МУК 4.1.3903-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пропиконазола в зерне гороха методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 29.06.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 29.06.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 29 июня 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОПИКОНАЗОЛА В ЗЕРНЕ ГОРОХА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3903-23
Дата введения 29 сентября 2023 года
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, Е.Н. Тестова, П.В. Рязанцев).»
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 июня 2023 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения уровня остаточных количеств пропиконазола в зерне гороха в диапазоне (0,01 — 0,10) мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1 Физико-химические свойства пропиконазола.
Название вещества по ИЮПАК: (±) - 1 - [2 - (2,4 - \text{дихлорфенил}) - 4 - \text{пропил} - 1,3 - \text{диоксолан} - 2 - \text{илметил}] - 1\text{Н} - 1,2,4 - \text{триазол}].
Эмпирическая формула: C15H17Cl2N3O2.
Агрегатное состояние: вязкая жидкость.
Давление насыщенного пара: 5,6 x 10-2 мПа (при 25 °C) и 2,7 x 10-2 мПа (при плюс 20 °C).
Температура плавления: плюс 180 °C при 13,3 Па.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 3,72 (pH 6,6, плюс 25 °C).
Растворимость в воде (в мг/дм3, при плюс 20 °C): 100.
При плюс 25 °C растворим в большинстве органических растворителей (этанол, ацетон, толуол), в гексане — 47 г/дм3.
Пропиконазол несущественно гидролизуется в щелочной и кислой средах.
Период полураспада в почве при плюс (20 — 25 °C) — от 29 до 70 дней. ДТ50 в воде — 6,4 дня.
2.2. Пропиконазол относится к веществам мало опасным по острой пероральной (ЛД50 для крыс — 1517, ЛД50 для мышей — 1490 мг/кг и дермальной токсичности (ЛД50 крысы > 4000, ЛД50 кролики > 6000 мг/кг), но к умеренно опасным по ингаляционной (ЛД50 для крыс (4 часа) > 5800 мг/м3).
2.3. Пропиконазол — системный фунгицид широкого спектра действия. Он обладает высокой активностью против возбудителей мучнистой росы, пятнистостей и ржавчины.
III. Метод измерения
3.1. Метод основан на определении пропиконазола методом капиллярной ГЖХ с использованием электроннозахватного детектора.
Определение пропиконазола проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей и очистки экстракта на колонках с флорисилом.
Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий хроматографирования.
IV. Метрологические характеристики
4.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 4.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Хроматограф газовый с электроннозахватным детектором (ЭЗД) | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I) по ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,5 г, класс точности средний (III) по ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-100-2 по ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10 по ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Пропиконазол, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 99,0% |
| Азот газообразный особой чистоты | ГОСТ 9293 |
| Ацетон химически чистый | ГОСТ 2603 |
| Ацетонитрил химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый чистый для анализа | ГОСТ 20490 |
| Кальций хлористый чистый для анализа | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Метилен хлористый химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Натрий сернокислый химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Натрий хлористый химически чистый | ГОСТ 4233 |
| Флорисил (магния силикат) для колоночной хроматографии | Содержание основного вещества не менее 99%, размер частиц 60 — 100 меш |
Вспомогательные устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний в минуту |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 Гц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД по ГОСТ 25336 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В по ГОСТ 25336 |
| Колбы конические стеклянные | Тип Кн по ГОСТ 25336 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К по ГОСТ 25336 |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла | Внутренний диаметр 0,32 мм, длина 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм |
| Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые | Длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин., с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур (20 — 100) °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость (100 — 800 см3) по ГОСТ 25336 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
VII. Квалификация операторов
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Отбор проб
8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.
<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Пробы зерна гороха подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
IX. Условия проведения измерений
9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 — 30) °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
X. Подготовка к выполнению измерений
10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
Подготовка органических растворителей.
10.1.1 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
10.1.2 Очистка ацетона.
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
10.1.3 Очистка гексана.
Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
10.1.4 Очистка хлористого метилена.
Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 39,5 — 40,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 39,5 — 40,5 °C, отбрасывают.
10.1.5 Приготовление бидистиллированной воды.
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.
Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 99,5 — 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 99,5 — 100,0 °C, отбрасывают.
10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.
10.2.1 Приготовление рабочих растворов.
10.2.1.1 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.
400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12-ти месяцев.
10.2.1.2. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 (по объему).
В коническую колбу объемом 250 см3 помещают 160 см3 гексана и добавляют 40 см3 ацетона. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстракта на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
10.2.1.3. Приготовление смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6 (по объему).
В коническую колбу объемом 250 см3 помещают 180 см3 ацетона и добавляют 30 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстракта на колонках с флорисилом. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
10.2.1.4 Приготовление 5%-го раствора натрия углекислого кислого.
50 г натрия углекислого кислого переносят в мерную колбу на 1000 см3, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Приготовленный раствор используется для очистки этилацетата и хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12 месяцев.
10.2.2 Приготовление градуировочных растворов.
10.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией пропиконазола 100,0 мкг/см3.
Взвешивают 10 мг пропиконазола в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 6 месяцев.
10.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией пропиконазола 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией пропиконазола 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией пропиконазола 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией пропиконазола 0,05 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией пропиконазола 0,02 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией пропиконазола 0,01 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.8. Стандартные растворы пропиконазола с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы зерна гороха.
Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3 пропиконазола, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы зерна гороха. Стандартные растворы для внесения хранятся в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.3. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
10.3.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации пропиконазола в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,10; 0,05; 0,02 и 0,01 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
10.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки. Содержание пропиконазола должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,01 до 0,10 мкг/см3 при определении пропиконазола в зерне гороха.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):
A = \frac{(X - C) \times 100}{C} \leq 10, (1)
где X — концентрация пропиконазола контрольного измерения, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора пропиконазола в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов пропиконазола, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.1.
10.4. Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения пропиконазола на ней.
10.4.1 Подготовка колонки с 5 г флорисила для очистки экстракта.
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 5 г флорисила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флорисила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.
В день использования колонку последовательно промывают 20 см3 ацетона и 10 см3 гексана, смыв отбрасывают.
10.4.2. Проверка хроматографического поведения пропиконазола на колонке с 5 г флорисила.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора пропиконазола в ацетоне с концентрацией 10,0 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток в колбе растворяют в 1 см3 ацетона, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Колонку последовательно промывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и четырьмя порциями смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6 объемом 5 см3 и последовательно вносят на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 10 см3 ацетона и 1 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие пропиконазол, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
Изучение поведения пропиконазола на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии флорисила.
XI. Проведение измерений
11.1 Зерно гороха.
11.1.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Навеску зерна гороха массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. По истечении времени экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см3 через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя каждый раз по 30 см3 ацетонитрила. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 см3.
К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 40 см3 гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру очистки еще раз, используя 40 см3 гексана. Верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
11.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Сухой остаток, полученный по п. 10.1.1, растворяют в 2 см3 ацетона, обмывают стенки колбы, затем прибавляют 100 см3 дистиллированной воды, 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают содержимое в колбе и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Пропиконазол экстрагируют тремя порциями хлористого метилена по 30 см3, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха при температуре не выше плюс 30 °C.
11.1.3 Очистка экстракта на колонке с флорисилом.
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 10.1.2, растворяют в 1 см3 ацетона, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 4 см3 гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку с флорисилом. Элюат отбрасывают.
Колонку последовательно промывают 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и 5 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6, элюаты отбрасывают.
Пропиконазол элюируют с колонки 10 см3 смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:6. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 30 °C.
Сухой остаток в колбе растворяют в 10 см3 ацетона и вводят 1 мм3 пробы в хроматограф.
11.2 Условия хроматографирования.
Хроматографическая система, включающая:
- хроматограф газовый с электронозахватным детектором, снабженный приспособлениями для капиллярной колонки и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 1 до 10 мм3 для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;
- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.
Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренним диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм.
Температура детектора — плюс 320 °C, поток газа поддувки (азот) — 25,0 см3/мин.
Температура испарителя — плюс 260 °C, газ-носитель — гелий, режим с делением потока (сплит), деление потока 10:1, общий поток 31,1 см3/мин., поток обдува септы — 3,0 см3/мин.
Температура колонки: градиентный нагрев колонки, начиная с плюс 120 °C (выдержка 1 мин.) по 25 град./мин. до плюс 260 °C (выдержка 3 мин.), затем по 10 град/мин. до плюс 290 °C (выдержка 1 мин.). Поток газа-носителя (гелий) — 2,5 см3/мин., скорость 45 см/сек.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 0,10 — 0,01 нг.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор пропиконазола с концентрацией 0,1 мкг/см3, соответственно разбавляют. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания пропиконазола в пробах.
XII. Обработка результатов измерения
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание пропиконазола в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества (приложение к настоящим МУК) из проб (2):
где X — содержание пропиконазола в пробе, мг/кг;
A — концентрация пропиконазола, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (3):
\frac{2 \times |X_{1} - X_{2}|}{X_{1} + X_{2}} \times 100 \leq r, (3)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 4.1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r}.
При невыполнении условия (3) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIV. Оформление результатов
14.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta), мг/кг при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \delta \cdot \overline{X}/100,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 4.1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание пропиконазола в зерне гороха — менее 0,01 мг/кг».
XV. Контроль качества результатов измерений
15.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6).
Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ПРОПИКОНАЗОЛА ИЗ ЗЕРНА ГОРОХА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено пропиконазола, мг/кг | Полнота определения, % |
| Зерно гороха | 0,01 | 89,1 |
| 0,02 | 81,2 | |
| 0,05 | 81,8 | |
| 0,10 | 85,5 |
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства изменений. Методики (методы) измерений».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
4. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
5. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
7. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
8. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
9. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
10. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
14. ГОСТ Р 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
15. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
17. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
18. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия».
19. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
20. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
21. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
22. ГОСТ 13586.3 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб».