Библиотека
"МУК 4.1.3988-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изоциклосерама в цитрусовых культурах (апельсин, грейпфрут, лимон), кофе, плодовых косточковых, перце, баклажанах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"

МУК 4.1.3988-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изоциклосерама в цитрусовых культурах (апельсин, грейпфрут, лимон), кофе, плодовых косточковых, перце, баклажанах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания

№ МУК 4.1.3988-24Действующий акт

Актуально на 01.11.2026.

Как цитировать: "МУК 4.1.3988-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изоциклосерама в цитрусовых культурах (апельсин, грейпфрут, лимон), кофе, плодовых косточковых, перце, баклажанах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания". МУК 4.1.3988-24. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3988-24

(утв. Роспотребнадзором 13.02.2024)

Примечание

Документ введен в действие с 19.05.2024.

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 13 февраля 2024 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИЗОЦИКЛОСЕРАМА В ЦИТРУСОВЫХ КУЛЬТУРАХ (АПЕЛЬСИН, ГРЕЙПФРУТ, ЛИМОН), КОФЕ, ПЛОДОВЫХ КОСТОЧКОВЫХ, ПЕРЦЕ, БАКЛАЖАНАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3988-24

Дата введения 19 мая 2024 года

1. Разработаны ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Синицкая Т.А., Федорова Н.Е., Белицкая В.В., Гречина М.С.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 13 февраля 2024 г.

3. Введены впервые.

I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) описывают порядок применения высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием для определения в цитрусовых культурах (например, апельсин, грейпфрут, лимон), плодовых косточковых, перце, баклажанах массовой концентрации изоциклосерама в диапазоне (0,01 — 0,25) мг/кг — без разбавления, (0,01 — 12,50) мг/кг — с учетом разбавления в 50 раз и в кофе в диапазоне (0,01 — 0,20) мг/кг — без разбавления, (0,01 — 10,00) мг/кг с учетом разбавления в 50 раз.

1.2 МУК носят рекомендательный характер.

II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

2.1. Изоциклосерам — 4-[5-(3,5-дихлор-4-фторфенил)-4,5-дигидро-5-(трифторметил)изоксазол-3-ил]-N-[2-этил-3-оксоизоксазолидин-4-ил]-o-толуамид <1>. Брутто-формула C23H19Cl2F4N3O4. Молекулярная масса 548,3 г/моль.

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2 Физические и химические свойства.

Бесцветное кристаллическое вещество. Давление паров менее 6,2·10-3 мПа (при плюс 20 °C). Растворимость в органических растворителях (при плюс 25 °C, г/дм3): гексан — 39, ацетон — 270, метанол — 75, октанол — 17, дихлорметан — 400, этилацетат — 190. Растворимость в воде при плюс 20 °C — 1,2 г/дм3. Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода при плюс 20 °C, Kow logP = 5,0.

2.3 Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность для крыс и мышей (LD₅₀) 5000 мг/кг, острая дермальная токсичность (LD₅₀) 5000 мг/кг.

2.4. Область применения препарата. Новый инсектицид класса изоксазолинов, эффективен против беспозвоночных вредителей при опрыскивании листвы и обработке семян.

III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ

3.1. При соблюдении условий проведения анализа <2> и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6)).

Таблица 3.1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), \pm \delta , %	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)
Цитрусовые культуры (например, апельсин, грейпфрут, лимон)	0,01 — 12,50	50	6,4	8,9	18	25
Кофе	0,01 — 10,00	50	7,2	10,1	20	28
Плодовые косточковые	0,01 — 12,50	50	7,6	10,7	21	30
Перец	0,01 — 12,50	50	4,6	6,5	13	18
Баклажаны	0,01 — 12,50	50	3,8	5,3	11	15
Примечание: диапазон определяемых концентраций приведен с учетом разбавления экстракта образца в 50 раз.

IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ

4.1. Измерения концентраций изоциклосерама выполняют методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием.

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых проб в зависимости от вида растительной продукции выполняют дихлорметаном или этилацетатом с последующим перерастворением пробы в смеси ацетонитрил-вода (1:1).

Предварительно увлажненные пробы кофе экстрагируют смесью ацетонитрила и воды с использованием солей для экстракции с цитратным буфером. Очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением сорбентов на основе аминов и сульфата магния.

Дополнительно проводят очистку экстрактов с помощью мембранных шприцевых фильтров с размером пор не более 0,20 мкм.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 10 пг (цитрусовые, плодовые косточковые, перец, баклажаны), 25 пг (кофе).

Средняя полнота извлечения — 91,8% (цитрусовые культуры), 87,7% (кофе), 89,5% (плодовые косточковые), 92,6% (перец), 92,9% (баклажаны).

4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

Таблица 5.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы лабораторные аналитические	С пределом допустимой погрешности +/- 0,0005 г, ГОСТ Р 53228
Весы лабораторные	с пределом допустимой погрешности +/- 0,01 г, ГОСТ Р 53228
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1
Колбы мерные	Вместимостью 50, 100, 1000 см3 типа 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770
Цилиндр мерный	Вместимостью 25, 50 и 1000 см3, исполнение 1-4, 1(2-4)-25-2, 1(2-4)-50-2 и 1(2-4)-1000-2, ГОСТ 1770
Пипетки градуированные	Вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 типа 1-1(2)-2-1, 1-1(2)-2-2, 1-1(2)-2-5 и 1-1(2)-2-10, ГОСТ 29227
Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 5.2

Реактивы

Наименование реактивов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Изоциклосерам	Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95%
Азот особой чистоты, сорт 1, в баллонах	ГОСТ 9293
Ацетонитрил	Для ВЭЖХ, чистота не менее 99,9%
Вода	Для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная), ГОСТ Р 52501
Магний сернокислый (сульфат магния)	Безводный химически чистый
Метилен хлористый (дихлорметан)	Чистота не менее 99,8%
Муравьиная кислота	99,7%, чистая для анализа, ГОСТ 5848
Натрий хлористый (хлорид натрия)	Химически чистый, ГОСТ 4233
Натрий лимоннокислый двузамещенный, 1,5-водный	Химически чистый
Натрий лимоннокислый трехзамещенный (цитрат натрия)	Чистый для анализа, ГОСТ 22280
Сорбент для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина	Площадь поверхности ~ 580 м2/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм
Этилацетат	Чистота не менее 99,9%
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

Таблица 5.3

Вспомогательное оборудование, устройства, материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Аппарат для встряхивания или орбитальный шейкер	Орбита до 10 мм, диапазон регулировки оборотов 50 — 200 об/мин
Баня ультразвуковая	Рабочая частота 35 кГц
Бутыли из темного стекла	Вместимостью 1000 см3
Виалы хроматографические	Вместимостью 2 см3 с фторопластовой септой и навинчивающейся крышкой
Груша резиновая	-
Колбы круглодонные (грушевидные) на шлифе	Типа К-1 или Гр-1 вместимостью 50 см3 с взаимозаменяемым конусом 14/23, 19/26 или 29/32, ГОСТ 25336
Мельница лабораторная	-
Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками	Вместимостью 15 и 50 см3
Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом	Обеспечивающий вакуум до 10 мбар
Стаканы химические с носиком	Вместимостью 100 — 150 см3, типа В-1-100(150) или Н-1-100(150), ГОСТ 25336
Фильтры мембранные	Для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,20 мкм, мембрана — гидрофильная (политетрафторэтилен (англ. Polytetrafluoroethylene, PTFE))
Холодильная/морозильная камера	ГОСТ 26678
Хроматографическая колонка	Стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм
Центрифуга лабораторная, роторная	Максимальная скорость вращения не менее 4000 об/мин
Шприцы медицинские одноразовые	Вместимостью 2 см3, ГОСТ ISO 7886-1
Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.

VIII. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка подвижной фазы, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов ацетонитрила, приготовление растворов для градуировки и внесения, приготовление смесей солей для экстракции и сорбентов для очистки, установление градуировочных характеристик, отбор и подготовка проб.

8.2. Приготовление 0,1% раствора муравьиной кислоты в воде (компонент А подвижной фазы).

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 деионизированной воды, вносят 1,0 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. При необходимости приготовленный раствор дегазируют. Компонент подвижной фазы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.3 Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.

Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А — 0,1% раствор муравьиной кислоты в воде, компонент Б — ацетонитрил) 1:1 и скорости подачи растворителя 0,3 см3/мин до установления стабильной базовой линии.

8.4 Приготовление водных растворов ацетонитрила.

8.4.1 Соотношение ацетонитрил-вода (1:1).

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают с помощью мерного цилиндра 500 см3 ацетонитрила, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. Раствор хранят в герметично закрытой стеклянной емкости не более 14 дней.

8.4.2 Соотношение ацетонитрил-вода (8:2).

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают с помощью мерного цилиндра 800 см3 ацетонитрила, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой стеклянной емкости не более 14 дней.

8.5. Приготовление смесей солей для экстракции и сорбентов для очистки.

8.5.1. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции с цитратным буфером смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г цитрата натрия (натрий лимоннокислый трехзамещенный) и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев) <4>.

<4> Примечание: возможно использование готовых наборов солей для экстракции массой 6,5 г.

8.5.2. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев) <5>.

<5> Примечание: возможно использование готовых наборов солей для экстракции массой 5 г.

8.5.3. Для приготовления одного набора сорбентов для очистки смешивают (900 +/- 10) мг магния сернокислого, (150 +/- 10) мг смеси первичных и вторичных аминов, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев) <6>.

<6> Примечание: возможно использование готовых наборов сорбентов для очистки.

8.6 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.6.1. Исходный раствор изоциклосерама для градуировки (концентрация 100 мкг/см3).

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г изоциклосерама, растворяют в 50 — 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более 6 месяцев.

Растворы № 1 — 8 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

8.6.2. Раствор № 1 изоциклосерама для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см3).

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 исходного раствора изоциклосерама с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 8.6.1), разбавляют ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Градуировочный раствор № 1 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике в герметично закрытой таре при температуре плюс 2 — 6 °C не более месяца.

8.6.3. Растворы № 2 — 3 изоциклосерама для градуировки и внесения (концентрация 1,0 и 0,1 мкг/см3).

В две мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 10,0 и 1,0 см3 градуировочного раствора № 1 изоциклосерама с концентрацией 10 мкг/см3 (п. 8.6.2), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы № 2 — 3, которые готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике в герметично закрытой таре при температуре плюс 2 — 6 °C не более месяца.

Растворы № 1 — 3 используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.6.4. Рабочие растворы № 4 — 8 изоциклосерама для градуировки (концентрации 0,002 — 0,05 мкг/см3).

В 3 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 5,0; 2,0 и 1,0 см3 градуировочного раствора № 2 с концентрацией изоциклосерама 1 мкг/см3 (п. 8.6.3), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 8.4.1, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 4 — 6 с концентрациями изоциклосерама 0,05; 0,02 и 0,01 мкг/см3 соответственно.

В 2 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 5,0 и 2,0 см3 градуировочного раствора № 3 с концентрацией изоциклосерама 0,1 мкг/см3 (п. 8.6.3), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 8.4.1, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 7 — 8 с концентрацией изоциклосерама 0,005 и 0,002 мкг/см3 соответственно.

Растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более недели.

8.7 Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации изоциклосерама в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора № 4 — 8 (N 3 — 7 - для определения в кофе) изоциклосерама и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4.1 (10.4.2 - при определении в кофе). Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.8 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

Проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание изоциклосерама в которых должно входить в диапазон линейности градуировочной характеристики 0,002 — 0,05 мкг/см3 (0,005 — 0,1 мкг/см3 — для кофе).

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):

A = \frac{|X - C|}{C} \times 100; (1)

A < B, (2)

где: A — величина расхождения, %;

X — концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

B — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов изоциклосерама, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 8.7.

IX. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <7>.

<7> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79; ГОСТ 34307 «Плоды цитрусовых культур. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.11.2017 № 1856-ст; ГОСТ Р 51450 «Кофе зеленый (сырой). Виды дефектов», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2010 № 566-ст; ГОСТ 33801 «Вишня и черешня свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 26.08.2016 № 951-ст; ГОСТ 34325 «Перец сладкий свежий. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 14.12.2017 № 1978-ст; ГОСТ 31821 «Баклажаны свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.05.2022 № 426-ст.

9.2. Растительные пробы хранят при температуре плюс 2 — 6 °C не более недели, кофе — при комнатной температуре в темном месте не более 2 недель. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед анализом растительные образцы измельчают.

X. ВЫПОЛНЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

10.1 Перец, баклажаны.

Образец массой 5 г помещают в полипропиленовую пробирку на 50 см3, добавляют смесь солей, приготовленную по п. 8.5.2, и заливают 25 см3 дихлорметана и осторожно перемешивают. Помещают пробирки на аппарат для встряхивания на 30 мин, а затем на ультразвуковую баню на 1 мин. После пробу центрифугируют в течение 3 мин при скорости вращения 4000 об/мин.

Экстракт объемом 2 см3 переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 см3 и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 35 °C досуха.

Сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси, подготовленной по п. 8.4.1, тщательно перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,20 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4.1.

10.2. Цитрусовые культуры (апельсин, грейпфрут, лимон), плодовые косточковые.

Образец растительной продукции массой 5 г помещают в полипропиленовую пробирку на 50 см3, заливают 25 см3 этилацетата, перемешивают и помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин, затем на 1 мин на ультразвуковую ванну. После пробу центрифугируют в течение 3 мин при скорости вращения 4000 об/мин.

10.3 Кофе.

Образец кофе массой 5 г помещают в полипропиленовую пробирку на 50 см3, смачивают 5 см3 бидистиллированной воды и выдерживают 5 — 10 мин. Пробу заливают 10 см3 смеси, подготовленной по п. 8.4.2, перемешивают и помещают на аппарат для встряхивания на 10 мин, добавляют смесь солей, подготовленную по п. 8.5.1, тщательно перемешивают и вновь помещают встряхиваться на 10 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 об/мин.

Надосадочную жидкость объемом 4 — 5 см3 переносят в полипропиленовую пробирку на 15 см3, заполненную смесью сорбентов, подготовленную по п. 8.5.3 на основе первичных и вторичных аминов и сульфата магния. Пробирку встряхивают, далее центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 об/мин.

Пробу фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,20 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4.2.

10.4. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации электроспрей (англ. Electrospray Ionization, ESI) при регистрации дочерних положительных ионов после разрушения материнских (регистрация «перехода»). Режим работы: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, MRM).

Параметры масс-спектрометрического детектора <8>:

материнский ион (масса/заряд): 548;
дочерние ионы (масса/заряд): 418 (количественный расчет), 160;
напряжение на фрагментаторе, В: 119;
энергия разрушения (соударения), В: 21 (548 -> 418), 49 (548 -> 160);
скорость сканирования: 200 мс;
давление на распылителе: 35 psi.

<8> Примечание: параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.

Скорость газа распыления (азот): 12 дм3/мин.

Скорость осушающего газа (азот): 10 дм3/мин.

Температура осушающего газа: плюс 350 °C.

10.4.1 Условия хроматографирования (цитрусовые, плодовые косточковые, перец, баклажаны):

хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;
температура колонки: плюс 40 °C;
скорость потока элюента: 0,3 см3/мин;
объем вводимой пробы: 5 мм3;
подвижная фаза: 0,1% раствор муравьиной кислоты в воде — ацетонитрил (10:90, по объему).

Линейный диапазон детектирования 10 — 250 пг.

10.4.2 Условия хроматографирования (кофе):

хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;
температура колонки: плюс 40 °C;
скорость потока элюента: 0,3 см3/мин;
объем вводимой пробы: 5 мм3.

Данные по режиму элюирования градиентного представлены в таблице 10.1.

Таблица 10.1

Данные по режиму элюирования градиентного

Время, мин	Содержание растворителя в подвижной фазе, % (по объему)
Время, мин	Компонент A: 0,1% раствор муравьиной кислоты (по объему) в воде	Компонент B: ацетонитрил
0	95	5
0,5	95	5
3,5	30	70
3,6	5	95
5,0	5	95
6,0	95	5
8,0	95	5

Линейный диапазон детектирования 25 — 500 пг.

XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

11.1 Содержание изоциклосерама в образцах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):

X = \frac{C \cdot V_{\text{кон}} \cdot \text{Кр}}{m} , (3)

где: C — концентрация изоциклосерама, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;

Vкон — объем экстрагента, см3 (25 см3 — цитрусовые, плодовые косточковые, перец, баклажаны; 10 см3 — кофе);

m — масса анализируемого образца, г (5 г);

Кр — коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

Примечание: идентификация и расчет концентрации веществ в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (4):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (4)

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .

При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

12.1 Результат количественного анализа представляют в виде формулы (5):

(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг}, (5)

где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):

\Delta = \delta \cdot X/100, (6)

где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: содержание изоциклосерама в цитрусовых культурах (апельсин, грейпфрут, лимон), кофе, плодовых косточковых, перце, баклажанах — менее 0,01 мг/кг <9>.

<9> Примечание: 0,01 мг/кг — предел обнаружения изоциклосерама в цитрусовых культурах (апельсин, грейпфрут, лимон), кофе, плодовых косточковых, перце, баклажанах.

XIII. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <10>. Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

<10> ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

3. ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».

4. ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».

5. ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».

6. ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».

7. ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».

8. ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

9. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

10. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».

11. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

12. ГОСТ OIML R 111-1 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».

13. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

14. ГОСТ ISO 7886-1 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».

15. ГОСТ 5848 «Кислота муравьиная. Технические условия».

16. ГОСТ 6995 «Метанол-яд. Технические условия».

17. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

18. ГОСТ 26678 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».

19. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».

20. ГОСТ 12.1.007 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

21. ГОСТ 12.1.019 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

22. ГОСТ 12.1.004 «Пожарная безопасность. Общие требования».

23. ГОСТ 12.4.009 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».

24. ГОСТ 34307 «Плоды цитрусовых культур. Технические условия».

25. ГОСТ Р 51450 «Кофе зеленый (сырой). Виды дефектов».

26. ГОСТ 33801 «Вишня и черешня свежие. Технические условия».

27. ГОСТ 34325 «Перец сладкий свежий. Технические условия».

28. ГОСТ 31821 «Баклажаны свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия».

29. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.