МУК 4.1.4031-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пириофенона в ягодах винограда, виноградном соке, сушеном винограде и вине из винограда методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля

№ МУК 4.1.4031-24Действующий акт

(утв. Роспотребнадзором 31.05.2024)

Примечание

Документ введен в действие с 31.08.2024.

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 31 мая 2024 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПИРИОФЕНОНА В ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, ВИНОГРАДНОМ СОКЕ, СУШЕНОМ ВИНОГРАДЕ И ВИНЕ ИЗ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4031-24

Дата введения 31 августа 2024 года

1. Разработаны ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Синицкая Т.А., Федорова Н.Е., Добрева Н.И., Курпединов К.С., Суслова А.В.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 31 мая 2024 г.

3. Введены впервые.

I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ГХ-МС) для определения остаточных количеств пириофенона в ягодах винограда, виноградном соке, сушеном винограде (изюм, кишмиш, авалон) и вине из винограда в диапазоне: 0,01 — 0,10 мг/кг — без учета разбавления и 0,01 — 5,00 мг/кг — с учетом разбавления в 50 раз.

1.2 МУК носят рекомендательный характер.

II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

2.1. Пириофенон — (5-хлор-2-метокси-4-метил-3-пиридинил)(4,5,6-триметокси-о-толил)-метанон <1>. Класс — бензоилпиридин. Брутто-формула C18H20ClNO5. Молекулярная масса 365,8 г/моль.

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2 Физические и химические свойства.

Белый кристаллический порошок без запаха. Температура плавления: плюс 93 — 95 °C. Давление паров при температуре плюс 25 °C — 0,0019 мПа. Растворимость в органических растворителях (при температуре плюс 20 — 25 °C): ацетон более 250 г/дм3; этилацетат более 250 г/дм3, дихлорэтан более 250 г/дм3; н-гептан 8,8 г/дм3, метанол 22,3 г/дм3, н-октанол 16,0 г/дм3, ксилол более 250 г/дм3. Растворимость в воде при температуре плюс 20 — 25 °C, pH = 6,6 — 1,56 мг/дм3. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Кow logP = 3,2. Насыпная плотность при температуре плюс 20 — 25 °C — 1,33. Стабилен при нагревании, гидролизуется при pH (4 — 9) и температуре плюс 50 °C.

2.3 Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс — более 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс — более 2000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс — более 5,18 мг/дм3 (динамическая экспозиция).

2.4 Область применения.

Пириофенон — фунгицид из группы производных бензоилпиридина, применяющийся для борьбы с мучнистой росой на винограде, плодовых ягодных кустарниках, мелкоплодных вьющихся культурах и низкорослых ягодах. Его способ фунгицидного действия заключается в ингибировании функции актина/миозина/фимбрина.

III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ

3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).

Таблица 3.1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), \pm \delta , %	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, %, (P = 0,95)
Ягоды винограда	0,01 — 5,00	50	8,1	11,3	23	32
Виноградный сок	0,01 — 5,00	50	7,6	10,7	21	30
Сушеный виноград	0,01 — 5,00	50	8,0	11,2	22	31
Вино из винограда	0,01 — 5,00	50	7,6	10,7	21	30
Примечание: диапазон определяемых концентраций приведен с учетом разбавления экстракта образца в 50 раз.

IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ

4.1 Измерения концентраций пириофенона выполняют методом ГХ-МС.

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых образцов ягод винограда, виноградного сока и сушеного винограда выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, буферных солей лимонной кислоты), очистку экстракта проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов.

Концентрирование пириофенона из проб вина проводят на патронах (картриджах) для твердофазной экстракции (далее — ТФЭ) с гидрофильно-липофильным сорбентом на основе сополимера N-винилпирролидона и дивинилбензола.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 0,01 нг. Средняя полнота извлечения: 93% (ягоды винограда), 87% (виноградный сок), 90% (сушеный виноград), 90% (вино из винограда).

4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки для сушеного винограда и вина из винограда и методом калибровки, согласованной с матрицей, для ягод винограда и виноградного сока.

V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

Таблица 5.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Газовый хроматограф, оснащенный масс-спектрометрическим детектором, предназначенный для работы с капиллярной колонкой	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Дозаторы лабораторные одноканальные механические 10 — 100, 100 — 1000, 1000 — 10000 мм3	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы аналитические	С пределом допустимой погрешности не менее +/- 0,0005 г, ГОСТ Р 53228-2008
Весы лабораторные общего назначения	С пределом допустимой погрешности не менее +/- 0,01, ГОСТ Р 53228-2008
Колбы мерные	2-го класса точности 2-5-2, 2-100-2, вместимостью 5 и 100 см3, ГОСТ 1770-74
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1-2009
Пипетки градуированные	Вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 типа 1-1(2)-2-1, 1-1(2)-2-2, 1-1(2)-2-5 и 1-1(2)-2-10, ГОСТ 29227-91
Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Цилиндр мерный	2-го класса точности 1(2-4)-10-2, 1(2-4)-50-2, 1(2-4)-100-2, вместимостью 10, 50 и 100 м3, ГОСТ 1770-74
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 5.2

Реактивы

Наименование реактивов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Пириофенон	Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95%
Ацетон	Особо чистый по ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил для ВЭЖХ	Чистота не менее 99,9%
Вода	Для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная), ГОСТ Р 52501-2005
Метиловый спирт (метанол)	Химически чистый, ГОСТ 6995-77
Гелий газообразный (сжатый)	В баллонах, марка 6.0. Высокой чистоты, с содержанием гелия не менее 99,9999%
Калий марганцовокислый (перманганат калия)	Химически чистый, ГОСТ 20490-75
Калий углекислый (карбонат калия, поташ)	Химически чистый, прокаленный, ГОСТ 4221-76
Магний сернокислый (сульфат магния)	Безводный химически чистый
Натрий хлористый (хлорид натрия)	Химически чистый, ГОСТ 4233-77
Натрий лимоннокислый двузамещенный	1,5-водный, химически чистый
Натрий лимоннокислый трехзамещенный	Чистый для анализа, ГОСТ 22280-76
Сорбент для твердофазной экстракции на основе первичных-вторичных аминов	Площадь поверхности сорбента ~ 570 м2/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм
Сорбент для очистки на основе графитизированной сажи	Площадь поверхности сорбента: ~ 100 м 2/г, размер частиц: 100 — 400 меш.
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора)	Химически чистый
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки органических растворителей.

Таблица 5.3

Вспомогательное оборудование, устройства, материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Виалы с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой	Вместимостью 1,5 — 2 см3 и 20 см3
Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом	Обеспечивающий вакуум до 10 мбар
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении	-
Колбы	Круглодонные (для упаривания) на шлифе вместимостью 25 см3, ГОСТ 25336-82
Керамические гомогенизаторы	Для пробирок на 50 см3
Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками	Вместимостью 50 и 15 см3
Ректификационная колонна	С числом теоретических тарелок не менее 30
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении	-
Холодильник водяной обратный	Типа ХШ или ХСВ, ГОСТ 25336-82
Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка	Длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм
Центрифуга лабораторная, роторная	Скорость вращения не менее 5000 об/мин
Шейкер вихревой (vortex)	Диапазон вращающего момента 0 — 2500 об/мин, диаметр орбиты 4 мм
Шприцы медицинские одноразовые	Вместимостью 2 и 5 см3, ГОСТ ISO 7886-1-2011
Морозильная камера бытового холодильника/морозильника	Обеспечивающая температуру не выше минус 18 °C, ГОСТ 26678-85
Гомогенизатор лабораторный	-
Патроны (картриджи) для твердофазной экстракции на основе сополимера N-винилпирролидона и дивинилбензола	Масса сорбента 60 мг, площадь поверхности ~ 831 м2/г, средний размер пор 82 А, средний размер частиц 30 мкм
Система для твердофазной экстракции (далее — манифолд) для работы с патронами (картриджами)	С мембранным насосом, с предельно допустимым уровнем давления в системе 74 кПа
Пробирки	П-1-15, вместимостью 15 см3, ГОСТ 1770-74
Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хромато-масс-спектрометры.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 25 °C и относительной влажности не более 80%;
выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

VIII. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов для градуировки и внесения, смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, подготовка патронов (картриджей) для ТФЭ к работе, установление градуировочной характеристики.

8.2 Очистка органических растворителей.

8.2.1. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 растворителя около 10 г перманганата калия и 30 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

8.2.2. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3 Приготовление исходного раствора и растворов внесения.

8.3.1. Исходный раствор пириофенона для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г пириофенона растворяют в 50 — 60 см3 ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более 6 месяцев.

8.3.2. Раствор № 1 пириофенона для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10,0 см3 исходного раствора с концентрацией пириофенона 100 мкг/см3 (п. 8.3.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор № 1 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более месяца.

Раствор № 1 используют для приготовления проб с внесением при подготовке градуировочных растворов, согласованных с матрицей, оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.3.3. Раствор № 2 пириофенона для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1,0 см3 исходного раствора с концентрацией пириофенона 100 мкг/см3 (п. 8.3.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор № 2 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более месяца.

8.4 Приготовление градуировочных растворов на растворителе.

8.4.1. Рабочие растворы № 3 — 7 пириофенона для градуировки (концентрации 0,01; 0,02; 0,05; 0,08 и 0,10 мкг/см3). В мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 1,0; 2,0; 5,0; 8,0 и 10,0 см3 раствора № 2 с концентрацией пириофенона 1,0 мкг/см3, приготовленного в соответствии с п. 8.3.3, разбавляют ацетоном до метки. Получают рабочие градуировочные растворы № 3 — 7 с концентрациями пириофенона 0,01; 0,02; 0,05; 0,08 и 0,10 мкг/см3 соответственно. Рабочие растворы № 3 — 7 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более 14 дней.

8.5. Приготовление рабочих градуировочных растворов, согласованных с матрицей (матричная калибровка).

Матричная калибровка рекомендуется при выявлении существенного усиления хроматографического сигнала пириофенона в экстракте образцов (более 20% от величины сигнала пириофенона в растворителе).

8.5.1. Приготовление раствора для разведения. От образца, не содержащего исследуемый компонент (далее — холостой образец), отбирают несколько навесок и проводят пробоподготовку (см. гл. 10). Получают очищенный экстракт общим объемом не менее 10 см3. Экстракт переносят в виалу на 20 см3 с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой и используют для приготовления растворов для градуировки и разведения проб. Экстракт хранят в морозильной камере при температуре минус 18 °C не более 3 месяцев <4>.

<4> Примечание: при отсутствии холостого образца допускается использование рабочей пробы. При этом, в условиях хроматографирования по п. 10.4, измеренная величина сигнала (площадь пика) исследуемого вещества в экстракте пробы, подготовленной по п. 10 не должна превышать 30% величины сигнала (площади пика) экстракта этой же пробы, подготовленной по п. 8.5.3, с внесением исследуемых веществ на нижнем градуировочном уровне.

8.5.2. Рабочий раствор № 8 пириофенона для градуировки (концентрация 0,1 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 5,0 см3 помещают 0,05 см3 раствора с концентрацией пириофенона 10,0 мкг/см3 и доводят до метки раствором для разведения, приготовленным по п. 8.5.1. Получают рабочий градуировочный раствор на матрице № 8 с концентрацией пириофенона 0,1 мкг/см3. Рабочий раствор № 8 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более 14 дней.

8.5.3. Рабочие растворы № 9 — 12 пириофенона для градуировки, согласованной с матрицей (концентрации 0,01; 0,02; 0,05 и 0,08 мкг/см3). В 4 виалы вместимостью 2,0 см3 помещают 0,1; 0,2; 0,5; 0,8 см3 градуировочного рабочего раствора № 7 с концентрацией 0,1 мкг/см3 (п. 8.5.2) и 0,9; 0,8; 0,5; 0,2 см3 раствора для разведения (п. 8.5.1) соответственно, тщательно перемешивают. Получают рабочие градуировочные растворы на матрице № 9 — 12 с концентрациями пириофенона 0,01; 0,02; 0,05 и 0,08 мкг/см3 соответственно. Рабочие растворы № 9 — 12 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более 7 дней.

8.6 Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации пириофенона в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки для проб сушеного винограда и вина из винограда по 5 растворам для градуировки (см. п. 8.4.1).

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков пириофенона, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.7. Установление градуировочной характеристики, согласованной с матрицей (матричная калибровка).

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации пириофенона в растворе (мкг/см3), устанавливают методом матричной калибровки для проб ягод винограда и виноградного сока по 5 растворам для градуировки (см. п. 8.5.2 - 8.5.3).

8.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание пириофенона в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,01 до 0,1 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):

\text{А } = \frac{|X - C|}{\text{С}} \times 100; (1)

A < B, (2)

где: A — величина расхождения, %;

X — концентрация пириофенона в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора пириофенона, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.9. Приготовление смеси солей для экстракции. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования смесь хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев) <5>.

<5> Примечание: возможно использование коммерческих наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г, содержащих 4 г MgSO4, 1 г NaCl, 1 г цитрата натрия, 0,5 г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного.

8.10 Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов.

8.10.1. Смесь сорбентов для очистки экстрактов из фруктов и овощей, не содержащих пигмент (например, сорта белого винограда, сок из белого винограда).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 помещают (150 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (900 +/- 4) мг магния сернокислого, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

8.10.2. Смесь сорбентов для очистки экстрактов из фруктов и овощей, содержащих пигмент (например, сорта красного винограда, сок из красного винограда).

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 помещают (150 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (900 +/- 4) мг магния сернокислого, (15 +/- 4) мг графитизированный сажи, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев <6>.

<6> Примечание: возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для фруктов и овощей (содержащих и не содержащих пигмент), помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см3.

8.11. Подготовка к работе патронов (картриджей) для твердофазной экстракции.

Патрон (картридж) устанавливают в аллонж (адаптер) с прямым отводом в необходимые позиции для вакуума. Сверху к патрону (картриджу) прикрепляют контейнер объемом не менее 5 см3, используемый в качестве емкости для элюента.

Концентрирующий патрон (картридж) промывают последовательно 5 см3 метанола и 5 см3 бидистиллированной (деионизированной) воды, процедуру проводят с использованием вакуума. Скорость элюирования — 1 - 2 см3/мин. Патроны (картриджи) готовят непосредственно перед использованием <7>.

<7> Примечание: при отсутствии специального устройства для работы с патронами (картриджами) (манифолда), жидкость концентрируют на патрон (картридж) и промывают с помощью шприца, со скоростью не более 2 — 3 капли/сек.

IX. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <8>.

<8> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; ГОСТ 32030-2013 «Вина столовые и виноматериалы столовые. Общие технические условия», введенный приказом Росстандарта от 27.06.2013 № 253-ст; ГОСТ 32786-2014 «Виноград столовый свежий. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.10.2014 № 1472-ст; ГОСТ 32102-2013 «Соки фруктовые концентрированные. Общие технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.06.2013 № 335-ст; ГОСТ 6882-88 «Виноград сушеный. Технические условия», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР 29.03.1988 № 888; ГОСТ 31782-2012 «Виноград свежий машинной и ручной уборки для промышленной переработки. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1735-ст.

9.2. Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в соответствии с указанием на этикетке и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Свежие образцы хранятся не более 5 дней в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед анализом образцы измельчают.

X. ВЫПОЛНЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

10.1 Ягоды винограда, виноградный сок.

10.1.1. Экстракция. Гомогенизированный образец ягод винограда или навеску виноградного сока массой (10 +/- 0,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3, вносят 10 см3 ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 сек. Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции, приготовленную по п. 8.9, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин или помещают на аппарат для встряхивания (вортекс) на 1 мин при скорости не менее 1500 об/мин.

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 5000 об/мин и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 10.1.2.

10.1.2. Очистка экстракта. Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 см3 с помощью дозатора переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.10, закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 5000 об/мин. Помещают в автосамплер хроматографа и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика пириофенона, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

10.2 Сушеный виноград (изюм, кишмиш, авалон).

10.2.1 Подготовка проб к анализу.

Сушеный виноград, массой (50 +/- 0,1) г смачивают 85 см3 дистиллированной воды и оставляют на 4 часа. Полученную массу пробы гомогенизируют.

10.2.2. Экстракция. Гомогенизированный образец сушеного винограда, приготовленный по п. 10.2.1, массой (13,5 +/- 0,1) г (эквивалентно 5,0 г сушеного винограда) помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3, вносят 10 см3 ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 сек. Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции приготовленную по п. 8.9, закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин или помещают на аппарат для встряхивания (vortex) на 1 мин при скорости не менее 1500 об/мин.

10.2.3. Очистка экстракта. Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 см3 с помощью дозатора переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.10, закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек или помещают на аппарат для встряхивания (vortex) на 1 мин при скорости не менее 1500 об/мин. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 5000 об/мин. Концентрируют в два раза. Например, аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 4 см3 с помощью механического дозатора переносят в круглодонную колбу и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 35 °C досуха. Полученный сухой остаток растворяют в 2 см3 ацетонитрила и помещают в автосамплер хроматографа и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.

10.3 Вино из винограда.

Образец вина из винограда массой (10 +/- 0,1) г пропускают через патрон (картридж), подготовленный по п. 8.11, со скоростью прохождения пробы 1 — 2 см3/мин. После нанесения пробы патрон (картридж) промывают 5 см3 бидистиллированной (деионизированной) воды. Пириофенон элюируют с патрона (картриджа) 10 см3 ацетонитрила. Полученный экстракт фильтруют через нейлоновый шприцевой фильтр (размер пор 0,45 мкм) в виалу вместимостью 2 см3 с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой. Помещают в автосамплер хроматографа и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.

10.4 Условия хроматографирования.

Измерения выполняют на ГХ-МС, предназначенном для работы с капиллярной колонкой:

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: источника плюс 230 °C, переходной линии плюс 280 °C.

Температура квадруполя: плюс 150 °C.

Температура испарителя: плюс 270 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура плюс 140 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 20 °C/мин до температуры плюс 250 °C, выдержка 8 мин, нагрев колонки со скоростью 20 °C/мин до температуры плюс 270 °C, выдержка 2 мин.

Газ-носитель (гелий):

поток в колонке 1,0 см3/мин;
деление потока — без деления.

Хроматографируемый объем: 1 мм3.

Режим сканирования — мониторинг выбранных ионов (SIM).

Характеристические ионы с m/z (отношение: масса/заряд): 350 (количественный), 184, 334.

Линейный диапазон детектирования: 0,01 — 0,1 нг.

Ориентировочное время удерживания пириофенона: 10,74 мин.

Образцы, дающие пики больше, чем градуировочный раствор пириофенона с концентрацией 0,1 мкг/см3, разбавляют не более чем в 50 раз ацетонитрилом (при использовании абсолютной калибровки) или раствором, приготовленным по п. 8.5.1.

XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

11.1. Содержание пириофенона в пробах ягод винограда и виноградном соке (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):

X = \frac{C \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (3)

где: C — концентрация пириофенона в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с усредненной величиной площади хроматографического пика пириофенона, мкг/см3;

V — объем растворителя, вносимый в пробу для экстракции (10 см3);

Кр — кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

m — масса анализируемого образца, г.

11.3 Содержание пириофенона в пробе вина из винограда (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (4):

X = \frac{C \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m} , (4)

V — объем элюата, приготовленного для хроматографирования (10 см3);

Кр — кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

m — масса анализируемого образца, г.

11.4 Содержание пириофенона в пробе сушеного винограда (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (5):

X = \frac{C \cdot V \cdot \text{К}_{\text{р}}}{m \cdot \text{К}_{\text{к}}} , (5)

V — объем растворителя, вносимый в пробу для экстракции (10 см3);

Кр — кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

m — масса анализируемого образца (в пересчете на массу сушеного винограда), г;

Кк — коэффициент концентрирования (равен 2) <9>.

<9> Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11.5 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (6):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (6)

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .

При невыполнении условия (6) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

12.1 Результат анализа представляют в виде формулы (7):

(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, (7)

где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (8):

\Delta = \delta \cdot X/100, (8)

где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание пириофенона в пробах — менее 0,01 мг/кг» <10>.

<10> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения пириофенона в ягодах винограда, виноградном соке, сушеном винограде и вине из винограда.

XIII. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <11>. Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.

<11> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».

3. Технический регламент таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011).

4. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю).

5. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

6. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».

7. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».

8. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».

9. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».

10. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».

11. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

12. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

13. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

14. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».

15. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».

16. ГОСТ 2603-79 «Ацетон. Технические условия».

17. ГОСТ 20490-75 «Калий марганцовокислый. Технические условия».

18. ГОСТ 4221-76 «Калий углекислый. Технические условия».

19. ГОСТ 4233-77 «Натрий хлористый. Технические условия».

20. ГОСТ 22280-76 «Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия».

21. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

22. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».

23. ГОСТ ISO 7886-1-2011 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».

24. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

25. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

26. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».

27. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».

28. ГОСТ 32030-2013 «Вина столовые и виноматериалы столовые. Общие технические условия».

29. ГОСТ 32786-2014 «Виноград столовый свежий. Технические условия».

30. ГОСТ 32102-2013 «Соки фруктовые концентрированные. Общие технические условия».

31. ГОСТ 6882-88 «Виноград сушеный. Технические условия».

32. ГОСТ 31782-2012 «Виноград свежий машинной и ручной уборки для промышленной переработки. Технические условия».

33. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.