--- title: "\"МУК 4.1.3905-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств крезоксим-метила в яблочном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.3905-23" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3905-23" --- ## "МУК 4.1.3905-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств крезоксим-метила в яблочном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.3905-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств крезоксим-метила в яблочном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 29.06.2023) > [!IMPORTANT] > Документ [введен](#p100005) в действие с 29.09.2023. Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации **А.Ю.ПОПОВА** 29 июня 2023 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КРЕЗОКСИМ-МЕТИЛА В ЯБЛОЧНОМ** **СОКЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **МУК 4.1.3905-23** Дата введения 29 сентября 2023 года 1. Разработаны ФГБОУ ВО "Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, Е.Н. Тестова, П.В. Рязанцев). 2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 июня 2023 г. 3. Введены впервые. ### I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ 1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для определения уровня остаточных количеств крезоксим-метила в яблочном соке в диапазоне (0,01 - 0,10) мг/кг. #### 1.2 МУК носят рекомендательный характер. ### II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА #### 2.1 Физико-химические свойства крезоксим-метила. Название вещества по ИЮПАК: (E)-метил-2-метоксиимино-2-[2-(o-толил-окси-метил)фенил]ацетат. Эмпирическая формула: C18H19NO4. Молекулярная масса: 313,35. Агрегатное состояние: белое кристаллическое твердое вещество. Цвет, запах: белый, со слабым ароматным запахом. Давление насыщенного пара при плюс 20 °C: 2,3 x 10-3 МПа. Температура плавления: плюс 97,2 - 101,7 °C. Растворимость в воде (в г/дм3, при плюс 20 °C): 0,002. Растворимость в органических растворителях (в г/дм3, при плюс 20 °C): дихлорметан - 939; ацетон - 217; этилацетат - 123; толуол - 111; метанол - 14,9; н-гептан - 1,7. Стабильность к гидролизу при плюс 20 °C: ДТ50 34 дня (pH 7), 7 часов (pH 9). В биологически активных почвах в аэробных условиях крезоксим-метил быстро разрушается: ДТ90 менее 3 дней. 2.2. Крезоксим-метил относится к мало опасным веществам по острой оральной (ЛД50 для крыс более 5000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) более 5600 мг/м3 воздуха). Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и сенсибилизирующими свойствами. 2.3. Крезоксим-метил - синтетический фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба Strobilurus tenacellus. Вещество эффективно против широкого круга грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и плодовых культур. Обладает защитным, лечебным и искореняющим действием. ### III. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ 3.1. Метод основан на определении крезоксим-метила методом капиллярной ГЖХ с использованием электронозахватного детектора. Определение крезоксим-метила в яблочном соке проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта на колонках с флорисилом. Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки. В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий хроматографирования. ### IV. МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 4.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в [таблице 1](#p100035) для соответствующих диапазонов концентраций. Таблица 1 Метрологические характеристики | Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (границы относительной погрешности), $\pm \delta$ , %,
P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, $\sigma_{r}$ , % | Стандартное отклонение воспроизводимости, $\sigma_{R}$ , % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Яблочный сок | 0,01 - 0,10 вкл. | 50 | 4,4 | 6,1 | 12 | 17 | Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в [таблице 2](#p100052). Таблица 2 Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для крезоксим-метила
Анализируемый объектМетрологические параметры, P = 0,95, n = 20
Предел обнаружения, мг/кгДиапазон определяемых концентраций, мг/кгПолнота извлечения вещества, %Стандартное отклонение S, %Доверительный интервал среднего результата, +/-, %
Яблочный сок0,010,01 - 0,1082,43,91,5
### V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ #### 5.1 Средства измерений: - весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228 - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г; - весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228 - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,5 г; - колбы мерные на 10, 100 см3, [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74); - пипетки мерные на 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 см3, [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91); - цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 250, 500 и 1000 см3, [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74); - хроматографическая система, включающая: - хроматограф газовый с микроэлектронозахватным детектором (микро-ЭЗД) с пределом детектирования по линдану меньше 0,8 x 10-14 г/с, снабженный приспособлениями для капиллярной колонки и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 1 до 10 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему; - компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ. #### 5.2 Реактивы: - крезоксим-метил, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,9%; - азот, особой чистоты, ГОСТ 9293; - ацетон, химически чистый; - ацетонитрил, особой чистоты, УФ-200 нм; - вода дистиллированная по ГОСТ 6709 и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости); - гелий, очищенный; - n-Гексан, химически чистый; - калий марганцовокислый, чистый для анализа, ГОСТ 20490; - кальций хлористый, чистый; - натрий сернокислый, безводный, химически чистый, [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76); - натрий хлористый, химически чистый, ГОСТ 4233; - этилацетат, чистый для анализа, [ГОСТ 22300](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76); - флорисил (магния силикат, 99%) для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш. #### 5.3 Вспомогательные устройства, материалы: - аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту; - банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см3; - ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм3; - вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная, [ГОСТ 5556](https://bukva.ai/docs/standart-gost-5556-2022); - виалы объемом 2 см3, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб; - виалы с тефлоновыми прокладками, стеклянные, объемом не менее 40 см3; - воронки делительные на 250 и 500 см3, ГОСТ 25336; - воронки лабораторные, стеклянные, ГОСТ 25336; - испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и с диапазоном температур от плюс 20 до плюс 100 °C; - колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см3, ГОСТ 25336; - колбы круглодонные со шлифом объемом 100, 250 см3 и 4000 см3 ТС; - колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренним диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм; - колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые, длиной 150 - 250 мм и диаметром 15 мм; - насос диафрагменный, химически стойкий на 100%, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин; - стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100 - 1000 см3, ГОСТ 25336; - установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3; - фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г. *Примечание.* Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных. ### VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ 6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф. 6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004. ### VII. КВАЛИФИКАЦИЯ ОПЕРАТОРОВ 7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений. ### VIII. ОТБОР ПРОБ 8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами [<1>](#p100117). --- <1> Унифицированные [правила](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79. Пробы яблочного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 5 суток. ### IX. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ #### 9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия: - процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80%; - выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору. ### X. ПОДГОТОВКА К ОПРЕДЕЛЕНИЮ 10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с флорисилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с флорисилом, установление градуировочной характеристики. Подготовка органических растворителей. ##### 10.1.1 Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,5 °C, отбрасывают. ##### 10.1.2 Очистка ацетона. Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,2 °C, отбрасывают. ##### 10.1.3 Очистка этилацетата. Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Этилацетат перегоняют при температуре плюс 77,1 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 77,1 °C, отбрасывают. ##### 10.1.4 Очистка гексана. Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Гексан перегоняют при температуре плюс 68,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,7 °C, отбрасывают. ##### 10.1.5 Приготовление бидистиллированной воды. Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 100,0 °C, отбрасывают. #### 10.2 Приготовление растворов для проведения анализа. ##### 10.2.1 Приготовление рабочих растворов. ###### 10.2.1.1 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия. 400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, ставят на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. 10.2.1.2. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5 (по объему). В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 5 см3 этилацетата и доводят гексаном объем в колбе до метки. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстракта на колонках с флорисилом. 10.2.1.3. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 9:1 (по объему). В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 10 см3 этилацетата и доводят гексаном объем в колбе до метки. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстракта на колонках с флорисилом. ##### 10.2.2 Приготовление градуировочных растворов. 10.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией крезоксим-метила 100,0 мкг/см3. Взвешивают 10 мг крезоксим-метила в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 1 месяца. 10.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией крезоксим-метила 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. 10.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией крезоксим-метила 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 3 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. 10.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией крезоксим-метила 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. 10.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией крезоксим-метила 0,05 мкг/см3. Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. 10.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией крезоксим-метила 0,02 мкг/см3. Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. 10.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией крезоксим-метила 0,01 мкг/см3. Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. 10.2.2.8. Стандартный раствор N 8 с концентрацией крезоксим-метила 0,005 мкг/см3. Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 8 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. 10.2.2.9. Стандартные растворы крезоксим-метила с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы яблочного сока. Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора N 2 готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 крезоксим-метила и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы яблочного сока. Стандартные растворы для внесения хранятся в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 3-х дней. #### 10.3 Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации крезоксим-метила в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-и растворам для градуировки с концентрацией 0,100; 0,050; 0,020 и 0,010 и 0,005 мкг/см3. В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 11.2](#p100190). Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений. 10.4. Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения крезоксим-метила на ней. ##### 10.4.1 Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 5 г флорисила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флорисила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. В день использования колонку последовательно промывают 10 см3 этилацетата и 20 см3 гексана, смыв отбрасывают. 10.4.2. Проверка хроматографического поведения крезоксим-метила на колонке с 5 г флорисила. В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора крезоксим-метила в ацетоне с концентрацией 0,1 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5, тщательно обмывают стенки колбы и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C. Колонку последовательно промывают 15 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5 и четырьмя порциями объемом 10 см3 каждая смеси гексан с этилацетатом в соотношении 9:1. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C. Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 ацетона и 1 мм3 хроматографируют. Определяют фракции, содержащие крезоксим-метил, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата. Изучение поведения крезоксим-метила на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии флорисила. ### XI. ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ #### 11.1 Яблочный сок. ##### 11.1.1 Экстракция. Образец яблочного сока массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 20 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, 50 см3 ацетонитрила и помещают на 10 минут на аппарат для встряхивания проб. Далее экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 см3 и после разделения фаз в делительной воронке, нижний водный слой возвращают в полипропиленовую банку для экстракции, а верхний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 30 см3 ацетонитрила и помещая пробы на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Ацетонитрильные экстракты, объединяют в отгонной колбе объемом 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C. ##### 11.1.2 Очистка экстракта на колонке с флорисилом. Сухой остаток, полученный по [п. 10.1.1](#p100126), растворяют в 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5, тщательно обмывают стенки колбы и вносят на подготовленную колонку. Колонку промывают 15 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5. Элюаты отбрасывают. Крезоксим-метил элюируют с колонки 30 см3 смеси гексан с этилацетатом в соотношении 9:1, элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C. Сухой остаток растворяют в 10 см3 ацетона и 1 мм3 хроматографируют. #### 11.2 Условия хроматографирования. ##### 11.3.1 Хроматографическая система, включающая: - хроматограф газовый с микроэлектронозахватным детектором (микро-ЭЗД) с пределом детектирования по линдану менее 0,8 x 10-14 г/с, снабженный приспособлениями для капиллярной колонки и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 1 до 10 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему; - компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ. Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренним диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм. Температура детектора - плюс 300 °C, поток газа поддувки (азот) - 30,0 см3/мин. Температура испарителя - плюс 260 °C, газ-носитель - гелий, режим с делением потока (сплит), деление потока 30:1, общий поток 83,6 см3/мин, поток обдува септы - 3,0 см3/мин. Температура колонки: градиентный нагрев колонки, начиная с плюс 180 °C (выдержка 1 мин) по 10 град/мин до плюс 260 °C (выдержка 2 мин). Поток газа-носителя (гелий) - 2,6 см3/мин, скорость 48,6 см/сек. Объем вводимой пробы: 1 мм3. Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 0,100 - 0,005 нг. Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор крезоксим-метила с концентрацией 0,1 мкг/см3, соответственно разбавляют. ### XII. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЯ 12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему. Альтернативная обработка результатов. Содержание крезоксим-метила в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб [(1)](#p100205): $X = \frac{S_{\text{пр}}AV}{100S_{\text{ст}}m} P,$ (1) где X - содержание крезоксим-метила в пробе, мг/кг; Sст - высота (площадь) пика стандарта, мм; Sпр - высота (площадь) пика образца, мм; A - концентрация стандартного раствора, мкг/см3; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3; m - масса анализируемого образца, г; P - содержание крезоксим-метила в аналитическом стандарте, %. ### XIII. ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ 13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости [(2)](#p100215): $\frac{2 \cdot |\text{Х}_{1} - \text{Х}_{2}| \cdot 100}{(\text{Х}_{1} + \text{Х}_{2})} \leq r,$ (2) где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм3; r - значение предела повторяемости [(таблица 1)](#p100035), при этом $r = 2,8 \times \sigma_{r}$ . При невыполнении [условия (2)](#p100215) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. ### XIV. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ #### 14.1 Результат анализа представляют в виде: $(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг}$ при вероятности P = 0,95, где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг: $\Delta = \frac{\delta\overline{X}}{100} ,$ где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100035)), %. В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "- при определении остаточного количества крезоксим-метила в яблочном соке содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" *Примечание.* 0,01 мг/кг - предел обнаружения определяемой концентрации крезоксим-метила в яблочном соке. ### XV. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ 15.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002). Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов. При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание крезоксим-метила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,005 до 0,100 мкг/см3. Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется [соотношение (3)](#p100235): $A = \frac{(X - C)100}{C} \leq 10,$ (3) где X - концентрация крезоксим-метила контрольного измерения, мкг/см3; C - известная концентрация градуировочного раствора крезоксим-метила в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3; 10 - погрешность градуировочной характеристики, %. Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов крезоксим-метила, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно [п. 10.3](#p100167). 15.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок. Величина добавки Cд должна удовлетворять [условию (4)](#p100242): $C_{\text{д}} = \overline{\Delta_{\text{л},\text{Х}}} + \overline{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}},$ (4) где $\pm \overline{\Delta_{\text{л},\text{Х}}}( \pm \overline{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом: $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,$ где $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг; $\Delta = \frac{\delta X}{100} ,$ где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100035)), %. Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле: $\text{К}_{\text{к}} = \overline{\text{Х}}\prime - \overline{\text{Х}} - \text{С}_{\text{д}},$ где $\overline{\text{Х}}\prime$ , $\overline{\text{Х}}$ , Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 13.1](#p100214)), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг. Норматив контроля К рассчитывают по [формуле (5)](#p100252): $\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .$ (5) Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К). Если результат контроля процедуры удовлетворяет [условию (6)](#p100255): |Кк| <= К, (6) процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении [условия (6)](#p100255) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (6)](#p100255) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению. 15.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R): $\frac{2|\text{Х}_{1} - \text{Х}_{2}|100}{(\text{Х}_{1} + \text{Х}_{2})} \leq R,$ (7) где X1, X2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100035)), %. Приложение к МУК 4.1.3905-23 **ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ КРЕЗОКСИМ-МЕТИЛА ИЗ ЯБЛОЧНОГО СОКА** **(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)**
СредаВнесено крезоксим-метила, мг/кгОбнаружено крезоксим-метила, мг/кгПолнота определения, %
Яблочный сок0,010,00823 +/- 0,000382,3
0,020,01620 +/- 0,000981,0
0,050,04028 +/- 0,001680,6
0,100,08573 +/- 0,002085,7
## БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ 1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения". 2. [ГОСТ Р 8.563](https://bukva.ai/docs/gost-r-8-563-2009) "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений". 3. [ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений". 4. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения". 5. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности". 6. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты". 7. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования". 8. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание". 9. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения". 10. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания". 11. [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042, ИСО 4788) "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия". 12. [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования". 13. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры". 14. ГОСТ 6709 "Вода дистиллированная. Технические условия". 15. [ГОСТ Р 52501](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия". 16. [ГОСТ 5556](https://bukva.ai/docs/standart-gost-5556-2022) "Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия". 17. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия". 18. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия". 19. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия". 20. [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) "Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия". 21. [ГОСТ 4201](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79) "Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия". 22. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия". 23. Унифицированные [правила](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79. 24. [ГОСТ 32101-2013](https://bukva.ai/docs/gost-32101-2013) "Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия". ---