МУК 4.1.3742-22. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации нитрат-ионов в моче методом капиллярного электрофореза. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 15.02.2022)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 15 февраля 2022 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ НИТРАТ-ИОНОВ В МОЧЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3742-22
1. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора (Т.С. Уланова, Н.В. Зайцева, Т.Д. Карнажицкая, Т.С. Пермякова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 15 февраля 2022 г.
Свидетельство об аттестации № 88-16207-030-RA.RU.310657-2018 от 02.04.2018.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярного электрофореза для измерения массовой концентрации нитрат-ионов в моче в диапазоне 4 — 300 мг/дм3.
Диапазоны измерений нитрат-ионов в моче приведены в табл. 1.1.
Наименование определяемого компонента, диапазоны измерений
| Наименование определяемого компонента | Диапазон измерений в моче, мг/дм3 |
| Нитрат-ионы | От 4 до 50 вкл. |
| Св. 50 до 100 вкл. | |
| Св. 100 до 300 вкл. |
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы в санитарно-гигиенических, экологических, лечебных и научных организациях, осуществляющих деятельность в области профпатологии и экологии человека.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1 Физические и химические свойства.
Нитрат-ионы — отрицательные ионы азотной кислоты, образуют нитраты — соли азотной кислоты. Нитраты (по NO_{3}^{-} ) CAS № 14797-55-8. Экзогенное поступление небольшого количества нитратов является нормальной частью процесса круговорота азота в организме человека. Ориентировочное содержание нитрат-ионов в моче здоровых людей от 68 мг/дм3 до 93 мг/дм3 <1>. В связи с особенностями питания значения могут изменяться.
<1> Jobgen W.S., Jobgen S.C., Li H., Meininger C.J., Wu G. Analysis of nitrite and nitrate in biological samples using high-performance liquid chromatography//Journal of Chromatography B. 2007. Vol. 851. P. 71 — 82.
2.2 Краткая токсикологическая характеристика.
Повышенное поступление нитратов в организм способствует образованию канцерогенных соединений — N-нитрозоаминов.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значения погрешности (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности p = 0,95 не превышают значений, приведенных в табл. 3.1, для соответствующих диапазонов массовых концентраций.
IV. Метод измерений
4.1. Измерения массовой концентрации нитратов в моче выполняют методом капиллярного электрофореза.
4.2. Подготовку проб проводят центрифугированием образца мочи, разбавлением этанолом и дистиллированной водой, фильтрованием через фильтр.
4.3. Идентификацию нитрат-ионов в пробе проводят по времени выхода стандартного раствора, детектирование — при длине волны 374 нм. Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки.
4.4 Нижний предел измерения в анализируемом растворе 4 мг/дм3.
Определению не мешают нитриты, хлориды, сульфаты, фториды и другие анионы, органические соединения.
4.5 Продолжительность проведения анализа составляет 15 минут.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Система капиллярного электрофореза с программным обеспечением | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные электронные II класса точности | ГОСТ Р 53228 |
| Дозаторы жидкости механические с одноразовыми наконечниками вместимостью: 1 — 5 см3 (погрешность от +/- 0,5% до +/- 2%), 100 — 1000 мм3 (погрешность от +/- 0,6% до +/- 2%), 20 — 200 мм3 (погрешность от +/- 0,6% до +/- 2,5%) | - |
| Пипетки градуированные 2-1-1-1, 2-1-1-2, 2-1-1-5, 2-1-1-10 | ГОСТ 29227 |
| Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2 | ГОСТ 1770 |
| Цилиндр 1-50-2 | ГОСТ 1770 |
| Стакан В-1-50 ТС | ГОСТ 25336 |
| Государственный стандартный образец состава раствора нитрат-ионов (1 мг/см3, флакон 40 мл) | ГСО 7820-2000 |
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Вода дистиллированная | ГОСТ 6709 |
| Этанол (спирт этиловый), 1 сорт | ГОСТ 5962 |
| Хрома (VI) оксид ч.д.а. | ГОСТ 3776 |
| Цетилтриметиламмония гидроксид (гексадецилтриметил аммония гидроксид), 10%-й раствор в воде, ч.д.а. | CAS № 505-86-2 |
| Диэтаноламин, чистота >= 99,5% | CAS № 111-42-2 |
| Натрия гидроокись х.ч. | ГОСТ 4328 |
| Кислота соляная х.ч. | ГОСТ 3118 |
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Система очистки воды, позволяющая получить дистиллированную воду | - |
| Центрифуга, обеспечивающая скорость вращения 2,7 тыс. об./мин | ТУ 9443-001-245.23530 |
| Пробирки конические из полипропилена вместимостью 1,5 см3 | - |
| Пробирки из полипропилена градуированные с винтовыми крышками вместимостью 15 см3 | - |
| Стаканы В-1-50-ТС, В-1-100-ТС | ГОСТ 25336 |
| Мембранные фильтры целлюлозно-ацетатные, диаметр 25 мм, размер пор 0,2 мкм | ТУ-6-55-221-879 |
| Оправа для мембранных фильтров диаметром 25 мм | - |
| Шприцы инъекционные однократного применения вместимостью 20 см3 | ГОСТ ISO 7886-1 |
| Шкаф сушильный электрический, диапазон рабочих температур от 50 до 200 °C | - |
| Холодильник бытовой любого типа для хранения проб | - |
| Шкаф вытяжной химический | ТУ 25-11.1630 |
| Шейкер лабораторный с орбитальным типом движения платформы для перемешивания проб в пробирках объемом до 30 мл, обеспечивающий скорость вращения 300 об./мин | - |
| Дезинфицирующее средство с широким спектром антимикробного действия для обработки изделий медицинского назначения | - |
Примечание: допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений соблюдают меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, имеются средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009 и соблюдаются правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019.
6.2. При работе с химическими реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007 и ГОСТ 12.1.005.
6.3. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. При выполнении измерений концентрация вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должна превышать гигиенических нормативов <2>.
<2> СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 № 2, зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021, регистрационный № 62296.
6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на приборе капиллярного электрофореза, прошедший инструктаж, освоивший метод анализа и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
6.5. При выполнении измерений на приборе капиллярного электрофореза соблюдают требования, изложенные в технической документации на систему капиллярного электрофореза.
6.6. Утилизацию растворов после выполнения измерений проводят в соответствии с инструкцией по обращению с химическими отходами, действующей в лаборатории.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, атмосферном давлении от 84,0 до 106,7 кПа (630 — 800 мм рт. ст.) и относительной влажности воздуха от 30 до 80%;
- выполнение измерений на приборе капиллярного электрофореза проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1 Подготовка посуды.
Все наконечники к дозаторам, фильтры и полипропиленовые пробирки вместимостью 1,5 см3 применяются однократно. Использованные изделия подвергаются дезинфекции методом полного погружения в дезинфицирующий раствор, приготовленный в соответствии с инструкцией к применению дезинфицирующего средства. Посуду многоразового использования для работы с мочой обрабатывают с помощью дезинфицирующего средства, ополаскивают водопроводной и дистиллированной водой.
Химическую посуду помещают в 2%-й раствор натрия гидроокиси на 1 — 2 минуты, промывают проточной водопроводной водой, многократно ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу при температуре 105 °C.
8.2 Приготовление растворов.
Все растворы готовят на свежей дистиллированной воде, соответствующей ГОСТ Р 58144. Проверку дистиллированной воды на чистоту проводят в условиях, указанных в п. 8.4.6.
8.2.1. 2%-й раствор натрия гидроокиси для промывки капилляра. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят с помощью цилиндра 50 см3 дистиллированной воды, 2 г натрия гидроокиси. После растворения содержимое колбы доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок хранения раствора в полиэтиленовой таре с плотно завинчивающейся крышкой при комнатных условиях 2 месяца.
8.2.2. 3%-й раствор соляной кислоты для промывки капилляра. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят цилиндром 50 см3 дистиллированной воды, пипеткой 7,9 см3 концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19 г/см3), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок хранения раствора в стеклянной посуде с притертой пробкой не ограничен.
8.2.3. 0,05 М раствор оксида хрома (VI). В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,5 г оксида хрома (VI), 50 см3 дистиллированной воды, после растворения доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок хранения раствора в стеклянной посуде с притертой пробкой не ограничен.
8.2.4. 0,1 М раствор диэтаноламина (ДЭА). В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят пипеткой 10 см3 дистиллированной воды, 0,26 г диэтаноламина, предварительно замороженного до кристаллического состояния. После растворения содержимое колбы доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок хранения раствора в полиэтиленовой посуде в условиях, исключающих поглощение углекислого газа из воздуха, 1 месяц.
Примечание: реактив ДЭА хранится в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C.
8.2.5. 0,01 М раствор цетилтриметиламмония гидроксида (ЦТА-ОН). В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят пипеткой или дозатором 5 см3 дистиллированной воды, 0,75 см3 10%-го раствора ЦТА-ОН. После растворения содержимое колбы доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок хранения раствора в пластиковой посуде с завинчивающейся крышкой в условиях, исключающих поглощение углекислого газа из воздуха, при температуре 4 — 6 °C 6 месяцев.
8.2.6. Хроматный буферный раствор (ведущий электролит). В стакан вместимостью 50 см3 вносят 2 см3 0,05 М раствора оксида хрома (VI), 3 см3 0,1 М раствора ДЭА, 3 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Добавляют 2 см3 0,01 М раствора ЦТА-ОН. Раствор перемешивают и сразу фильтруют через мембранный фильтр с помощью шприца в пластиковую посуду. Срок хранения раствора в пластиковой посуде с завинчивающейся крышкой при комнатной температуре 1 неделя.
8.2.7. Контрольный раствор с массовой концентрацией нитрат-ионов 10 мг/дм3. В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят пипеткой или дозатором 0,5 см3 раствора ГСО с концентрацией нитрат-ионов 1 мг/см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок хранения раствора в стеклянной посуде с притертой пробкой при температуре 4 — 6 °C 2 недели.
8.3 Подготовка прибора к работе.
8.3.1. Систему капиллярного электрофореза готовят к работе в соответствии с руководством по эксплуатации и руководством пользователя программного обеспечения. После включения и автотестирования прибора проводят включение системы охлаждения капилляра, через несколько минут проверяют температуру теплоносителя (дистиллированной воды) системы охлаждения. Производят проверку работы фотометра, правильность установки знака полярности (отрицательный или положительный) блока высокого напряжения.
8.3.2 Подготовка капилляра к работе.
8.3.2.1 Подготовка нового капилляра к работе.
Новый капилляр промывают в следующем порядке:
- 10 минут дистиллированной водой;
- 10 минут 3%-м раствором соляной кислоты;
- 10 минут дистиллированной водой;
- 10 минут 2%-м раствором натрия гидроокиси;
- 10 минут дистиллированной водой;
- 10 минут хроматным буферным раствором (ведущим электролитом).
8.3.2.2 Ежедневная подготовка капилляра к работе.
Оставленный на ночь в дистиллированной воде капилляр промывают перед работой по схеме:
- 3 минуты дистиллированной водой;
- 5 минут 2%-м раствором натрия гидроокиси;
- 5 минут дистиллированной водой;
- 10 минут хроматным буферным раствором (ведущим электролитом).
Все промывочные растворы собирают в сливную пробирку, не погружая в нее выходной конец капилляра.
8.3.3. Анализируют контрольный раствор нитрат-ионов, приготовленный по п. 8.2.7. Устанавливают время миграции нитрат-ионов на полученной электрофореграмме. По градуировочному графику определяют концентрацию нитрат-ионов в контрольном растворе.
8.3.4 Промывка капилляра между анализами и в конце рабочего дня.
8.3.4.1. Промывка капилляра между анализами. После каждого измерения капилляр последовательно промывают 3 минуты 2%-м раствором натрия гидроокиси, 2 минуты дистиллированной водой, 3 минуты хроматным буферным раствором в течение 3 минут.
8.3.4.2. Через каждые 6 анализов мочи анализируют контрольный раствор нитрат-ионов для проверки стабильности градуировочной характеристики. Если концентрация нитрат-ионов в контрольном растворе занижена, капилляр промывают дистиллированной водой в течение 1 — 2 часов.
В ходе работы на электрофореграмме может наблюдаться дрейф базовой линии и появление ступеней. В этом случае рекомендуется увеличить время промывки капилляра между анализами, заменить свежими порциями рабочий буферный раствор в пробирках на входе и выходе.
8.3.4.3. При сильном загрязнении капилляра промывку проводят по схеме для промывки нового капилляра, приведенной в п. 8.3.2.1.
8.3.4.4. В конце рабочего дня капилляр промывают дистиллированной водой 1 час и оставляют концы капилляра в пробирках с дистиллированной водой.
Примечание. Допускается возможность изменения процедуры промывки капилляра. Подбирают оптимальную по времени и промывочным растворам процедуру подготовки капилляра между измерениями.
8.3.5 Хранение капилляра.
В случае перерыва в работе прибора сроком до 2 недель капилляр промывают по схеме:
- 2 минуты дистиллированной водой;
- 5 минут 2%-м раствором натрия гидроокиси;
- 5 минут дистиллированной водой;
- 5 минут 3%-м раствором соляной кислоты;
- 10 минут дистиллированной водой и оставляют в воде, подняв пробирки с водой на входе и выходе.
Если перерыв в работе прибора составляет более 2 недель, капилляр высушивают и оставляют в сухом состоянии, подняв пустые пробирки на входе и выходе. При сухом хранении капилляров применяют следующую схему промывки:
- 2 минуты дистиллированной водой;
- 5 минут 2%-м раствором натрия гидроокиси;
- 5 минут дистиллированной водой;
- 5 минут 3%-м раствором соляной кислоты;
- 10 минут дистиллированной водой;
- 10 минут продувка воздухом (задание режима «Промывка» из пустой пробирки).
1. После окончания работы необходимо вынуть из прибора все пробирки, кроме пробирок с дистиллированной водой. Если капилляр хранится в сухом виде, то необходимо вынуть все пробирки, удалить слив, установить и поднять пустые пробирки на входе и выходе.
2. При перерывах на срок более недели можно продолжать хранить капилляр в воде, но периодически следить за ее уровнем во входной и выходной пробирках.
8.4 Установление градуировочной характеристики.
8.4.1 Проверка чистоты дистиллированной воды.
Перед построением градуировочной зависимости анализируют дистиллированную воду, применяемую для приготовления растворов, в рабочем режиме прибора (п. 8.4.6). На полученной электрофореграмме должен отсутствовать пик нитрат-ионов.
8.4.2. Строят графики зависимости площади пика нитрат-ионов на электрофореграмме от массовой концентрации нитрат-ионов в моче в трех диапазонах измерения концентраций. Для каждого диапазона устанавливают градуировочный коэффициент по двум сериям растворов для градуировки. Каждая серия состоит из пяти градуировочных растворов.
8.4.3. Градуировочные растворы готовят в градуированных пробирках из полипропилена вместимостью 15 см3. В каждую пробирку вносят растворы ГСО в соответствии с табл. 8.1, доводят до метки 10 см3 мочой и перемешивают.
Градуировочные растворы для определения нитрат-ионов в моче, мг/дм3
Для приготовления градуировочных растворов на основе мочи собирают общую порцию мочи объемом не менее 300 см3. В соответствии с пп. 10.1 - 10.2 проводят анализ холостой пробы мочи на содержание нитрат-ионов. При наличии нитрат-ионов в холостой пробе вычитают значение площади пика нитрат-ионов, полученное при анализе холостой пробы, из значений площадей пиков нитрат-ионов, полученных при анализе каждого градуировочного раствора при построении градуировочного графика.
8.4.4. 10 см3 каждого градуировочного раствора центрифугируют 10 мин со скоростью вращения 2,5 тыс. об./мин, отбирают 0,5 см3 верхнего слоя в полипропиленовую пробирку, добавляют 1 см3 этанола, перемешивают в течение 10 мин с помощью устройства для перемешивания образцов, добавляют 1 см3 дистиллированной воды, перемешивают 1 мин, повторно центрифугируют 5 мин со скоростью вращения 2,5 тыс. об./мин, фильтруют раствор через фильтр с диаметром пор 0,2 мкм, переносят анализируемый раствор в пробирку вместимостью 1,5 см3 и проводят измерение на приборе в условиях, указанных в п. 8.4.6.
8.4.5. Идентификацию нитрат-ионов в пробах мочи проводят методом сравнения времени удерживания нитрат-ионов в анализируемой пробе и контрольном растворе.
8.4.6 Режим работы прибора (табл. 8.2).
Режим работы системы капиллярного электрофореза
| Параметры | Показания |
|---|---|
| Длина волны, нм | 374 (254) |
| Ввод пробы | 30 мбар, 10 с |
| Напряжение, кВ | минус 17 |
| Температура, °C | 20 |
| Время анализа, мин | 10 |
1. Через 5 — 7 вводов проб необходимо заново заполнять пробирки на входе и выходе свежими порциями буферного раствора (п. 8.2.6).
2. На входе рекомендуется использовать дополнительную пробирку с буфером для промывки капилляра между анализами.
8.4.7. Сбор и обработка данных выполняются программным обеспечением системы капиллярного электрофореза.
8.4.8 Градуировочный коэффициент для каждого диапазона рассчитывают по формуле (1):
K = \frac{\sum_{i = 1}^{n} C_{i}/S_{i}}{n} , (1)
где Ci — массовая концентрация нитрат-ионов в градуировочном растворе, мг/дм3;
Si — среднее значение двух измерений площади пика нитрат-ионов i-й концентрации, условные единицы (усл. ед.);
n — количество градуировочных смесей (n = 5).
8.4.9 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал с анализируемой серии измерений или при смене партий реактивов, замене капилляра или изменении одного из условий проведения анализа (температуры, напряжения, времени и давления при вводе пробы). Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация нитрат-ионов соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировочная характеристика признается стабильной при выполнении условия:
|C_{m} - C| \leq 0,01 \cdot \delta_{\text{гр}} \cdot \text{С}, (2)
где C — заданная массовая концентрация нитрат-ионов в градуировочном растворе, мг/дм3;
Cm — результат измерения массовой концентрации нитрат-ионов в образце для градуировки, мг/дм3;
\delta_{\text{гр}} — относительная погрешность установления градуировочного коэффициента, %, равная 13%.
При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики (2) эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.
IX. Отбор и хранение проб
9.1 Отбор проб.
Отбирают пробу мочи объемом не менее 10 см3 в градуированную пробирку из полипропилена с завинчивающейся крышкой. Анализируют свежеотобранные пробы или замораживают до проведения анализа.
9.2 Срок хранения проб мочи при температуре минус 18 °C один месяц.
X. Выполнение измерений
10.1 Подготовка проб к анализу.
Перед измерением пробу мочи в количестве 10 см3 центрифугируют 10 мин со скоростью вращения 2,5 тыс. об./мин, отбирают 0,5 см3 верхнего слоя в пробирку из полипропилена, добавляют 1 см3 этанола для осаждения белков, перемешивают 10 мин, прибавляют 1 см3 дистиллированной воды для разбавления концентрации, перемешивают 1 мин, повторно центрифугируют 5 мин со скоростью вращения 2,5 тыс. об./мин для удаления осажденных белков, фильтруют раствор через фильтр с диаметром пор 0,2 мкм. Переносят пробу в пробирку коническую из полипропилена вместимостью 1,5 см3 и проводят измерение на приборе в условиях, указанных в п. 8.4.6.
10.2 Порядок выполнения измерений.
10.2.1 Проводят измерение контрольного раствора нитрат-ионов в воде.
10.2.2 Проводят измерение проб мочи.
10.2.3. Идентификацию нитрат-ионов в анализируемой пробе проводят путем сравнения времени миграции нитрат-ионов в пробе мочи и контрольном растворе.
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Массовую концентрацию нитрат-ионов в моче (мг/дм3) рассчитывают по формуле:
где Ci — массовая концентрация нитрат-ионов в моче, мг/дм3;
Si — площадь пика нитрат-ионов на электрофореграмме, е.о.п.;
K — градуировочный коэффициент.
11.2. За результат измерения \overline{C} принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости C1, C2 (параллельных определений), для которых выполняется условие:
|C_{1} - C_{2}| \leq 0,01 \cdot r \cdot \frac{C_{1} + C_{2}}{2} , (4)
где r — предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл. 11.1.
Значения пределов повторяемости, воспроизводимости и критического диапазона при доверительной вероятности P = 0,95
| Диапазон измерений, мг/дм3 | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r <*>, % | Предел внутрилабораторной прецизионности (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в условиях внутрилабораторной прецизионности), Rл, <**> % |
|---|---|---|
| От 4,0 до 50 вкл. | 18 | 18 |
| Св. 50 до 100 вкл. | 9,1 | 14 |
| Св. 100 до 300 вкл. | 7,2 | 7,2 |
<*> Предел повторяемости рассчитан по формуле r = \sigma_{r} \cdot 2,77 <3>;
<**> Предел внутрилабораторной прецизионности рассчитан по формуле R_{\text{л}} = \sigma_{R\text{л}} \cdot 2,77 .
<3> РМГ 61-2010 «Государственная система обеспечения единства измерений. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки».
При невыполнении условия (4) процедуру повторяют. При повторном превышении предела повторяемости выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат измерений представляют в виде:
(\overline{\text{С}} \pm \Delta_{\text{л}})\text{мг}/\text{дм}^{3}, (5)
где \overline{\text{С}} — средний результат измерений, мг/дм3;
\Delta_{\text{л}} — характеристика погрешности, мг/дм3, при P = 0,95, рассчитанная по формуле:
\Delta_{\text{л}} = \frac{\delta_{\text{л}} \cdot \text{С}}{100} , (6)
где \delta_{\text{л}} — относительное значение характеристики погрешности, % (приведено в табл. 3.1).
12.2. Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
12.3. Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание нитрат-ионов в пробе мочи менее 4 мг/м3». Если содержание вещества больше верхней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание нитрат-ионов в пробе мочи более 300 мг/м3».
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль точности результатов измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях повторяемости (п. 11.2), внутрилабораторной прецизионности, оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6.
13.2. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности.
Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности (в пределах одной лаборатории разными операторами в разное время), проводят по результатам измерений массовой концентрации нитрат-ионов в образцах мочи с одинаковым содержанием нитрат-ионов.
Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:
\frac{|C_{1} - C_{2}|}{\frac{C_{1} + C_{2}}{2}} \cdot 100\% \leq R_{\text{л}}, (7)
где \overline{\text{С}_{1}} и \overline{\text{С}_{2}} — результаты измерений массовой концентрации нитрат-ионов, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности, т.е. в одной лаборатории в разное время разными операторами, мг/дм3;
Rл — предел внутрилабораторной прецизионности, %.
Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 11.1.
Если условие (7) не выполняется, процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок.
Образцами для контроля процедуры измерений являются образцы мочи с внесенными в них добавками контрольного раствора нитрат-ионов, приготовленного в соответствии с п. 8.2.7.
Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.
Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:
\text{К}_{\text{к}} = |\overline{\text{С}\prime} - \overline{\text{С}} - \text{С}_{\text{д}}|, (8)
где \overline{\text{С}\prime} — результат измерений массовой концентрации нитрат-ионов в пробе с известной добавкой — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4), мг/дм3;
\overline{\text{С}} — результат измерений массовой концентрации нитрат-ионов в исходной пробе — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4), мг/дм3;
Cд — величина введенной добавки, мг/дм3.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{С}\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{С}}^{2}} , (9)
где \Delta_{\text{л},\text{С}\prime} , \Delta_{\text{л},\text{С}} — значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации нитрат-ионов в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно, рассчитанные по формулам:
\Delta_{\text{л},\text{С}\prime} = 0,01 \cdot \delta_{\text{л}} \cdot \overline{\text{С}}\prime; (10)
\Delta_{\text{л},\text{С}} = 0,01 \cdot \delta_{\text{л}} \cdot \overline{\text{С}}. (11)
Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:
При невыполнении условия (12) контрольную процедуру повторяют.
При повторном невыполнении условия (12) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания».
2. ГОСТ 12.1.004-91 ССБТ «Пожарная безопасность. Общие требования».
3. ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ «Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
4. ГОСТ 12.1.007-76 ССБТ «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
5. ГОСТ 12.4.009-83 ССБТ «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
6. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия».
7. ГОСТ 3118-77 «Реактивы. Кислота соляная. Технические условия».
8. ГОСТ 3776-78 «Реактивы. Хрома (VI) оксид. Технические условия».
9. ГОСТ 4328-77 «Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия».
10. ГОСТ Р 58144-18 «Вода дистиллированная. Технические условия».
11. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
12. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ Р 12.1.019-2009 ССБТ. «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
14. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность методов и результатов измерений). Использование значений точности на практике».
15. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
16. ГОСТ 5962-2013 «Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия».
17. ГОСТ ISO 7886-1-2011 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
18. РМГ 61-2010 «Государственная система обеспечения единства измерений. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки».
19. ТУ 25-11-1592-81 «Бидистиллятор».
20. ТУ 25-11.1630-84 «Шкаф вытяжной химический».
21. ТУ 9443-001-245.23530-97 «Центрифуга лабораторная».
22. ТУ 9452-002-00141798-97 «Термостаты электрические суховоздушные ТС-1 СПУ».
23. ТУ-6-55-221-879-88 «Мембраны „Владипор“ типа МФАС-Б».