МУК 4.1.4078-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств амисульброма и его метаболита IT-4 в воде, почве и амисульброма в картофеле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 25.12.2024)
Примечание
Документ введен в действие с 25.03.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 25 декабря 2024 года
Дата введения 25 марта 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АМИСУЛЬБРОМА И ЕГО МЕТАБОЛИТА IT-4 В ВОДЕ, ПОЧВЕ И АМИСУЛЬБРОМА В КАРТОФЕЛЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4078-24
1. Разработаны ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Н.Е. Федорова, С.Д. Добрев, А.А. Ивченкова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 25 декабря 2024 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ) с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (далее — МС/МС) для определения массовой концентрации амисульброма и его метаболита IT-4 в воде водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/дм3 без разбавления, 0,01 — 10,00 мг/дм3 с учетом разбавления в 100 раз, амисульброма в картофеле и почве в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг без разбавления, 0,01 — 10,00 мг/кг с учетом разбавления в 100 раз и метаболита амисульброма IT-4 в почве в диапазоне 0,025 — 0,1 мг/кг без разбавления и 0,025 — 10 мг/кг с учетом разбавления в 100 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Амисульбром — 3-(3-бром-6-фтор-2-метилиндол-1-ил-сульфонил)-N,N-диметил-1,2,4-триазол-1-сульфонамид <1>. CAS 348635-87-0. Брутто-формула C13H13BrFN5O4S2. Молекулярная масса 466,3.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC) (далее — ИЮПАК).
2.2 Физические и химические свойства амисульброма.
Бледно-желтые кристаллы. Температура плавления плюс 128,6 °C. Температура деградации плюс 242 °C. Давление паров < 1,8·105 мПа (при температуре плюс 20 °C). Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow logP = 4,4 (при pH = 7, плюс 25 °C). Плотность 1,85 г/см3. Растворимость в воде 0,11 мг/дм3 (при температуре плюс 20 °C). Растворимость в органических растворителях (в г/дм3 при температуре плюс 20 °C): гексан — 0,264, толуол — 88,6, метанол 10,1; октанол — 2,6.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность (LD50) крысы, мыши — более 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) крысы — более 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LK50) для крыс — более 2800 мг/м3 (экспозиция на 4 часа).
2.4 Область применения.
2.5. IT-4 — метаболит амисульброма. 3-Бром-6-фтор-2-метил-1-(1H-1,2,4-триазол-3-ил-сульфонил)-1H-индол <2>. CAS 2505298-06-4. Брутто-формула C11H8BrFN4O2S. Молекулярная масса 359,2 г/моль.
2.6 Физические и химические свойства IT-4.
Порошок бледно-желтого цвета. Растворимость в воде 2,39 г/дм3 (при температуре плюс 20 °C).
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <3> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<3> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст.
Метрологические характеристики
IV. Метод измерений
4.1. Методика основана на определении амисульброма и его метаболита IT-4 с использованием ВЭЖХ-МС/МС.
4.2. Экстракцию соединений из образцов почвы выполняют 50% водным раствором ацетонитрила (объемные %), из образцов картофеля — добавлением ацетонитрила с последующим выделением ацетонитрильного экстракта при помощи смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, цитрата натрия и натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного) и проводят очистку методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе первичных-вторичных аминов.
Пробы воды анализируют после фильтрования через мембранный шприцевой фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.
4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы: для амисульброма в картофеле и почве — 25-пг, в воде 50 пг; для IT-4 в почве — 62,5-пг, в воде — 50-пг.
4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Весы лабораторные аналитические | Предел допустимой погрешности не более +/- 0,0005 г, ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные общего назначения | Предел допустимой погрешности не более +/- 0,01 г, ГОСТ Р 53228-2008 |
| Дозаторы лабораторные одноканальные механические, с диапазонами измерений 0,5 — 10, 10 — 100, 100 — 1000, 500 — 5000 мм3 | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Колбы мерные | 2-го класса точности 2-(10, 500)-2, ГОСТ 1770-74 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Пипетки градуированные | (1, 2, 3, 5)-(1, 2)-2-(10), ГОСТ 29227-91 |
| Приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Амисульбром | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% либо аттестованный раствор с концентрацией не менее 100 мкг/см3 |
| Метаболит амисульброма IT-4 | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% либо аттестованный раствор с концентрацией не менее 100 мкг/см3 |
| Ацетонитрил | Квалификация «Для ВЭЖХ-МС», чистота не менее 99,9% |
| Вода для лабораторного анализа (деионизованная) | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Муравьиная кислота | 99,7%, чистая для анализа, ГОСТ 5848-73 |
| Азот/Аргон | В зависимости от требований производителя масс-спектрометра |
| Магний сернокислый (сульфат магния), безводный | Химически чистый |
| Натрий хлористый (хлорид натрия) | Химически чистый, ГОСТ 4233-77 |
| Натрий лимоннокислый двузамещенный, 1,5-водный | Химически чистый |
| Натрий лимоннокислый трехзамещенный, 2-водный | Химически чистый |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе первичных-вторичных аминов | Площадь поверхности сорбента ~ 570 м2/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей. | |
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Шейкер — вихревой или орбитальный | Диапазон регулировки оборотов 50 — 200 об/мин — для орбитального (до 3000 об/мин — для вихревого), орбита до 10 мм |
| Виалы стеклянные с крышками и септами из темного стекла | Объем 2 см3 |
| Мельница лабораторная (гомогенизатор) | - |
| Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками | Вместимостью 15, 50 см3 |
| Фильтры мембранные | Для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,45 мкм, мембрана — политетрафторэтилен (далее — ПТФЭ) |
| Холодильник/морозильник бытовой | Обеспечивающая температуру 2 — 6 °C для холодильной камеры и температуру не выше минус 18 °C для морозильной камеры, ГОСТ 26678-85 |
| Хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS (триметилсиланол) эндкеппингом, зернением 4 мкм | - |
| Центрифуга лабораторная, роторная | Скорость вращения не менее 3000 об/мин |
| Шприцы медицинские однократного применения | Вместимостью 5 см3, ГОСТ ISO 7886-1-2011 |
| Устройство для фильтрования под вакуумом подвижной фазы (растворителей) | - |
| Фильтры мембранные для устройства для фильтрования под вакуумом | Материал — ПТФЭ, нейлон (в зависимости от растворителя). Диаметр — подходящий для используемого устройства. Размер пор — не более 0,45 мкм |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы с масс-спектрометрическим детектированием.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <4>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<4> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка лабораторной посуды к анализу, приготовление растворов, подвижной фазы, приготовление смеси солей для экстракции и смеси для очистки экстрактов, установление градуировочных характеристик, подготовка проб к анализу.
8.2 Подготовка лабораторной посуды к анализу.
Стеклянную посуду вымыть с моющим средством, промыть проточной водопроводной водой, трижды ополоснуть дистиллированной водой и высушить в сушильном шкафу при температуре плюс 105 — 110 °C. Перед употреблением посуду ополаскивают ацетонитрилом и высушивают.
Пластиковую посуду используют однократно.
8.3. Приготовление компонента А подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 500 см3 добавляют 200 см3 деионизованной воды, вносят 0,5 см3 муравьиной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Концентрация муравьиной кислоты в деионизованной воде составляет 0,1% (объемные %). Хранят при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней. Перед использованием профильтровать под вакуумом через мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм (при необходимости).
8.4. Приготовление 50% водного раствора ацетонитрила (объемные %) для экстракции почвы. В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 250 см3 ацетонитрила и 250 см3 деионизованной воды. Хранят при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 3 месяцев.
8.5. Приготовление раствора ацетонитрила, содержащего 0,1% муравьиной кислоты (объемные %), для приготовления градуировочных растворов. В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают около 200 см3 ацетонитрила, вносят 0,5 см3 муравьиной кислоты, доводят ацетонитрилом до метки. Хранят при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 3 месяцев.
8.6. Приготовление смеси солей для экстракции <5>. Для обработки одной пробы смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного. Для каждой пробы готовится отдельное количество смеси. Смеси хранят в индивидуальной герметичной упаковке (не более 6 месяцев).
<5> Примечание: допускается замена навески 4 г MgSO4 навеской 6 г безводного Na2SO4, прокаленного при температуре плюс 550 — 600 °C. Допускается использование смеси солей для экстракции из коммерческих наборов для твердофазной экстракции согласно EN 15662.
8.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов <6>. Для очистки одной аликвоты экстракта смешивают (150 +/- 5) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина и (900 +/- 5) мг магния сернокислого, закрывают в герметичную тару, хранят не более 6 месяцев <7>.
<6> Примечание: допускается использование смеси для очистки экстрактов из коммерческих наборов для твердофазной экстракции с насыпными сорбентами для непигментированных фруктов и овощей.
<7> При применении коммерческих наборов соблюдать инструкции производителя.
8.8 Кондиционирование хроматографической колонки.
Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А приготовлен по п. 8.3, компонент Б — ацетонитрил) 90:10 по объему со скоростью подачи растворителя 0,4 см3/мин не менее 20 минут.
8.9 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.
8.9.1. Исходные растворы амисульброма и его метаболита IT-4 для градуировки (концентрация 1000 мкг/см3). В мерные колбы вместимостью 10 см3 раздельно для каждого компонента помещают по (0,0100 +/- 0,0005) г амисульброма или метаболита, добавляют 5 — 7 см3 подкисленного раствора ацетонитрила (приготовленного в соответствии с п. 8.5), перемешивают, доводят подкисленным ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 16 °C не более 12 месяцев.
8.9.2. Раствор № 1 для градуировки с концентрацией амисульброма и его метаболита IT-4 10 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают по 0,1 см3 исходного раствора каждого компонента с концентрацией 1000 мкг/см3 (см. п. 8.9.1), доводят подкисленным ацетонитрилом (приготовленным в соответствии с п. 9.5) до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой стеклянной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 16 °C не более 14 дней.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения соединений методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов методом «добавок».
8.9.3. Рабочие растворы № 2 — 7 для градуировки (концентрация 0,005 — 0,12 мкг/см3). В 6 мерных колб вместимостью 10 см3 помещают по 0,005; 0,01; 0,02; 0,05; 0,1; 0,12 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см3 каждого компонента (см. п. 8.9.2), доводят до метки подкисленным ацетонитрилом (приготовленным в соответствии с п. 8.5), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 7 с концентрациями 0,005; 0,01; 0,02; 0,05; 0,1 и 0,12 мкг/см3 каждого компонента.
Растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой стеклянной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 16 °C не более недели.
8.10. Установление градуировочных характеристик. Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика от концентрации амисульброма и его метаболита IT-4 устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки № 2 — 7.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора, приготовленного в соответствии с п. 8.9.3 и анализируют в условиях хроматографирования в соответствии с п. 10.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков амисульброма и его метаболита IT-4.
8.11. Контроль стабильности градуировочных характеристик. Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
Проводят измерения не менее двух образцов рабочих растворов для градуировки, содержание аналитов в которых соответствует диапазону концентраций от 0,005 до 0,12 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов величина расхождения (A), рассчитанная по формуле (1), не превышает норматива контроля погрешности (B) - соотношение (2):
A = \frac{|X - C|}{C} \times 100; (1)
где: A — величина расхождения, %;
X — концентрация амисульброма или его метаболита IT-4 в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).
Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов амисульброма и его метаболита IT-4, предусмотренными настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново в соответствии с п. 8.10.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <8>, а также документами по стандартизации <9>.
<8> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; ПНД Ф 12.1:2:2:2:2.3:3.2-03 «Методические рекомендации. Отбор проб почв, грунтов, донных отложений, илов, осадков сточных вод, шламов промышленных сточных вод, отходов производства и потребления», утвержденные директором ООО НТФ «Хромос», директором ФБУ «Федеральный центр анализа и оценки техногенного воздействия» 01.08.2014.
<9> ГОСТ 7176-2017 «Картофель продовольственный. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.11.2017 № 1843-ст; ГОСТ Р 59024-2020 «Вода. Общие требования к отбору проб», введенный приказом Росстандарта от 10.09.2020 № 640-ст; ГОСТ Р 58595-2019 «Почвы. Отбор проб», введенный приказом Росстандарта от 10.10.2019 № 954-ст.
9.2. Образцы картофеля, не имеющие следов порчи, можно хранить при температуре плюс 2 — 6 °C в темном месте в течение 3 — 5 дней, для более продолжительного срока хранят при температуре не выше минус 16 °C.
9.3. Пробы почвы готовят в соответствии с документами по стандартизации <10>.
<10> ГОСТ ISO 11464-2015 «Качество почвы. Предварительная подготовка проб для физико-химического анализа», введенный приказом Росстандарта от 05.06.2015 № 559-ст.
Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C.
9.4. Пробы воды отбирают и хранят в темных пластиковых или стеклянных бутылях при температуре 2 — 5 °C не более 5 суток. При отборе необходима консервация пробы этиловым спиртом или ацетонитрилом в количестве 10% от объема пробы.
X. Выполнение определения
10.1 Подготовка проб воды.
Образец воды фильтруют через шприцевой мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм в хроматографическую стеклянную виалу из темного стекла вместимостью 2 см3. Пробу анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.
10.2 Подготовка проб почвы.
Образец суховоздушной почвы массой 5 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3. Добавляют 10 см3 раствора, приготовленного в соответствии с п. 8.4, перемешивают пробу на вихревом шейкере в течение 10 минут. Вносят в пробирку смесь солей для экстракции (см. п. 8.6). Закрывают крышкой и помещают на вихревой шейкер на 2 минуты. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости вращения не менее 3000 об/мин. Помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью Э15 см3 смесь сорбентов для очистки экстракта (см. п. 8.7), добавляют 4 см3 верхнего слоя экстракта, встряхивают вручную до полного смачивания порошков и перемешивают на вихревом шейкере 2 минуты. Образец повторно центрифугируют 5 минут при скорости вращения не менее 3000 об/мин. Экстракт (верхний слой в пробирке после центрифугирования) фильтруют через мембранный фильтр (размер пор не более 0,45 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.
10.3 Подготовка проб картофеля.
Навеску измельченного картофеля массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3. Добавляют 10 см3 ацетонитрила, перемешивают пробу на вихревом шейкере в течение 10 минут. Вносят в пробирку смесь солей для экстракции (см. п. 8.6). Закрывают крышкой и перемешивают на вихревом шейкере 2 минуты. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости вращения не менее 3000 об/мин. Помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 смесь сорбентов для очистки экстракта (см. п. 8.7), добавляют 6 см3 верхнего слоя экстракта, встряхивают вручную до полного смачивания порошков и перемешивают на вихревом шейкере 2 минуты. Образец повторно центрифугируют 5 минут при скорости вращения не менее 3000 об/мин. Экстракт (верхний слой в пробирке после центрифугирования) фильтруют через мембранный фильтр (размер пор не более 0,45 мкм) в темную стеклянную хроматографическую виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4. <11>
<11> Примечание: во избежание фотодеградации амисульброма рекомендуется подготовку проб до этапа переноса экстракта в темную стеклянную хроматографическую виалу производить небольшими партиями (10 — 12 образцов) без задержек между этапами.
10.4. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации при следующих режимных параметрах детектора:
- режим ионизации: электроспрей (англ. Electrospray Ionization, ESI), электростатическое напряжение плюс 5500 В (при положительной полярности для амисульброма) и минус 4500 В (при отрицательной полярности для IT-4);
- скорость сканирования: 100 мс;
- давление газовой завесы: 25 psi;
- давление газа 1: 50 psi;
- давление газа 2: 70 psi;
- температура осушающего газа: плюс 400 °C;
- тип сканирования: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, далее — MRM).
MRM переходы определяемых соединений приведены в табл. 10.1.
MRM переходы анализируемых соединений
| Наименование аналита | Материнский ион, масса/заряд (m/z) | Дочерний ион, масса/заряд (m/z) |
| Амисульбром | 466,0 | 227,0 <*> |
| 466,0 | 215,0 | |
| 466,0 | 148,0 | |
| IT-4 | 357,0 | 131,0 <*> |
| 357,0 | 277,0 | |
| 359,0 | 131,0 | |
| 359,0 | 277,0 | |
| Примечание: <*> MRM переходы для количественного расчета. | ||
- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS (триметилсиланол) эндкеппингом, зернением 4 мкм;
- температура колонки: плюс 40 °C;
- скорость потока элюента: 0,4 см3/мин;
- объем вводимой пробы: 5 мм3;
- подвижная фаза: компонент А: раствор 0,1% муравьиной кислоты (приготовлен в соответствии с п. 8.2); компонент Б: ацетонитрил.
Режим элюирования: градиентный, приведен в табл. 10.2.
Режим градиентного элюирования
10.5. Идентификацию и количественное определение амисульброма и его метаболита IT-4 осуществляют по выделению родительского и дочерних ионов с соответствующим отношением массы иона к его заряду (m/z) (см. табл. 10.1) и по временам удерживания на хроматограмме при сравнении с соответствующими стандартами.
10.6. Анализируют две параллельные пробы в условиях хроматографирования (см п. 10.4).
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Содержание амисульброма и его метаболита IT-4 в воде (Xв, мг/дм3) рассчитывают по формуле (2):
где: 1,1 — коэффициент, учитывающий разбавление пробы за счет консервации;
Cв — концентрация соединений, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
Kрв — коэффициент разбавления (если проба подвергалась разбавлению).
11.2. Содержание амисульброма и его метаболита IT-4 в почве и картофеле (Xп, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):
X_{\text{п}} = \frac{\text{С}_{\text{п}} \cdot V \cdot K_{\text{рп}}}{m \cdot f} , (3)
где: Cп — концентрация соединения, полученная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем ацетонитрила, добавленного в образец, см3 (10 см3 для картофеля, 5 см3 для почвы);
m — масса анализируемого образца, г (5 г для почвы, 10 г для картофеля);
f — степень извлечения соединения из проб. Определяется конкретной лабораторией в процессе внедрения метода. Рассчитывается как отношение полученного при измерении значения к величине добавки аналита в пробу;
Kрп — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
Для выражения содержания метаболита в эквиваленте действующего вещества полученное содержание IT-4 умножают на коэффициент 1,30, равный соотношению молекулярных масс действующего вещества и метаболита (466,3/359,2).
При необходимости представления результата в виде содержания амисульброма с учетом его метаболита IT-4, выраженное в эквиваленте действующего вещества — амисульброма, результаты суммируют.
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (4):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (4)
где: X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/дм3, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов
12.1 Результат количественного анализа представляют в виде формулы (5):
(X \pm \Delta)\text{мг}/\text{дм}^{3}(\text{мг}/\text{кг}), (5)
где: X — результат определения, мг/дм3 (мг/кг);
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/дм3 (мг/кг), рассчитанная по формуле (6):
\Delta = \delta \cdot X/100, (6)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
Если содержание амисульброма либо его метаболита IT-4 менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание амисульброма в почве и картофеле — менее 0,01 мг/кг» <12>, «содержание IT-4 в почве — менее 0,025 мг/кг» <13>, «содержание амисульброма и его метаболита IT-4 в воде — менее 0,01 мг/дм3» <14>.
<12> Примечание: 0,01 мг кг — предел обнаружения амисульброма в почве и картофеле.
<13> Примечание: 0,025 мг/кг — предел обнаружения IT-4 в почве.
<14> Примечание: 0,01 мг/дм3 — предел обнаружения амисульброма и его метаболита IT-4 в воде.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <15>. Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
<15> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Технический регламент таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011).
4. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю).
5. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
6. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
11. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
12. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
13. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
14. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
15. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
16. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
17. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».
18. ГОСТ ISO 7886-1-2011 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
19. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
20. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
21. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
22. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
23. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
24. ГОСТ 7176-77 «Картофель продовольственный. Технические условия».
25. ГОСТ 5848-73 «Кислота муравьиная. Технические условия».
26. ГОСТ Р 59024-2020 «Вода. Общие требования к отбору проб».
27. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
28. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
29. ПНД Ф 12.1:2:2:2:2.3:3.2-03 «Методические рекомендации. Отбор проб почв, грунтов, донных отложений, илов, осадков сточных вод, шламов промышленных сточных вод, отходов производства и потребления».