МУК 4.1.3936-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств мезотриона в сое (бобы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 03.07.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 03.10.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 3 июля 2023 года
Дата введения 3 октября 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕЗОТРИОНА В СОЕ (БОБЫ) МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3936-23
1. Разработаны ФБУН «Федеральный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Федорова Н.Е., Бондарева Л.Г.).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 3 июля 2023 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения массовой концентрации мезотриона в сое (бобы) в диапазонах 0,01 — 0,2 мг/кг — без учета разбавления и 0,01 — 10 мг/кг при разбавлении в 50 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Мезотрион. 2-(4-мезил-2-нитробензоил)циклогексан-1,3-дион <1>. Брутто-формула — C14H13NO7S. Молекулярная масса 339,3.
<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства:
- бледно-желтый порошок без запаха;
- давление паров: 5,69 x 10-3 МПа при плюс 20 °C;
- температура плавления: плюс 165,3 °C;
- растворимость в воде — 2,2 (pH 4,8), 15 (pH 6,9), 22 (pH 9) г/л (при плюс 20 °C);
- растворимость в органических растворителях: 1,2-дихлорэтан — 66,3; этилацетат — 18,6; метанол — 4,6; толуол — 3,1 г/кг.
Константа диссоциации pKa — 3,12 при плюс 20 °C. Стабилен к гидролизу в стерильных условиях при pH 5 — 9 и фотолизу в воде.
2.3 Область применения.
Мезотрион — системный гербицид из класса трикетонов, хорошо проникающий в растение через корни и листья и передвигающийся в растениях в обоих направлениях — базипетально и акропетально. Эффективно подавляет двудольные однолетние и некоторые злаковые сорняки путем ингибирования биосинтеза каратиноидов в посевах кукурузы.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности p = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций (согласно ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6)).
Метрологические характеристики
IV. Метод измерений
4.1. Методика основана на определении вещества с помощью ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором.
4.2. Уровень мезотриона в пробах бобов сои определяют после экстракции смесью ацетонитрил:вода (8:2), очистки и концентрирования на картридже, заполненным сорбционным материалом на основе сополимера N-винилпирролидона и дивинилбензола. Элюирование мезотриона проводят метанолом.
4.3. Нижний предел измерения мезотриона в анализируемом объеме пробы — 1 нг.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, термостатом колонки | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные аналитические, предел допустимой погрешности 0,0005 г | ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные, наибольший предел взвешивания 420 г, предел допустимой погрешности +/- 0,01 г | ГОСТ Р 53228 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1 |
| Цилиндры мерные | Вместимостью 25, 100, 500 и 1000 см3, Исполнение 1-4, 1(2-4)-25-2; 1(2-4)-100-2; 1(2-4)-500-2 и 1(2-4)-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Колбы мерные | Вместимостью 25, 100, 500 и 1000 см3 типа 2-25-2, 2-100-2, 2-500-2 и 2-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Весы аналитические, с пределом взвешивания 110 г и пределом допустимой погрешности 0,001 г | ГОСТ Р 53228 |
| Пипетки градуированные | Вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 типа 1-1(2)-2-1, 1-1(2)-2-2, 1-1(2)-2-5 и 1-1(2)-2-10 по ГОСТ 29227 |
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Мезотрион | Аналитический стандарт с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Ацетонитрил | Квалификация не ниже «суперградиент для ВЭЖХ» |
| Вода для лабораторного анализа | Бидистиллированная, деионизованная по ГОСТ Р 52501 |
| Калий углекислый (карбонат калия, поташ) | Химически чистый, прокаленный по ГОСТ 4221 |
| Метиловый спирт (метанол) | Химически чистый по ГОСТ 6995 |
| Кислота ортофосфорная | Химически чистая, 85% по ГОСТ 6552 |
| Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) | Квалификация не ниже «химически чистый» |
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей.
Вспомогательные устройства, материалы
Примечание: допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, освоивший данную методику и подтвердившего экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 — 30) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1 Очистка растворителей.
8.1.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия). Хранят в емкости из темного стекла.
8.2 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ.
8.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,2% (0,2%-ный раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 бидистиллированной или деионизованной воды, 2,0 см3 ортофосфорной кислоты, перемешивают доводят до метки бидистиллированной или деионизованной водой и еще раз тщательно перемешивают.
8.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 400 см3 ацетонитрила и 600 см3 0,2%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14-ти дней.
8.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ. Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 8.2.2) при скорости подачи растворителя 1,0 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
8.4 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.
8.4.1. Исходный раствор мезотриона для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г мезотриона, растворяют в 50 — 60 см3 ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C, не более трех месяцев.
8.4.2. Рабочий раствор № 1 мезотриона для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10,0 см3 исходного градуировочного раствора с концентрацией 100,0 мкг/см3 (п. 8.4.1), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 1 с концентрацией мезотриона 10,0 мкг/см3.
Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 — 6) °C не более трех месяцев.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок.
8.4.3. Рабочие растворы № 2 — 6 мезотриона для градуировки (концентрация 0,05 — 1,0 мкг/см3). В 5 мерных колб вместимостью 100 см3 помещают 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10 см3 рабочего раствора № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см3 (п. 8.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2 — 6 с концентрациями мезотриона 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 1,0 мкг/см3.
Растворы хранят в холодильнике при температуре плюс (2 — 6) °C не более 14 суток.
8.5. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации мезотриона в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных ниже. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков мезотриона, на основании которых строят градуировочную зависимость.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание мезотриона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,00 мкг/см3. Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
A = \frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq B ; (1)
где A — величина расхождения, %;
X — концентрация мезотриона в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора мезотриона, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).
8.6 Приготовление смесей органических растворителей для экстракции.
8.6.1. Смесь ацетонитрил:вода = 8:2. В мерную колбу на 500 см3 вносят 400 см3 ацетонитрила и 100 см3 бидистиллированной воды. Тщательно перемешивают.
8.6.2. Смесь ацетонитрил:вода = 2:8. В мерную колбу на 500 см3 вносят 100 см3 ацетонитрила и 400 см3 бидистиллированной воды. Тщательно перемешивают.
8.7. Подготовка картриджа для очистки и концентрирования. Картридж устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума. Промывают картридж последовательно 1 см3 метанолом, 1 см3 ацетонитрилом, затем три раза по 1 см3 смесью ацетонитрил:вода, в соотношении 2:8 по объему, приготовленной по п. 8.6.2. Процедуру проводят с использованием вакуума. Скорость элюирования — 15 — 20 капель в минуту. Не допускать высыхания верхнего слоя сорбента в картридже.
IX. Отбор и условия хранения проб
9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <2>.
<2> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Пробы растительного сырья хранят при температуре плюс (2 — 6) °C неделю. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C.
X. Выполнение определения
10.1. Образец измельченных бобов сои (10 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 — 300 см3, затем добавляют 100 см3 смеси ацетонитрил-вода, приготовленной в соответствии с п. 8.6.1, перемешивают. Оставляют в покое на 15 минут. Затем смесь фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной бумажный фильтр низкой плотности. Растительные остатки повторно экстрагируют 50 см3 смеси ацетонитрил-вода, приготовленной в соответствии с п. 8.6.1, на ультразвуковой ванне в течение 15 минут, раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтраты объединяются и переносятся в круглодонную колбу, объемом 250 см3. Упаривают на ротационном вакуумном испарителе, при температуре не выше плюс 30 °C до водного остатка (15 — 20 см3). Водный остаток пропускают через подготовленный в соответствии с п. 8.7 картридж, со скоростью 15 — 20 капель в минуту, используя разряжение, создаваемое водоструйным насосом. После пропускания пробы, картридж четыре раза по 1 см3 промывают смесью ацетонитрил:вода в соотношением 2:8, приготовленной в соответствии с п. 8.6.2. Мезотрион элюируют с картриджа метанолом, 2 раза по 1 см3. Элюат собирают в круглодонную колбу объемом 50 см3. Упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °C до влажного остатка. Остаток в круглодонной колбе растворяют в 2 см3 подвижной фазы, приготовленной в соответствии с п. 8.2.2. Перед хроматографированием пробу дополнительно фильтруют через мембранный фильтр.
10.2 Условия хроматографирования. Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
- жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором и термостатом колонки;
- хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами (C-18 или C-8) для удерживания гидрофильных соединений, зернением 5 мкм;
- рабочая длина волны: 260 нм;
- температура колонки: плюс 25 °C;
- подвижная фаза: ацетонитрил — ортофосфорная кислота (0,2%) (40:60, по объему);
- скорость потока элюента: 1,0 см3/мин;
- объем вводимой пробы: 20 мм3;
- линейный диапазон детектирования: 1 — 20 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор мезотриона с концентрацией 1,0 мкг/см3 разбавляют смесью ацетонитрил:ортофосфорная кислота (0,2%), приготовленной в соответствии с п. 8.2.2, не более чем в 50 раз.
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Содержание мезотриона в пробах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
где V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
C — концентрация мезотриона, найденная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см3;
Кр — кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);
Примечание. Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
XII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R , (3)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (3) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. Оформление результатов
13.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95, (4)
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг.
\Delta = \delta \cdot X100 , (5)
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание мезотриона в пробе сои (бобы) — менее 0,01 мг/кг» <3>.
<3> 0,01 мг/кг — предел обнаружения мезотриона в бобах сои.
XIV. Контроль качества результатов измерений
14.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Государственный стандарт Российской Федерации. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
3. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
4. ГОСТ OIML R 111-1 «Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений».
5. ГОСТ 29227 «Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
6. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
7. ГОСТ 6995 «Государственный стандарт Союза ССР. Метанол-яд. Технические условия».
8. ГОСТ 6552 «Межгосударственный стандарт. Кислота ортофосфорная. Технические условия».
9. ГОСТ 25336 «Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
10. ГОСТ 9737 «Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Шлифы сферические взаимозаменяемые».
11. ГОСТ 21241 «Государственный стандарт Союза ССР. Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний».
12. ГОСТ 12.1.004 «Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
13. ГОСТ 12.1.007 «Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
14. ГОСТ 12.1.018 «Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования».
15. ГОСТ 12.1.019 «Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
16. ГОСТ 12.4.009 «Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
17. ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) «Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
18. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
19. «Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности». Москва — 2018. 64 с.
| ББК 51.231 |
|---|