МУК 4.1.3952-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пироксасульфона в зерне нута методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 05.07.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 05.10.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 5 июля 2023 года
Дата введения 5 октября 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПИРОКСАСУЛЬФОНА В ЗЕРНЕ НУТА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3952-23
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова).»
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 5 июля 2023 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием для определения уровня остаточных количеств пироксасульфона в зерне нута в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1 Физико-химические свойства пироксасульфона.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-[5-(дифторметокси)-1-метил-3-(трифторметил)пиразол-4-ил метилсульфонил]-4,5-дигидро-5,5-диметил-1,2-оксазол.
Эмпирическая формула: C12H14F5N3O4S.
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет, запах: белый, без запаха.
Давление насыщенного пара при плюс 25 °C: 2,4 x 10-6 Па.
Температура плавления: плюс 131 — 133 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25 °C: Кowlog P = 2,30 (pH 8,7).
Растворимость в воде (в г/дм3 при плюс 20 °C): 3,49.
Растворимость в органических растворителях (в г/дм3 при плюс 20 °C): ацетон — более 250; н-гексан — 0,0721; дихлорметан — 151; метанол — 11,4; толуол — 11,3 этилацетат — 97.
Пироксасульфон гидролитически стабилен при pH 5, 7, 9 в течение 15 дней.
В почве DT50 составляет 16 — 26 дней.
2.2. Пироксасульфон относится к веществам малоопасным по острой оральной (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) более 5800 мг/м3 воздуха).
2.3. Пироксасульфон — гербицид из класса пиразолов/оксазолинов, применяется как довсходовый и послевсходовый гербицид системного действия для борьбы с широколиственными сорняками.
III. Метод измерения
3.1. Метод основан на определении пироксасульфона с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора.
3.2. Определение пироксасульфона в зерне нута проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, вымораживании экстракта в морозильной камере и очистки аликвоты экстракта на колонках с оксидом алюминия.
3.3. Идентификация пироксасульфона проводится по времени удерживания, наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов. Количественное определение пироксасульфона проводится методом абсолютной калибровки.
3.4. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометрического детектора.
IV. Метрологические характеристики
4.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 4.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Хроматограф жидкостной с масс-спектрометрическим детектором | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I) по ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,5 г, класс точности средний (III) по ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 и 2-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2 и 1-2-2-5 по ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Пироксасульфон, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 98,0% |
| Азот газообразный особой чистоты | ГОСТ 9293 |
| Алюминий окись | 1 степени активности, размер частиц 50 — 200 мкм |
| Ацетонитрил химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| Калий марганцовокислый чистый для анализа | ГОСТ 20490 |
| Кальций хлористый чистый для анализа | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Кислота муравьиная для анализа | Содержание основного вещества не менее 98% |
| Натрий сернокислый химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Спирт метиловый химически чистый | ГОСТ 6995 |
Вспомогательные устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Алонж прямой стеклянный | Тип АО по ГОСТ 25336 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 кГц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В по ГОСТ 25336 |
| Колбы конические стеклянные | Тип Кн по ГОСТ 25336 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К по ГОСТ 25336 |
| Колонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18 |
| Колонки хроматографические стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур 20 — 100 °C |
| Предколонка хроматографическая стальная | Заполнена сорбентом с привитыми неполярными группами C18 |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3 по ГОСТ 25336 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
| Фильтры мембранные для очистки растворителей | Диаметр 47 мм, размер пор 0,45 мкм |
| Шприц инъекционный многократного применения | Объем 10 см3 по ГОСТ 22967 |
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, а также посуды, реактивов и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
VII. Квалификация операторов
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Отбор проб
8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.
<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Пробы зерна нута подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
IX. Условия проведения измерений
9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
X. Подготовка к выполнению измерений
10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия, установление градуировочной характеристики.
Подготовка органических растворителей.
10.1.1 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
10.1.2 Приготовление бидистиллированной воды.
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.
Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.
10.2.1 Приготовление рабочих растворов.
10.2.1.1. Приготовление 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты (подвижная фаза A).
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 бидистиллированной воды, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
10.2.1.2. Приготовление 0,1%-го раствора муравьиной кислоты в метаноле (подвижная фаза B).
В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 метанола, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки метанолом. Раствор используется как компонент подвижной фазы и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
10.2.1.3. Приготовление смеси метанола с водой в соотношении 50:50 (по объему).
В коническую колбу объемом 250 см3 помещают 100 см3 метанола, 100 см3 бидистиллированной воды и перемешивают. Раствор используется для приготовления градуировочных стандартов и растворения проб и хранится при комнатной температуре не более пяти дней.
10.2.2 Приготовление градуировочных растворов.
10.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией пироксасульфона 100,0 мкг/см3.
Взвешивают 10 мг пироксасульфона в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в метаноле и доводят объем до метки метанолом при перемешивании. Стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 2 месяцев.
10.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией пироксасульфона 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1,0 см3 и помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Доводят объем до метки метанолом при перемешивании. Стандартный раствор № 2 используют для приготовления градуировочных растворов и стандартных растворов для хроматографического исследования и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 2 месяцев.
10.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией пироксасульфона 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1,0 см3 и помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления градуировочных растворов и стандартных растворов для хроматографического исследования и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией пироксасульфона 100,0 нг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2,5 см3 и помещают в мерную колбу объемом 25 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 4 используют для приготовления градуировочных растворов и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией пироксасульфона 25,0 нг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2,5 см3 и помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 5 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией пироксасульфона 20,0 нг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2,0 см3 и помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 6 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией пироксасульфона 10,0 нг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2,5 см3 и помещают в мерную колбу объемом 25 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.8. Стандартный раствор № 8 с концентрацией пироксасульфона 5,0 нг/см3.
Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 5,0 см3 и помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 8 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.9. Стандартный раствор № 9 с концентрацией пироксасульфона 2,0 нг/см3.
Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 2,0 см3 и помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 9 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.10. Стандартный раствор № 10 с концентрацией пироксасульфона 1,0 нг/см3.
Из стандартного раствора № 7 отбирают пипеткой 1,0 см3 и помещают в мерную колбу объемом 10 см3. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор № 10 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца.
10.2.2.11. Стандартные растворы пироксасульфона с концентрацией 1,00; 0,50; 0,20; и 0,10 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы и для проверки хроматографического поведения пироксасульфона на колонке с оксидом алюминия.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 1,00; 0,50; 0,20 и 0,10 мкг/см3 пироксасульфона и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы зерна нута.
Для проверки хроматографического поведения на колонке с окисью алюминия используют стандартный раствор в ацетонитриле, содержащий 0,1 мкг/см3 (100 нг/см3) пироксасульфона.
Стандартные растворы в ацетонитриле хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 2 месяцев.
10.3. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
10.3.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость отклика фрагментарного иона, используемого для количественного определения, от концентрации пироксасульфона в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 20,0 и 25,0 нг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
Производят расчет параметров градуировочной характеристики (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации пироксасульфона в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0,995, и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20% для каждого уровня градуировочной характеристики.
Если линейность градуировочной характеристики была продемонстрирована, то при анализе серии образцов допускается устанавливать градуировочную характеристику методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5 и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений. Данные для построения градуировочной зависимости набираются перед началом серии анализов и после ее окончания (рамочная калибровка; не менее 10 измерений не менее чем по пяти уровням концентраций). По полученным данным производят расчет параметров градуировочной характеристики. Рекомендуется в серию анализов образцов включать не более 12 инъекций.
10.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание пироксасульфона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций градуировочных характеристик.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C) \times 100}{C} \leq 20 ,
где X — концентрация пироксасульфона контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора пироксасульфона в экстракте контрольных образцов анализируемых матриц, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
20 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов пироксасульфона, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.
Примечание: в случае, если градуировочная характеристика устанавливается при анализе каждой серии образцов по п. 10.3, контроль стабильности градуировочной характеристики не проводится.
10.4. Подготовка колонки с 3 г окиси алюминия для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения пироксасульфона на ней.
10.4.1 Подготовка колонки с 3 г окиси алюминия для очистки экстракта.
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см3 ацетонитрила.
10.4.2. Проверка хроматографического поведения пироксасульфона на колонке с 3 г окиси алюминия.
В химический стакан объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора пироксасульфона в ацетонитриле с концентрацией 0,1 мкг/см3, прибавляют туда же 9 см3 ацетонитрила, перемешивают и вносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.
Химический стакан обмывают тремя порциями ацетонитрила объемом по 10 см3 каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают в отдельную отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 5 см3 смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и анализируют на содержание пироксасульфона в условиях хроматографирования по п. 11.2.
Определяют фракции, содержащие пироксасульфон, полноту умывания с колонки и необходимый объем элюентов.
Изучение поведения пироксасульфона на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.
10.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.
Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют ее при температуре плюс 40 °C не более 3 — 4 часов, промывая подвижной фазой (смесь компонентов A и B, приготовленных по п. 10.2.1, в соотношении 90:10) при скорости подачи растворителя 0,3 см3/мин.
XI. Проведение измерений
11.1 Зерно нута.
11.1.1 Экстракция.
Образец измельченного зерна нута массой 10 г помещают в плоскодонную стеклянную колбу объемом 100 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в мерный цилиндр объемом 100 см3 через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 50 см3 ацетонитрила. Экстракт фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 100 см3. Объем экстракта доводят до метки 100 см3 ацетонитрилом. Экстракт переносят в плоскодонную колбу объемом 100 см3, перемешивают и помещают на 30 минут в морозильную камеру (температура не выше минус 18 °C). Охлажденный экстракт фильтруют в плоскодонную колбу объемом 100 см3 через бумажный фильтр низкой плотности и выдерживают при комнатной температуре в течение 40 — 60 мин. Затем отбирают аликвоту экстракта объемом 10 см3, помещают в химический стакан объемом 50 см3 и проводят очистку на колонке с окисью алюминия.
11.1.2 Очистка экстракта на колонке с 3 г окиси алюминия.
Аликвоту экстракта объемом 10 см3 (1/10 часть), полученную по п. 11.1.1, вносят на подготовленную по п. 10.4.1 колонку с 3 г окиси алюминия. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3.
Исходный стакан обмывают последовательно двумя порциями по 10 см3 ацетонитрила каждая, вносят на колонку. Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток в колбе растворяют в 5 см3 смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), помещают на 20 секунд в ультразвуковую ванну, обмывая стенки колбы. Фильтруют содержимое колбы через бумажный фильтр низкой плотности в виалу объемом 20 см3. Затем пробу переносят в виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание пироксасульфона в условиях хроматографирования по п. 11.2.
11.2 Хроматографические и масс-спектрометрические условия.
11.2.1. Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа «тройной квадруполь».
11.2.2 Хроматографические условия.
Колонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18.
Предколонка хроматографическая стальная, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18.
Температура колонки: плюс 40 °C.
Подвижная фаза: A — 0,1%-й водный раствор муравьиной кислоты, B — 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в метаноле (% по объему) в градиентном режиме со скоростью потока 0,3 см3/мин.
Градиентный режим потока элюента при определении пироксасульфона приведен в табл. 11.1.
Градиентный режим потока элюента при определении пироксасульфона
| Время (минуты) | Подвижная фаза A (0,1%-й водный раствор муравьиной кислоты) |
Подвижная фаза B (0,1%-й раствор муравьиной кислоты в метаноле) |
|---|---|---|
| 0 | 90 | 10 |
| 3 | 90 | 10 |
| 10 | 0 | 100 |
| 18 | 0 | 100 |
| 20 | 90 | 10 |
| 22 | 90 | 10 |
11.2.3 Масс-спектрометрические условия.
Источник ионов — электроспрей.
Газ-осушитель — азот с температурой плюс 320 °C, расход 10 м3/мин.
Расход газа периферийного слоя 11 м3/мин.
Температура газа периферийного слоя плюс 300 °C.
Давление в распылителе 30 psi.
Напряжение на входе в капилляр 3500 В.
Напряжение на умножителе: +200 В.
Режим ионизации — положительный.
Режим сканирования — мониторинг множественных реакций (MRM).
- пироксасульфон: 392 \rightarrow 229 — количественный переход, энергия соударения — 17 В; 392 \rightarrow 179 — качественный переход, энергия соударения — 41 В. Энергия фрагментации 145 В, время сканирования 50 мс, напряжение на ускорителе ячейки 7 В.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартные растворы пироксасульфона с концентрацией 25,0 нг/см3, разбавляют. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания пироксасульфона в пробах.
Примечание: хроматографические и масс-спектрометрические условия подбираются для каждого индивидуального прибора с масс-спектрометрическим детектированием и могут быть изменены для достижения результатов не хуже вышеуказанных.
XII. Обработка результатов измерения
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание пироксасульфона рассчитывают по формуле без учета полноты извлечения вещества из проб:
X = \frac{A \cdot V \cdot K}{m \cdot 1000} ,
где X — содержание пироксасульфона в пробе, мг/кг;
A — концентрация пироксасульфона, найденная по градуировочным графикам в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, нг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
К — коэффициент, учитывающий объем экстракта, взятого для анализа (для зерна нута К = 10);
1000 — коэффициент перевода нг/см3 в мг/кг.
XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r ,
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 4.1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIV. Оформление результатов
14.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} , при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 4.1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание пироксасульфона в зерне нута — менее 0,01 мг/кг».
XV. Контроль качества результатов измерений
15.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).
Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ПИРОКСАСУЛЬФОНА ИЗ ОБРАЗЦОВ ЗЕРНА НУТА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено, мг/кг | Полнота извлечения, % |
| Зерно нута | 0,01 | 92,9 |
| 0,02 | 93,1 | |
| 0,05 | 92,9 | |
| 0,10 | 92,2 |
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
4. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
5. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
7. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
8. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
9. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
10. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
14. ГОСТ Р 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
15. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
17. ГОСТ 22967 «Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний».
18. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
19. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
20. ГОСТ 6995 «Реактивы. Метанол-яд. Технические условия».
21. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
22. ГОСТ 13586.3 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб».
23. ГОСТ 8758 «Нут. Требования при заготовках и поставках»
| ББК 51.231 |
|---|