МУК 4.1.3957-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуфенацета и суммы всех метаболитов, содержащих N-фторфенил-N-изопропил радикалы в семенах и масле сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 05.07.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 05.10.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 5 июля 2023 года
Дата введения 5 октября 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУФЕНАЦЕТА И СУММЫ ВСЕХ МЕТАБОЛИТОВ, СОДЕРЖАЩИХ N-ФТОРФЕНИЛ-N-ИЗОПРОПИЛ РАДИКАЛЫ В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3957-23
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, Е.Ю. Панов, П.В. Рязанцев, Е.Н. Тестова).»
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 5 июля 2023 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием для определения остаточных количеств флуфенацета и суммы всех метаболитов, содержащих N-фторфенил-N-изопропил радикалы (оксалат, сернистая кислота и тригликолат сульфоксид), с пересчетом на флуфенацет в семенах и масле сои в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1 Физико-химические свойства флуфенацета (I) и его метаболитов.
2.1.1 Флуфенацет (I).
Название действующего вещества по ИЮПАК: N-(4-фторфенил)-N-(метилэтил)-2-[[5-(трифторметил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил]окси]ацетамид.
Эмпирическая формула: C14H13F4N3O2S.
Агрегатное состояние: бесцветный кристаллический порошок со слабым неспецифическим запахом.
Температура плавления: частичное плавление происходит при температуре плюс 76 °C, вновь образовавшиеся из расплавленной массы кристаллы плавятся при температуре плюс 79 °C.
Давление паров (при плюс 20 °C): 9 x 10-7 гПа.
Коэффициент распределения октанол/вода: Kow log P = 3,2 при плюс 24 °C.
Растворимость в воде (мг/дм3, при плюс 25 °C): при pH 4 и 7 — 56, при pH 9 — 54.
Растворимость (г/дм3, при плюс 20 °C): гексан — 8,7; изопропанол — 170; октанол — 88; полиэтиленгликоль — 74; дихлорометан, ацетонитрил, ацетон > 200.
Стабилен к гидролизу в водных растворах в диапазоне pH от 5 до 9, стабилен к фотолизу при pH 5.
2.1.2 Метаболиты флуфенацета.
Название действующего вещества по ИЮПАК: N-(4-фторфенил)-N-(метилэтил)-аминощавелевая кислота.
Название действующего вещества по ИЮПАК: N-(4-фторфенил)-N-(метилэтил)-ацетамид-2-сернистая кислота.
Название действующего вещества по ИЮПАК: N-(4-фторфенил)-N-(метилэтил)-ацетамид-2-сульфинил уксусная кислота.
2.1.3 Дериват Флуфенацета (V).
Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-фтор-N-метилэтил бензенамин трифторацетамид
2.2. Флуфенацет относится к умеренно опасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс — от 589 до 1617 мг/кг) и ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) более 3740 мг/м3), но к малоопасным веществам по дермальной токсичности (ЛД50 крыс более 2000 мг/кг).
2.3. Флуфенацет — гербицид из группы тиадиазолов, ингибитор процесса деления клеток и роста растений. Применяется для борьбы с широким кругом злаковых и некоторых широколиственных сорняков в предвсходовый и ранний послевсходовый период на кукурузе, зерновых, хлопчатнике, картофеле, рисе, сое, подсолнечнике, томатах и других культурах с нормой расхода 50 — 900 г/га.
III. Метод измерения
3.1. Метод основан на определении флуфенацета и суммы всех метаболитов, содержащих N-фторфенил-N-изопропил радикалы, методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием масс-селективного детектора после их окисления перманганатом калия в течение 5 минут и дальнейшего гидролиза до 4-фтор-N-метилэтил бензоламина (далее по тексту фторанилин) путем кипячения матрицы с 47%-м раствором серной кислоты в течение 24 часов. Фторанилин отделяют от матрицы методом перегонки с водяным паром и экстрагируют из дистиллята органическим растворителем. Фторанилин дериватизируют трифторуксусным ангидридом с последующей очисткой полученного деривата флуфенацета 4-фтор-N-метилэтил бензенамин трифторацетамид (V) на концентрирующих патронах № 1.
Идентификация вещества основывается на масс-спектрах характеристичных ионов, соотношению их интенсивностей и времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования тандемного масс-спектрометрического детектора, регистрирующего одновременно несколько специфичных ионов, характеризующих вещество.
IV. Метрологические характеристики
4.1. При соблюдении всех условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для флуфенацета
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1 Средства измерений:
- весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228 — специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г;
- весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228 — средний (III), с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,5 г;
- колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 см3, ГОСТ 1770;
- пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см3, ГОСТ 29227;
- цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 см3, ГОСТ 1770;
- пробирки мерные на 10 см3, ГОСТ 1770;
- хромато-масс-спектрометрическая система, включающая:
- газовый хроматограф с испарителем для ввода проб с делением/без деления потока и капиллярной колонкой, соединенный с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройная квадруполь с диапазоном масс (m/z) 1,2 — 1050 а.е.м., разрешением 0,7 — 2,5 а.е.м., скоростью сканирования до 6250 а.е.м./сек, чувствительностью при ионизации электронным ударом в режиме полного сканирования не ниже 300:1 (1 фг октафторнафталина по массе m/z 272);
- компьютер с программным обеспечением, которое осуществляет управление и контроль всеми физическими параметрами, требуемыми для согласованной работы всех систем прибора, обработку данных, включая калибровку, визуализацию спектров, автоматические количественные расчеты, архивирование данных, создание и использование библиотек масс-спектров.
5.2 Реактивы:
- флуфенацет, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 97,8%;
- 4-фтор-N-метилэтил бензенамин трифторацетамид, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,7%;
- N, N-диметилформамид, плотность 0,944 г/см3, чистота не менее 99,0%;
- 4-(диметиламино)пиридин, чистота не менее 99,0%;
- азот особой чистоты, ГОСТ 9293;
- ацетон особой чистоты;
- ацетонитрил особой чистоты, УФ-200 нм;
- бисульфит натрия, чистота не менее 97,0%, содержание нерастворимых примесей менее 0,005%;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости);
- гелий очищенный;
- калий марганцовокислый чистый для анализа, ГОСТ 20490;
- кальций хлористый чистый;
- кислота серная концентрированная чистая, ГОСТ 4204;
- кислота соляная химически чистая, ГОСТ 3118;
- концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофобным сорбентом с размером частиц 63 — 200 мкм с привитыми гексадецильными (C16) группами (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г), (патрон № 1);
- метилен хлористый химически чистый;
- натрий сернокислый безводный химически чистый, ГОСТ 4166;
- натрия гидроокись, химически чистая, ГОСТ 4328;
- пиридин безводный, плотность 0,978 г/см3, чистота не менее 99,8%, воды менее 0,003%;
- спирт метиловый (метанол) химически чистый, ГОСТ 6995;
- трифторуксусный ангидрид, плотность 1,511 г/см3, чистота не менее 99,0%.
Примечание. Трифторуксусный ангидрид является токсичным и очень гигроскопичным. Рекомендуется иметь реагент в небольшой таре и использовать в течение двух недель после вскрытия бутылки. Обращаться с особой осторожностью в вытяжном шкафу, строго соблюдая технику безопасности.
5.3 Вспомогательные устройства, материалы:
- алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами, ГОСТ 25336;
- аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту;
- ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм3;
- виалы объемом 2 см3, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб;
- вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная, ГОСТ 5556;
- воронки делительные на 250, 500 см3, ГОСТ 25336;
- воронки лабораторные стеклянные, ГОСТ 25336;
- испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температур от плюс 20 до плюс 100 °C;
- колбы круглодонные со шлифом на 100, 250 см3 и 4000 см3 ТС;
- колбы круглодонные со шлифом двугорлые на 2000 см3 ТС;
- колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренний диаметром 0,25 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% фенила и 95% метилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм;
- насос диафрагменный, химически стойкий на 100%, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин;
- стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 2000 см3, ГОСТ 25336;
- установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3;
- установка для перегонки с водяным паром с круглодонной двугорлой колбой объемом 2000 см3 и приемной круглодонной колбой объемом 500 см3.
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, а также посуды, реактивов и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
VII. Квалификация операторов
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Отбор проб
8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.
<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Пробы семян сои подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы соевого масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.
IX. Условия проведения измерений
9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
X. Подготовка к определению
10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта, установление градуировочной характеристики.
Подготовка органических растворителей.
10.1.1 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,5 °C, отбрасывают.
10.1.2 Очистка ацетона.
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,2 °C, отбрасывают.
10.1.3 Очистка метанола.
Метанол, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный углекислый калий из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем метанол фильтруют через фильтр «красная лента» в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Метанол перегоняют при температуре плюс 64,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 64,7 °C, отбрасывают.
10.1.4 Приготовление бидистиллированной воды.
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.
Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 100,0 °C, отбрасывают.
10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.
10.2.1 Приготовление рабочих растворов.
10.2.1.1 Приготовление 50%-го раствора гидроокиси натрия.
100 г гидроокиси натрия переносят в химический стакан на 200 см3, добавляют 100 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и охлаждают (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
10.2.1.2. Приготовление 0,2%-го раствора 4-(диметиламино)пиридина в пиридине.
В мерную колбу объемом 25 см3 помещают 0,05 г 4-(диметиламино)пиридина, прибавляют 15 см3 пиридина, перемешивают и доводят пиридином объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
10.2.1.3 Приготовление 1 н раствора серной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 14 см3 концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу объемом 500 см3, куда предварительно наливают около 200 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
10.2.2 Приготовление градуировочных растворов.
10.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 250 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,0172 г 4-фтор-N-метилэтил бензенамин трифторацетамид (V, дериват флуфенацета), растворяют в 40 — 50 см3 ацетона, доводят объем до метки ацетоном, тщательно перемешивают. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
10.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 10,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 25 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
10.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 1,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,5 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,2 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,1 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,05 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,02 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 8 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.9. Стандартный раствор № 9 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,01 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 6 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 9 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.10. Стандартный раствор № 10 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,005 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 10 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.2.11. Стандартный раствор № 11 с концентрацией деривата флуфенацета (V) 0,002 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент флуфенацета I).
Из стандартного раствора № 8 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 11 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C не более 14 суток.
10.2.3 Приготовление растворов для внесения в контрольные образцы.
10.2.3.1. Стандартный раствор A с концентрацией флуфенацета (I) 250 мкг/см3.
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,025 г флуфенацета (I), добавляют 40 — 50 см3 метанола, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор A используется для приготовления стандартных растворов для внесения в контрольные образцы и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3 месяцев.
10.2.3.2. Стандартный раствор B с концентрацией флуфенацета 5,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора A отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 50 см3 и доводят объем до метки метанолом. Стандартный раствор B используется для приготовления стандартных растворов для внесения в контрольные образцы семян и масла сои и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более одного месяца.
10.2.3.3. Стандартный раствор для внесения в контрольные образцы семян сои BC № 1 с концентрацией флуфенацета 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора B отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метанолом. Стандартный раствор BC № 1 используется для внесения в контрольные образцы семян сои и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более одного месяца.
10.2.3.4. Стандартный раствор для внесения в контрольные образцы семян сои BC № 2 с концентрацией флуфенацета 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора BC № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метанолом. Стандартный раствор BC № 2 используется для внесения в контрольные образцы семян сои и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более одного месяца.
10.2.3.5. Стандартный раствор для внесения в контрольные образцы масла сои BM № 1 с концентрацией флуфенацета 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора B отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор BM № 1 используется для внесения в контрольные образцы масла сои и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более одного месяца.
10.2.3.6. Стандартный раствор для внесения в контрольные образцы масла сои BM № 2 с концентрацией флуфенацета 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора BM № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор BM № 2 используется для внесения в контрольные образцы масла сои и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более одного месяца.
10.3 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика квалифицирующего ионного перехода от концентрации деривата флуфенацета (V) в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-м растворам для градуировки с концентрацией 0,002; 0,005; 0,010; 0,020 и 0,050 мкг/см3. Для подтверждения обнаружения именно деривата флуфенацета используются еще два подтверждающих ионных перехода, относительная интенсивность которых должна попадать в правильный диапазон.
В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади пика квалифицирующего иона (Responce) от концентрации деривата флуфенацета (V) в растворе в мкг/см3.
10.4 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума.
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 ацетона, затем 5 см3 воды. Элюировать каждый растворитель, пока уровни жидкости не достигнут верхней границы сорбента. Элюаты отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
XI. Проведение измерений
11.1 Семена сои.
11.1.1 Окисление и гидролиз.
Образец измельченных семян сои массой 10 г помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 1000 см3, приливают 75 см3 дистиллированной воды и помещают на 60 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем в колбу добавляют 10 см3 1 н раствора серной кислоты, перемешивают смесь в течение 1 — 2 мин, добавляют 0,3 г марганцовокислого калия, перемешивают смесь в течение 5 минут (смесь приобретает фиолетовый цвет), добавляют 2,0 г бисульфита натрия и встряхивают (смесь теряет фиолетовый цвет). Затем в колбу аккуратно добавляют 50 см3 концентрированной серной кислоты. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 24 часов <2>.
<2> Примечание. Так как при добавлении кислоты образуется газ, эта процедура проводится строго под тягой. Необходимо обеспечить достаточный и постоянный приток воды к конденсатору для обеспечения полной конденсации паров при кипячении с обратным холодильником. Также обеспечивается надежное подключение шлангов к водопроводной воде для предотвращения протечек. Поскольку никакие горючие растворители при кислотном гидролизе не используются, кипячение ночью не представляет опасности.
11.1.2 Перегонка с водяным паром.
Смесь, полученную по п. 11.1.1, охлаждают в течение 15 — 20 минут, затем осторожно добавляют в колбу 350 см3 дистиллированной воды. Охлаждают колбу в емкости с дробленым льдом в течение 15 минут. Затем постепенно (порциями по 10 см3) в колбу приливают 100 см3 50%-го раствора гидроксида натрия. Смесь необходимо постоянно перемешивать и охлаждать.
Проверяют pH смеси, pH должно быть больше 12. При необходимости доводят pH до значения больше 12 с помощью небольших порций (по 5 см3) 50%-го раствора гидроксида натрия. Колбу убирают со льда. Содержимое колбы переносят в двугорлую круглодонную колбу для перегонки с водяным паром.
В круглодонную колбу объемом 500 см3 (приемник для дистилляции) добавляют 2 см3 концентрированной соляной кислоты и подсоединяют к холодильнику установки перегонки с водяным паром.
Дистиллируют смесь со скоростью отгонки дистиллята от 1,5 до 2,5 см3/мин до достижения объема дистиллята 150 — 200 см3. При необходимости дистиллят хранят в холодильнике плюс 0 — 5 °C в течение 10 часов.
11.1.3 Экстракция фторанилина из дистиллята.
Дистиллят, полученный по п. 11.1.2, переносят в делительную воронку объемом 500 см3. Исходную колбу обмывают 10 см3 дистиллированной воды и переносят в ту же делительную воронку.
Проверяют pH, значение pH должно быть меньше 2. Если pH больше 2, добавляют концентрированную соляную кислоту до достижения требуемого значения pH.
Подкисленную водную фракцию промывают 2 раза по 10 см3 хлористого метилена, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 30 секунд. После полного разделения слоев выделившийся нижний слой (хлористый метилен) отбрасывают.
Водную фазу в делительной воронке подщелачивают с помощью 50%-го раствора гидроксида натрия (~ 2,5 мл) до значения pH больше 10.
Фторанилин экстрагируют двумя порциями хлористого метилена объемом по 5 см3, каждый раз встряхивая делительную воронку в течение 30 секунд. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в мерную пробирку объемом 10 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Доводят общий объем экстракта до 10 см3.
При необходимости экстракт <3> хранят в течение 10 часов в холодильнике при температуре ниже плюс 5 °C.
<3> Примечание. Первые 5 см3 экстракта содержат основное количество фторанилина. Потеря даже небольшой части экстракта значительно сократит выход производного (деривата флуфенацета V). Необходимо соблюдать осторожность в обращении с экстрактом.
11.1.4 Дериватизация <4>.
<4> Примечание. Весь процесс проводится только в работающей тяге и завершается без промедления после его начала. Добавление малых объемов компонентов реакции проводят с помощью газонепроницаемых шприцов объемом 1000 мм3.
Аликвоту (1/2 раствора) хлористого метилена <5> (5 см3), полученного по п. 10.1.3, переносят в чистую сухую мерную пробирку объемом 10 см3, добавляют 10 мм3 концентрированной серной кислоты и 250 мм3 N, N-диметилформамида. Хорошо перемешивают содержимое пробирки. Упаривают хлористый метилен слабым потоком азота до объема менее 200 мм3. Добавляют 100 мм3 N, N-диметилформамида, доводя общий объем в пробирке до 300 мм3. Помещают пробирку в стакан с холодной водой (температура ниже плюс 10 °C).
<5> Примечание. Хлористый метилен упаривается полностью. Остаточное количество хлористого метилена приводит к образованию солей и неполному выходу производного. Заметить полное упаривание хлористого метилена можно по прекращению изменения объема пробы.
Затем добавляют 100 мм3 0,2%-го раствора 4-(диметиламино)пиридина в пиридине, далее полученную смесь хорошо перемешивают в ультразвуковой ванне.
Добавляют в пробирку 300 мм3 трифторуксусного ангидрида <6> по каплям, с помощью газонепроницаемого шприца. Дают смеси постоять около 15 мин.
<6> Примечание. Использовать трифторуксусный ангидрид только в работающей тяге.
Затем в пробирку осторожно, по каплям, слегка помешивая, добавляют 3,0 см3 очищенной воды. Общий объем раствора доводят очищенной водой до 8 см3. Убирают пробирку из стакана с холодной водой, хорошо перемешивают содержимое (при необходимости используют ультразвуковую ванну).
11.1.5 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Раствор, полученный по п. 11.1.4, наносят на подготовленный по п. 10.4 концентрирующий патрон № 1 с небольшой скоростью нанесения (давление — 2 кПа), элюат отбрасывают. Пробирку обмывают 2 см3 очищенной воды, наносят на патрон, элюат отбрасывают. Патрон промывают 5 см3 воды, элюат также отбрасывают. Высушивают патрон под вакуумом в течение 15 мин (давление около — 4 кПа).
Дериват флуфенацета элюируют с патрона 8 см3 ацетона <7> при скорости потока от 15 до 20 капель/мин. Собирают элюат в чистую мерную пробирку объемом 10 см3.
<7> Примечание. Ацетон через патрон пропускается со слабым положительным давлением из шприца (скорость элюирования не должна превышать 5 см3/мин). Не использовать вакуум для элюирования ацетона через патрон.
Доводят общий объем в пробирке ацетоном до 10 см3, 1 мм3 пробы вводят в хроматограф и анализируют на содержание деривата флуфенацета (V) в условиях хроматографирования по п. 11.3.
11.2 Масло сои.
11.2.1 Экстракция.
Образец масла сои массой 10 г помещают в химический стакан объемом 100 см3, навеску растворяют в 20 см3 гексана. Растворенный образец переносят в делительную воронку на 250 см3. Исходный стакан обмывают еще раз 20 см3 гексана и переносят в ту же делительную воронку.
Флуфенацет экстрагируют 3 порциями ацетонитрила по 50 см3, встряхивая каждый раз делительную воронку в течение одной минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонитрил) собирают и объединяют в круглодонной колбе со шлифом объемом 1000 см3. По завершении процедуры экстракции верхний слой (гексан) отбрасывают.
Ацетонитрильный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе до масляного остатка при температуре водяной бани не выше плюс 35 °C.
11.2.2 Окисление и гидролиз.
К маслянистому остатку, полученному по п. 11.2.1, добавляют 2 см3 ацетона, тщательно обмывают стенки колбы. В колбу приливают 75 см3 дистиллированной воды, пробу перемешивают. Затем в колбу добавляют 10 см3 1 н раствора серной кислоты, перемешивают смесь в течение 1 — 2 мин, прибавляют 0,3 г марганцовокислого калия, перемешивают смесь в течение 5 минут (смесь приобретает фиолетовый цвет). Далее прибавляют 2,0 г бисульфита натрия, встряхивают (смесь теряет фиолетовый цвет). Затем в колбу аккуратно добавляют 50 см3 концентрированной серной кислоты.
Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 24 часов в условиях, указанных в п. 11.1.1.
Далее выполняют процедуры как указано в п. 11.1.2. Перегонка с водяным паром, п. 11.1.3. Экстракция фторанилина из дистиллята, п. 11.1.4. Дериватизация и п. 11.1.5. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
1 мм3 пробы вводят в хроматограф и анализируют на содержание деривата флуфенацета (V) в условиях хроматографирования по п. 11.3.
11.3 Хроматографические и масс-спектрометрические условия.
11.3.1. Система газожидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором.
11.3.2 Хроматографические условия.
Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,25 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой содержащей 5% фенила и 95% метилполисилоксана, толщиной пленки 0,25 мкм.
Температура испарителя плюс 200 °C, тип газа — гелий, давление 17,73 psi, режим ввода без деления потока (сплитлесс), выдержка 1,0 мин, поток продувки 50 см3/мин.
Программированный нагрев колонки с плюс 60 °C (выдержка 1 мин) по 15 град/мин до плюс 140 °C (выдержка 0 мин) и по 25 град/мин до плюс 250 °C (выдержка 0 мин), режим — постоянный поток, поток через колонку 2,0 см3/мин, средняя скорость 51,79 см/сек.
Температура устройства сопряжения хроматографа с масс-спектрометрическим детектором плюс 280 °C.
11.3.3 Масс-спектрометрические условия.
Температура ионного источника плюс 230 °C, температура квадруполей плюс 150 °C.
Режим ионизации — электронный удар, энергия ионизирующих электронов 70 эВ.
Режим сканирования — мониторинг множественных реакций (MRM). Количественный переход 206,8 \rightarrow 110,0m/z , время сканирования 25 мс, энергия соударения 25 В. Подтверждающие переходы: 137,7 \rightarrow 110,0m/z , время сканирования 25 мс, энергия соударения 5 В; 248,7 \rightarrow 206,8m/z , время сканирования 25 мс, энергия соударения 10 В.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор деривата флуфенацета (V) с концентрацией 0,05 мкг/см3, соответственно разбавляют.
XII. Обработка результатов измерения
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание деривата флуфенацета (V) в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:
X = \frac{S_{\text{пр}} \cdot A \cdot V}{100 \cdot S_{\text{ст}} \cdot m} \cdot P , (1)
где X — содержание деривата флуфенацета (V) в пробе, мг/кг;
Sст — высота (площадь) пика стандарта, мм;
Sпр — высота (площадь) пика образца, мм;
A — концентрация стандартного раствора, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
P — содержание деривата флуфенацета (V) в аналитическом стандарте, %.
XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (2):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (2)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм3;
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIV. Оформление результатов
14.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «При определении остаточного количества флуфенацета в семенах и масле сои содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг».
XV. Контроль качества результатов измерений
15.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 — 6.
Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание деривата флуфенацета (V) в которых должно охватывать весь диапазон концентраций градуировочных характеристик.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C) \times 100}{C} \leq 20 , (3)
где X — концентрация деривата флуфенацета (V) контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора деривата флуфенацета (V) в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
20 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов деривата флуфенацета (V), предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.
15.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:
C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime} , (4)
где \pm \Delta_{\text{л},X} , \Delta_{\text{л},X\prime} , — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84 \cdot \Delta ,
где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:
K_{\text{к}} = \overline{X\prime} - \overline{X} - C_{\text{д}} , (5)
где \overline{X\prime} , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 13.1), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} (6)
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (7) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (7) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
15.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R , (8)
где X1, X2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ФЛУФЕНАЦЕТА ИЗ ОБРАЗЦОВ СЕМЯН И МАСЛА СОИ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. «Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79 г.
3. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
4. ГОСТ ISO/IEC 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1 — 62 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Части 1 — 6».
6. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
7. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
8. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
9. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
10. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
11. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
12. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
13. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
14. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
15. ГОСТ 6709 «Вода дистиллированная. Технические условия».
16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
17. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
18. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
19. ГОСТ 4204 «Реактивы. Кислота серная. Технические условия».
20. ГОСТ 3118 «Реактивы. Кислота соляная. Технические условия».
21. ГОСТ 6995 «Реактивы. Метанол-яд. Технические условия».
22. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
23. ГОСТ 4328 «Реактивы. Натрий гидроокись. Технические условия».
24. ГОСТ 10852 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
25. ГОСТ 17109 «Соя. Требования при заготовках и поставках».
26. ГОСТ 32190 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
27. ГОСТ 31760 «Масло соевое. Технические условия».
| ББК 51.231 |
|---|