МУК 4.1.3944-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спинеторама в воде, почве, ягодах винограда, в плодовых семечковых культурах, в яблочном и виноградном соке, в зеленой массе и зерне кукурузы, в семенах масличных культур и в растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания

№ МУК 4.1.3944-23Действующий акт

(утв. Роспотребнадзором 04.07.2023)

Примечание

Документ введен в действие с 04.10.2023.

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 4 июля 2023 года

Дата введения 4 октября 2023 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИНЕТОРАМА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, В ПЛОДОВЫХ СЕМЕЧКОВЫХ КУЛЬТУРАХ, В ЯБЛОЧНОМ И ВИНОГРАДНОМ СОКЕ, В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, В СЕМЕНАХ МАСЛИЧНЫХ КУЛЬТУР И В РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3944-23

1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова).»

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 4 июля 2023 г.

3. Введены впервые.

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовых концентраций спинеторама-J и спинеторама-L (каждого соединения) в воде в диапазоне 0,0025 — 0,0250 мг/дм3 и в почве в диапазоне 0,005 — 0,050 мг/кг, а также уровня их остаточных количеств в ягодах винограда, плодовых семечковых культурах, в яблочном и виноградном соке, зеленой массе и зерне кукурузы, семенах масличных культур и в растительных маслах в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг. Остаточные количества спинеторама определяются как сумма остаточных количеств спинеторама-J и спинеторама-L.

1.2 МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические свойства

2.1 Физико-химические свойства крезоксим-метила спинеторама.

Спинеторам — продукт ферментации лучистых грибов актиномицетов Saccharopolyspora spinosa, модифицированный химическим путем, состоит из двух компонентов — спинеторам-J (основой компонент) и спинеторам-L в соотношении примерно 3:1.

2.1.1 Спинеторам-J.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (1~{S},2~{R},5~{R}, 7~{R},9~{R},10~{S},14~{R},15~{S},19~{S})-15-[(2~{R},5~{S},6~{R})-5-(диметиламино)-6-метилоксан-2-ил]окси-7-[(2~{R},3~{R},4~{R},5~{S},6~{S})-4-этокси-3,5-диметокси-6-метилоксан-2-ил]окси-19-этил-14-метил-20-оксатетрацикло[10.10.0.0^{2,10}.0^{5,9}]докос-11-ене-13,21-дион.

Эмпирическая формула: C42H69NO10.

Молекулярная масса: 747,5.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белый, без запаха.

Давление насыщенного пара при плюс 25 °C: 5,3 x 10-11 (мПа).

Температура плавления: плюс 143,4 °C.

Константа диссоциации (при плюс 25 °C): pKa — 7,68.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 20 °C: Kow log P = 2,44 (pH 5); 4,09 (pH 7); 4,22 (pH 9).

Растворимость в воде (в мг/дм3, при плюс 20 °C): 0,423 (pH 5); 0,011 (pH 7); 0,006 (pH 10).

Растворимость в органических растворителях (в г/дм3, при плюс 20 °C): ацетон — более 250; ксилол — более 250; ацетонитрил — 163; этилацетат — более 250; н-гептан — 23,9.

Спинеторам-J гидролитически стабилен, подвергается фотолизу: DT50 в воде составляет 0,5 дня.

2.1.2 Спинеторам-L.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (1~{S},2~{S},5~{R},7~{S},9~{S},10~{S},14~{R},15~{S},19~{S})-15-[(2~{R},5~{S},6~{R})-5-(диметиламино)-6-метилоксан-2-ил]окси-7-[(2~{R},3~{R},4~{R},5~{S},6~{S})-4-этокси-3,5-диметокси-6-метилоксан-2-ил]окси-19-этил-4,14-диметил-20-оксатетрацикло [10.10.0.0^{2,10}.0^{5,9}]докоза-3,11-диен-13,21-дион.

Эмпирическая формула: C43H69NO10.

Молекулярная масса: 759,5.

Агрегатное состояние: кристаллы.

Цвет, запах: от белого до желтого, с миндальным запахом.

Давление насыщенного пара при плюс 25 °C: 2 x 10-11 (мПа).

Температура плавления: плюс 70,8 °C.

Константа диссоциации (при плюс 25 °C): pKa — 7,59.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при плюс 20 °C: Kow log P = 2,94 (pH 5); 4,49 (pH 7); 4,82 (pH 9).

Растворимость в воде (в мг/дм3, при плюс 20 °C): 0,002 (pH 5); 0,467 (pH 7); 0,002 (pH 9); 0,0007 (pH 10).

Растворимость в органических растворителях (в г/дм3, при 20 °C): в ацетоне, н-гептане, ксилоле, ацетонитриле и этилацетате — более 250.

Спинеторам-L гидролитически стабилен при pH 5 и pH 7, при pH 9 период полураспада DT50 составляет 154 дня; подвергается фотолизу: DT50 в воде составляет 0,3 дня.

2.2. Спинеторам относится к веществам малоопасным по острой оральной (ЛД50 для крыс более 5000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 5000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) 4400 мг/м3 воздуха). Не вызывает покраснения глаз и кожи.

Не обладает канцерогенными, генотоксичными и нейротоксичными свойствами.

2.3. Спинеторам — инсектицид широкого спектра действия из класса спинозинов, активен в отношении трипсов, мух, белокрылки, чешуекрылых и других насекомых. Применяют для защиты широкого спектра сельскохозяйственных культур от насекомых.

III. Метод измерения

3.1. Метод основан на определении спинеторама-J и спинеторама-L с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора.

Определение спинеторама-J и спинеторама-L в пробах воды проводится после разбавления аликвоты пробы воды точно отмеренным объемом ацетонитрила.

Определение спинеторама-J и спинеторама-L в почве проводится после их экстракции из образцов почвы смесью ацетонитрила с водой и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами.

Определение спинеторама-J и спинеторама-L в зеленой массе кукурузы, ягодах винограда, виноградном и яблочном соке проводится после их экстракции из образцов ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами.

Определение спинеторама-J и спинеторама-L в зерне кукурузы и плодах яблони проводится после их экстракции из образцов смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 (по объему) и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами.

Определение спинеторама-J и спинеторама-L в семенах масличных культур проводится после их экстракции из образцов ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами.

Определение спинеторама-J и спинеторама-L в растительных маслах проводится после растворения образцов в гексане, отбора аликвоты раствора с последующей очисткой ее на концентрирующих патронах № 2 с гидрофобным сорбентом на основе сверхсшитого полистирола и на концентрирующих патронах № 1 со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами.

Идентификация спинеторама-J и спинеторама-L проводится по времени удерживания, наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов. Количественное определение спинеторама-J и спинеторама-L проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометрического детектора.

IV. Метрологические характеристики

4.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)	Показатель точности (границы относительной погрешности), \pm \delta , % P = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости, \sigma_{r} , %	Стандартное отклонение воспроизводимости, \sigma_{R} , %	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, % (P = 0,95)
1	2	3	4	5	6	7
спинеторам-J
Вода	0,0025 - ₀,0050 вкл	50	5,0	7,0	14	19
Вода	0,0100 - ₀,0250 вкл	50	1,8	2,5	5	8
Почва	0,005 — 0,010 вкл	50	3,9	5,5	11	15
Почва	0,020 — 0,050 вкл	50	2,4	3,4	7	9
Ягоды винограда	0,01 — 0,10 вкл	50	2,4	3,4	7	9
Виноградный сок	0,01 — 0,10 вкл	50	4,5	6,3	13	18
Плоды яблони	0,01 — 0,10 вкл	50	4,9	6,8	14	19
Яблочный сок	0,01 — 0,10 вкл	50	5,9	8,2	16	23
Зеленая масса кукурузы	0,01 — 0,10 вкл	50	4,7	6,5	13	18
Зерно кукурузы	0,01 — 0,10 вкл	50	5,6	7,8	16	22
Семена сои	0,01 — 0,10 вкл	50	5,0	7,0	14	19
Семена подсолнечника	0,01 — 0,10 вкл	50	4,1	5,7	11	16
Масло подсолнечника	0,01 — 0,10 вкл	50	4,3	6,0	12	17
спинеторам-L
Вода	0,0025 — 0,0050 вкл	50	5,7	8,0	16	22
Вода	0,0100 — 0,0250 вкл	50	1,8	2,5	5	7
Почва	0,005 — 0,010 вкл	50	2,5	3,5	7	9
Почва	0,020 — 0,050 вкл	50	2,1	2,9	6	9
Ягоды винограда	0,01 — 0,10 вкл	50	1,7	2,4	5	7
Виноградный сок	0,01 — 0,10 вкл	50	4,4	6,1	12	17
Плоды яблони	0,01 — 0,10 вкл	50	5,5	7,7	15	22
Яблочный сок	0,01 — 0,10 вкл	50	3,9	5,4	11	15
Зеленая масса кукурузы	0,01 — 0,10 вкл	50	3,8	5,3	11	15
Зерно кукурузы	0,01 — 0,10 вкл	50	6,2	8,7	17	24
Семена сои	0,01 — 0,10 вкл	50	5,4	7,6	15	21
Семена подсолнечника	0,01 — 0,10 вкл	50	4,3	6,1	12	17
Масло подсолнечника	0,01 — 0,10 вкл	50	4,0	5,7	11	16

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для спинеторама-J и спинеторама-L

Анализируемый объект	Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20
Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, +/-, %
1	2	3	4	5	6
спинеторам-J
Вода	0,0025	0,0025 — 0,0250	89,1	3,2	1,3
Почва	0,005	0,005 — 0,050	87,9	5,9	2,4
Ягоды винограда	0,01	0,01 — 0,10	83,1	2,3	0,9
Виноградный сок	0,01	0,01 — 0,10	86,2	3,1	1,2
Плоды яблони	0,01	0,01 — 0,1	79,0	4,6	1,7
Яблочный сок	0,01	0,01 — 0,1	84,4	5,9	2,3
Зеленая масса кукурузы	0,01	0,01 — 0,10	74,5	4,0	1,4
Зерно кукурузы	0,01	0,01 — 0,10	88,6	6,6	2,7
Семена сои	0,01	0,01 — 0,1	86,2	3,9	1,6
Семена подсолнечника	0,01	0,01 — 0,1	83,0	3,0	1,2
Масло подсолнечника	0,01	0,01 — 0,1	82,6	5,7	2,2
спинеторам-L
Вода	0,0025	0,0025 — 0,0250	86,0	3,7	1,5
Почва	0,005	0,005 — 0,050	83,9	3,1	1,2
Ягоды винограда	0,01	0,01 — 0,10	83,1	2,1	0,8
Виноградный сок	0,01	0,01 — 0,10	91,5	4,8	2,1
Плоды яблони	0,01	0,01 — 0,1	78,6	4,7	1,8
Яблочный сок	0,01	0,01 — 0,1	85,9	6,7	2,7
Зеленая масса кукурузы	0,01	0,01 — 0,10	75,5	3,5	1,2
Зерно кукурузы	0,01	0,01 — 0,10	88,3	6,7	2,8
Семена сои	0,01	0,01 — 0,1	86,5	4,0	1,6
Семена подсолнечника	0,01	0,01 — 0,1	86,5	3,1	1,3

V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

5.1 Средства измерений:

весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228 — специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г;
весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228 — средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,5 г;
колбы мерные на 10, 100, 500 и 1000 см3, ГОСТ 1770;
пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см3, ГОСТ 29227;
цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 см3, ГОСТ 1770;
система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором, включающая:
модульный жидкостной хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элюента от 0,001 до 5,0 см3/мин и создавать давление от 0 до 600 бар; вакуумного дегазатора; термостата колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температур от плюс 10 до плюс 80 °C и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему. ВЭЖХ система соединена с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройной квадруполь с двумя высокопроизводительными турбомолекулярными насосами, позволяющим регистрировать отдельные ионы с заданными массами от 50 до 3000 а.е.м.;
система оснащена компьютерной системой обработки данных, контролирующей работу всего прибора, обеспечивающей сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спектрометрического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ.

5.2 Реактивы:

спинеторам-J, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 92%;
спинеторам-L, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 89%;
азот, особой чистоты, ГОСТ 9293;
ацетон, химически чистый;
ацетонитрил, особой чистоты, УФ-200 нм;
вода дистиллированная по ГОСТ 6709 и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости);
n-Гексан, химически чистый;
калий марганцовокислый, чистый для анализа, ГОСТ 20490;
кальций хлористый, чистый;
кислота муравьиная, чистая для анализа, ГОСТ 5848;
концентрирующие патроны для твердофазной экстракции со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами с размером частиц 63 — 200 мкм (объем — 1 см3), (патрон № 1);
концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофобным сорбентом на основе сверхсшитого полистирола с размером частиц 50 — 100 мкм (объем — 1 см3) (патрон № 2);
натрий сернокислый, безводный, химически чистый, ГОСТ 4166;
натрий хлористый, химически чистый, ГОСТ 4233.

5.3 Вспомогательные устройства, материалы:

аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту;
банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см3;
вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная, ГОСТ 5556;
ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм3;
виалы объемом 2 см3, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб;
виалы с тефлоновыми прокладками, стеклянные, объемом не менее 20 см3;
воронки делительные на 250 см3, ГОСТ 25336;
воронки лабораторные, стеклянные, ГОСТ 25336;
испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температур от плюс 20 до плюс 100 °C;
колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см3, ГОСТ 25336;
колбы круглодонные со шлифом на 100, 250 см3 и 4000 см3 ТС;
колонка хроматографическая стальная, длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18;
насос диафрагменный, химически стойкий на 100%, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин;
предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18;
стаканы стеклянные, термостойкие объемом 50 — 500 см3, ГОСТ 25336;
установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3;
фильтры для фильтрации органических растворителей и воды с размером пор 0,45 мкм;
фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г;
центрифуга лабораторная, настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4000 об/мин, с рабочим объемом ротора 200 см3 x 4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 минут и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см3.

Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, а также посуды, реактивов и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.

VI. Требования безопасности

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.

VII. Квалификация операторов

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VIII. Отбор проб

8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.

<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы, почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы зеленой массы кукурузы, яблок и ягод винограда хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток, для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре минус 18 °C.

Пробы яблочного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 5 суток.

Пробы зерна кукурузы и семян масличных культур подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы растительного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.

Отобранные пробы зерна подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

IX. Условия проведения измерений

9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80%;
выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

X. Подготовка к определению

10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

Подготовка органических растворителей.

10.1.1 Очистка ацетонитрила.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,5 °C, отбрасывают.

10.1.2 Приготовление бидистиллированной воды.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 100,0 °C отбрасывают.

10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.

10.2.1 Приготовление рабочих растворов.

10.2.1.1 Приготовление 0,1% водного раствора муравьиной кислоты.

В мерную колбу объемом 1000 см3 помещают 500 см3 бидистиллированной воды, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

10.2.1.2. Приготовление 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле.

В мерную колбу объемом 1000 см3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 1,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

10.2.1.3 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.

400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли.

10.2.2 Приготовление градуировочных растворов.

Стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L в ацетонитриле и в смеси ацетонитрила с водой хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 9 месяцев.

10.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией спинеторама-J 100,0 мкг/см3.

Взвешивают 10 мг спинеторама-J в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.

10.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией спинеторама-L 100,0 мкг/см3.

Взвешивают 10 мг спинеторама-L в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.

Стандартные растворы № 1 и № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочных характеристик.

10.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 10,0 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 100 см3 помещают по 10,0 см3 стандартного раствора № 1 и № 2, доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочных характеристик, для приготовления растворов для внесения в контрольные образцы.

10.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 1,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой по 10 см3 и помещают в мерную колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор № 4 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочных характеристик, приготовления растворов спинеторама-J и спинеторама-L для внесения в анализируемые образцы и для хроматографического исследования.

10.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 0,1 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 10,0 см3 стандартного раствора № 4, доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор № 5 используют для приготовления стандартных растворов для установления градуировочных характеристик и для хроматографического исследования.

10.2.2.6. Стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L с концентрацией по 0,0005, 0,001, 0,002, 0,005, 0,01 и 0,02 мкг/см3 для установления градуировочной зависимости для определения спинеторама-J и спинеторама-L <2>.

<2> Стандартные растворы для установления градуировочной зависимости для определения спинеторама-J и спинеторама-L в воде готовят, используя смесь ацетонитрила с водой в соотношении 6:4 (по объему).

Стандартные растворы для установления градуировочной зависимости для определения спинеторама-J и спинеторама-L в почве, ягодах винограда, плодах яблок, виноградном и яблочном соке, зеленой массе и зерне кукурузы, семенах масличных культур и в растительных маслах готовят, используя смесь ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 (по объему).

10.2.2.6.1. Стандартный раствор № 6 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 0,02 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 10 см3 помещают 2 см3 стандартного раствора № 5, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой и перемешивают.

10.2.2.6.2. Стандартный раствор № 7 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 0,01 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 25 см3 помещают 2,5 см3 стандартного раствора № 5, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой и перемешивают.

10.2.2.6.3. Стандартный раствор № 8 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 0,005 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 10 см3 помещают 5 см3 стандартного раствора № 7, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой и перемешивают.

10.2.2.6.4. Стандартный раствор № 9 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 0,002 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 10 см3 помещают 2 см3 стандартного раствора № 7, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой и перемешивают.

10.2.2.6.5. Стандартный раствор № 10 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 0,001 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 10 см3 помещают 1 см3 стандартного раствора № 7, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой и перемешивают.

10.2.2.6.6. Стандартный раствор № 11 с концентрацией спинеторама-J и спинеторама-L по 0,0005 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 10 см3 помещают 1 см3 стандартного раствора № 8, доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой и перемешивают.

10.2.2.7. Стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L с концентрацией по 25,0; 5,0 и 2,5 мкг/см3 для внесения в образцы воды <3>.

<3> Для внесения в образцы воды используются стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L объемом 0,1 см3 соответствующей концентрации.

10.2.2.7.1. Стандартный раствор спинеторама-J и спинеторама-L с концентрацией по 25 мкг/см3.

В мерную колбу объемом 10 см3 помещают по 2,5 см3 стандартного раствора № 1 и № 2, доводят объем до метки ацетонитрилом.

10.2.2.7.2. Стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L с концентрацией по 5,0 и 2,5 мкг/см3.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 3 готовят растворы, содержащие по 5,0 и 2,5 мкг/см3 спинеторама-J и спинеторама-L.

10.2.2.8. Стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L с концентрацией по 0,500; 0,250; 0,100; 0,050 и 0,025 мкг/см3 для внесения в образцы почвы, плодов яблок, ягод винограда, виноградного и яблочного сока, зеленой массы и зерна кукурузы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 4 готовят растворы, содержащие по 0,500; 0,250; 0,100; 0,050 и 0,025 мкг/см3 спинеторама-J и спинеторама-L.

10.2.2.9. Стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L с концентрацией по 0,50; 0,25; 0,10 и 0,05 мкг/см3 для внесения в образцы семян масличных культур и в растительные масла.

Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 4 готовят растворы, содержащие по 0,50; 0,25; 0,10 и 0,05 мкг/см3 спинеторама-J и спинеторама-L.

10.3 Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость отклика фрагментарного иона, используемого для количественного определения, от концентрации спинеторама-J и спинеторама-L в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6-ти растворам для градуировки с концентрацией 0,0005; 0,0010; 0,0020; 0,0050; 0,0100 и 0,0200 мкг/см3.

Градуировочную зависимость для определения спинеторама-J и спинеторама-L в воде устанавливают по 6-ти растворам для градуировки с концентрацией 0,0005; 0,0010; 0,0020; 0,0050; 0,0100 и 0,0200 мкг/см3 каждого компонента, приготовленным согласно п. 10.2.2.6.

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.10. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Производят расчет параметров градуировочной характеристики (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации спинеторама-J и спинеторама-L в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0,995 и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20% для каждого уровня градуировочной характеристики.

Если линейность градуировочной характеристики была продемонстрирована, то при анализе серий образцов допускается устанавливать градуировочную характеристику методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5 и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений, выполненных как перед началом серии анализов, так и после ее окончания (рамочная калибровка; не менее 10 измерений не менее чем по пяти уровням концентраций). По полученным данным производят расчет параметров градуировочной характеристики. Рекомендуется в серию анализов образцов включать не более 12 инъекций.

10.4. Подготовка концентрирующих патронов № 1 (со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами) для очистки экстрактов почвы и проверка хроматографического поведения спинеторама-J и спинеторама-L на них (схема № 1).

10.4.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта почвы.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.

Патрон № 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума.

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 (по объему). Элюат отбрасывают.

10.4.2. Проверка хроматографического поведения спинеторама-J и спинеторама-L на концентрирующих патронах № 1.

В стеклянную виалу объемом не менее 20 см3 помещают 1 см3 раствора аналитического стандарта спинеторама-J и спинеторама-L в ацетонитриле с концентрацией каждого вещества по 0,1 мкг/см3, прибавляют 4 см3 очищенной воды, перемешивают и вносят на концентрирующий патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную виалу обмывают 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 (по объему), вносят на концентрирующий патрон, элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

На концентрирующий патрон последовательно вносят две порции ацетонитрила объемом 5 см3 каждая. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельную в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток после упаривания каждой порции элюата растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 (по объему) и анализируют на содержание спинеторама-J и спинеторама-L в условиях хроматографирования по п. 11.10.

Определяют фракции, содержащие спинеторам-J и спинеторам-L, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюентов.

Изучение поведения спинеторам-J и спинеторам-L на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

10.5. Подготовка концентрирующих патронов № 1 (со слабоосновным анионообменным сорбентом с привитыми аминогруппами) для очистки экстрактов зеленой массы и зерна кукурузы, плодов яблок, ягод винограда, виноградного и яблочного соков и проверка хроматографического поведения спинеторама-J и спинеторама-L на них (схема № 2).

10.5.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов зеленой массы и зерна кукурузы, плодов яблок, ягод винограда, виноградного и яблочного соков.

Патрон № 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума.

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему). Элюат отбрасывают.

10.5.2. Проверка хроматографического поведения спинеторама-J и спинеторама-L на концентрирующих патронах № 1.

В стеклянную виалу объемом не менее 20 см3 помещают 5 см3 раствора аналитического стандарта спинеторама-J и спинеторама-L в ацетонитриле с концентрацией каждого вещества по 0,1 мкг/см3, прибавляют 5 см3 очищенной воды, перемешивают и вносят на концентрирующий патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную виалу последовательно обмывают двумя порциями по 5 см3 каждая смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), вносят на концентрирующий патрон.

Изучение поведения спинеторама-J и спинеторама-L на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

10.6. Подготовка концентрирующих патронов № 2 (на основе сверхсшитого полистирола) для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения спинеторама-J и спинеторама-L на них.

Концентрирующий патрон № 2 (на основе сверхсшитого полистирола) используют для очистки экстрактов растительных масел.

10.6.1 Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстракта.

Патрон № 2 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 гексана. Элюат отбрасывают.

10.6.2. Проверка хроматографического поведения спинеторама-J и спинеторама-L на концентрирующих патронах № 2.

В химический стакан объемом 100 см3 помещают 10 см3 гексана, вносят 1 см3 раствора аналитического стандарта спинеторама-J и спинеторама-L в ацетоне с концентрацией каждого вещества по 0,1 мкг/см3, перемешивают и вносят на подготовленный концентрирующий патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходный стакан обмывают 10 см3 гексана, смыв вносят на патрон, элюат собирают в отдельную в отгонную колбу объемом 100 см3. Затем на патрон вносят 10 см3 гексана, элюат собирают в отдельную в отгонную колбу объемом 100 см3, патрон высушивают под вакуумом до отсутствия капель элюата. После высушивания на патрон вносят последовательно 10 см3 ацетонитрила, 10 см3 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и две порции по 5 см3 каждая 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельную в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток после упаривания каждой порции элюата растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 80:20 (по объему) и анализируют на содержание спинеторама-J и спинеторама-L в условиях хроматографирования по п. 11.10.

Изучение поведения спинеторама-J и спинеторама-L на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

10.7. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре плюс 40 °C в течение 3 — 4 часов.

XI. Проведение измерений

11.1 Вода.

11.1.1 Подготовка образца воды.

Из пробы воды объемом 100 см3 отбирают аликвоту объемом 2 см3 образца воды пипеткой объемом 2 см3 и помещают в стеклянную виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют 3 см3 ацетонитрила, перемешивают, переносят пробу в виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание спинеторама-J и спинеторама-L в условиях хроматографирования по п. 11.10.

11.2 Почва.

11.2.1 Экстракция.

Образец почвы массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 2 см3 дистиллированной воды, 15 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 (по объему) и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в мерный цилиндр объемом 50 см3. Экстракцию повторяют еще 2 раза в тех же условиях, используя каждый раз по 15 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 (по объему). Экстракты фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 50 см3 и доводят объем до 50 см3 смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 (по объему). Экстракт переносят в плоскодонную стеклянную колбу, перемешивают, отбирают аликвоту объемом 5 см3 и очищают на концентрирующем патроне № 1 (схема № 1).

11.2.2 Очистка экстракта на концентрирующем патроне № 1 (схема № 1).

На кондиционированный по п. 10.4.1. концентрирующий патрон № 1 последовательно вносят аликвоту из экстракта, 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 и 5 см3 ацетонитрила. Все элюаты собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток после упаривания растворяют в 2,5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 (по объему), переносят в виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание спинеторама-J и спинеторама-L в условиях хроматографирования по п. 11.10.

11.3 Зеленая масса кукурузы.

11.3.1 Экстракция.

Образец измельченной зеленой массы кукурузы массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 100 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в мерный цилиндр объемом 100 см3 и доводят объем ацетонитрилом до 100 см3.

Экстракт переносят в плоскодонную стеклянную колбу, перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 5 см3, помещают в стеклянную виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют 5 см3 очищенной воды, перемешивают и очищают на концентрирующем патроне № 1 (схема № 2).

11.3.2 Очистка экстракта на концентрирующем патроне № 1 (схема № 2).

На кондиционированный по п. 10.5.1. концентрирующий патрон № 1 вносят подготовленную пробу и собирают элюат в отгонную колбу объемом 100 см3. Виалу обмывают 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и также вносят на патрон. Элюат объединяют с предыдущим в отгонной колбе объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

11.4 Зерно кукурузы.

11.4.1 Экстракция.

Образец измельченного зерна массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в мерный цилиндр объемом 100 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 50 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Экстракты фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 100 см3 и доводят объем экстракта ацетонитрилом до 100 см3.

Экстракт переносят в плоскодонную стеклянную колбу, перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 5 см3, помещают в стеклянную виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют 5 см3 очищенной воды, перемешивают и проводят очистку как указано в п. 11.3.2. Очистка на концентрирующих патронах № 1 (схема № 2).

11.5 Семена масличных культур.

11.5.1 Экстракция.

Образец измельченных семян массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в мерный цилиндр объемом 100 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 50 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 100 см3 и доводят объем экстракта ацетонитрилом до 100 см3.

Экстракт переносят в плоскодонную стеклянную колбу, перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 5 см3, помещают в стеклянную виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют 5 см3 очищенной воды, перемешивают и проводят очистку как указано в п. 11.3.2. Очистка на концентрирующих патронах № 1 (схема № 2).

11.6 Масла растительные.

11.6.1 Экстракция.

Навеску растительного масла массой 5 г помещают в химический стакан объемом 50 см3. Навеску растворяют в 15 см3 гексана, перемешивают и переносят в мерный цилиндр объемом 50 см3. Стакан обмывают еще двумя порциями гексана объемом 15 и 10 см3, смывы объединяют в мерном цилиндре объемом 50 см3 и доводят объем раствора гексаном до 50 см3.

Гексановый экстракт переносят в плоскодонную колбу объемом 100 см3, перемешивают, отбирают аликвоту объемом 5 см3, помещают в виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют к ней 5 см3 гексана, перемешивают и очищают на концентрирующем патроне № 2.

11.6.2. Очистка экстракта на концентрирующем патроне № 2 (на основе сверхсшитого полистирола).

Подготовленную аликвоту экстракта растительного масла наносят на кондиционированный по п. 10.6.1. концентрирующий патрон № 2. Элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают двумя порциями гексана по 10 см3 каждая, вносят на концентрирующий патрон, элюаты отбрасывают. Патрон высушивают под вакуумом до отсутствия капель элюата.

Для элюирования спинеторама-J и спинеторама-L на патрон вносят последовательно 10 см3 ацетонитрила и 15 см3 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Элюаты собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 см3 ацетонитрила, прибавляют 5 см3 очищенной воды, перемешивают и проводят очистку как указано в п. 11.3.2. Очистка на концентрирующих патронах № 1 (схема № 2).

Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 (по объему), переносят в виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание спинеторама-J и спинеторама-L в условиях хроматографирования по п. 11.10.

11.7 Плоды яблони.

11.7.1 Экстракция.

Образец измельченных плодов яблони массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 (по объему) и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в мерный цилиндр объемом 100 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 40 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 (по объему). Экстракт фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 100 см3 и доводят объем экстракта смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 (по объему) до 100 см3.

Экстракт переносят в плоскодонную стеклянную колбу, перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 5 см3, помещают в стеклянную виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют 5 см3 очищенной воды, перемешивают и проводят очистку как указано в п. 11.3.2. Очистка на концентрирующих патронах № 1 (схема № 2).

11.8 Яблочный и виноградный сок.

11.8.1 Экстракция.

Образец яблочного или виноградного сока массой 5 г помещают в химический стакан объемом 50 см3, прибавляют туда 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3.

Спинеторам-J и спинеторам-L экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 15 см3, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке ацетонитрил (верхний слой) объединяют в мерном цилиндре объемом 50 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 5 см3 ацетонитрила и объединяют смыв с основным экстрактом. Объем экстракта в цилиндре доводят до 50 см3 ацетонитрилом.

Экстракт переносят в плоскодонную стеклянную колбу, перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 2,5 см3, помещают в стеклянную виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют 2,5 см3 очищенной воды, перемешивают и проводят очистку как указано в п. 11.3.2. Очистка на концентрирующих патронах № 1 (схема № 2).

11.9 Ягоды винограда.

11.9.1 Экстракция.

Образец измельченных ягод винограда массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в мерный цилиндр объемом 100 см3. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 40 см3 ацетонитрила. Экстракт фильтруют, объединяют с предыдущим в мерном цилиндре объемом 100 см3 и доводят объем экстракта ацетонитрилом до 100 см3.

Экстракт переносят в плоскодонную стеклянную колбу, перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 5 см3, помещают в стеклянную виалу объемом не менее 20 см3, прибавляют 5 см3 очищенной воды, перемешивают и проводят очистку как указано в п. 11.3.2. Очистка на концентрирующих патронах № 1 (схема № 2).

11.10 Хроматографические и масс-спектрометрические условия.

11.10.1. Система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором.

11.10.2 Хроматографические условия.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Температура колонки: плюс 40 °C.

Подвижная фаза: A — 0,1% водный раствор муравьиной кислоты, B — 0,1% раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле (% по объему) в градиентном режиме со скоростью потока 0,3 см3/мин.

Режим переключения шестипортового крана кран с электроприводом: с 0 по 11 минуту — в слив; с 11 по 17 минуту — в источник масс-детектора; с 17 по 24 минуту (общее время анализа 24 мин).

Объем вводимой пробы: 10 мм3.

Таблица 3

Градиентный режим потока элюента при определении спинеторама-J и спинеторама-L

Время (минуты)	Подвижная фаза A (0,1% водный раствор муравьиной кислоты), %	Подвижная фаза B (0,1% раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле), %
0	95	5
7	30	70
11	20	80
15	0	100
16	0	100
17	95	5
24	95	5

11.10.3 Масс-спектрометрические условия.

Источник ионов — электроспрей.

Время подачи элюента в источник масс-детектора: с 11 по 17 минуту.

Газ-осушитель — азот с температурой плюс 320 °C, расход 10 дм3/мин.

Расход газа периферийного слоя 11 м3/мин.

Температура газа периферийного слоя плюс 250 °C.

Давление в распылителе 30 psi.

Напряжение на входе в капилляр 4000 В.

Режим ионизации — положительный.

Режим сканирования — мониторинг множественных реакций (MRM).

Детектируемые переходы:

Спинеторам-J: 748,5 \rightarrow 142,2 — количественный переход, энергия соударения — 28 В; 748,5 \rightarrow 98,1 — качественный переход, энергия соударения — 76 В. Энергия фрагментации 165 В, время сканирования 50 мс, напряжение на ускорителе ячейки 7 В.

Спинеторам-L: 760,5 \rightarrow 142,2 — количественный переход, энергия соударения — 28 В; 760,5 \rightarrow 98,1 — качественный переход, энергия соударения — 72 В. Энергия фрагментации 165 В, время сканирования 50 мс, напряжение на ускорителе ячейки 7 В.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартные растворы спинеторама-J и спинеторама-L с концентрацией 0,02 мкг/см3, разбавляют.

XII. Обработка результатов измерения

12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание спинеторама-J или спинеторама-L в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

X = \frac{S_{\text{пр}} \cdot A \cdot V}{100 \cdot S_{\text{ст}} \cdot m} \cdot P , (1)

где X — содержание спинеторама-J или спинеторама-L в пробе, мг/дм3 или мг/кг;

Sст — высота (площадь) пика стандарта, мм;

Sпр — высота (площадь) пика образца, мм;

A — концентрация стандартного раствора, мкг/см3;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m — масса анализируемого образца, г (см3);

P — содержание спинеторама-J или спинеторама-L в аналитическом стандарте, %.

XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (2):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (2)

где X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм3;

r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .

При невыполнении условия (2) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XIV. Оформление результатов

14.1 Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95,

где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 ,

где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«- при определении остаточного количества спинеторама-J и спинеторама-L в воде содержание веществ в пробе менее 0,0025 мг/дм3;»

при определении остаточного количества спинеторама-J и спинеторама-L в почве содержание веществ в пробе менее 0,005 мг/кг;
при определении остаточного количества спинеторама-J и спинеторама-L в яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках, в зеленой массе и зерне кукурузы, в семенах масличных культур и в растительных маслах содержание веществ в пробе менее 0,01 мг/кг».

XV. Контроль качества результатов измерений

15.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 — 6.

Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание спинеторама-J и спинеторама-L в которых должно охватывать весь диапазон концентраций градуировочных характеристик.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

A = \frac{(X - C) \times 100}{C} \leq 20 , (3)

где X — концентрация спинеторама-J или спинеторама-L контрольного измерения, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора спинеторама-J или спинеторама-L в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 8:2 (по объему) или в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 (по объему), взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

20 — погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов оксатиапипролина, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.

Примечание: в случае, если градуировочная характеристика устанавливается при анализе каждой серии образцов по п. 10.3, контроль стабильности градуировочной характеристики не проводится.

15.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X'} , (4)

где \pm \Delta_{\text{л},X} ( \pm \Delta_{\text{л},X'}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

\Delta = (\delta\overline{X})100 ,

где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta ,

Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

K_{\text{к}} = \overline{X'} - \overline{X} - C_{\text{д}} , (5)

где \overline{X'} , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 13.1), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X'}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} (6)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|Kк| <= K, (7)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (7) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (7) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

15.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R , (8)

где X1, X2 — результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение к МУК 4.1.3944-23

Полнота извлечения спинеторама-J из образцов воды, почвы, ягод винограда, плодов яблони, яблочного и виноградного соков, зеленой массы и зерна кукурузы, семян сои и подсолнечника, масла подсолнечника (5 повторностей для каждой концентрации, P = 0,95)

Среда	Внесено спинеторама-J, мг/кг (мг/дм3)	Обнаружено спинеторама-J, мг/кг (мг/дм3)	Полнота определения, %
1	2	3	4
Вода	0,0025	0,00222 +/- 0,0001	88,7
	0,0050	0,00452 +/- 0,0002	90,5
	0,0100	0,00896 +/- 0,0002	89,6
	0,0250	0,02191 +/- 0,0003	87,6
Почва	0,005	0,00472 +/- 0,0001	94,4
	0,010	0,00888 +/- 0,0004	88,8
	0,020	0,01729 +/- 0,0002	86,5
	0,050	0,04087 +/- 0,0012	81,7
Ягоды винограда	0,01	0,00836 +/- 0,0001	83,6
	0,02	0,01703 +/- 0,0005	85,2
	0,05	0,04082 +/- 0,0003	81,7
	0,10	0,08218 +/- 0,0017	82,2
Виноградный сок	0,01	0,00848 +/- 0,0005	84,8
	0,02	0,01698 +/- 0,0001	84,9
	0,05	0,04465 +/- 0,0005	89,3
	0,10	0,08570 +/- 0,0011	85,7
Плоды яблони	0,01	0,00752 +/- 0,0003	75,2
	0,02	0,01585 +/- 0,0002	79,3
	0,05	0,03965 +/- 0,0024	79,3
	0,10	0,08220 +/- 0,0039	82,2
Яблочный сок	0,01	0,00783 +/- 0,0006	78,3
	0,02	0,01654 +/- 0,0004	82,7
	0,05	0,04458 +/- 0,0014	89,2
	0,10	0,08733 +/- 0,0015	87,3
Зеленая масса кукурузы	0,01	0,00762 +/- 0,0003	76,2
	0,02	0,01499 +/- 0,0009	75,0
	0,05	0,03579 +/- 0,0006	71,6
	0,10	0,07532 +/- 0,0030	75,3
Зерно кукурузы	0,01	0,00946 +/- 0,0006	94,6
	0,02	0,01769 +/- 0,0008	88,5
	0,05	0,04164 +/- 0,0028	83,3
	0,10	0,08795 +/- 0,0061	88,0
Семена сои	0,01	0,00860 +/- 0,0003	86,0
	0,02	0,01691 +/- 0,0010	84,6
	0,05	0,04386 +/- 0,0025	87,7
	0,10	0,08643 +/- 0,0036	86,4
Семена подсолнечника	0,01	0,00818 +/- 0,0002	81,8
	0,02	0,01631 +/- 0,0005	81,6
	0,05	0,04259 +/- 0,0022	85,2
	0,10	0,08359 +/- 0,0005	83,6
Масло подсолнечника	0,01	0,00809 +/- 0,0002	80,9
	0,02	0,01705 +/- 0,0009	85,2
	0,05	0,04367 +/- 0,0006	87,3
	0,10	0,07691 +/- 0,0036	76,9

Полнота извлечения спинеторама-L из образцов воды, почвы, ягод винограда, плодов яблони, яблочного и виноградного соков, зеленой массы и зерна кукурузы, семян сои и подсолнечника, масла подсолнечника (5 повторностей для каждой концентрации, P = 0,95)

Среда	Внесено спинеторама-L, мг/кг (мг/дм3)	Обнаружено спинеторама-L, мг/кг (мг/дм3)	Полнота определения, %
1	2	3	4
Вода	0,0025	0,00216 +/- 0,0002	86,3
	0,0050	0,00438 +/- 0,0002	87,6
	0,0100	0,00861 +/- 0,0002	86,1
	0,0250	0,02098 +/- 0,0004	83,9
Почва	0,005	0,00429 +/- 0,0001	85,8
	0,010	0,00848 +/- 0,0003	84,8
	0,020	0,01690 +/- 0,0002	84,5
	0,050	0,04014 +/- 0,0011	80,3
Ягоды винограда	0,01	0,00837 +/- 0,0002	83,7
	0,02	0,01697 +/- 0,0004	84,9
	0,05	0,04111 +/- 0,0007	82,2
	0,10	0,08165 +/- 0,0013	81,7
Виноградный сок	0,01	0,00943 +/- 0,0005	94,3
	0,02	0,01739 +/- 0,0004	86,9
	0,05	0,04795 +/- 0,0006	95,9
	0,10	0,08870 +/- 0,0016	88,7
Плоды яблони	0,01	0,00745 +/- 0,0004	74,5
	0,02	0,01614 +/- 0,0002	80,7
	0,05	0,03986 +/- 0,0027	79,7
	0,10	0,07962 +/- 0,0034	79,6
Яблочный сок	0,01	0,00777 +/- 0,0004	77,7
	0,02	0,01684 +/- 0,0002	84,2
	0,05	0,04541 +/- 0,0003	90,8
	0,10	0,09071 +/- 0,0008	90,7
Зеленая масса кукурузы	0,01	0,00763 +/- 0,0003	76,3
	0,02	0,01524 +/- 0,0007	76,2
	0,05	0,03648 +/- 0,0008	73,0
	0,10	0,07641 +/- 0,0030	76,4
Зерно кукурузы	0,01	0,00943 +/- 0,0006	94,3
	0,02	0,01749 +/- 0,0010	87,4
	0,05	0,04152 +/- 0,0032	83,0
	0,10	0,08849 +/- 0,0054	88,5
Семена сои	0,01	0,00865 +/- 0,0002	86,5
	0,02	0,01694 +/- 0,0011	84,7
	0,05	0,04368 +/- 0,0029	87,4
	0,10	0,08724 +/- 0,0036	87,2
Семена подсолнечника	0,01	0,00852 +/- 0,0002	85,2
	0,02	0,01694 +/- 0,0005	84,7
	0,05	0,04432 +/- 0,0024	88,6
	0,10	0,08730 +/- 0,0018	87,3
Масло подсолнечника	0,01	0,00791 +/- 0,0001	79,1
	0,02	0,01704 +/- 0,0009	85,2
	0,05	0,04340 +/- 0,0006	86,8
	0,10	0,07470 +/- 0,0037	74,7

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».

3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

4. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».

5. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

6. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

7. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».

8. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».

9. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».

10. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».

12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

13. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

14. ГОСТ 6709 «Вода дистиллированная. Технические условия».

15. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».

17. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».

18. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия»

19. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».

20. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».

21. ГОСТ 4201 «Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия».

22. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».

23. ГОСТ 31861 «Вода. Общие требования к отбору проб».

24. ГОСТ 17.4.3.01 «Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб».

25. ГОСТ 28168-89. «Почвы. Отбор проб».

26. ГОСТ 34314 «Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия».

27. ГОСТ 27572 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия».

28. ГОСТ 32101 «Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия»,

29. ГОСТ 32786 «Виноград столовый свежий. Технические условия».

30. ГОСТ 10852 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».

31. ГОСТ 22391 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках».

32. ГОСТ 1129 «Масло подсолнечное. Технические условия».

33. ГОСТ 17109 «Соя. Требования при заготовках и поставках».

34. ГОСТ 31760 «Масло соевое. Технические условия».

35. ГОСТ 32190 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».

36. ГОСТ 13586.3 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб».

37. ГОСТ ISO 6497 «Корма. Отбор проб».

ББК 51.231