»
27. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
28. ГОСТ 4166-76 «Натрий сернокислый. Технические условия».
29. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».
30. ГОСТ 7176-2017 «Картофель продовольственный. Технические условия».
31. ГОСТ 34306-2017 «Лук репчатый свежий. Технические условия».
32. ГОСТ 1723-2015 «Лук репчатый свежий для промышленной переработки. Технические условия».
33. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
| ББК 51.231 |
|---|