МУК 4.1.4001-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тербутилазина в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)
Примечание
Документ введен в действие с 19.05.2024.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 19 февраля 2024 года
Дата введения 19 мая 2024 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕРБУТИЛАЗИНА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.4001-24
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева», Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, А.В. Попов, П.В. Рязанцев, Е.Н. Тестова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 19 февраля 2024 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) описывают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения уровня остаточных количеств тербутилазина в семенах и масле сои в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
1.3 Физико-химические свойства тербутилазина.
Название вещества <1>: [N2-трет-бутил-6-хлоро-N4-этил-1,3,5-триазин-2,4-диамин].
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
Рис. 1. Структурная формула тербутилазина
Эмпирическая формула: C9H16CIN5.
Агрегатное состояние: кристаллический порошок.
Цвет, запах: вещество белого цвета без ощутимого запаха.
Температура плавления: плюс 177 — 179 °C.
Давление паров при плюс 25 °C: 0,15 МПа.
Коэффициент распределения октанол-вода: Kow log P = 3.21.
Растворимость в воде при плюс 25 °C и pH 7,0: 8,5 мг/дм3.
Растворимость в органических растворителях: ацетон — 4 1,0; этанол — 14,0; н-октанол — 12,0; гексан — 0,36.
Тербутилазин стабилен в водных растворах в нейтральной, слабощелочной и слабокислой среде; гидролизуется сильными кислотами и щелочами. Период полураспада (ДТ50) (при плюс 20 °C) — 8 дней (pH 1) и 12 дней (pH 13).
1.4. Краткая токсикологическая характеристика: тербутилазин относится к веществам, малоопасным по острой пероральной (полулетальная доза (ЛД50) для крыс от 1590 и более 2000 мг/кг) и дермальной токсичности (полулетальная доза (ЛД50) для крыс более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам острой ингаляционной токсичности (полулетальная концентрация (ЛК50) для крыс (при экспозиции в течение 4 часов) более 5300 мг/м3 воздуха). Не вызывает раздражения глаз и кожи. Практически не токсичен для пчел.
1.5. Область применения: тербутилазин применяется для борьбы с сорными растениями в посевах кукурузы, сорго, гороха, бобов, на картофеле, на виноградниках, на плантациях фруктовых деревьев, цитрусовых, олив, кофе, сахарного тростника при нормах расхода 0,6 — 3,0 кг/га.
II. Метод измерения
2.1. Метод основан на определении тербутилазина методом капиллярной ГЖХ с использованием термоионного (азотно-фосфорного) детектора.
2.2. Определение тербутилазина проводится после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах № 1 с гидрофобным сорбентом с привитыми группами (далее — группы C16).
2.3. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
2.4. В условиях проведения анализа <2> и методики, изложенной в настоящих МУК, метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором хроматографической капиллярной колонки и условий программирования температуры.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).
III. Метрологические характеристики
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1, для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
IV. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование и материалы
4.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 4.1 - 4.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Хроматограф газовый с термоионным (азотно-фосфорным) детектором (далее — ТИД) | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I), ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,5 г, класс точности средний (III), ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2 и 2-100-2, ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10, ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2, ГОСТ 1770 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Тербутилазин, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 99,0% |
| Азот газообразный особой чистоты | ГОСТ 9293 |
| Ацетон химически чистый | ГОСТ 2603 |
| Ацетонитрил химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый чистый для анализа | ГОСТ 20490 |
| Кальций хлористый чистый для анализа | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены гидрофобным сорбентом с размером частиц 63 — 200 мкм с C16 группами (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Натрий сернокислый химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Натрий хлористый химически чистый | ГОСТ 4233 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией. | |
Вспомогательное оборудование и материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Алонж прямой стеклянный | Тип АО по ГОСТ 25336 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний в минуту |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД по ГОСТ 25336 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В по ГОСТ 25336 |
| Колбы конические стеклянные | Тип Кн по ГОСТ 25336 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К по ГОСТ 25336 |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла | Внутренний диаметр 0,32 мм, длина 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана, и толщиной пленки 0,25 мкм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость (100 — 800 см3) по ГОСТ 25336 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3 по ГОСТ 22967 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
V. Требования безопасности
5.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
5.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.
VI. Требования к квалификации операторов
6.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой, изложенной в настоящих МУК, может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Отбор проб
7.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <3>.
<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Общая часть, утвержденные Научно-техническим советом (секции земледелия и растениеводства) Минсельхоза России (протокол № 15 от 16.11.2018); ГОСТ 10852 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 18.12.1986 № 3979; ГОСТ 32190 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб», введенный в действие приказом Росстандарта от 28.11.2013 № 1254-ст; ГОСТ 31760 «Масло соевое. Технические условия», введенный в действие приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1630-ст.
7.2. Пробы семян сои подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
7.3. Пробы соевого масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.
VIII. Условия проведения измерений
8.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
IX. Подготовка к выполнению измерений
9.1. Выполнению измерений предшествуют: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах № 1 и установление градуировочной характеристики.
9.2 Подготовка органических растворителей.
9.2.1 Очистка ацетона.
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3.
Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
9.2.2 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
9.2.3 Очистка гексана.
Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
9.2.4 Приготовление бидистиллированной воды.
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
9.3 Приготовление растворов для проведения анализа.
9.3.1 Приготовление градуировочных растворов.
9.3.1.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией тербутилазина 1,0 мг/см3.
Взвешивают 50 мг тербутилазина в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 12 месяцев.
9.3.1.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией тербутилазина 100,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 6 месяцев.
9.3.1.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией тербутилазина 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 суток.
9.3.1.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией тербутилазина 5 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном.
Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 суток.
9.3.1.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией тербутилазина 2 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном.
Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 суток.
9.3.1.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией тербутилазина 1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном.
Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 суток.
9.3.1.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией тербутилазина 0,5 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном.
Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 суток.
9.3.1.8. Стандартные растворы тербутилазина с концентрацией 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы семян и масла сои.
Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 3 готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см3 и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы семян и масла сои. Стандартные растворы для внесения хранятся в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 суток.
9.4. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
9.4.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации тербутилазина в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования согласно п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
9.4.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание тербутилазина в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
A = \frac{(X - C) \times 100}{C} \leq 10 , (1)
где: X — концентрация тербутилазина контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора тербутилазина в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тербутилазина, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 9.4.1.
9.5. Подготовка концентрирующих патронов № 1 (с C16 группами) для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тербутилазина на них.
9.5.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 ацетонитрила, затем 10 см3 воды. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
9.5.2. Проверка хроматографического поведения тербутилазина на концентрирующих патронах № 1.
Из стандартного раствора тербутилазина в ацетоне, содержащего 5 мкг/см3, отбирают 1 см3, помещают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 см3 воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Исходную колбу обмывают последовательно 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 (по объему), затем двумя порциями по 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные отгонные колбы объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в испаритель хроматографа.
Определяют фракции, содержащие тербутилазин, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.
Изучение поведения тербутилазина на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
X. Проведение измерений
10.1 Семена сои.
10.1.1 Экстракция.
Образец измельченных семян сои массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3. Навеску смачивают 5 см3 воды, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 30 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в отгонную колбу объемом 250 см3 через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 40 см3 ацетонитрила и помещая на 15 мин на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают досуха при температуре не выше плюс 30 °C.
10.1.2. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
К маслянистому остатку в колбе, полученному согласно п. 10.1.1, прибавляют 2 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 50 см3 дистиллированной воды, перемешивают и фильтруют в делительную воронку объемом 250 см3 через бумажный фильтр низкой плотности.
Добавляют в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают. Тербутилазин экстрагируют тремя порциями гексана объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, помещенного в химическую воронку. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
10.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Маслянистый остаток, полученный согласно п. 10.1.2, растворяют в 1 см3 ацетонитрила, тщательно обмывая стенки колбы, прибавляют 4 см3 воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 (по объему), вносят на патрон и элюат отбрасывают.
Тербутилазин элюируют с патрона 10 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток в колбе растворяют в 1 см3 ацетона и вводят 1 мм3 пробы в хроматограф.
10.2 Масло сои.
10.2.1 Экстракция.
Образец соевого масла массой 10 г помещают в химический стакан объемом 100 см3, прибавляют 30 см3 гексана, перемешивают и переносят делительную воронку объемом 250 см3. Химический стакан обмывают последовательно еще двумя порциями гексана объемом по 30 см3 каждая и объединяют с первым смывом в делительной воронке объемом 250 см3.
Тербутилазин экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 50 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3. Верхний слой (гексан) отбрасывают.
Далее проводят очистку экстракта, как указано в п. 10.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 10.1.3.
Сухой остаток в колбе растворяют в 1 см3 ацетона и вводят 1 мм3 пробы в хроматограф.
10.3 Условия хроматографирования.
10.3.1 Хроматографическая система, включающая:
- хроматограф газовый с ТИД, снабженный приспособлениями для капиллярной колонки и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 1 до 10 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;
- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.
Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренним диаметром 0,25 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксана, и толщиной пленки 0,25 мкм.
Температура детектора плюс 300 °C, поток газа поддувки (азот) 10,0 см3/мин.
Температура испарителя плюс 250 °C, давление 204,1 кПа, деление потока 5:1, общий поток 30,0 см3/мин, поток обдува септы 3,0 см3/мин.
Температура колонки: программированный нагрев колонки, начиная с плюс 140 °C (выдержка 3 мин) по 30 град/мин до плюс 260 °C (выдержка 2 мин), режим постоянный поток. Поток газа-носителя (гелий) 2,0 см3/мин, средняя скорость 47 см/сек.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор тербутилазина с концентрацией 5,0 мкг/см3, соответственно разбавляют. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания тербутилазина в пробах.
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
11.2 Альтернативная обработка результатов.
Содержание тербутилазина в пробах рассчитывают по формуле (2) без учета полноты извлечения вещества из проб:
где: X — содержание тербутилазина в пробе, мг/кг;
A — концентрация тербутилазина, полученная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г.
XII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, формула (3):
\frac{2 \times |X_{1} - X_{2}| \times 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (3)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл/ 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. Оформление результатов
13.1 Результат анализа представляют в виде (формула 4):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (4)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг (формула 5):
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 , (5)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание тербутилазина в семенах и масле сои менее 0,05 мг/кг.»
XIV. Контроль качества результатов измерений
14.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <4>.
Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
4. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
5. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
6. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
7. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
8. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
9. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
10. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
11. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
12. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
13. ГОСТ Р 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
14. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
15. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
16. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
17. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия»
18. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
19. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
20. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
21. ГОСТ 10852 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
22. ГОСТ 31760 «Масло соевое. Технические условия».
23. ГОСТ 32190 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
24. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
25. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности.