МУК 4.1.3714-21. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацибензолар-C-метила в семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 10.11.2021)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 ноября 2021 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЦИБЕНЗОЛАР-C-МЕТИЛА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3714-21
1. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, М.С. Гречина).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 10 ноября 2021 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения в семенах и масле подсолнечника массовой концентрации ацибензолар-C-метила в диапазонах 0,01 — 0,1 мг/кг.
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы организациями, аккредитованными в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья, пищевых продуктов.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические и токсикологические свойства
2.1. Ацибензолар-C-метил. S-метил бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоксилат <1>. Брутто-формула: C8H6N2OS2. Молекулярная масса 210,3. Светло-бежевый порошок. Температура плавления 132,9 °C. Давление паров (в мПа): 4,4·10-1 (25 °C). Растворимость в органических растворителях при 25 °C (в г/дм3): метанол — 4,2; этилацетат — 25; ацетон — 28; толуол — 36; гексан — 1,3. Растворимость в воде при 25 °C — 7,7 мг/дм3. Коэффициент распределения н-октанол-вода — logKow 3,1 (при 20 °C, pH 7).
<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC). Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2. Краткая токсикологическая характеристика: острая оральная и дермальная токсичность (LD50) для крыс > 2000 мг/кг. Не раздражает кожу и слизистую глаз кроликов.
2.3. Ацибензолар-C-метил — фунгицид химического класса бензотиадиазолов, используется для борьбы с рядом инфекционных заболеваний пшеницы на ранней стадии болезни или как профилактическое средство. Применяется в качестве активатора природных защитных механизмов растений, значительно повышающих их устойчивость к мучнистой росе, септориозу, бурой ржавчине на озимой и яровой пшенице, яровом ячмене. Эффективен также против ряда заболеваний риса, табака, овощных культур.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
IV. Метод измерений
4.1. Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) на обращенной фазе с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором.
4.2. Уровни ацибензолар-C-метила в пробах определяют после его экстракции охлажденным ацетонитрилом, последующего щелочного гидролиза образца при 65 — 70 °C (с целью превращения действующего вещества в метаболит бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновую кислоту) и очистки с применением картриджа для твердофазной экстракции.
4.3. Нижний предел измерения ацибензолар-C-метила по его метаболиту в анализируемом объеме пробы — 20 пг.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Прибор для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные аналитические, предел допустимой погрешности +/- 0,0005 г | ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные, предел допустимой погрешности +/- 0,01 г | ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные 2-го класса точности, вместимостью 50, 100, 500 и 1000 см3 | ГОСТ 1770 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1 |
| Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 0,1, 1,0, 2,0, 5,0, 10 см3 | ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 250 см3 | ГОСТ 1770 |
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Аналитический стандартный образец ацибензолар-C-метила | CAS 135158-54-2, с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Аналитический стандартный образец бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновая кислота (CGA210007) | CAS 35272-27-6, с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Азот особой чистоты, сорт 1, в баллонах | ГОСТ 9293 (ИСО 2435) |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Чистота не менее 99,9% |
| Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная) | ГОСТ Р 52501 |
| Изопропиловый спирт (изопропанол) | ГОСТ 9805 |
| Калий углекислый (карбонат калия, поташ), химически чистый, прокаленный | ГОСТ 4221 |
| Метиловый спирт (метанол), химически чистый | ГОСТ 6995 |
| Муравьиная кислота, 99,7%, чистая для анализа | ГОСТ 5848 |
| Натрий гидроксид (натрия гидроокись) | ГОСТ 4328 |
| Соляная кислота (хлороводородная), 37%, химически чистая | ГОСТ 3118 |
| Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) | Квалификация реактива: химически чистый |
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Аппарат для встряхивания проб, орбита до 10 мм | - |
| Бумажные фильтры, средней плотности (красная лента) | ГОСТ 12026 |
| Ванна ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц | - |
| Воронки химические конусные | ГОСТ 25336 |
| Груша резиновая | - |
| Колба коническая плоскодонная вместимостью 250 см3 | ГОСТ 25336 |
| Колба круглодонная вместимостью 50 см3 | ГОСТ 25336 |
| Мельница лабораторная | - |
| Морозильная камера или морозильный ларь, поддерживающий температуру не выше -18 °C | - |
| Насос водоструйный | ГОСТ 25336 |
| Патроны для твердофазной экстракции со смешанной обращенно-фазовой и анион-обменной функциональностью (содержащие анион-обменные группы четвертичного амина) | Масса сорбента 500 мг, размер частиц 60 мкм, объем резервуара 6 см3 |
| Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками, вместимостью 50 см3 | - |
| Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар | - |
| Стаканы химические с носиком, вместимостью 100 см3 | ГОСТ 25336 |
| Установка для перегонки растворителей | - |
| Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,20 мкм | - |
| Хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм | - |
| Центрифуга лабораторная, роторная, скорость вращения до 4 000 об./мин | - |
| Шкаф сушильный (термостат), поддерживающий температуру 65 — 70 °C | - |
| Шприцы медицинские одноразовые вместимостью 5 см3 | ГОСТ ISO 7886-1 |
Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать нормы и правила <2> промышленной безопасности. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<2> Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116.
6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия проведения измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (15 — 30) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление подвижной фазы, приготовление растворов, смесей растворителей для экстракции проб, подготовка концентрирующих патронов для очистки экстрактов, градуировочных растворов, растворов внесения, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик, отбор проб.
8.2. Очистка растворителей. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия). Хранят в емкости из темного стекла.
8.3. Приготовление 0,1% раствора муравьиной кислоты в воде (компонент А подвижной фазы для ВЭЖХ).
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 деионизованной воды, вносят 1,0 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки водой, перемешивают.
Хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.4 Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.
Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А — 0,1% раствор муравьиной кислоты в воде, компонент Б — метанол) 1:1 и скорости подачи растворителя 0,4 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
8.5. Приготовление смесей растворителей для экстракции и элюирования вещества с патрона, а также для приготовления градуировочных растворов, подготовка ацетонитрила перед экстракцией.
8.5.1. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 деионизованной воды, вносят 2,0 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки водой, перемешивают, получают 0,2% раствор муравьиной кислоты.
8.5.2. В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 100 см3 деионизованной воды, вносят 20 г гидроксида натрия, доводят до метки водой, перемешивают, получают 1 М водный раствор гидроксида натрия.
8.5.3. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 100 см3 деионизованной воды, вносят 0,4 г гидроксида натрия, доводят до метки водой, перемешивают, получают 0,01 М водный раствор гидроксида натрия.
8.5.4. В мерную колбу вместимостью 250 см3 помещают 100 см3 метанола, вносят 2,5 см3 1 М водного раствора гидроксида натрия, доводят до метки метанолом, перемешивают, получают 0,01 М раствор гидроксида натрия в метаноле.
8.5.5. В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 200 см3 метанола, вносят по каплям 5 см3 37% соляной кислоты, доводят до метки метанолом, перемешивают, получают 1% раствор соляной кислоты.
Растворы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.5.6 Подготовка ацетонитрила для экстракции.
Ацетонитрил охлаждают в течение 10 — 15 минут в морозильной камере при температуре не выше -18 °C непосредственно перед проведением экстракции.
8.6 Подготовка концентрирующих патронов.
Патроны устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума.
Концентрирующие патроны промывают с помощью разрежения, создаваемого водоструйным насосом, со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 — 2 капли в секунду: последовательно 5 см3 метанола и 5 см3 раствора, приготовленного по п. 8.5.4. Патроны готовят непосредственно перед использованием.
8.7 Приготовление растворов внесения.
8.7.1. Исходный раствор ацибензолар-C-метила для внесения (концентрация 100 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005 г) ацибензолар-C-метила, добавляют 50 — 70 см3 изопропанола, перемешивают, доводят изопропанолом до метки, вновь перемешивают. Массу навески необходимо брать, учитывая чистоту стандартного образца ацибензолар-C-метила. Раствор хранят в холодильнике 2 — 6 °C в течение 6 месяцев.
8.7.2. Раствор № 1 ацибензолар-C-метила для внесения (концентрация 1 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1 см3 исходного раствора ацибензолар-C-метила (п. 8.7.1) с концентрацией 100 мкг/см3, разбавляют изопропанолом до метки, перемешивают. Раствор № 1 хранят в холодильнике (2 — 6 °C) в течение 6 месяцев.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок.
8.8 Приготовление градуировочных растворов.
8.8.1. Исходный раствор бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (CGA210007) для градуировки (концентрация 100 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005 г) бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты, добавляют 50 — 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Массу навески необходимо брать, учитывая чистоту стандартного образца бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты. Раствор хранят в холодильнике (2 — 6) °C в течение 6 месяцев.
Растворы № 1 — 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.
8.8.2. Раствор № 1 бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (CGA210007) для градуировки (концентрация 1 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1,0 см3 исходного раствора бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (п. 8.8.1) с концентрацией 100 мкг/см3, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 1 с концентрацией бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты 1 мкг/см3. Раствор № 1 хранят в холодильнике (2 — 6) °C в течение месяца.
8.8.3. Раствор № 2 бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (CGA210007) для градуировки (концентрация 0,1 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты 1 мкг/см3 (п. 8.8.2), доводят до метки смесью для разбавления градуировочных растворов (приготовленной по п. 8.5.1), тщательно перемешивают, получают раствор № 2 с концентрацией бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты 0,1 мкг/см3.
8.8.4. Рабочие растворы № 3 — 7 бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (CGA210007) для градуировки (концентрации 2 — 20 нг/см3).
В 2 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 2 и 1 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты 1 мкг/см3 (п. 8.8.2), доводят до метки смесью для разбавления градуировочных растворов (приготовленной по п. 8.5.1), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 3 и № 4 с концентрацией бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты 20 и 10 нг/см3 соответственно.
В 3 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 8, 5 и 2 см3 градуировочного раствора № 2 с концентрацией бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты 0,1 мкг/см3, доводят до метки смесью для разбавления градуировочных растворов (приготовленной по п. 8.5.1), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 5 — 7 с концентрацией бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты 8, 5 и 2 нг/см3 соответственно.
Растворы хранят в холодильнике (2 — 6) °C в течение двух недель.
8.9 Установление градуировочных характеристик.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (1) от концентрации бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (CGA210007) в растворе (нг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 10 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.10 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов. При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 2 до 20 нг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C)}{C} \cdot 100 \leq B,
где X — концентрация бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты в пробе при контрольном измерении, нг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, нг/см3;
B — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <3>.
<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 № 2051-79, ГОСТ 22391 «Подсолнечник. Технические условия».
9.2. Пробы семян и масла подсолнечника хранят при температуре (2 — 6) °C не более 2 недель. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °C. Перед анализом образцы семян измельчают.
X. Выполнение определения
10.1 Экстракция. Семена и масло подсолнечника.
Измельченный образец семян или пробу масла массой 5 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3, добавляют 25 см3 охлажденного ацетонитрила, подготовленного по п. 8.5.6, интенсивно встряхивают в течение 1 мин и помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 оборотов/мин.
Надосадочную жидкость фильтруют через бумажный фильтр средней плотности в цилиндр на 50 см3. При необходимости, верхний слой масла можно удалить пипеткой, а затем отфильтровать.
Далее проводят щелочной гидролиз. Объем экстракта в цилиндре доводят деионизованной водой до 45 см3 и вносят 5 см3 1 М водного раствора гидроксида натрия, подготовленного по п. 8.5.2. Переносят экстракт в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 250 см3 и помещают в сушильный шкаф при температуре 65 — 70 °C на 30 минут. После остывания раствора до комнатной температуры добавляют 100 см3 метанола, закрывают пробку и интенсивно перемешивают. Раствор фильтруют через бумажный фильтр средней плотности в мерный цилиндр на 250 см3 и доводят его объем до 200 см3 метанолом, перемешивают.
Отбирают аликвоту экстракта объемом 20 см3, добавляют 30 см3 0,01 М водного раствора гидроксида натрия, приготовленного по п. 8.5.3, перемешивают.
10.2 Очистка экстракта.
Полученный раствор пропускают через концентрирующий патрон, подготовленный по п. 8.6, со скоростью прохождения раствора 1 — 2 см3/мин, пропуская раствор до верхнего края сорбента. После нанесения пробы, патрон дополнительно промывают 10 см3 0,01 М водного раствора гидроксида натрия, приготовленного по п. 8.5.3 и 10 см3 метанола. Патрон освобождают от следов влаги с помощью разрежения, создаваемого водоструйным насосом (15 минут).
Бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновую кислоту (метаболит ацибензолар-C-метила) элюируют с патрона двумя порциями по 5 см3 1%-го раствора соляной кислоты, приготовленного по п. 8.5.5. Упаривают досуха и растворяют остаток в 1,1 см3 водного раствора муравьиной кислоты (подготовленного по п. 8.5.1), выдерживают 1 — 2 мин на ультразвуковой ванне, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,20 мкм и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.
10.3. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации, оснащенным соосной подачей горячего азота для эффективной десольвации ионов при следующих режимных параметрах:
- источник ионизации: электростатическое распыление;
- режим работы: регистрация дочерних положительных ионов после разрушения материнских ионов (регистрация «перехода») в режиме мультиреакционного мониторинга.
Параметры масс-спектрометрического детектора:
- материнский ион (масса/заряд): 181,0;
- дочерние ионы (масса/заряд): 65,1 (количественный расчет), 53,1 (подтверждающий ион);
- напряжение на фрагментаторе, В: 124;
- энергия разрушения (соударения), В: 25 (181,0 \rightarrow 65,1) , 37 (181,0 \rightarrow 53,1) ;
- давление на распылителе: 35 psi;
- скорость осушающего газа 1 (азот): 10 дм3/мин;
- температура газа 1: 250 °C;
- скорость газа 2 (азот): 11 дм3/мин;
- температура газа 2: 340 °C;
- температура квадруполей (1 и 3): 100 °C.
- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;
- температура колонки: 40 °C;
- скорость потока элюента: 0,4 см3/мин;
- объем вводимой пробы: 10 мм3;
- подвижная фаза: компонент А — 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде; компонент Б — метанол. Режим элюирования — изократический (А:Б в соотношении 75:25).
Линейный диапазон детектирования 20 — 200 пг.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 20 нг/см3, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Содержание ацибензолар-C-метила в пробах семян и масла подсолнечника (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
X = 1,167 \cdot \frac{A \cdot V \cdot K}{1000 \cdot m} ,
где A — концентрация бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, нг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
K — коэффициент, учитывающий разбавление экстракта, взятого для анализа, K = 20;
1,167 — коэффициент пересчета содержания бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты в содержание ацибензолар-C-метила (конверсивный фактор).
11.2 Проверка приемлемости результатов параллельных определений.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}|}{(X_{1} - X_{2})} \leq r,
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XII. Оформление результатов
12.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание ацибензолар-C-метила в семенах и масле подсолнечника — менее 0,01 мг/кг» <4>.
<4> 0,01 мг/кг — нижний предел количественного определения ацибензолар-C-метила.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6). Периодичность и формы контроля определяются Руководством по качеству.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. ГОСТ Р ИСО 5725 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
2. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
3. ГОСТ OIML R 111-1 «Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
4. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
5. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
6. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
7. ГОСТ 9805 «Спирт изопропиловый. Технические условия».
8. ГОСТ 9293 (ИСО 2435) «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
9. ГОСТ 5848 «Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия».
10. ГОСТ 6995 «Реактивы. Метанол-яд. Технические условия».
11. ГОСТ 4221 «Калий углекислый. Технические условия».
12. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
13. ГОСТ 4328 «Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия».
14. ГОСТ 3118 «Реактивы. Кислота соляная. Технические условия».
15. ГОСТ ISO 7886-1 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
16. ГОСТ 12026 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».
17. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
18. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
19. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
20. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
21. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
22. ГОСТ 22391 «Подсолнечник. Технические условия».
23. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов № 2051-79 от 21.08.79.