МУК 4.1.4102-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 25.12.2024)
Примечание
Документ введен в действие с 25.03.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 25 декабря 2024 года
Дата введения 25 марта 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФИПРОНИЛА И ЕГО МЕТАБОЛИТА ФИПРОНИЛ-СУЛЬФОНА В БОТВЕ И КОРНЕПЛОДАХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4102-24
1. Разработаны ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений» (А.С. Комарова, В.И. Долженко); ООО «Инновационный центр защиты растений» (Г.И. Иванова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 25 декабря 2024 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения массовой концентрации фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0,005 — 0,05 мг/кг без учета разбавления и 0,005 — 1,0 мг/кг — с учетом разбавления в 20 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Фипронил — (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор- \alpha,\alpha,\alpha -трифтор-п-толил)-4-трифтор-метилсульфинилпиразол-3-карбонитрил <1>. Молекулярная масса: 437,2. Эмпирическая формула: C12H4Cl2F6N4OS.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
Фипронил-сульфон. — (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор- \alpha,\alpha,\alpha -трифтор-п-толил)-4-трифторметилсульфонилпиразол-3-карбонитрил <2>. Молекулярная масса: 453,2. Эмпирическая формула: C12H4Cl2F6N4O2S.
<2> В соответствии с классификацией ИЮПАК.
2.2 Физические и химические свойства.
Химически чистый фипронил — бесцветное кристаллическое вещество с плесневым запахом. Давление насыщенного пара — 3,7 x 10-4 мПа (при температуре плюс 20 °C). Температура плавления плюс 200 — 201 °C. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow lgP = 4,00 (при температуре плюс 20 °C). Хорошо растворим в органических растворителях. Растворимость (г/дм3, при температуре плюс 20 °C): дихлорметан — 22,3, ацетон — 545,9, гексан — 0,028. Растворимость в воде (мг/дм3, при температуре плюс 20 °C): 1,9 (pH 5), 2,4 (pH 9) и 1,9 (дистиллированная).
Фипронил термически стабилен, не разрушается в присутствии металлов, не гидролизуется при pH (5 — 7); при pH 9 медленно гидролизуется. Медленно разрушается под действием солнечного света.
В растениях фипронил метаболизируется до фипронил-сульфона. В почве в период 30 и более дней наряду с сульфоном образуется соответствующий сульфид в результате восстановления сульфоксидной группы, а также амид за счет гидролиза нитрильной группы.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность (ЛД50) для крыс 97 мг/кг. Острая дермальная токсичность ЛД50 для крыс > 2000 мг/кг, для кроликов 354 мг/кг. Ингаляционная ЛК50 (4 часа) для крыс 0,682 мг/дм3.
2.4 Область применения.
Фипронил — инсектицид из группы фенилпиразолов контактного, кишечного и частично системного действия с длительным защитным эффектом.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность <3> результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 и 3.2 для соответствующих диапазонов концентраций.
<3> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002); ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002).
Метрологические характеристики фипронила
Метрологические характеристики фипронил-сульфона
Объект анализа, предел определения, диапазон определяемых концентраций, полнота извлечения фипронила, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений для n = 20, P = 0,95
Объект анализа, предел определения, диапазон определяемых концентраций, полнота извлечения фипронил-сульфона, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений для n = 20, P = 0,95
IV. Метод измерения
4.1. Методика основана на определении фипронила и фипронил-сульфона методом ГЖХ с использованием электронозахватного детектора после экстракции определяемых компонентов из образцов органическим растворителем. Идентификация фипронила и фипронил-сульфона проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки. Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
4.2. Нижний предел измерения содержания фипронила и фипронил-сульфона в анализируемом объеме пробы — 0,005 нг.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Газовый хроматограф с электронозахватным детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений. Предел детектирования 3 x 10-14 г/с. Относительное СКО выходного сигнала по площади пика 4,0%, по времени удерживания 4,0% |
| Весы лабораторные аналитические | Наибольший предел взвешивания 81/210 г, предел допустимой погрешности 0,1/0,3 мг, ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные общего назначения | Наибольший предел взвешивания 150 г, предел допустимой погрешности 5 мг, ГОСТ Р 53228-2008 |
| Дозаторы пипеточные переменного объема 0 — 100; 100 — 1000; 1000 — 5000 мм3 | ГОСТ 28311-2021 |
| Колбы мерные | Объемом 10, 50 и 100 см3, ГОСТ 1770-74 |
| Цилиндры мерные | Вместимость 50 и 100 см3, ГОСТ 1770-74 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Азот | Высокой чистоты, марка 6.0, содержание основного вещества не менее 99,9999% |
| Ацетон | Массовая доля основного вещества не менее 99% |
| Ацетонитрил | Для ГЖХ |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| н-Гексан | Массовая доля основного вещества не менее 99% |
| Натрий хлористый | Чистый для анализа, ГОСТ 4233-77 |
| Фипронил, аналитический стандарт | Содержание основного компонента не менее 98,8% |
| Фипронил-сульфон, аналитический стандарт | Содержание основного компонента не менее 97,9% |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки. | |
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений следует соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Обучение работников безопасности труда организуется в соответствии с законодательством Российской Федерации <4>.
<4> Постановление Правительства Российской Федерации от 24.12.2021 № 2464 «О порядке обучения по охране труда и проверки знания требований охраны труда».
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <5>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<5> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Отбор и хранение проб
7.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами, а также документам <6> по стандартизации <7>.
<6> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
<7> ГОСТ 33884-2016 «Свекла сахарная. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 06.12.2016 № 1957-ст; ГОСТ Р 53036-2008 «Свекла сахарная. Методы испытаний», введенный приказ Ростехрегулирования от 11.12.2008 № 390-ст.
Пробы ботвы и корнеплодов сахарной свеклы хранят раздельно в герметичной полиэтиленовой таре в морозильной камере с температурой не выше минус 18 °C до анализа не более 1 года
VIII. Условия измерений
8.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
IX. Подготовка к выполнению измерений
9.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей.
Реактивы и растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют. Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
9.2 Кондиционирование колонки.
Капиллярную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре плюс 250 °C до стабилизации нулевой линии.
9.3 Приготовление основного, рабочих и градуировочных растворов.
9.3.1. Основной раствор с концентрацией 1,0 мг/см3: точную навеску фипронила или фипронил-сульфона (50,0 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки тем же растворителем.
9.3.2. Рабочий раствор А с концентрацией 10,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 дозатором вносят 1,0 см3 основного раствора и доводят до метки ацетоном.
9.3.3. Рабочий раствор Б с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 1,0 см3 рабочего раствора А и доводят до метки ацетоном.
9.3.4 Приготовление градуировочных растворов.
Градуировочные растворы с концентрациями фипронила или фипронил-сульфона 0,005, 0,01, 0,02, 0,05 и 0,1 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя гексан.
9.3.4.1. Раствор № 1 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 1,0 см3 рабочего раствора Б и доводят до метки гексаном.
9.3.4.2. Раствор № 2 с концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 0,5 см3 рабочего раствора Б и доводят объем до метки гексаном.
9.3.4.3. Раствор № 3 с концентрацией 0,02 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 0,2 см3 рабочего раствора Б и доводят объем до метки гексаном.
9.3.4.4. Раствор № 4 с концентрацией 0,01 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.
9.3.4.5. Раствор № 5 с концентрацией 0,005 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 дозатором вносят 0,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.
Основной и рабочие растворы можно хранить в холодильнике при температуре от 0 до плюс 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы — в течение недели.
При изучении полноты определения фипронила и фипронил-сульфона используют ацетоновые растворы вещества, приготовленные из рабочих растворов методом последовательного разбавления по объему.
9.4 Установление градуировочной характеристики.
Для установления градуировочной характеристики (площадь пика — концентрация фипронила или фипронил-сульфона в растворе) в инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Затем определяют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации фипронила или фипронил-сульфона в градуировочном растворе.
Градуировки признают удовлетворительными, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику следует проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
X. Выполнение определения
10.1. Экстракция. Навеску измельченных ботвы или корнеплодов (10 г) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, последовательно добавляют 10 см3 ацетонитрила, 1 г хлористого натрия. В пробы ботвы добавляют 5 см3 воды. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при 4000 об/мин. От верхнего ацетонитрильного слоя дозатором отбирают 1,0 см3, переносят в стеклянную пробирку, упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1,0 см3 гексана, переносят в виалу для хроматографирования и анализируют по п. 10.2.
10.2. Условия хроматографирования. Газовый хроматограф с электронозахватным детектором, колонка кварцевая капиллярная 30 м x 0,32 мм неподвижная фаза — 5% фенил — 95% диметилполисилоксан с толщиной слоя 0,25 мкм, температура термостата колонки в режиме программирования: от плюс 150 °C (2 мин) до плюс 270 °C (7 мин) со скоростью 25 °C/мин; температура испарителя плюс 250 °C; детектора 330 °C; поддув детектора 15 см3/мин; газ-носитель — азот; поток газа-носителя через колонку 3 см3/мин (в режиме постоянного потока); деление потока 1: 20; хроматографируемый объем 1 мм3. Приблизительное время удерживания фипронила 6,5 мин, фипронил-сульфона 7,0 мин.
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Содержание фипронила или фипронил-сульфона в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле (1):
X = \frac{C \times V \times 100 \times K}{M \times f} , (1)
где: C — концентрация фипронила или фипронил-сульфона, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
f — полнота извлечения фипронила или фипронил-сульфона, приведенная в табл. 3.3 и 3.4, %;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3 (1 см3);
M — окончательная масса анализируемого образца, г (аликвота, равная 1 г).
Содержание фипронила или фипронил-сульфона в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор фипронила или фипронил-сульфона с концентрацией 0,1 мкг/см3, разбавляют гексаном не более чем в 20 раз. Коэффициент разбавления при этом учитывают при расчете по формуле (1).
XII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, условие (2):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (2)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (приведено в табл. 3.1 и 3.2).
При невыполнении условия (2) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. Оформление результатов
13.1 Результат анализа представляют в виде выражения (3):
(X_{\text{ср}} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, (3)
где: Xср — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (4):
\Delta = \frac{\delta \times X_{\text{ср}}}{100} , (4)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, приведена в табл. 3.1 и 3.2), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в пробе — менее 0,005 мг/кг» <8>.
<8> Примечание: 0,005 мг/кг — предел обнаружения фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы.
XIV. Контроль качества результатов измерений
14.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <9>.
<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
14.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении условия (4):
\frac{|C - C_{\text{К}}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.} , (4)
где: C — известная концентрация фипронила или фипронил-сульфона в градуировочном растворе;
Cк — результат контрольного измерения массовой концентрации фипронила или фипронил-сульфона в градуировочном растворе;
\lambda_{\text{контр}.} — норматив контроля градуировочного коэффициента, %. ( \lambda_{\text{контр}.} = 10% , при P = 0,95).
Если расхождение превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов фипронила или фипронил-сульфона. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Постановление Правительства Российской Федерации от 24.12.2021 № 2464 «О порядке обучения по охране труда и проверке знания требований охраны труда».
3. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
4. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
10. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
11. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
12. ГОСТ 28311-2021 «Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний».
13. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
14. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия.»
15. ГОСТ 4233-77 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
16. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
17. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
18. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
19. ГОСТ 12.4.009-83 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
20. ГОСТ 33884-2016 «Свекла сахарная. Технические условия».
21. ГОСТ Р 53036-2008 «Свекла сахарная. Методы испытаний».
22. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
| ББК 51.231 |
|---|