МУК 4.1.3958-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах сливы и сливовом соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3958-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах сливы и сливовом соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.3958-23. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3958-23
(утв. Роспотребнадзором 05.07.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 05.10.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 5 июля 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЦЕТАМИПРИДА В ПЛОДАХ СЛИВЫ И СЛИВОВОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3958-23
Дата введения 5 октября 2023 года
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Ю.Н. Савушкин, Е.Н. Тестова, О.В. Шибика).»
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 5 июля 2023 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств ацетамиприда в плодах сливы и сливовом соке в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1 Физико-химические свойства ацетамиприда.
Название действующего вещества по ИЮПАК: (E)-N1-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-N2-циано-N1-метилацетамидин.
Эмпирическая формула: C10H11ClN4.
Агрегатное состояние: белое кристаллическое вещество.
Цвет, запах: бесцветный кристаллический порошок без запаха.
Давление паров < 1,0 — 103 мПа (при 25 °C).
Температура плавления: плюс 98,9 °C.
Коэффициент распределения н-октанол-вода: KowlogP = 0,80 (плюс 25 °C).
Растворимость в воде (г/дм3, при плюс 20 °C): 0,295.
Растворимость в органических растворителях (г/дм3, при плюс 20 °C): ацетон, метанол, этанол, дихлорметан, хлороформ, ацетонитрил и тетрагидрофуран — более 200, н-гексан — 0,006.
Вещество гидролитически стабильно при pH 4 — 7. При pH 9 и плюс 45 °C постепенно разлагается. Стабилен на солнечном свете. Стабилен в водных буферных растворах при pH 4 — 7.
2.2. Ацетамиприд относится к веществам умеренно опасным по острой оральной (ЛД50 для крыс 217 мг/кг) и ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) 2900 мг/м3 воздуха), но к малоопасным веществам по дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг). Не вызывает раздражения глаз и кожи.
2.3. Ацетамиприд — инсектицид системного, контактного и кишечного действия из группы неоникотиноидов, блокирующий никотинзависимые рецепторы ацетилхолина в нервной системе. Эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов равнокрылых (тли, белокрылки), полужесткокрылых (клопы), бахромчатокрылых (трипсы) и жесткокрылых в посевах многих культур, особенно овощных, при нормах расхода 75 — 300 г д.в./га.
III. Метод измерения
3.1. Метод основан на определении ацетамиприда методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора.
3.2. Определение ацетамиприда в плодах сливы проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 и на колонках с окисью алюминия.
Определение ацетамиприда в сливовом соке проводится после его перенесения из образцов водой, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1.
3.3. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
3.4. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
IV. Метрологические характеристики
4.1. При соблюдении всех условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 4.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I) по ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,5 г, класс точности средний (III) по ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10 по ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Ацетамиприд, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 95,0% |
| Алюминий окись | Нейтральная, размер частиц 50 — 200 мкм |
| Ацетон химически чистый | ГОСТ 2603 |
| Ацетонитрил химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Кальций хлористый чистый для анализа | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый чистый для анализа | ГОСТ 20490 |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены гидрофильным слабокислым сорбентом с постоянной активностью с размером частиц 63 — 200 мкм с привитыми аминогруппами (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Метилен хлористый химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Натрий сернокислый химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Натрий углекислый кислый химически чистый | ГОСТ 4201 |
| Спирт метиловый (метанол) химически чистый | ГОСТ 6995 |
| Этилацетат чистый для анализа | ГОСТ 22300 |
Вспомогательные устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Аллонж прямой стеклянный | Тип АО по ГОСТ 25336 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний в минуту |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД по ГОСТ 25336 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В по ГОСТ 25336 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К по ГОСТ 25336 |
| Колбы конические стеклянные | Тип Кн по ГОСТ 25336 |
| Колонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 150 мм x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3 по ГОСТ 25336 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Фильтры мембранные для очистки растворителей | Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм |
| Центрифуга с набором полипропиленовых банок | Максимальное рабочее число оборотов 4000 об/мин, рабочий объем ротора 200 см3 x 4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 минут. Объем банок 200 см3 |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3 по ГОСТ 22967 |
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, а также посуды, реактивов и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
VII. Квалификация операторов
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Отбор проб
8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.
<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Пробы плодов сливы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C.
Пробы сливового сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 5 суток.
IX. Условия проведения измерений
9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
X. Подготовка к выполнению измерений
10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с окисью алюминия и концентрирующих патронах № 1, установление градуировочной характеристики.
Подготовка органических растворителей.
10.1.1 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
10.1.2 Очистка хлористого метилена.
Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 39,5 — 40,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 39,5 — 40,5 °C, отбрасывают.
10.1.3 Очистка гексана.
Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
10.1.4 Очистка этилацетата.
Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Этилацетат перегоняют при температуре плюс 76,5 — 77,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 76,5 — 77,5 °C, отбрасывают.
10.1.5 Очистка ацетона.
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3.
Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
10.1.6 Приготовление бидистиллированной воды.
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.
Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.
10.2.1 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.
Для приготовления подвижной фазы используют метиловый спирт и бидистиллированную воду, предварительно профильтрованные через мембранные фильтры для очистки растворителей.
В плоскодонную колбу объемом 1000 см3 помещают 450 см3 бидистиллированной воды и 550 см3 метанола. Смесь тщательно перемешивают.
При использовании градиентного режима хроматографирования компоненты подвижной фазы помещают в разные емкости.
В случае отсутствия в составе хроматографической системы автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см3/мин в течение 5 минут, после чего его помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
10.2.2 Приготовление рабочих растворов.
10.2.2.1. Приготовление 5%-го раствора натрия углекислого: 50 г натрия углекислого переносят в мерную колбу на 1000 см3, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используется для очистки хлористого метилена и очистки экстракта сливового сока. Раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 12 месяцев.
10.2.2.2 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.
400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 12 месяцев.
10.2.3 Приготовление градуировочных растворов.
10.2.3.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией ацетамиприда 500,0 мкг/см3.
Взвешивают 50 мг ацетамиприда в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
10.2.3.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией ацетамиприда 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 50 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.3.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией ацетамиприда 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.3.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией ацетамиприда 0,5 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.3.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией ацетамиприда 0,2 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.3.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией ацетамиприда 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.3.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией ацетамиприда 0,05 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.3.8. Стандартные растворы ацетамиприда с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом из стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 ацетамиприда, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц. Стандартные растворы для внесения хранятся при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.3. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
10.3.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации ацетамиприда в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0,05 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
10.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание ацетамиприда в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,00 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
\text{А } = \frac{(\text{Х } - \text{С }) \times 100}{\text{С}} \leq 10, (1)
где X — концентрация ацетамиприда контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора ацетамиприда в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов ацетамиприда, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.1.
10.4. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения ацетамиприда на них.
10.4.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:4, затем 10 см3 гексана. Элюаты отбрасывают.
10.4.2. Проверка хроматографического поведения ацетамиприда на концентрирующих патронах № 1.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора ацетамиприда в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 2 см3 этилацетата, обмывают стенки колбы, добавляют 8 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают двумя порциями по 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:4 и вносят растворы на патрон. Элюаты собирают в чистые отгонные колбы объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие ацетамиприд, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения ацетамиприда на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
10.5. Подготовка колонки с окисью алюминия (5 г) для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения ацетамиприда на ней.
10.5.1 Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта.
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 5 г окиси алюминия и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила.
10.5.2. Проверка хроматографического поведения ацетамиприда на колонке с окисью алюминия.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора ацетамиприда в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, перемешивают и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают четырьмя порциями по 5 см3 ацетонитрила и вносят растворы на колонку. Элюаты собирают в чистые отгонные колбы объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие ацетамиприд, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения ацетамиприда на колонке с окисью алюминия проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.
10.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.
Хроматографическую колонку устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 30 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой (смесь метанола с водой в соотношении 550:450) при скорости подачи растворителя 0,5 см3/мин.
XI. Проведение измерений
11.1 Плоды сливы.
11.1.1 Экстракция.
Образец измельченных слив массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 30 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 30 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3, добавляют 5 см3 дистиллированной воды и выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
К водному остатку, полученному по п. 11.1.1, добавляют 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, 30 см3 воды и 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3.
Ацетамиприд экстрагируют тремя порциями хлористого метилена по 30 см3, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток, полученный по п. 11.1.2, растворяют в 2 см3 этилацетата, обмывают стенки колбы, добавляют 8 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон (п. 10.4.1), элюат отбрасывают.
Ацетамиприд элюируют с патрона 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:4, элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.4 Очистка экстракта на колонках с окисью алюминия.
Сухой остаток, полученный по п. 11.1.3, растворяют в 10 см3 ацетонитрила, обмывают стенки колбы и вносят раствор на подготовленную колонку с окисью алюминия (п. 10.5.1), элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3.
Исходную колбу обмывают 15 см3 ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.2 Сливовый сок.
11.2.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
В стакан объемом 250 см3 из пробы сока отбирают навеску массой 10 г. Навеску сока растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, добавляют 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия и переносят в делительную воронку.
К водной фазе добавляют 50 см3 гексана, встряхивают делительную воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний водный слой возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру очистки еще один раз, используя 50 см3 гексана. Верхний гексановый слой отбрасывают, а нижний водный слой возвращают в делительную воронку.
Ацетамиприд экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3.
Объединенный экстракт (хлористый метилен) центрифугируют в течение 5 минут при 4000 об/мин. Экстракт из полипропиленовой банки переносят в делительную воронку и промывают 50 см3 5%-го раствора натрия углекислого, встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (водный) отбрасывают, нижний слой (хлористый метилен) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку по п. 11.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 5 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.3 Условия хроматографирования.
11.3.1 Хроматографическая система.
Колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.
Температура колонки: плюс 30 °C.
Подвижная фаза: смесь метанола с бидистиллированной водой в соотношении 550:450 (по объему) при хроматографировании в изократическом режиме.
Скорость потока элюента: 0,5 см3/мин.
Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор ацетамиприда с концентрацией 1,0 мкг/см3, соответственно разбавляют. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания ацетамиприда в пробах.
XII. Обработка результатов измерения
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание ацетамиприда в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:
где X — содержание ацетамиприда в пробе, мг/кг;
A — концентрация ацетамиприда, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г.
XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (2)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 4.1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIV. Оформление результатов
14.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \delta \cdot \overline{X}/100,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 4.1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание ацетамиприда в плодах сливы и сливовом соке — менее 0,01 мг/кг».
XV. Контроль качества результатов измерений
15.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 — 6.
Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ АЦЕТАМИПРИДА ИЗ ПЛОДОВ СЛИВЫ И СЛИВОВОГО СОКА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено ацетамиприда, мг/кг | Полнота извлечения, % |
| Сливы | 0,01 | 88,4 |
| 0,02 | 82,8 | |
| 0,05 | 86,4 | |
| 0,1 | 87,2 | |
| Сливовый сок | 0,01 | 84,8 |
| 0,02 | 87,1 | |
| 0,05 | 87,3 | |
| 0,1 | 80,7 |
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
4. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
5. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
7. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
8. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
9. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
10. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
14. ГОСТ Р 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
15. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
17. ГОСТ 22967 «Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний».
18. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия»
19. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
20. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
21. ГОСТ 4201 «Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия».
22. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
23. ГОСТ 6995 «Реактивы. Метанол-яд. Технические условия».
24. ГОСТ 22300 «Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
25. ГОСТ 21920 «Слива свежая для промышленной переработки. Технические условия».
26. ГОСТ 32101 «Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия».