МУК 4.1.3962-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств протиоконазола по его основному метаболиту протиоконазол-дестио в зеленой массе и корнеплодах моркови методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 06.07.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 06.10.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 6 июля 2023 года
Дата введения 6 октября 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОТИОКОНАЗОЛА ПО ЕГО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ ПРОТИОКОНАЗОЛ-ДЕСТИО В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И КОРНЕПЛОДАХ МОРКОВИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3962-23
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, Е.Н. Тестова, Н.С. Фролова).»
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 6 июля 2023 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения уровня остаточных количеств протиоконазола по его основному метаболиту протиоконазолу-дестио в зеленой массе моркови в диапазоне 0,05 — 0,50 мг/кг и в корнеплодах моркови в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1 Физико-химические свойства протиоконазола.
Название вещества по ИЮПАК: 2-[(RS)-2-гидрокси-2-(1-хлорциклопропил)-3-(2-хлорфенил)пропил]-2H-1,2,4-триазол-3(4H)-тион.
Эмпирическая формула: C14H15Cl2N3OS.
Агрегатное состояние: твердое вещество.
Цвет, запах: белый или светло-бежевый, без запаха.
Давление насыщенного пара: 4 x 10-7 Па (при плюс 20 °C).
Температура плавления: плюс 139,1 — 144,5 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 4,16 (при pH 4); 3,82 (при pH 7) и 2,0 (при pH 9).
Растворимость в воде (в г/дм3, при плюс 20 °C): 0,005 (при pH 4); 0,3 (при pH 8) и 2,0 (при pH 9).
Растворимость в органических растворителях при плюс 20 °C (г/дм3): ацетон — более 250; этилацетат — более 250; дихлорметан — 88; ацетонитрил — 69.
Протиоконазол стабилен при хранении на воздухе, а также в кислой (ДТ50 = 120 дней) и щелочной (ДТ50 > 1 года) средах. В водных фотолитических условиях в присутствии света протиоконазол деградирует с периодом полураспада 47,7 часов. Основным продуктом фотодеградации является протиоконазол-дестио, его содержание составляет до 56%.
В почве в полевых условиях протиоконазол подвергается быстрой деградации, ДТ50 составляет 1,3 — 2,8 дня (в среднем 1,7 дня), ДТ90 — 4,4 — 9,3 дня (в среднем 5,8 дня). Отмечена заметная сорбция протиоконазола почвой. Основным почвенным метаболитом является протиоконазол-дестио.
В растениях протиоконазол быстро метаболизируется до более устойчивого соединения — протиоконазол-дестио.
2.2. Протиоконазол относится к веществам малоопасным по острой пероральной (ЛД50 для крыс более 6200 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс более 4990 мг/м3 воздуха). Протиоконазол не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз.
2.3. Протиоконазол — фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза эргостерина. Вещество обладает защитным, искореняющим и лечебным действием.
2.4 Физико-химические свойства протиоконазол-дестио.
Название вещества по ИЮПАК: \alpha -(1-хлорциклопропил)- \alpha -[(2-хлорфенил)метил]-1H-1,2,4-триазол-1-этанол olecular Weight:
Эмпирическая формула: C14H15Cl2N3O.
Агрегатное состояние: твердое вещество.
Цвет, запах: бесцветный, без запаха.
Давление насыщенного пара: 2,7 x 10-7 Па (при плюс 20 °C).
Температура плавления: плюс 108,5 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 3,04.
Растворимость в воде (в г/дм3, при плюс 20 °C): 0,051.
Растворимость в органических растворителях при 20 °C (г/дм3): дихлорметан — более 200; ацетон — 100; толуол — 84; ацетонитрил — 43; гексан — 3.
Стабилен в кислой и щелочной средах (ДТ50 > 5000 часов).
III. Метод измерения
3.1. Метод основан на определении протиоконазола-дестио методом капиллярной ГЖХ с использованием азотно-фосфорного детектора.
3.2. Определение протиоконазола-дестио в зеленой массе и корнеплодах моркови проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей и на концентрирующих патронах № 1 с гидрофильным слабокислым сорбентом.
3.3. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
3.4. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий хроматографирования.
IV. Метрологические характеристики
4.1. При соблюдении всех условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 4.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Хроматограф газовый с азотно-фосфорным детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I) по ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,5 г, класс точности средний (III) по ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-100-2 по ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10 по ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Протиоконазол-дестио, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 98,0% |
| Азот газообразный особой чистоты | ГОСТ 9293 |
| Ацетон химически чистый | ГОСТ 2603 |
| Ацетонитрил химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый чистый для анализа | ГОСТ 20490 |
| Кальций хлористый чистый для анализа | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены гидрофильным слабокислым сорбентом (С) с размером частиц 63 — 200 мкм (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Метилен хлористый химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Натрий сернокислый химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Натрий углекислый кислый химически чистый | ГОСТ 4201 |
| Натрий хлористый химически чистый | ГОСТ 4233 |
| Этилацетат чистый для анализа | ГОСТ 22300 |
Вспомогательные устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Алонж прямой стеклянный | Тип АО по ГОСТ 25336 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний в минуту |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД по ГОСТ 25336 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В по ГОСТ 25336 |
| Колбы конические стеклянные | Тип Кн по ГОСТ 25336 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К по ГОСТ 25336 |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла | Внутренний диаметр 0,32 мм, длина 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3 по ГОСТ 25336 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3 по ГОСТ 22967 |
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, а также посуды, реактивов и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
VII. Квалификация операторов
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Отбор проб
8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.
<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Пробы зеленой массы и корнеплодов моркови хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре минус 18 °C.
IX. Условия проведения измерений
9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
X. Подготовка к выполнению измерений
10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах № 1, установление градуировочной характеристики.
Подготовка органических растворителей.
10.1.1 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3.
Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
10.1.2 Очистка ацетона.
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
10.1.3 Очистка гексана.
Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
10.1.4 Очистка хлористого метилена.
Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 39,5 — 40,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 39,5 — 40,5 °C, отбрасывают.
10.1.5 Очистка этилацетата.
Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Этилацетат перегоняют при температуре плюс 76,5 — 77,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 76,5 — 77,5 °C, отбрасывают.
10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.
10.2.1 Приготовление рабочих растворов.
10.2.1.1 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.
400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12 месяцев.
10.2.2 Приготовление градуировочных растворов.
10.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией протиоконазола-дестио 100,0 мкг/см3.
Помещают 10 мг протиоконазола-дестио в мерную колбу объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C не более 3 месяцев.
10.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией протиоконазола-дестио 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C не более 30 дней.
10.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией протиоконазола-дестио 0,5 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C не более 7 дней.
10.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией протиоконазола-дестио 0,2 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C не более 7 дней.
10.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией протиоконазола-дестио 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C не более 7 дней.
10.2.2.6. Стандартные растворы протиоконазола-дестио с концентрацией 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; 0,25 и 0,2 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц.
Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 1 готовят растворы, содержащие по 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; 0,25 и 0,2 мкг/см3 протиоконазола-дестио, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц. Стандартные растворы протиоконазола-дестио с концентрацией 2,5; 2,0; 1,0 мкг/см3 хранятся в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C не более 30 дней, остальные стандартные растворы для внесения хранятся в морозильнике при температуре не выше минус 18 °C не более 7 дней.
10.3. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
10.3.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации протиоконазола-дестио в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
10.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки. Содержание протиоконазола-дестио должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,10 до 1,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C) \times 100}{C} \leq 10 , (1)
где X — концентрация протиоконазола-дестио в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора протиоконазола-дестио в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов протиоконазола-дестио, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.1.
10.4. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения протиоконазола-дестио.
10.4.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон последовательно промывают 5 см3 этилацетата и 10 см3 гексана. Элюаты отбрасывают.
10.4.2. Проверка хроматографического поведения протиоконазола-дестио на концентрирующих патронах № 1.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора протиоконазола-дестио в ацетоне с концентрацией 2,0 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 этилацетата, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Патрон последовательно промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1 и четырьмя порциями по 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 3:2. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 ацетона и 1 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие протиоконазол-дестио, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.
Изучение поведения протиоконазола-дестио на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
XI. Проведение измерений
11.1 Зеленая масса моркови.
11.1.1 Экстракция.
Навеску измельченной зеленой массы моркови массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 10 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Примечание. Выпаривание проводить с осторожностью, возможно вспенивание ацетонитрильного экстракта и заброс его в приемную колбу испарителя.
11.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Сухой остаток, полученный по п. 11.1.1, растворяют в 2 см3 ацетона, добавляют 50 см3 дистиллированной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Добавляют в воронку 10 см3 насыщенного раствора хлористого натрия, содержимое перемешивают.
Отгонную колбу обмывают 30 см3 хлористого метилена, хлористый метилен объединяют с водной фазой в делительной воронке. Делительную воронку встряхивают в течение 2 минут и после полного разделения фаз нижний слой (хлористый метилен) собирают в чистую отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 см3 хлористого метилена. Экстракты, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3. Объединенный экстракт хлористого метилена упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 11.1.2, растворяют в 1 см3 этилацетата, обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон. Элюат отбрасывают.
Патрон промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1, элюат отбрасывают.
Протиоконазол-дестио элюируют с патрона 15 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 3:2, элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток в колбе растворяют в 2,5 см3 ацетона и вводят 1 мм3 пробы в хроматограф.
11.2 Корнеплоды моркови.
11.2.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Образец измельченных корнеплодов моркови массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 10 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в делительную воронку объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя каждый раз по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в делительной воронке.
К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 30 см3 гексана и встряхивают делительную воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний ацетонитрильный слой возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще два раза, используя по 30 см3 гексана. Верхний гексановый слой отбрасывают, а нижний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3 и упаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку по п. 11.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 11.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток после очистки растворяют в 2 см3 ацетона и вводят 1 мм3 пробы в хроматограф.
11.3 Условия хроматографирования.
11.3.1 Газовый хроматограф с азотно-фосфорным детектором.
Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренним диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм.
Температура детектора — плюс 300 °C, поток воздуха — 60 см3/мин, поток газа горения H2 — 3 см3/мин, поток газа поддувки (азот) — 10 см3/мин.
Температура испарителя — плюс 275 °C, газ-носитель — гелий, режим с делением потока (сплит), деление потока 5:1, общий поток 18,6 см3/мин, поток обдува септы — 3 см3/мин.
Температура колонки: градиентный нагрев колонки начиная с плюс 180 °C (выдержка 3 мин) по 20 град/мин до плюс 280 °C (выдержка 4 мин). Поток газа-носителя (гелий) — 2,6 см3/мин, давление 17,987 psi, средняя скорость 97,25 см/сек, режим постоянный поток.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 1,0 — 0,10 нг.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор протиоконазола-дестио с концентрацией 0,10 мкг/см3 соответственно разбавляют. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания протиоконазола-дестио в пробах.
XII. Обработка результатов измерения
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание протиоконазола-дестио в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:
где X — содержание протиоконазола-дестио в пробе, мг/кг;
A — концентрация протиоконазола-дестио, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г.
Для установления уровня содержания протиоконазола полученное значение содержания протиоконазола-дестио (X) умножают на 1,1 (1,1 — коэффициент пересчета содержания протиоконазола-дестио на эквивалент протиоконазола по соотношению молекулярных масс).
XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (3)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 4.1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIV. Оформление результатов
14.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 4.1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«Содержание протиоконазола-дестио в зеленой массе моркови — менее 0,05 мг/кг; содержание протиоконазола-дестио в корнеплодах моркови — менее 0,01 мг/кг».
XV. Контроль качества результатов измерений
15.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).
Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ПРОТИОКОНАЗОЛА-ДЕСТИО ИЗ ЗЕЛЕНОЙ МАССЫ И КОРНЕПЛОДОВ МОРКОВИ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено, мг/кг | Полнота извлечения, % |
| Зеленая масса моркови | 0,05 | 87,1 |
| 0,10 | 85,5 | |
| 0,25 | 89,9 | |
| 0,5 | 82,6 | |
| Корнеплоды моркови | 0,01 | 81,7 |
| 0,02 | 81,3 | |
| 0,05 | 83,0 | |
| 0,1 | 78,1 |
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
4. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
5. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
7. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
8. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
9. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
10. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
14. ГОСТ Р 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
15. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
17. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
18. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия»
19. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
20. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
21. ГОСТ 4201 «Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия».
22. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
23. ГОСТ 22300 «Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
24. ГОСТ ISO 6497 «Корма. Отбор проб».
25. ГОСТ 32284 «Морковь столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия».
26. ГОСТ 33540 «Морковь столовая свежая для промышленной переработки. Технические условия».
| ББК 51.231 |
|---|