---
title: "\"МУК 4.1.3937-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тетранилипрола и его основного метаболита BCS-CL73507-N-метил-хиназолинона (BCS-CQ63359) в плодоовощной и соковой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3937-23"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3937-23"
---

## "МУК 4.1.3937-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тетранилипрола и его основного метаболита BCS-CL73507-N-метил-хиназолинона (BCS-CQ63359) в плодоовощной и соковой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"

# "МУК 4.1.3937-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тетранилипрола и его основного метаболита BCS-CL73507-N-метил-хиназолинона (BCS-CQ63359) в плодоовощной и соковой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 03.07.2023)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 03.10.2023.


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
3 июля 2023 года

<a id="p100002"></a>Дата введения
3 октября 2023 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕТРАНИЛИПРОЛА И ЕГО**
**ОСНОВНОГО МЕТАБОЛИТА BCS-CL73507-N-МЕТИЛ-ХИНАЗОЛИНОНА**
**(BCS-CQ63359) В ПЛОДООВОЩНОЙ И СОКОВОЙ ПРОДУКЦИИ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3937-23**

1. <a id="p100006"></a>Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Ракитский В.Н., Федорова Н.Е., Гречина М.С., Белицкая В.В.).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "03" июля 2023 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


### <a id="p100009"></a>I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ


<a id="p100010"></a>1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовой концентрации тетранилипрола в плодах и соке плодовых семечковых (яблоки, груши) и плодовых косточковых (вишня, черешня, слива), тетранилипрола с учетом основного метаболита BCS-CL73507-N-метил-хиназолинона (BCS-CQ63359) в ягодах и соке винограда, картофеле, в плодах и соке томатов, капусте в диапазоне (0,01 - 0,50) мг/кг без учета разбавления, (0,01 - 25,00) мг/кг с учетом разбавления в 50 раз.

#### <a id="p100011"></a>1.2 МУК носят рекомендательный характер.



### <a id="p100012"></a>II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА


<a id="p100013"></a>2.1. Тетранилипрол - 1-(3-хлорпиридин-2-ил)-N-[4-циано-2-метил-6-(метилкарбамоил)фенил]-3-{[5-(трифторметил)-2H-тетразол-2-ил]метил}-1H-пиразол-5-карбоксамид <1>. Брутто-формула C22H16ClF3N10O2. Молекулярная масса 544,9 г/моль.

<a id="p100014"></a>

---

<a id="p100015"></a><1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

<a id="p100016"></a>2.2. Физические и химические свойства. Порошок светло-желтого цвета без выраженного запаха. Давление паров 3,2·10-6 Па (при плюс 20 °C). Растворимость в воде 1,2 мг/дм3 (при плюс 25 °C), 1 мг/дм3 (при pH = 4), 1,3 мг/дм3 (при pH = 9). Растворимость в органических растворителях (в г/дм3 при плюс 20 °C): н-гептан << 0,001, толуол - 0,17, дихлорметан - 5,3, этилацетат - 6,4, метанол - 2,9, ацетон - 21,8, диметилсульфоксид > 280. Коэффициент распределения н-октанол/вода при 25 °C: при pH = 4 - 398, при pH = 7 - 398, при pH = 9 - 79. Температура плавления плюс (227 - 230) °C. Плотность 1,52 г/см3.
<a id="p100017"></a>2.3. Острая пероральная токсичность для крыс (ЛД<sub>50</sub>) > 2000 мг/кг, острая дермальная токсичность (ЛД<sub>50</sub>) > 2000 мг/кг. Острая ингаляционная токсичность (ЛК50) для крыс более 5010 мг/м3 воздуха (4 часа).
<a id="p100018"></a>2.4. Инсектицид. используется для защиты от плодовых мотыльков, листоверток и других вредителей яблок, груш, винограда и косточковых культур.
<a id="p100019"></a>2.5. BCS-CQ63359 - 2-[1-(3-хлорпиридин-2-ил)-3-{[5-трифторметил-2H-тетразол-2-ил]метил}-1H-пиразол-5-ил]-3,8-диметил-4-оксо-3,4 дигидрохиназолин-6-карбонитрил [<1>](#p100015). Брутто-формула C22H14ClF3N10O. Молекулярная масса 526,9 г/моль. Метаболит тетранилипрола.


### <a id="p100020"></a>III. ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100021"></a>3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в [таблице 3.1](#p100023) для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100022"></a>Таблица 3.1

<a id="p100023"></a>Метрологические характеристики


<table>
<colgroup><col width="17%"><col width="10%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="13%"><col width="17%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100024"></a>Анализируемый объект и вещество</td><td><a id="p100025"></a>Диапазон определяемых концентраций,<br>мг/кг</td><td><a id="p100026"></a>Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95),<br>$\pm \delta$ , %</td><td><a id="p100027"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости),<br>$\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100028"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости),<br>$\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100029"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений),<br>r, %</td><td><a id="p100030"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях),<br>R, %, (P = 0,95)</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100031"></a>Тетранилипрол</td></tr>
<tr><td><a id="p100032"></a>Плодовые семечковые и косточковые, сок плодовых семечковых и косточковых, виноград, виноградный сок, капуста, картофель, томаты, томатный сок</td><td><a id="p100033"></a>0,01 - 25</td><td><a id="p100034"></a>50</td><td><a id="p100035"></a>9,4</td><td><a id="p100036"></a>13,2</td><td><a id="p100037"></a>26</td><td><a id="p100038"></a>37</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100039"></a>Метаболит BCS-CQ63359</td></tr>
<tr><td><a id="p100040"></a>Виноград, виноградный сок, капуста, картофель, томаты, томатный сок</td><td><a id="p100041"></a>0,01 - 25</td><td><a id="p100042"></a>50</td><td><a id="p100043"></a>9,8</td><td><a id="p100044"></a>13,7</td><td><a id="p100045"></a>27</td><td><a id="p100046"></a>38</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100047"></a>Примечание. Диапазон определяемых концентраций, указанный в таблице 3.1, приведен с учетом разбавления в 50 раз.</td></tr>
</table>



### <a id="p100048"></a>IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100049"></a>4.1. Измерения концентраций тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359 выполняют методом обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.
<a id="p100050"></a>4.2. Экстракцию веществ из анализируемых проб растительной продукции и сока выполняют смесью ацетонитрила с водой (4:1). Дополнительно проводят очистку экстрактов с помощью мембранного шприцевого фильтра с размером пор не более 0,20 мкм.

#### <a id="p100051"></a>4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 5 пг.



### <a id="p100052"></a>V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ


<a id="p100053"></a>5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в [таблицах 5.1](#p100055) - [5.3](#p100091).

<a id="p100054"></a>Таблица 5.1

<a id="p100055"></a>Средства измерений


| <a id="p100056"></a>Наименование средств измерения | <a id="p100057"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| --- | --- |
| <a id="p100058"></a>Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | <a id="p100059"></a>Внесено в Реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| <a id="p100060"></a>Весы лабораторные аналитические | <a id="p100061"></a>С пределом допустимой погрешности +/- 0,0005 г по ГОСТ Р 53228 |
| <a id="p100062"></a>Весы лабораторные | <a id="p100063"></a>с пределом допустимой погрешности +/- 0,01 г по ГОСТ Р 53228 |
| <a id="p100064"></a>Меры массы | <a id="p100065"></a>ГОСТ OIML R 111-1 |
| <a id="p100066"></a>Колбы мерные | <a id="p100067"></a>Вместимостью 50, 100, 1000 см3 типа 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100068"></a>Цилиндр мерный | <a id="p100069"></a>Вместимостью 25, 500 и 1000 см3, Исполнение 1-4, 1(2-4)-25-2, 1(2-4)-500-2 и 1(2-4)-1000-2 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100070"></a>Пипетки градуированные | <a id="p100071"></a>Вместимостью 1, 5 и 10 см3 типа 1-1(2)-2-1, 1-1(2)-2-5 и 1-1(2)-2-10 по [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100072"></a>Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | <a id="p100073"></a>Внесено в Реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |


<a id="p100074"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

<a id="p100075"></a>Таблица 5.2

<a id="p100076"></a>Реактивы


| <a id="p100077"></a>Наименование реактивов | <a id="p100078"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| --- | --- |
| <a id="p100079"></a>Тетранилипрол | <a id="p100080"></a>Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| <a id="p100081"></a>BCS-CQ63359, метаболит тетранилипрола | <a id="p100082"></a>Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| <a id="p100083"></a>Ацетонитрил | <a id="p100084"></a>Для ВЭЖХ, чистота не менее 99,9% |
| <a id="p100085"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная) | <a id="p100086"></a>[ГОСТ Р 52501](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100087"></a>Муравьиная кислота | <a id="p100088"></a>99,7%, чистая для анализа по [ГОСТ 5848](https://bukva.ai/docs/gost-5848-73) |


<a id="p100089"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

<a id="p100090"></a>Таблица 5.3

<a id="p100091"></a>Вспомогательное оборудование, устройства, материалы


| <a id="p100092"></a>Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | <a id="p100093"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| --- | --- |
| <a id="p100094"></a>Аппарат для встряхивания проб вихревой (шейкер) | <a id="p100095"></a>Орбита до 10 мм, скорость не менее 200 оборотов/мин |
| <a id="p100096"></a>Виалы хроматографические | <a id="p100097"></a>Вместимостью 2 см3 с септой с фторопластовым покрытием |
| <a id="p100098"></a>Груша резиновая | <a id="p100099"></a>- |
| <a id="p100100"></a>Мельница лабораторная | <a id="p100101"></a>- |
| <a id="p100102"></a>Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками | <a id="p100103"></a>Вместимостью 50 см3 |
| <a id="p100104"></a>Фильтры мембранные | <a id="p100105"></a>Для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,20 мкм, мембрана - гидрофильная (PTFE) |
| <a id="p100106"></a>Холодильная/морозильная камера | <a id="p100107"></a>Поддерживающая температуру плюс (2 - 6) °C для холодильного оборудования или не выше минус 18 °C для морозильного оборудования по ГОСТ 26678 |
| <a id="p100108"></a>Хроматографическая колонка | <a id="p100109"></a>Стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм |
| <a id="p100110"></a>Центрифуга лабораторная, роторная | <a id="p100111"></a>Максимальная скорость вращения не менее 4000 оборотов/мин |
| <a id="p100112"></a>Шприцы медицинские одноразовые | <a id="p100113"></a>Вместимостью 2 см3 по [ГОСТ ISO 7886-1](https://bukva.ai/docs/gost-iso-7886-1-2011) |


<a id="p100114"></a>*Примечание.* Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


### <a id="p100115"></a>VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ


<a id="p100116"></a>6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
<a id="p100117"></a>6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.
<a id="p100118"></a>6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.


### <a id="p100119"></a>VII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ



#### <a id="p100120"></a>7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- <a id="p100121"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100122"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.


### <a id="p100123"></a>VIII. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100124"></a>8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка подвижной фазы, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, отбор и подготовка проб.
<a id="p100125"></a>8.2. Приготовление 0,1%-ного раствора муравьиной кислоты в воде (компонент А подвижной фазы).
<a id="p100126"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 деионизированной воды, вносят 1,0 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. При необходимости приготовленный раствор дегазируют.
<a id="p100127"></a>8.3. Приготовление 0,1%-ного раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле (компонент Б подвижной фазы). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 ацетонитрила, вносят 1,0 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают. При необходимости приготовленный раствор дегазируют.
<a id="p100128"></a>Каждый компонент подвижной фазы хранят в темном месте (в стеклянных бутылях) не более 14-ти дней.

#### <a id="p100129"></a>8.4 Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.

<a id="p100130"></a>Промывают колонку подвижной фазой (смесь компонентов А и Б, приготовленных по [п. 8.2](#p100125) и [8.3](#p100127), в соотношении 1:1) при скорости подачи растворителя 0,3 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
<a id="p100131"></a>8.5. Приготовление смеси растворителей для экстракции и приготовления рабочих растворов.
<a id="p100132"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают с помощью мерного цилиндра 800 см3 ацетонитрила, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. Раствор хранят в герметично закрытой стеклянной емкости не более 14-ти дней.

#### <a id="p100133"></a>8.6 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

<a id="p100134"></a>8.6.1. Исходный раствор тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359 для градуировки (концентрация 100 мкг/см3).
<a id="p100135"></a>В две мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают раздельно по (0,0100 +/- 0,0005) г тетранилипрола и BCS-CQ63359, растворяют в 50 - 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Растворы хранят в герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 6 месяцев.
<a id="p100136"></a>Растворы N 1 - 8 и N 1' - 8' готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.
<a id="p100137"></a>8.6.2. Раствор N 1 тетранилипрола и раствор N 1' метаболита BCS-CQ63359 для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см3).
<a id="p100138"></a>В две мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают раздельно по 10 см3 исходных растворов тетранилипрола и BCS-CQ63359 с концентрацией 100 мкг/см3 [(п. 8.6.1)](#p100134), разбавляют ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Градуировочные растворы N 1 и N 1' хранят в холодильнике в герметично закрытой таре при температуре плюс (2 - 6) °C не более месяца.
<a id="p100139"></a>8.6.3. Раствор N 2 тетранилипрола и раствор N 2' метаболита BCS-CQ63359 для градуировки и внесения (концентрация 1 мкг/см3).
<a id="p100140"></a>В две мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают раздельно по 10 см3 градуировочных растворов N 1 тетранилипрола и N 1' метаболита BCS-CQ63359 с концентрацией 10 мкг/см3 [(п. 8.6.2)](#p100137), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Градуировочные растворы N 2 и N 2' хранят в холодильнике в герметично закрытой таре при температуре плюс (2 - 6) °C не более двух недель.
<a id="p100141"></a>Растворы N 1, N 2, N 1' и N 2' используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.
<a id="p100142"></a>8.6.4. Рабочие растворы N 3 - 8 тетранилипрола для градуировки (концентрация 0,001 - 0,1 мкг/см3).
<a id="p100143"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 10,0; 5,0; 2,5 и 1,0 см3 градуировочного раствора N 2 с концентрацией тетранилипрола 1,0 мкг/см3 [(п. 8.6.3)](#p100139), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по [п. 8.5](#p100131), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 3 - 6 с концентрацией тетранилипрола 0,1; 0,05; 0,025 и 0,01 мкг/см3, соответственно.
<a id="p100144"></a>В 2 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 5 и 1 см3 градуировочного раствора N 3 с концентрацией тетранилипрола 0,1 мкг/см3 (п. 8.6.4), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по [п. 8.5](#p100131), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 7, 8 с концентрацией тетранилипрола 0,005 и 0,001 мкг/см3, соответственно.
<a id="p100145"></a>Растворы хранятся в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более десяти дней.
<a id="p100146"></a>8.6.5. Рабочие растворы N 3' - 8' метаболита BCS-CQ63359 для градуировки (концентрация 0,001 - 0,1 мкг/см3).
<a id="p100147"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 10,0; 5,0; 2,5 и 1,0 см3 градуировочного раствора N 2' с концентрацией BCS-CQ63359 1,0 мкг/см3 [(п. 8.6.3)](#p100139), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по [п. 8.5](#p100131), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 3' - 6' с концентрацией метаболита BCS-CQ63359 0,1; 0,05; 0,025 и 0,01 мкг/см3, соответственно.
<a id="p100148"></a>В 2 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 5 и 1 см3 градуировочного раствора N 3' с концентрацией BCS-CQ63359 0,1 мкг/см3 (п. 8.6.5), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по [п. 8.5](#p100131), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 7', 8' с концентрацией метаболита BCS-CQ63359 0,005 и 0,001 мкг/см3, соответственно.
<a id="p100149"></a>Растворы хранятся в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более десяти дней.

#### <a id="p100150"></a>8.7 Установление градуировочных характеристик.

<a id="p100151"></a>Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика от концентрации тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359 в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.
<a id="p100152"></a>В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора (N 4 - N 8) для тетранилипрола и (N 4' - N 8') для метаболита BCS-CQ63359 и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 10.2](#p100171). Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений. Устанавливают площади пиков тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359.

#### <a id="p100153"></a>8.8 Контроль стабильности градуировочных характеристик.

<a id="p100154"></a>Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
<a id="p100155"></a>Проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359 в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,001 до 0,05 мкг/см3.
<a id="p100156"></a>Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

<a id="p100157"></a> $A = \frac{|(X - C)|}{C} \cdot 100 \leq B$ , (1)

<a id="p100158"></a>где A - величина расхождения, %;
<a id="p100159"></a>X - концентрация тетранилипрола или его метаболита BCS-CQ63359 в растворе при контрольном измерении, мкг/см3;
<a id="p100160"></a>C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
<a id="p100161"></a>B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 20% при P = 0,95).
<a id="p100162"></a>Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359, предусмотренных МИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно [п. 8.7](#p100150).


### <a id="p100163"></a>IX. ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ


<a id="p100164"></a>9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <2>.

<a id="p100165"></a>

---

<a id="p100166"></a><2> Унифицированные [правила](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79, [ГОСТ 34314](https://bukva.ai/docs/standart-gost-34314-2017) "Межгосударственный стандарт. Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия", [ГОСТ 33499](https://bukva.ai/docs/gost-33499-2015) "Межгосударственный стандарт. Груши свежие. Технические условия", [ГОСТ 33801](https://bukva.ai/docs/standart-gost-33801-2016) "Межгосударственный стандарт. Вишня и черешня свежие. Технические условия", [ГОСТ 32286](https://bukva.ai/docs/gost-32286-2013) "Межгосударственный стандарт. Сливы, реализуемые в розничной торговле. Технические условия", [ГОСТ 32786](https://bukva.ai/docs/gost-32786-2014) "Межгосударственный стандарт. Виноград столовый свежий. Технические условия", [ГОСТ 7176](https://bukva.ai/docs/gost-7176-2017) "Межгосударственный стандарт. Картофель продовольственный. Технические условия", [ГОСТ 34298](https://bukva.ai/docs/standart-gost-34298-2017) "Межгосударственный стандарт. Томаты свежие. Технические условия", [ГОСТ Р 51809](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51809-2001) "Государственный стандарт Российской Федерации. Капуста белокочанная свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия".

<a id="p100167"></a>9.2. Растительные пробы и сок хранят при температуре плюс (2 - 6) °C не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед анализом растительные образцы измельчают. Перед измельчением плоды косточковых культур освобождают от косточек.


### <a id="p100168"></a>X. ВЫПОЛНЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ



#### <a id="p100169"></a>10.1 Экстракция.

<a id="p100170"></a>Образец растительной продукции или сока массой 2 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3 и заливают 20 см3 смеси, приготовленной по [п. 8.5](#p100131). Затем помещают на аппарат для встряхивания на 15 минут, следя за равномерностью перемешивания по всему объему пробы. После встряхивания пробу центрифугируют в течение 3 мин при скорости вращения 4000 оборотов/мин. Часть надосадочной жидкости фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,20 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 10.2](#p100171).
<a id="p100171"></a>10.2. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации электроспрей (ESI) при следующих режимных параметрах:
- <a id="p100172"></a>электростатическое напряжение плюс 5000 В;
- <a id="p100173"></a>полярность: положительная;
- <a id="p100174"></a>режим работы: мониторинг множественных реакций (MRM).
<a id="p100175"></a>Параметры масс-спектрометрического детектора:

<a id="p100176"></a>Тетранилипрол

- <a id="p100177"></a>материнский ион (масса/заряд): 545,12;
- <a id="p100178"></a>дочерние ионы (масса/заряд): 356 (количественный расчет), 376,1;
- <a id="p100179"></a>напряжение на фрагментаторе, В: 114;
- <a id="p100180"></a>энергия разрушения (соударения), В: $9(545,12 \rightarrow 356)$ , $25(545,12 \rightarrow 376,1)$ .

<a id="p100181"></a>Метаболит BCS-CQ63359

- <a id="p100182"></a>материнский ион (масса/заряд): 527;
- <a id="p100183"></a>дочерние ионы (масса/заряд): 389 (количественный расчет), 247,9;
- <a id="p100184"></a>напряжение на фрагментаторе, В: 134;
- <a id="p100185"></a>энергия разрушения (соударения), В: $17(527 \rightarrow 389)$ , $53(527 \rightarrow 247,9)$ .
<a id="p100186"></a>Скорость сканирования: 200 мс.
<a id="p100187"></a>Давление на распылителе: 35 psi.
<a id="p100188"></a>Скорость газа распыления (азот): 10 дм3/мин.
<a id="p100189"></a>Скорость осушающего газа (азот): 12 дм3/мин.
<a id="p100190"></a>Температура осушающего газа: плюс 400 °C.
<a id="p100191"></a>*Примечание.* Параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.

<a id="p100192"></a>Условия хроматографирования:
- <a id="p100193"></a>хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;
- <a id="p100194"></a>температура колонки плюс 40 °C;
- <a id="p100195"></a>скорость потока элюента 0,3 см3/мин;
- <a id="p100196"></a>объем вводимой пробы 5 мм3;
- <a id="p100197"></a>подвижная фаза: 0,1% раствор муравьиной кислоты в воде - 0,1% раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле (30:70, по объему).
<a id="p100198"></a>Линейный диапазон детектирования 5 - 250 пг.
<a id="p100199"></a>Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочные растворы с концентрацией 0,05 мкг/см3, разбавляют смесью растворителей, приготовленной по [п. 8.5](#p100131) (не более чем в 50 раз).


### <a id="p100200"></a>XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА



#### <a id="p100201"></a>11.1 Содержание тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359 в пробах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:


<a id="p100202"></a> $X = \frac{C \cdot V_{\text{кон}} \cdot \text{Кр}}{m}$ , (2)

<a id="p100203"></a>где C - концентрация вещества, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
<a id="p100204"></a>V - объем экстрагента, см3 (20 см3);
<a id="p100205"></a>m - масса анализируемого образца, г (2 г);
<a id="p100206"></a>Кр - коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).
<a id="p100207"></a>Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

#### <a id="p100208"></a>11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений

<a id="p100209"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости [(1)](#p100210):

<a id="p100210"></a> $\frac{2*|X_{1} - X_{2}|*100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , (3)

<a id="p100211"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100212"></a>r - значение предела повторяемости [(таблица 3.1)](#p100023), при этом $r = 2,8 \cdot \sigma_{r}$ .
<a id="p100213"></a>При невыполнении [условия (3)](#p100210) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


### <a id="p100214"></a>XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ



#### <a id="p100215"></a>12.1 Результат количественного анализа представляют в виде:


<a id="p100216"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ , мг/кг, при вероятности P = 0,95, (4)

<a id="p100217"></a>где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, мг/кг;
<a id="p100218"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг.

<a id="p100219"></a> $\Delta = \delta \cdot X100$ , (5)

<a id="p100220"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, [таблица 3.1](#p100023)), %.
<a id="p100221"></a>Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
<a id="p100222"></a>Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: содержание тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359 - менее 0,01 мг/кг <3>.

<a id="p100223"></a>

---

<a id="p100224"></a><3> 0,01 мг/кг - предел обнаружения тетранилипрола и его метаболита BCS-CQ63359.


### <a id="p100225"></a>XIII. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100226"></a>13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002). Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.






## <a id="p100227"></a>БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ


1. <a id="p100228"></a>Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2. <a id="p100229"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Межгосударственный стандарт. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
3. <a id="p100230"></a>ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".
4. <a id="p100231"></a>[ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".
5. <a id="p100232"></a>[ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".
6. <a id="p100233"></a>ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".
7. <a id="p100234"></a>[ГОСТ Р 52501](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".
8. <a id="p100235"></a>[ГОСТ 5848](https://bukva.ai/docs/gost-5848-73) "Государственный стандарт союза ССР. Реактивы. Кислота муравьиная".
9. <a id="p100236"></a>ГОСТ 25336 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".
10. <a id="p100237"></a>ГОСТ 26678. "Государственный стандарт союза ССР. Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия (с Изменением N 1)".
11. <a id="p100238"></a>ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".
12. <a id="p100239"></a>ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
13. <a id="p100240"></a>ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".
14. <a id="p100241"></a>ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".
15. <a id="p100242"></a>[ГОСТ ISO 7886-1](https://bukva.ai/docs/gost-iso-7886-1-2011) "Межгосударственный стандарт. Шприцы инъекционные для однократного применения стерильные".
16. <a id="p100243"></a>Унифицированные [правила](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.
17. <a id="p100244"></a>[ГОСТ 34314](https://bukva.ai/docs/standart-gost-34314-2017) "Межгосударственный стандарт. Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия".
18. <a id="p100245"></a>[ГОСТ 33499](https://bukva.ai/docs/gost-33499-2015) "Межгосударственный стандарт. Груши свежие. Технические условия".
19. <a id="p100246"></a>[ГОСТ 33801](https://bukva.ai/docs/standart-gost-33801-2016) "Межгосударственный стандарт. Вишня и черешня свежие. Технические условия".
20. <a id="p100247"></a>[ГОСТ 32286](https://bukva.ai/docs/gost-32286-2013) "Межгосударственный стандарт. Сливы, реализуемые в розничной торговле. Технические условия".
21. <a id="p100248"></a>[ГОСТ 32786](https://bukva.ai/docs/gost-32786-2014) "Межгосударственный стандарт. Виноград столовый свежий. Технические условия".
22. <a id="p100249"></a>[ГОСТ 7176](https://bukva.ai/docs/gost-7176-2017) "Межгосударственный стандарт. Картофель продовольственный. Технические условия".
23. <a id="p100250"></a>[ГОСТ 34298](https://bukva.ai/docs/standart-gost-34298-2017) "Межгосударственный стандарт. Томаты свежие. Технические условия".
24. <a id="p100251"></a>[ГОСТ Р 51809](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51809-2001) "Государственный стандарт Российской Федерации. Капуста белокочанная свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия".



<a id="p100252"></a>

---