МУК 4.1.3990-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств хлорорганических пестицидов в отдельных видах пищевой продукции и продовольственного (пищевого) сырья животного происхождения методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)
Примечание
Документ введен в действие с 19.08.2024.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 19 февраля 2024 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В ОТДЕЛЬНЫХ ВИДАХ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ И ПРОДОВОЛЬСТВЕННОГО (ПИЩЕВОГО) СЫРЬЯ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3990-24
Дата введения 19 августа 2024 года
Методические указания ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, Н.И. Добрева, Л.В. Горячева, М.В. Ларькина, А.В. Суслова).
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) описывают порядок применения метода газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ГХ-МС) для определения в отдельных видах пищевой продукции и продовольственного сырья животного происхождения массовой концентрации 4,4'-дихлордифенилтрихлорэтана (далее — 4,4'-ДДТ), его метаболитов 4,4'-диэтилдифенилдихлорэтана (далее — 4,4'-ДДД), 4,4'-дихлордифенилдихлорэтилена (далее — 4,4'-ДДЭ); изомеров (альфа-, бета- и гамма-) гексахлорциклогексана (далее — \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} ). Диапазоны измеряемых концентраций 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДЭ, 4,4'-ДДД, \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} для продукции животного происхождения 0,01 — 0,1 мг/кг без учета разбавления, (0,01 — 1) мг/кг с учетом разбавления в 10 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Характеристика веществ и основные физико-химические свойства представлены в табл. 2.1.
Характеристика веществ, основные физико-химические свойства
2.2 Краткая токсикологическая характеристика
\gamma - \text{ГХЦГ} : острая пероральная токсичность (LD50) 88 — 270 мг/кг (крысы), 59 — 246 мг/кг (мыши); острая дермальная токсичность (LD50) 900 — 1000 мг/кг (крысы); острая ингаляционная токсичность (LD50) для крыс (4 ч) 1,56 мг/дм3 воздуха (аэрозоль).
4,4'-ДДТ: острая пероральная токсичность (LD50) 113 — 118 мг/кг (крысы), 150 — 300 мг/кг (мыши), 300 мг/кг (кролики), 500 — 750 мг/кг (собаки); острая дермальная токсичность (LD50) 2510 мг/кг (крысы, самки).
2.3. 4,4'-ДДТ — стойкий несистемный инсектицид, обладающий контактным и кишечным действием. 4,4'-ДДД и 4,4'-ДДЭ являются метаболитами 4,4'-ДДТ в организме млекопитающих и окружающей среде. ДДТ и его метаболиты устойчивы в окружающей среде, а также к полному разложению микроорганизмами; подвержены фотохимическому разложению. Стойкость 4,4'-ДДТ значительно ниже в тропическом климате, чем в умеренном (несколько месяцев по сравнению с годами). 4,4'-ДДТ отнесен к стойким загрязнителям окружающей среды, его применение в сельскохозяйственной сфере запрещено или ограничено во многих странах мира.
\gamma - \text{ГХЦГ} — инсектицид, обладающий контактным, кишечным и респираторным действием.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа <1> и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1, для соответствующих диапазонов концентраций.
<1> ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)).
Метрологические характеристики
| Анализируемый объект, определяемое вещество | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), \pm \delta , % | Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , % | Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , % | Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, % | Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % (P = 0,95) |
| Группа А. Жидкие продукты с высоким содержанием воды (см. п. 10.1.1) | ||||||
| \alpha - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 35 | 6,9 | 9,7 | 19 | 27 |
| \beta - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 40 | 7,0 | 9,8 | 20 | 27 |
| \gamma - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 35 | 6,7 | 9,4 | 19 | 26 |
| 4,4'-ДДТ | 0,01 — 1,0 | 40 | 6,9 | 9,7 | 19 | 27 |
| 4,4'-ДДД | 0,01 — 1,0 | 40 | 7,2 | 10,0 | 20 | 28 |
| 4,4'-ДДЭ | 0,01 — 1,0 | 35 | 6,7 | 9,4 | 19 | 26 |
| Группа Б. Вязкие и пастообразные продукты, имеющие мелкодисперсную структуру (см. п. 10.1.2) | ||||||
| \alpha - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 40 | 7,1 | 10,0 | 20 | 28 |
| \beta - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 40 | 7,3 | 10,2 | 20 | 29 |
| \gamma - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 45 | 6,9 | 9,7 | 19 | 27 |
| 4,4'-ДДТ | 0,01 — 1,0 | 50 | 6,9 | 9,6 | 19 | 27 |
| 4,4'-ДДД | 0,01 — 1,0 | 50 | 7,0 | 9,8 | 20 | 27 |
| 4,4'-ДДЭ | 0,01 — 1,0 | 35 | 7,3 | 10,2 | 20 | 29 |
| Группа В. Полутвердые и твердые продукты животного происхождения, имеющие высокое содержание воды и (или) жира (не сыпучие) (см. п. 10.1.3) | ||||||
| \alpha - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 40 | 8,0 | 11,2 | 22 | 31 |
| \beta - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 35 | 7,5 | 10,4 | 21 | 29 |
| \gamma - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 40 | 7,6 | 10,7 | 21 | 30 |
| 4,4'-ДДТ | 0,01 — 1,0 | 50 | 7,5 | 10,5 | 21 | 29 |
| 4,4-ДДД | 0,01 — 1,0 | 40 | 7,6 | 10,6 | 21 | 30 |
| 4,4'-ДДЭ | 0,01 — 1,0 | 35 | 7,2 | 10,1 | 20 | 28 |
| Группа Г. Сухие продукты животного происхождения (высушенные или сублимированные), и (или) сыпучие порошкообразные продукты с низким содержанием воды (см. п. 10.1.4) | ||||||
| \alpha - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 35 | 6,7 | 9,4 | 19 | 26 |
| \beta - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 35 | 7,2 | 10,0 | 20 | 28 |
| \gamma - \text{ГХЦГ} | 0,01 — 1,0 | 35 | 7,6 | 10,7 | 21 | 30 |
| 4,4'-ДДТ | 0,01 — 1,0 | 40 | 6,8 | 9,6 | 19 | 27 |
| 4,4'-ДДД | 0,01 — 1,0 | 40 | 7,1 | 10,0 | 20 | 28 |
| 4,4'-ДДЭ | 0,01 — 1,0 | 35 | 7,3 | 10,2 | 20 | 29 |
| Примечание: диапазон определяемых концентраций приведен с учетом разбавления экстракта образца в 10 раз. | ||||||
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовых концентраций \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} , 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ выполняют методом ГХ-МС.
4.2. Экстракцию веществ из анализируемых образцов выполняют методом матричной твердофазной дисперсии (пробу диспергируют на твердый сорбент флоризил и элюируют вещества при помощи смеси растворителей), очистку элюата проводят концентрированной серной кислотой.
4.3. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| ГХ-МС, оснащенный автоматическим пробоотборником, предназначенным для работы с капиллярной колонкой, испарителем с программируемой температурой | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | С пределом допустимой погрешности 0,0005 г, ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные общего назначения | С пределом допустимой погрешности +/- 0,01 г, ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные | Вместимостью 10, 100 и 500 см3 типа 2-(10, 100, 500)-2, ГОСТ 1770 |
| Цилиндр мерный | 2-(20, 250)-2, ГОСТ 1770 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1 |
| Микрошприц | Вместимостью 10 мм3, ГОСТ ISO 7886-1 |
| Дозаторы лабораторные одноканальные механические | Диапазон измерений 10 — 100, 100 — 1000 мм3. Внесены в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Пипетки градуированные | Вместимостью 1 и 10 см3 типа 1-1(2)-2-1, 1-1(2)-2-10, ГОСТ 29227 |
| Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| \alpha - \text{ГХЦГ} | Содержание основного компонента не менее 95% |
| \beta - \text{ГХЦГ} | Содержание основного компонента не менее 95% |
| \gamma - \text{ГХЦГ} | Содержание основного компонента не менее 95% |
| 4,4'-ДДТ | Содержание основного компонента не менее 95% |
| 4,4'-ДДД | Содержание основного компонента не менее 95% |
| 4,4'-ДДЭ | Содержание основного компонента не менее 95% |
| Ацетон | Особо чистый, ГОСТ 2603 |
| н-Гексан | Чистота не менее 95% |
| Хлористый метилен (дихлорметан) | Химически чистый, массовая доля хлористого метилена не менее 99,8% |
| Вода | Для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная), ГОСТ Р 52501 |
| Гелий газообразный (сжатый) | В баллонах, марка «6». Высокой чистоты, с содержанием гелия не менее 99,9999% |
| Калий марганцовокислый (перманганат калия) | Химически чистый, ГОСТ 20490 |
| Калий углекислый (карбонат калия, поташ) | Химически чистый прокаленный, ГОСТ 4221 |
| Кислота серная концентрированная | Химически чистая, ГОСТ 4204 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силиката магния (флоризил) | Фракция 60 — 100 меш |
| Натрия гидроокись | Химически чистый, ГОСТ 4328 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки органических растворителей. | |
Вспомогательные устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Виалы хроматографические с крышкой | Вместимостью 1,5 — 2 см3, крышка с септой с фторопластовым покрытием |
| Шприцы медицинские одноразовые | Вместимостью 10, 12, 20 см3, ГОСТ ISO 7886-1 |
| Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками | Вместимостью 50 см3 |
| Шейкер вихревой (типа вортекс) | Скорость оборотов до 2000 об/мин |
| Индикаторная бумага универсальная | pH 0 — 12 или 1 — 14 |
| Ректификационная колонна | С числом теоретических тарелок не менее 30 |
| Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении | - |
| Фильтры мембранные | Для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,22 — 0,45 мкм, мембрана гидрофильная |
| Колбы конические круглодонные (для упаривания) на шлифе | Вместимостью 50 см3, ГОСТ 25336, типы К и Гр |
| Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар | - |
| Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка | Длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм; неподвижная фаза: поперечно-связанный и молекулярно-сшитый полимер (14%-цианопропил-фенил)-метилполисилоксан, толщина пленки неподвижной фазы 0,25 мкм |
| Центрифуга лабораторная с охлаждением роторная | Максимальная скорость вращения не менее 5000 об/мин |
| Эксикатор | ГОСТ 25336 |
| Манифолд для тведофазной экстракции в комплекте с вакуумным насосом | - |
| Холодильная/морозильная камера | ГОСТ 26678 |
| Баня ультразвуковая | С рабочей частотой 35 кГц |
| Баня водяная | - |
| Лабораторная мельница | - |
| Гомогенизатор лабораторный | - |
| Фарфоровые ступка и пестик | Ступка диаметром 140 мм и пестик № 1 высотой 90 мм, ГОСТ 9147 |
| Примечание: допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. Вместо фарфоровых ступки и пестика допускается использование агатовых и стеклянных (кварцевых). | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<2> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на ГХ-МС, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 25 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на ГХ-МС проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление исходных растворов и растворов для построения калибровки и внесения, установление градуировочных характеристик, подготовка проб к анализу, подготовка патронов (мини-колонок) к работе, отбор проб.
8.2 Очистка органических растворителей
8.2.1. Ацетон. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (поташом) или подвергают ректификационной перегонке на колонке с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят в стеклянной емкости не более 2 недель.
8.2.2. н-Гексан. Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод; перегоняют над прокаленным карбонатом калия. Хранят в стеклянной емкости не более 2 недель.
8.2.3. Дихлорметан (хлористый метилен). Промывают концентрированной серной кислотой, нейтрализуют щелочью и промывают водой. Сушат над прокаленным карбонатом калия (поташом) и перегоняют. Хранят в емкости из темного стекла не более 2 недель.
8.3. Сорбент флоризил перед употреблением выдерживают не менее 5 часов при температуре плюс 150 °C. Хранят в герметично закрывающейся емкости либо эксикаторе.
8.4. Приготовление раствора для элюирования. В колбу вместимостью 500 см3 помещают 250 см3 н-гексана, отмеренного при помощи мерного цилиндра. Доводят до метки дихлорметаном, встряхивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят при температуре плюс 15 — 25 °C не более 3 месяцев.
8.5. Приготовление исходных растворов. Исходные растворы \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} , 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4-ДДЭ для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г каждого вещества, растворяют в 20 — 30 см3 ацетона <3>, перемешивают, доводят до метки гексаном, вновь перемешивают. Растворы готовят при температуре плюс 20 — 25 °C и хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 6 месяцев.
<3> Примечание: исследуемые вещества имеют высокую растворимость в ацетоне.
8.5.1. Раствор № 1 смесь \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} , 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ (далее — смесь ХОП) для градуировки и внесения (концентрация 1 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают по 1 см3 исходных растворов каждого вещества с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 8.5), доводят гексаном до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 — 25 °C и хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 6 месяцев.
Раствор № 1 смеси ХОП используют для приготовления градуировочных растворов и проб с внесением для контроля качества результатов методом стандартной добавки.
8.5.2. Растворы № 2 — 3 смеси ХОП для градуировки и внесения (концентрация 0,1 и 0,2 мкг/см3). В мерные колбы вместимостью 10 см3 помещают по 1 и 2 см3 раствора № 1 с концентрацией 1 мкг/см3 (п. 8.5.1), доводят гексаном до метки, перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 3 с концентрацией веществ 0,1 и 0,2 мкг/см3, соответственно.
Градуировочные растворы № 2 — 3 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более недели.
8.5.3. Растворы № 4 — 7 смеси ХОП для градуировки (концентрация 0,005; 0,01; 0,02; 0,05 мкг/см3). В 4 мерные колбы вместимостью 10 см3 помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 см3 раствора № 2 с концентрацией 0,1 мкг/см3 (п. 8.5.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 4 — 7 с концентрацией веществ 0,005; 0,01; 0,02 и 0,05 мкг/см3 соответственно.
Градуировочные растворы № 4 — 7 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более недели.
8.6 Установление градуировочных характеристик
Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика от концентрации каждого вещества, устанавливают методом калибровки по 6 градуировочным растворам № 2 — 7 для \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} , 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДЦЭ.
В инжектор хроматографа вводят 1 мм3 каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.5, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.5. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков каждого вещества смеси ХОП.
8.7 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух градуировочных растворов, содержание определяемых веществ в которых входит в диапазон линейности градуировочной характеристики: от 0,01 до 0,1 мкг/см3 для \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} , 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):
A = \frac{|X - C|}{C} \cdot 100; (1)
где A — величина расхождения, %;
X — концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).
Если полученная величина превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов исследуемых веществ, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 8.5.
8.8. Подготовка патрона (мини-колонки) для экстракции методом матричной твердофазной дисперсии (далее — МТФД). В качестве патрона для МТФД используют шприц вместимостью 10 — 20 см3. На выход шприца в качестве фритты вставляют стекловату и мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 — 0,45 мм для удержания сорбента и подготовленного образца в виде мелкодисперсного сыпучего порошка. На дно колонки помещают (1 +/- 0,01) г флоризила, подготовленного по п. 8.3.
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с действующими методическими документами на продукцию.
9.2. Отобранные образцы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в соответствии с указанием на этикетке и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C.
X. Выполнение определения
10.1 Группы продукции и пищевого сырья животного происхождения по их структурно-механическим свойствам
10.1.1 Группа А. Жидкие продукты с высоким содержанием воды. Состав группы:
- сырое молоко, сырое обезжиренное молоко, сырые сливки;
- питьевое молоко и питьевые сливки, пахта, сыворотка молочная, молочный напиток.
10.1.2 Группа Б. Вязкие и пастообразные продукты, имеющие мелкодисперсную структуру. Состав группы:
- яйца и жидкие яичные продукты (меланж, белок, желток);
- жир-сырец убойных животных (охлажденный, замороженный), шпик свиной и продукты из него;
- кисломолочные продукты (айран, ацидофилин, варенец, кефир, кумыс и кумысный продукт, йогурт, простокваша, ряженка), сметана, молочные составные продукты на их основе, продукты, термически обработанные после сквашивания;
- концентрированные и сгущенные с сахаром молоко, сливки, пахта, сыворотка, молочные продукты, молочные составные продукты на их основе, молоко сгущенное стерилизованное, молочные консервы и молочные составные консервы;
- мороженое молочное, сливочное, пломбир, с растительным жиром; торты, пирожные, десерты из мороженого;
- масло, паста масляная из коровьего молока, молочный жир; сливочно-растительный спред, сливочно-растительная топленая смесь.
10.1.3. Группа В. Полутвердые и твердые продукты животного происхождения, имеющие высокое содержание воды и (или) жира (не сыпучие). Состав группы:
- мясо, в том числе полуфабрикаты, парное, охлажденное, подмороженное, замороженное (все виды убойных, промысловых и диких животных); колбасные изделия, продукты из мяса всех видов убойных животных, кулинарные изделия из мяса; консервы из мяса, мясорастительные;
- субпродукты убойных животных охлажденные, замороженные (печень, почки, язык, мозги, сердце), шкурка свиная, кровь пищевая и продукты ее переработки; продукты мясные с использованием субпродуктов (например, паштеты, ливерные колбасы, зельцы, студни) и крови. Изделия вареные с использованием субпродуктов, крови (хлебы, колбасы, студни, ливерные колбасы, заливные блюда); консервы из субпродуктов, в том числе паштетные (все виды убойных и промысловых животных);
- мясо птицы, в том числе полуфабрикаты, охлажденное, замороженное (все виды птицы для убоя, пернатой дичи); колбасные изделия, копчености, кулинарные изделия с использованием мяса птицы; субпродукты, полуфабрикаты из субпродуктов птицы; мясопродукты с использованием субпродуктов птицы, шкурки (например, паштеты, ливерные колбасы); консервы птичьи (из мяса птицы и мясорастительные, в т.ч. паштетные и фаршевые);
- сыры и сырные продукты (сверхтвердые, твердые, полутвердые, мягкие, рассольные), плавленые, сывороточно-альбуминные, сухие, сырные пасты, соусы; творог, творожная масса, зерненый творог, сырок, творожные продукты, молочные составные продукты на их основе, альбумин молочный и продукты на его основе, продукты пастообразные молочные белковые, в т.ч. термически обработанные после сквашивания.
10.1.4. Группа Г. Сухие продукты животного происхождения (высушенные или сублимированные) и (или) сыпучие порошкообразные продукты с низким содержанием воды. Состав группы:
- мясо сублимационной и тепловой сушки; продукты из мяса птицы сублимационной и тепловой сушки;
- яичные продукты сухие (яичные порошок, белок, желток); яичный белок (альбумин) сухой;
- продукты молочные, молочные составные сухие, сублимированные (молоко, сливки, кисломолочные продукты, напитки, смеси для мороженого, сыворотка, пахта, обезжиренное молоко); концентраты молочных белков, лактулоза, сахар молочный, казеин, казеинаты, гидролизаты молочных белков; питательные среды сухие на молочной основе для культивирования заквасочной и пробиотической микрофлоры.
10.2 Предварительная подготовка образцов к испытаниям
10.2.1. Группа А. Жидкие продукты с высоким содержанием воды. Образцы жидкой продукции тщательно взбалтывают и перемешивают. В фарфоровую ступку помещают (10 +/- 0,01) г предварительно гомогенизированного образца и смешивают с (30 +/- 0,03) г сорбента флоризила, постепенно вводя сорбент в пробу при постоянном перемешивании и гомогенизации, до получения мелкодисперсного сыпучего порошка. Полученный порошок помещают в контейнер с плотно завинчивающейся крышкой и хранят до проведения анализа в холодильнике при температуре плюс 4 — 6 °C не более 1 месяца. Для долгосрочного хранения образец помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не менее минус 18 °C.
10.2.2. Группа Б. Вязкие и пастообразные продукты, имеющие мелкодисперсную структуру. Образцы вязкой и пастообразной консистенции тщательно перемешивают и гомогенизируют. В фарфоровую (агатовую или стеклянную) ступку помещают (10 +/- 0,01) г предварительно гомогенизированного образца и смешивают с (20 +/- 0,02) г сорбента флоризила, постепенно вводя сорбент в пробу при постоянном перемешивании и гомогенизации, до получения мелкодисперсного сыпучего порошка. Полученный порошок помещают в контейнер с плотно завинчивающейся крышкой и хранят до проведения анализа в холодильнике при температуре плюс 4 — 6 °C не более 1 месяца. Для долгосрочного хранения образец помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не менее минус 18 °C.
10.2.3. Группа В. Полутвердые и твердые продукты животного происхождения, имеющие высокое содержание воды и (или) жира (не сыпучие). Образцы продукции, имеющие полутвердую и твердую консистенцию, измельчают до мелкодисперсного состояния, тщательно перемешивают и гомогенизируют. В фарфоровую ступку помещают (10 +/- 0,01) г предварительно гомогенизированного образца и смешивают с (20 +/- 0,02) г сорбента флоризила, постепенно вводя сорбент в пробу при постоянном перемешивании и гомогенизации, до получения мелкодисперсного сыпучего порошка. Полученный порошок помещают в контейнер с плотно завинчивающейся крышкой и хранят до проведения анализа в холодильнике при температуре плюс 4 — 6 °C не более 1 месяца. Для долгосрочного хранения образец помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не менее минус 18 °C.
10.2.4. Группа Г. Сухие продукты животного происхождения (высушенные или сублимированные) и (или) сыпучие порошкообразные продукты с низким содержанием воды. Образцы сухих продуктов предварительно восстанавливают в соответствии с указанием на этикетке либо в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Далее восстановленный продукт (массой 10 г) подвергают диспергированию по п. 10.2.1 - 10.2.3 (в зависимости от структурно-механических свойств образца) для получения мелкодисперсного сыпучего порошка.
Примечание: для смешивания и гомогенизации образца и сорбента допускается использование агатовой или стеклянной ступки необходимых размеров.
10.3 МТФД экстракция
В мини-колонку, подготовленную по п. 8.8, помещают аликвоту образца в виде мелкодисперсного сыпучего порошка, приготовленного по п. 10.2, содержащую 1 г исследуемой продукции. Для группы А навеска, содержащая 1 г исследуемой продукции, составляет (4 +/- 0,04) г, для группы Б и В — (3 +/- 0,03) г, для группы Г — аликвоту образца определяют в зависимости от структурно-механических свойств исследуемой восстановленной продукции. Постукиванием слегка утрамбовывают содержимое колонки для удаления воздушных карманов.
Элюируют хлорорганические пестициды 15 см3 смеси растворителей гексан/дихлорметан (1:1), приготовленной по п. 8.3, со скоростью 1 — 2 капли в секунду, применяя небольшой вакуум при помощи плунжера шприца. Возможно использование устройства (манифолда) в комплекте с вакуумным насосом, при этом скорость элюирования должна составлять 1 — 2 см3/мин. Элюат собирают в круглодонную колбу вместимостью 50 см3. При наличии у ротационного вакуумного испарителя функции контроля и регулировки вакуума отгоняют из элюата дихлорметан, при отсутствии такой функции упаривают 2/3 объема элюата при температуре водяной бани не более плюс 35 °C. Остаток элюата переносят в полипропиленовую центрифужную пробирку на 50 см3 с завинчивающейся крышкой. Промывают круглодонную колбу 2 — 3 см3 гексана и объединяют с элюатом.
10.4 Очистка экстрактов
К объединенному элюату добавляют 5 — 6 см3 серной кислоты концентрированной. Помещают на аппарат для встряхивания (вортекс) на 10 мин при среднеинтенсивном режиме перемешивания. Центрифугируют 5 — 10 мин при скорости вращения 2500 — 3000 об/мин при температуре 20 °C до получения четкой поверхности раздела жидкостей. Отбирают верхний гексановый слой в остродонную колбу вместимостью 50 см3. В центрифужную пробирку с кислотой добавляют 5 см3 гексана и повторяют процедуру встряхивания, центрифугирования и отбора гексанового слоя. Процедуру проводят несколько раз до получения бесцветного прозрачного экстракта гексана с нейтральным pH. Объединенный очищенный экстракт отдувают досуха при помощи ротационного вакуумного испарителя или в потоке чистого газа, разводят в 1 — 10 см3 гексана, при необходимости фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 — 0,45 мм, помещают в виалу и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.5.
Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков веществ, с помощью градуировочного графика определяют концентрации компонентов в хроматографируемом растворе.
10.5. Измерения выполняют на ГХ-МС: квадруполь с источником электронной ионизации при следующих режимных параметрах масс-спектрометрического детектора:
- тип ионизации: электронная ионизация;
- температура источника плюс 200 °C;
- температура переходной линии плюс 250 °C;
- время задержки растворителя 7 мин;
- режим работы: регистрация выбранных ионов (SIM).
Параметры регистрации выбранных ионов (SIM) приведены в табл. 10.1.
Параметры регистрации выбранных ионов масс-спектрометрического детектора
10.6 Условия хроматографирования <4>
<4> Примечание: параметры хроматографирования могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, неподвижная фаза: поперечно-связанный и молекулярно-сшитый полимер (14%-цианопропил-фенил)-метилполисилоксан, толщина пленки неподвижной фазы 0,25 мкм; газ-носитель — гелий, поток газа-носителя — 1,2 см3/мин.
Режим испарителя: объем вводимой пробы 1 мм3, температура испарителя плюс 250 °C.
Режим термостата колонки: начальная температура плюс 80 °C, выдержка 1 мин; нагрев колонки со скоростью плюс 30 °C/мин до температуры плюс 200 °C, выдержка 5 мин; нагрев со скоростью плюс 20 °C/мин до температуры плюс 280 °C, выдержка 3 мин.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией вещества 0,1 мкг/см3, разбавляют гексаном (не более чем в 10 раз).
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Содержание веществ в пробах (X1, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):
X_{1} = \frac{C \cdot V \cdot K_{p}}{m} , (3)
где C — концентрация вещества, полученная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3 (1 см3);
m — масса аликвотная анализируемого образца, г (1 г);
Kр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
11.2 Содержание веществ в пробах в пересчете на жир (X2, мг/кг) рассчитывают по формуле (4):
X_{1} = \frac{C \cdot V \cdot K_{p} \cdot 100}{m \cdot \text{Р}} , (4)
где C — концентрация вещества, полученная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем экстрагента, подготовленного для хроматографирования, см3 (1 см3);
m — масса аликвотная анализируемого образца продукции, г (1 г);
P — составная часть жира, содержащаяся в анализируемом образце, %;
Kр — коэффициент разбавления (если экстракт разбавляли перед хроматографированием).
При необходимости выражения содержания веществ в исходном сухом продукте результат корректируется (умножается) введением в формулу 1 и 3 коэффициента восстановления, равного отношению массы восстановленного продукта к содержанию в нем сухого продукта.
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условию (5):
\frac{2|X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq r, (5)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (5) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат анализа представляют в виде формулы (6):
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, (6)
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (7):
\Delta = \frac{\delta \cdot \text{Х}}{100} , (7)
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} , 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ менее 0,01 мг/кг» <5>.
<5> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения концентрации \alpha - \text{ГХЦГ} , \beta - \text{ГХЦГ} , \gamma - \text{ГХЦГ} , 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ в исследуемой продукции.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <6>. Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Технический регламент таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011).
4. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю).
5. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
6. ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
11. ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
12. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
13. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
14. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
15. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
16. ГОСТ OIML R 111-1 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
17. ГОСТ 9147 «Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия».
18. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
19. ГОСТ 2603 «Ацетон. Технические условия».
20. ГОСТ 20490 «Калий марганцовокислый. Технические условия».
21. ГОСТ 4221 «Калий углекислый. Технические условия».
22. ГОСТ 4204 «Кислота серная. Технические условия».
23. ГОСТ 4328 «Натрия гидроокись. Технические условия».
24. ГОСТ 26678 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
25. ГОСТ ISO 7886-1 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
26. ГОСТ 12.1.007 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
27. ГОСТ 12.1.019 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
28. ГОСТ 12.1.004 «Пожарная безопасность. Общие требования».
29. ГОСТ 12.4.009 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».