МУК 4.1.3955-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тиаклоприда в семенах и масле подсолнечника и сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 05.07.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 05.10.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 5 июля 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТИАКЛОПРИДА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА И СОИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3955-23
Дата введения 5 октября 2023 года
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, А.С. Поликарпов, Е.Н. Тестова).»
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «05» июля 2023 г.
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения уровня остаточных количеств тиаклоприда в семенах и масле подсолнечника и сои в диапазоне (0,01 — 0,1) мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
2.1 Физико-химические свойства тиаклоприда.
Название действующего вещества по ИЮПАК: (Z)-3-(6-хлор-3-пиридилметил)-1,3-тиазолидин-2-илиденцианамид.
Эмпирическая формула: C10H9ClN4S.
Агрегатное состояние: кристаллическое твердое вещество.
Цвет, запах: кристаллическое вещество желтоватого цвета без запаха.
Давление насыщенного пара: 3,0 x 10-7 мПа (при плюс 20 °C).
Температура плавления: плюс 136 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 1,26 (при плюс 22 °C).
Растворимость в воде: 185 мг/дм3 (при плюс 20 °C).
Растворимость в органических растворителях (г/дм3, при плюс 20 °C): ацетон — 64, ацетонитрил — более 52, дихлорметан — 160, н-гексан — менее 0,1, диметилсульфоксид — 150.
Вещество устойчиво к гидролизу при pH от 5 до 9 (при плюс 25 °C) и относительно стабильно на свету — ДТ50 составляет более 100 дней.
Тиаклоприд относительно слабо передвигается по почвенному профилю и достаточно быстро разрушается в почве в аэробных условиях (ДТ50 = 7 — 21 день).
2.2. Тиаклоприд относится к веществам умеренно опасным по острой оральной (ЛД50 для крыс 396 — 836 мг/кг), к малоопасным по дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг), но к опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) от 1223 до 2535 мг/м3). Не вызывает раздражения слизистых оболочек глаз и кожи у кроликов. Тиаклоприд практически не токсичен для пчел, птиц, дождевых червей и водорослей.
2.3. Тиаклоприд — инсектицид нервно-паралитического действия, эффективно уничтожает тлю, цветоеда, минеров, трипсов, плодожорку, колорадского жука на хлопчатнике, табаке, картофеле, рисе, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода.
III. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ
3.1. Метод основан на определении тиаклоприда методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора.
3.2. Определение тиаклоприда в семенах сои, масле подсолнечника и соевом масле проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, очистки экстракта на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 1.
Определение тиаклоприда в семенах подсолнечника проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, очистки экстракта концентрирующих патронах № 2, на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 1.
3.3. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
3.4. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
IV. МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 2 - 4.
| Наименование средства измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I) по ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,5 г, класс точности средний (III) по ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2 и 1-2-2-5 по ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Наименование реактива | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Тиаклоприд, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 99,0% |
| Алюминий окись | Нейтральная, размер частиц 50 — 200 мкм |
| Ацетон химически чистый | ГОСТ 2603 |
| Ацетонитрил химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый чистый для анализа | ГОСТ 20490 |
| Кальций хлористый чистый для анализа | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены гидрофильным слабокислым сорбентом (C) с размером частиц 63 — 200 мкм (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 2) | Заполнены гидрофильным слабокислым сорбентом с постоянной активностью с размером частиц 63 — 200 мкм с привитыми аминогруппами (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Метилен хлористый химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Натрий сернокислый химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Натрий углекислый кислый химически чистый | ГОСТ 4201 |
| Натрий хлористый химически чистый | ГОСТ 4233 |
| Этилацетат чистый для анализа | ГОСТ 22300 |
Вспомогательные устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Аллонж прямой стеклянный | Тип АО по ГОСТ 25336 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний в минуту |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД по ГОСТ 25336 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В по ГОСТ 25336 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К по ГОСТ 25336 |
| Колбы конические стеклянные | Тип Кн по ГОСТ 25336 |
| Колонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 150 мм x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Предколонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18; линейные размеры 12,5 мм x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур плюс (20 — 100) °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные объемом Тип В, номинальная вместимость (100 — 800 см3) по ГОСТ 25336 | |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Фильтры мембранные для очистки растворителей | Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3 по ГОСТ 22967 |
| Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, а также посуды, реактивов и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам. | |
VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
VII. КВАЛИФИКАЦИЯ ОПЕРАТОРОВ
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. ОТБОР ПРОБ
8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.
<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.
Отобранные пробы семян масличных культур подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы растительного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.
IX. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 — 30) °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
X. ПОДГОТОВКА К ОПРЕДЕЛЕНИЮ
10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с окисью алюминия и концентрирующих патронах № 1 и № 2, установление градуировочной характеристики.
Подготовка органических растворителей.
10.1.1 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс (81,0 — 82,0) °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс (81,0 — 82,0) °C, отбрасывают.
10.1.2 Очистка хлористого метилена.
Хлористый метилен промывают равным объемом 5% раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3.
Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс (39,5 — 40,5) °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс (39,5 — 40,5) °C, отбрасывают.
10.1.3 Очистка гексана.
Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Гексан перегоняют при температуре плюс (68,5 — 69,0) °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс (68,5 — 69,0) °C, отбрасывают.
10.1.4 Очистка этилацетата.
Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Этилацетат перегоняют при температуре плюс (76,5 — 77,5) °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс (76,5 — 77,5) °C, отбрасывают.
10.1.5 Очистка ацетона.
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3.
Ацетон перегоняют при температуре плюс (56,0 — 56,5) °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс (56,0 — 56,5) °C, отбрасывают.
10.1.6 Приготовление бидистиллированной воды.
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.
Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс (99,5 — 100,0) °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс (99,5 — 100,0) °C, отбрасывают.
10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.
10.2.1 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и бидистиллированную воду. Ацетонитрил и бидистиллированную воду предварительно фильтруют через мембранные фильтры для очистки растворителей.
В плоскодонную колбу объемом 1000 см3 помещают 600 см3 бидистиллированной воды и 400 см3 ацетонитрила. Смесь тщательно перемешивают.
При использовании градиентного режима хроматографирования компоненты подвижной фазы помещают в разные емкости.
В случае отсутствия в составе хроматографической системы автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см3/мин в течение 5 минут, после чего его помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.
Приготовленный раствор подвижной фазы хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
10.2.2 Приготовление рабочих растворов.
10.2.2.1 Приготовление 5% раствора натрия углекислого кислого.
50 г натрия углекислого кислого переносят в мерную колбу на 1000 см3, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используется для очистки хлористого метилена и хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12-ти месяцев.
10.2.2.2 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.
400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12-ти месяцев.
10.2.3 Приготовление градуировочных растворов.
10.2.3.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией тиаклоприда 1000,0 мкг/см3.
Взвешивают 50 мг тиаклоприда в мерной колбе объемом 50 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 6 месяцев.
10.2.3.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией тиаклоприда 100,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией тиаклоприда 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией тиаклоприда 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией тиаклоприда 0,5 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией тиаклоприда 0,2 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией тиаклоприда 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией тиаклоприда 0,05 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). Стандартный раствор № 8 используется для установления градуировочной характеристики и хранится при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.9. Стандартные растворы тиаклоприда с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы семян масличных культур.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом из стандартного раствора № 3 готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 тиаклоприда, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы семян подсолнечника и сои. Стандартные растворы для внесения хранятся при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.2.3.10. Стандартные растворы тиаклоприда с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы растительного масла.
Методом последовательного разведения ацетоном из стандартного раствора № 3 готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 тиаклоприда, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы масла подсолнечника и сои. Стандартные растворы для внесения хранятся при температуре не выше плюс (4 +/- 2) °C в течение 30 дней.
10.3. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
10.3.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации тиаклоприда в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 и 0,05 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 10 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.4. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.
10.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание тиаклоприда в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,00 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:
\text{А } = \frac{(\text{Х } - \text{С}) \times 100}{\text{С}} \leq 10, (1)
где X — концентрация тиаклоприда контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора тиаклоприда в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тиаклоприда, предусмотренных методикой выполнения измерения. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.1.
10.4. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тиаклоприда на них.
10.4.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, затем 10 см3 гексана. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
10.4.2. Проверка хроматографического поведения тиаклоприда на концентрирующих патронах № 1.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора тиаклоприда в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и двумя порциями по 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 7:3 и вносят растворы на патрон. Элюаты собирают в чистые отгонные колбы объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие тиаклоприд, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения тиаклоприда на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
10.5. Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тиаклоприда на них.
10.5.1 Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 2 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:4, затем 10 см3 гексана. Элюаты отбрасывают.
Не допускать высыхания поверхности патрона.
10.5.2. Проверка хроматографического поведения тиаклоприда на концентрирующих патронах № 2.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора тиаклоприда в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 2 см3 этилацетата, обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают двумя порциями по 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:4 и вносят растворы на патрон. Элюаты собирают в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие тиаклоприд, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения тиаклоприда на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.
10.6. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тиаклоприда на ней.
10.6.1 Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта.
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила.
10.6.2. Проверка хроматографического поведения тиаклоприда на колонке с окисью алюминия.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора тиаклоприда в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Исходную колбу последовательно обмывают двумя порциями по 10 см3 ацетонитрила и вносят растворы на колонку. Элюаты собирают в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие тиаклоприд, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения тиаклоприда на колонке с окисью алюминия проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.
10.7. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.
Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 30 °C в течение 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой (смесь ацетонитрила с водой в соотношении 600:400) при скорости подачи растворителя 0,5 см3/мин.
XI. ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
11.1 Семена сои.
11.1.1 Экстракция.
Образец измельченных семян сои массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя каждый раз по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают до сухого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Сухой остаток, полученный по п. 11.1.1, растворяют в 5 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 100 см3 воды и 5 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3.
Тиаклоприд экстрагируют тремя порциями хлористого метилена по 30 см3 каждая, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.3 Очистка экстракта на колонках с окисью алюминия.
Сухой остаток, полученный по п. 11.1.2, растворяют в 10 см3 ацетонитрила, тщательно обмывают стенки колбы и вносят раствор на подготовленную колонку с окисью алюминия (п. 10.6.1), элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3. Исходную колбу обмывают 10 см3 ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и выпаривают досуха остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток, полученный по п. 11.1.3, растворяют в 1 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон (п. 10.4.1), элюат отбрасывают. Исходную колбу последовательно обмывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1 и 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, элюаты отбрасывают.
Тиаклоприд элюируют с патрона 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 7:3, элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 10 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.2 Семена подсолнечника.
11.2.1 Экстракция.
Образец измельченных семян подсолнечника массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в отгонную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя каждый раз по 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают до сухого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Сухой остаток, полученный по п. 11.2.1, растворяют в 5 см3 ацетонитрила и проводят очистку экстракта, как указано в п. 11.1.2.
Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
11.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2.
Сухой остаток, полученный по п. 11.2.2, растворяют в 2 см3 этилацетата, обмывают стенки колбы, добавляют 8 см3 гексана, перемешивают и вносят раствор на подготовленный патрон (п. 10.5.1), элюат отбрасывают.
Исходную колбу обмывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:4, элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку по п. 11.1.3.
Очистка экстракта на колонках с окисью алюминия и по п. 11.1.4.
Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 10 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.3 Масло сои и подсолнечника.
11.3.1 Экстракция.
Навеску растительного масла массой 10 г помещают в химический стакан объемом 50 см3. Переносят ее в делительную воронку объемом 250 см3 двумя порциями гексана объемом по 30 см3. Тиаклоприд экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку по п. 11.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, п. 11.1.3. Очистка экстракта на колонках с окисью алюминия и по п. 11.1.4. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и 10 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.4 Условия хроматографирования.
11.4.1 Хроматографическая система, включающая:
- хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от плюс 15 до плюс 80 °C и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;
- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.
Колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.
Предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.
Температура колонки: плюс 30 °C.
Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и бидистиллированной воды в соотношении 600:400 (по объему) при хроматографировании в изократическом режиме.
Скорость потока элюента: 0,5 см3/мин.
Чувствительность не менее 8 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор тиаклоприда с концентрацией 1,0 мкг/см3, соответственно разбавляют. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания тиаклоприда в пробах.
XII. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЯ
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание тиаклоприда в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:
где X — содержание тиаклоприда в пробе, мг/кг;
A — концентрация тиаклоприда, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г.
XIII. ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ
13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (3)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIV. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
14.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
\Delta = \delta \cdot \overline{X}/100,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«- содержание тиаклоприда в семенах и масле подсолнечника и сои — менее 0,01 мг/кг».
XV. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
15.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).
Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ТИАКЛОПРИДА ИЗ СЕМЯН И МАСЛА ПОДСОЛНЕЧНИКА И СОИ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
4. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
5. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
7. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
8. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
9. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
10. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
14. ГОСТ Р 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
15. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
17. ГОСТ 22967 «Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний».
18. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия».
19. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
20. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
21. ГОСТ 4201 «Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия».
22. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
23. ГОСТ 22300 «Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
24. ГОСТ 10852 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
25. ГОСТ 17109 «Соя. Требования при заготовках и поставках».
26. ГОСТ 31760 «Масло соевое. Технические условия».
27. ГОСТ 32190 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
28. ГОСТ 22391 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках».
29. ГОСТ 1129 «Масло подсолнечное. Технические условия».