МУК 4.1.3992-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств каптана и его метаболита тетрагидрофталимида в плодоовощной и соковой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)
Примечание
Документ введен в действие с 19.05.2024.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 19 февраля 2024 года
Дата введения 19 мая 2024 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КАПТАНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА ТЕТРАГИДРОФТАЛИМИДА В ПЛОДООВОЩНОЙ И СОКОВОЙ ПРОДУКЦИИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3992-24
Разработаны «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, С.Д. Добрев, А.А. Ивченкова, Л.В. Горячева).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 19 февраля 2024 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) с тандемным масс-спектрометрическим детектором для определения массовой концентрации каптана и его метаболита тетрагидрофталимида в плодоовощной <1> продукции (например, плоды семечковых, косточковых, цитрусовых культур, виноград, ягоды, бананы, перец, огурцы, картофель, томаты, дыня), а также в соках на их основе в диапазоне: 0,01 — 0,1 мг/кг — без учета разбавления и 0,01 — 50 мг/кг — с учетом разбавления в 500 раз.
<1> ГОСТ Р 57976 «Фрукты и овощи свежие. Термины и определения», введенный приказом Росстандарта от 22.11.2017 № 1797-ст.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Каптан — N-(трихлорметилтио)циклогекс-4-ен-1,2-дикарбоксимид <2>. Брутто-формула C9H8Cl3NO2S. Молекулярная масса 300,6.
<2> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, далее — IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Бесцветные кристаллы. Температура плавления плюс 178 °C. Давление паров < 1,3 МПа (при плюс 25 °C). Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow logP = 2,8 (при плюс 25 °C). Плотность 1,74 г/кг. Растворимость в воде 3,3 мг/дм3 (при плюс 25 °C). Растворимость в органических растворителях (в г/дм3 при плюс 25 °C): ксилол — 20, хлороформ — 70, ацетон — 21; циклогексанон — 23, диоксан — 47, бензол — 21, толуол — 6,9, изопропанол — 1,7, этанол — 2,9, диэтиловый эфир — 2,5. Медленно гидролизуется при нейтральном значении pH, быстро при щелочном. Термическая устойчивость DT50 > 4 дня (при 80 °C), 14,2 дня (при плюс 120 °C). Разлагается с образованием метаболита тетрагидрофталимида.
2.3. Каптан — контактный фунгицид широкого спектра действия. Применяется в период вегетации и при обработке готовой продукции.
2.4. Тетрагидрофталимид — метаболит каптана. Цис-1,2,3,6-тетрагидрофталимид <3>. Брутто-формула C8H9NO2. Молекулярная масса 151,16.
<3> В соответствии с классификацией IUPAC.
2.5. Физические и химические свойства тетрагидрофталимида: порошок от светло-желтого до светло-оранжевого цвета. Температура плавления плюс 136 — 140 °C.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа <4> и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<4> ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).
Метрологические характеристики каптана
Метрологические характеристики тетрагидрофталимида
IV. Метод измерений
4.1. Методика основана на определении каптана и его метаболита тетрагидрофталимида с использованием ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектором.
4.2. Экстракцию веществ из анализируемых образцов выполняют ацетонитрилом, подкисленным 0,1% муравьиной кислотой, с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия). Ацетонитрильный экстракт фильтруют через мембранный шприцевой фильтр с характеристиками согласно табл. 5.3 и вымораживают.
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 50 пг.
4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки или методом калибровки на основе матрицы.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Весы лабораторные аналитические | Предел допустимой погрешности не более +/- 0,0005 г, ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные общего назначения | Предел допустимой погрешности не более +/- 0,01 г, ГОСТ Р 53228 |
| Дозаторы лабораторные одноканальные механические | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Колбы мерные | 2-(10, 50, 500)-2, ГОСТ 1770 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1 |
| Пипетки градуированные | (1,2,3,5)-(1,2)-2-(1,2,10), ГОСТ 29227 |
| Приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Каптан | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Тетрагидрофталимид | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Аммоний муравьинокислый | Чистота не менее 99,0% |
| Ацетонитрил | Для ВЭЖХ, чистота не менее 99,9% |
| Вода для лабораторного анализа (деионизованная) | ГОСТ Р 52501 |
| Муравьиная кислота | 99,7%, чистая для анализа, ГОСТ 5848 |
| Метанол | Для ВЭЖХ, чистота не менее 99,9% |
| Азот/Аргон | В зависимости от требований производителя масс-спектрометра |
| Магний сернокислый (сульфат магния) | Безводный химически чистый |
| Натрий хлористый (хлорид натрия) | Химически чистый, ГОСТ 4233 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией. | |
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Шейкер — вихревой или орбитальный | Диапазон регулировки оборотов 50 — 200 об/мин — для орбитального (до 3000 об/мин — для вихревого), орбита до 10 мм |
| Виалы стеклянные с крышками и септами | Объем 2 см3 |
| Вставки в виалы, стеклянные | Вместимость 150, 250 или 400 мм3 |
| Груша резиновая | - |
| Мельница лабораторная (гомогенизатор) | - |
| Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками | Вместимостью 15, 50 см3 |
| Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца | Размер пор 0,45 мкм, вход Луер, корпус полипропилен, диаметр 13 — 20 мм, мембрана поливинилиденфторид (англ. Polyvinylidene Fluoride, PVDF), политетрафторэтилен (англ. Polytetrafluoroethylene, PTFE), восстановленная целлюлоза (англ. Regenerated Cellulose, RC), |
| Холодильник/морозильник бытовой | - |
| Хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS эндкеппингом, зернением 4 мкм | - |
| Центрифуга лабораторная, роторная | Скорость вращения не менее 3000 об/мин |
| Шприцы медицинские однократного применения | Вместимостью 5 см3, ГОСТ ISO 7886-1 |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы с масс-спектрометрическим детектированием.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 Мпа (150 кгс/см2) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <5>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<5> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижной фазы, установление градуировочных характеристик, отбор проб.
8.2. Приготовление раствора аммония муравьинокислого с концентрацией 1 моль/дм3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 6,3 г аммония муравьинокислого, доводят деионизованной водой до метки, перемешивают до полного растворения соли. Срок хранения раствора в герметично закрытой таре не более 90 дней.
8.3. Приготовление компонента А подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 500 см3 добавляют 200 см3 деионизованной воды, вносят 0,5 см3 раствора аммония муравьинокислого с концентрацией 1 моль/дм3, приготовленного по п. 8.2, и доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Получают раствор аммония муравьинокислого с концентрацией 1 ммоль/дм3. Хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.4. Приготовление раствора ацетонитрила, содержащего 0,1% муравьиной кислоты, для приготовления градуировочных растворов и экстракции. В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают около 200 см3 ацетонитрила, вносят 0,5 см3 муравьиной кислоты, доводят ацетонитрилом до метки.
8.5 Приготовление смеси солей для экстракции. <6>
<6> Примечание: возможно использование коммерческих наборов солей, содержащих 4 г MgSO4, 1 г NaCl; допускается замена навески 4 г MgSO4 навеской 6 г безводного Na2SO4, прокаленного при температуре плюс 550 — 600 °C.
Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого. До использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).
8.6 Кондиционирование хроматографической колонки.
Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А приготовлен по п. 8.3, компонент Б — метанол) 90 : 10 по объему и скорости подачи растворителя 0,3 см3/мин не менее 20 мин.
8.7 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.
8.7.1. Исходные растворы каптана и тетрагидрофталимида для градуировки (концентрация 1000 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 10 см3 раздельно для каждого компонента помещают по (0,0100 +/- 0,0005) г каптана или тетрагидрофталимида, добавляют 5 — 7 см3 раствора подкисленного ацетонитрила (приготовленного по п. 8.4), перемешивают, доводят подкисленным ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Растворы хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 16 °C в течение 3 месяцев. При приготовлении исходных растворов необходимо учитывать чистоту стандарта при взятии навесок.
Раствор № 1 (Микс 1) для градуировки, концентрацией 10 мкг/см3 каждого компонента, готовят объемным методом путем смешивания и разбавления исходных растворов для градуировки.
Растворы № 2 — 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления раствора № 1 для градуировки.
8.7.2. Раствор № 1 (Микс 1) для градуировки (концентрация 10 мкг/см3 каждого компонента). В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают по 0,1 см3 исходного раствора каждого компонента с концентрацией 1000 мкг/см3 (п. 8.7.1), доводят подкисленным ацетонитрилом (приготовленным по п. 8.4) до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой стеклянной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 16 °C 2 недели.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов методом «добавок».
8.7.3. Рабочие растворы № 2 — 7 для градуировки (концентрация 0,007 — 0,13 мкг/см3). В 6 мерных колб вместимостью 10 см3 помещают по 0,007; 0,01; 0,025; 0,05; 0,1; 0,13 см3 градуировочного раствора № 1 (Микс 1) с концентрацией 10,0 мкг/см3 каждого компонента (п. 8.6.2), доводят до метки подкисленным ацетонитрилом (приготовленным по п. 8.4), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 7 с концентрацией 0,007; 0,01; 0,025; 0,05; 0,1 и 0,13 мкг/см3 каждого компонента.
Растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой стеклянной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 16 °C не более недели.
8.7.4. Допускается установление градуировочной характеристики методом матричной калибровки.
Для приготовления матричных градуировочных растворов отбирают 6 навесок холостого образца по 10 г в полипропиленовые пробирки, вместимостью 50 см3. В пробирки помещают по 0,007; 0,01; 0,025; 0,05; 0,1; 0,13 см3 градуировочного раствора № 1 (Микс 1) с концентрацией 10,0 мкг/см3 каждого компонента (п. 8.6.2). Проводят пробоподготовку по п. 10.1, получают матричные градуировочные растворы № 2' — 7' с концентрацией 0,007; 0,01; 0,025; 0,05; 0,1 и 0,13 мкг/см3 каждого компонента, соответственно.
Примечание: для уменьшения объема используемого матричного градуировочного раствора допускается применение стеклянных вставок в виалы объемом 150 — 400 мм3.
Матричные градуировочные растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой стеклянной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 16 °C не более недели.
8.8 Установление градуировочных характеристик.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации каптана и тетрагидрофталимида устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки № 2 — 7 либо матричным градуировочным растворам № 2' — 7'.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.7.3 либо по п. 8.7.4 и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков каптана и тетрагидрофталимида.
8.9 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
Проводят измерения не менее двух образцов рабочих растворов для градуировки или матричных градуировочных растворов, содержание аналитов в которых соответствует диапазону концентраций от 0,007 до 0,13 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):
A = \frac{|X - C|}{C} \times 100 ; (1)
где: A — величина расхождения, %;
X — концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).
Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.
8.10 Определение степени извлечения (f).
Степень извлечения определяется при внедрении методики. Применяется при использовании абсолютной калибровки (калибровочные стандарты приготовлены на растворителе). Степень извлечения определяется методом добавок как соотношение среднего значения экспериментально найденной величины добавки к фактическому значению внесенной в образец добавки. Степень извлечения при применении матричной калибровки должна быть не менее 90%.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <7>.
<7> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; ГОСТ 32100 «Консервы. Продукция соковая. Соки, нектары и сокосодержащие напитки овощные и овощефруктовые», введенный приказом Росстандарта от 28.06.2013 № 331-ст; ГОСТ 34314 «Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 15.12.2017 № 2006-ст; ГОСТ 33499 «Груши свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 01.12.2015 № 2093-ст; ГОСТ 27572 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 24.11.2017 № 1830-ст; ГОСТ 21715 «Айва свежая. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 22.11.2013 № 1967-ст; ГОСТ 32283 «Алыча свежая. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 22.11.2013 № 1976-ст; ГОСТ 32787 «Абрикосы свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.09.2014 № 1243-ст; ГОСТ 32286 «Межгосударственный стандарт. Сливы, реализуемые в розничной торговле. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 17.12.2013 № 2298-ст; ГОСТ 33801 «Межгосударственный стандарт. Вишня и черешня свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 26.08.2016 № 951-ст; ГОСТ 34340 «Персики и нектарины свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.11.2017 № 1857-ст; ГОСТ 34325 «Перец сладкий свежий. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 14.12.2017 № 1978-ст.
9.2. Образцы плодоовощной продукции, не имеющие следов порчи, можно хранить при температуре плюс 2 — 6 °C в течение 3 — 5 дней, для более продолжительного срока хранят при температуре не выше минус 16 °C.
X. Выполнение определения
10.1. К фруктам с высоким содержанием воды (более 80%), в частности относятся плодовые семечковые, косточковые, другие фрукты — бананы, дыня.
К овощам с высоким содержанием воды (более 80%), в частности относятся перец, картофель, огурцы, томаты.
К плодам и ягодам с высоким содержанием воды (более 80%) и повышенной кислотностью, в частности относятся цитрусовые, мелкие ягоды, виноград. Выбор группы, к которой относится исследуемый объект, осуществляется в соответствии с методическими документами <8>.
<8> Приложения 3, 4 МУК 4.1.3828-22 «Многокомпонентное определение действующих веществ пестицидов и их метаболитов в пищевой продукции и продовольственном (пищевом) сырье растительного происхождения. Методы пробоподготовки», утвержденных руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 23.12.2022.
10.2. Экстракция каптана и тетрагидрофталимида из проб плодоовощной и соковой продукции.
Навеску измельченной продукции <9> или сока массой (10 +/- 0,1) г, помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3.
<9> Примечание: измельчение плодоовощной продукции проводят непосредственно перед анализом. В связи с высокой скоростью деградации каптана в тетрагидрофталимид после измельчения все операции до экстракции проводят как можно быстрее. Оставшийся измельченный образец подлежит немедленному замораживанию. При необходимости взятия навески из замороженного образца отбирают навеску при неполном его размораживании, как только процедура становится возможной.
В пробирку вносят 10 см3 ацетонитрила, содержащего 0,1% муравьиной кислоты (подготовленного по п. 8.4), ставят на вихревой шейкер на 15 мин. Вносят в каждую пробирку смесь солей (приготовленную по п. 8.5), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают вручную в течение 1 мин.
Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения не менее 3000 об/мин. Отбирают 4 — 5 см3 верхнего (ацетонитрильного) слоя, фильтруют через мембранный фильтр (характеристики по табл. 5.3) в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 и помещают в морозильную камеру не менее чем на 3 — 4 часа при температуре не выше минус 16 °C.
Отбирают верхний слой жидкости в виалу <10> и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.
<10> Примечание: отбор верхнего слоя жидкости в виалу необходимо проводить до размораживания пробы.
10.3. Измерения выполняют на ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации при следующих режимных параметрах <11>:
<11> Примечание: параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
- режим ионизации: электроспрей (англ. Electrospray Ionization, ESI), электростатическое напряжение плюс 5500 В (при положительной полярности для каптана) и минус 4500 В (при отрицательной полярности для тетрагидрофталимида);
- полярность: положительная (для каптана) и отрицательная (для тетрагидрофталимида);
- режим работы: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, далее — MRM), параметры масс-спектрометрического детектора приведены в табл. 10.1;
Параметры масс-спектрометрического детектора
| Наименование аналита | Материнский ион, масса/заряд (m/z) | Напряжение на фрагментаторе/Потенциал декластеризации (DP), В | Дочерний ион, масса/заряд (m/z) | Энергия соударения (CE), В |
| Каптан | 317 <*> | 65 | 264,0 | 17 |
| 319 | 65 | 266,0 | 18 | |
| 300 | 65 | 264,0 | 12 | |
| 300 | 65 | 235,9 | 18 | |
| Тетрагидрофталимид | 150 <*> | -60 | 96 | -30 |
| 150 | -60 | 42 | -60 | |
| Примечание: <*> — MRM переходы для количественного расчета. | ||||
- скорость сканирования: 100 мс;
- давление газовой завесы: 172,37 кПа;
- давление газа 1: 344,74 кПа;
- давление газа 2: 482,63 кПа;
- температура осушающего газа: плюс 300 °C.
- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS эндкеппингом, зернением 4 мкм;
- температура колонки: плюс 40 °C;
- скорость потока элюента: 0,3 см3/мин;
- объем вводимой пробы: 5 мм3;
- подвижная фаза: компонент А: 1 мМ формиат аммония (приготовлен по п. 8.3); компонент Б: метанол.
Режим элюирования: градиентный, приведен в табл. 10.2.
| Компонент А, % | Суммарный расход элюентов, см3/мин | Время, мин |
|---|---|---|
| 90 | 0,3 | 0 |
| 5 | 0,3 | 3,5 |
| 5 | 0,3 | 7,0 |
| 90 | 0,3 | 8,0 |
| 90 | 0,3 | 11,0 |
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Содержание каптана и тетрагидрофталимида, в пробах плодоовощной и соковой продукции (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):
X = \frac{C \cdot V \cdot K_{p}}{m} , (3)
где: C — концентрация вещества, определенная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем ацетонитрила, добавленного в анализируемую пробу, см3 (10 см3);
m — масса анализируемого образца, г;
f — полнота извлечения аналита (включается в формулу расчета при использовании абсолютной градуировки);
Kр — кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
Для выражения содержания метаболита в эквиваленте действующего вещества полученное содержание тетрагидрофталимида умножают на коэффициент, равный соотношению молекулярных масс действующего вещества и метаболита (300,6/151,16 = 1,99).
При необходимости представления результата в виде содержания каптана с учетом его метаболита тетрагидрофталимида, выраженное в эквиваленте действующего вещества — каптана, результаты суммируют.
Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (4):
\frac{2 \times |X_{1} - X_{2}| \times 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (4)
где: X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1 и 3.2), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов
12.1 Результат количественного анализа представляют в виде формулы (5):
(X \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} , (5)
где: X — результат определения, мг/кг,
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):
\Delta = \delta \cdot X100 , (6)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, (табл. 3.1 и 3.2), %.
Если содержание каптана либо тетрагидрофталимида менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание каптана в пробах — менее 0,01 мг/кг» <12> либо «содержание тетрагидрофталимида в пробах — менее 0,01 мг/кг» <13>.
<12> Примечание: 0,01 мг/кг — предел обнаружения каптана в плодоовощной и соковой продукции.
<13> Примечание: 0,01 мг/кг — предел обнаружения тетрагидрофталимида в плодоовощной и соковой продукции.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <14>. Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.
<14> ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
3. МУК 4.1.3828-22 «Многокомпонентное определение действующих веществ пестицидов и их метаболитов в пищевой продукции растительного происхождения и сырье. Методы пробоподготовки».
4. ГОСТ Р 57976 «Фрукты и овощи свежие. Термины и определения».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
6. ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
11. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
14. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
15. ГОСТ OIML R 111-1 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
16. ГОСТ 4166 «Натрий сернокислый. Технические условия».
17. ГОСТ 4233 «Натрий хлористый. Технические условия».
18. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
19. ГОСТ 26678 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
20. ГОСТ ISO 7886-1 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
21. ГОСТ 12.1.007 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
22. ГОСТ 12.1.019 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
23. ГОСТ 12.1.004 «Пожарная безопасность. Общие требования».
24. ГОСТ 12.4.009 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
25. ГОСТ 32100 «Консервы. Продукция соковая. Соки, нектары и сокосодержащие напитки овощные и овощефруктовые».
26. ГОСТ 34314 «Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия».
27. ГОСТ 33499 «Груши свежие. Технические условия».
28. ГОСТ 27572 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия».
29. ГОСТ 21715 «Айва свежая. Технические условия».
30. ГОСТ 32283 «Алыча свежая. Технические условия».
31. ГОСТ 32787 «Абрикосы свежие. Технические условия».
32. ГОСТ 32286 «Сливы, реализуемые в розничной торговле. Технические условия».
33. ГОСТ 33801 «Вишня и черешня свежие. Технические условия».
34. ГОСТ 34340 «Персики и нектарины свежие. Технические условия».
35. ГОСТ 34325 «Перец сладкий свежий. Технические условия».
36. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.