МУК 4.1.3702-21. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глифосата и его метаболита аминометилфосфоновой кислоты в воде и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 05.10.2021)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 5 октября 2021 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ГЛИФОСАТА И ЕГО МЕТАБОЛИТА АМИНОМЕТИЛФОСФОНОВОЙ КИСЛОТЫ В ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3702-21
1. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, М.С. Гречина).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 5 октября 2021 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием для определения в воде и почве массовой концентрации глифосата и его метаболита аминометилфосфоновой кислоты в диапазонах 0,001 — 0,010 мг/дм3 — вода, 0,01 — 0,10 мг/кг — почва.
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические и токсикологические свойства
2.1. Глифосат. N-(фосфонометил)-глицин <1>. Брутто-формула: C3H8NO5P.
<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
Молекулярная масса 169,1. Белые кристаллы без запаха. Температура плавления 189,5 °C. Давление паров 1,31·10-2 мПа (при 25 °C). Растворимость в воде при 25 °C: 12 г/дм3. Плотность 1,41 (23,5 °C). Коэффициент распределения октанол/вода: KowlogP < -3,2 (pH 5 — 9). Растворимость в органических растворителях в г/дм3 (20 — 25 °C): ацетон — 0,078; этилацетат — 0,012; метанол — 0,231; 1,2-дихлорметан — 0,233; изопропанол — 0,02; толуол — 0,036. Стабильность: глифосат и все его соли нелетучи, не подвержены фотохимическому разложению в буферной воде и стабильны на воздухе.
2.2. Краткая токсикологическая характеристика: острая пероральная токсичность (LD50) для крыс > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс > 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс > 4,98 мг/дм3.
2.3. Область применения: применяется как гербицид неизбирательного системного действия для уничтожения однолетних и многолетних сорняков и нежелательной древесно-кустарниковой растительности. Используется в условиях сельского и лесного хозяйств, на землях несельскохозяйственного назначения при наземных обработках. Естественным метаболитом глифосата является аминометилфосфоновая кислота.
2.4. Аминометилфосфоновая кислота (AMPA). Aminomethylphosphonic acid. Брутто-формула: CH6NO3P. Молекулярная масса 111,04. Белый тонкокристаллический гигроскопический порошок без запаха. Температура плавления 300 °C. Удельная плотность 1,64 г/мл. Log Kow < -1,63 (pH 7, 20 °C). Растворимость в воде при 25 °C: 58 г/дм3.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности p = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
3.2. Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.
Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата
IV. Метод измерений
4.1. Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором.
4.2. Образцы воды очищают на патронах для твердофазной экстракции, а затем дериватизируют с использованием 0,01 М раствора 9-флуоренилметилхлороформиата (FMOC) в среде боратного буфера с последующей очисткой толуолом.
Экстракцию вещества из анализируемых проб почвы выполняют 1 Н раствором гидроксида натрия, очистку экстрактов проводят на патронах для твердофазной экстракции, а затем дериватизируют с использованием 0,01 М раствора 9-флуоренилметилхлороформиата (FMOC) в среде боратного буфера с последующей очисткой толуолом.
4.3. Нижний предел измерения глифосата и аминометилфосфоновой кислоты в анализируемом объеме пробы — 10 пг.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Прибор для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные аналитические, предел допустимой погрешности +/- 0,0005 г | ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные, предел допустимой погрешности +/- 0,01 г | ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 10, 100 и 1000 см3 | ГОСТ 1770 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1 |
| Микрошприц на 250 мм3 | - |
| Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 | ГОСТ 29227 |
| Пробирки градуированные с притертой пробкой 2-го класса точности объемом 10,0 см3 | ГОСТ 1770 |
| Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10, 100 и 500 см3 | ГОСТ 1770 |
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Аналитический стандартный образец глифосата | CAS № 1071-83-6 с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Аналитический стандартный образец аминометилфосфоновой кислоты | CAS № 1066-51-9 с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Азот особой чистоты, сорт 1, в баллонах | ГОСТ 9293 (ИСО 2435) |
| Аммоний уксуснокислый | Химически чистый по ГОСТ 3117 |
| Ацетон | Особо чистый по ГОСТ 2603 |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Чистота не менее 99,9% |
| Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная) | ГОСТ Р 52501 |
| Метиловый спирт (метанол) | Химически чистый по ГОСТ 6995 |
| Натрия гидроокись | Химически чистая по ГОСТ 4328 |
| Соляная кислота | 37%-я, чистая для анализа по ГОСТ 3118 |
| Тетраборат натрия | Чистота не менее 99% |
| Толуол | Чистый для анализа по ГОСТ 5789 |
| 9-флуоренилметилхлороформиат | Чистота не менее 98% |
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Аппарат для встряхивания проб (орбитальный шейкер) | - |
| Виалы вместимостью 2 см3 с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой | - |
| Воронки химические стеклянные конусные | ГОСТ 25336 |
| Вставки пластиковые конусные для виал на 250 мм3 | - |
| Груша резиновая | - |
| Индикаторная бумага универсальная | - |
| Морозильная камера или морозильный ларь, поддерживающий температуру не выше -18 °C | - |
| Патроны для твердофазной экстракции на основе сополимера N-винилпирролидона и дивинилбензола | Масса сорбента 60 мг |
| Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками вместимостью 15 см3 | - |
| Стаканы полипропиленовые, вместимостью 250 см3 | - |
| Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,45 мкм | - |
| Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм | - |
| Центрифуга лабораторная роторная, скорость вращения до 4500 об./мин | - |
| Шкаф сушильный (термостат), поддерживающий температуру 50 °C | - |
| Шприцы медицинские одноразовые вместимостью 5 см3 | ГОСТ ISO 7886-1 |
Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать нормы и правила <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<2> Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116.
6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление компонентов подвижной фазы для ВЭЖХ, растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик, подготовка патронов для твердофазной экстракции.
8.2. Приготовление 2,2 мМ раствора ацетата аммония в воде (компонент А подвижной фазы для ВЭЖХ).
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 0,17 г ацетата аммония, растворяют в деионизированной воде, затем доводят деионизированной водой до метки, тщательно перемешивают. Приготовленный раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.3 Приготовление 0,025 М раствора тетрабората натрия.
В мерную колбу на 100 см3 вносят 0,953 г тетрабората натрия, растворяют в 50 см3 воды, доводят до метки деионизированной водой, тщательно перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.4. Приготовление 0,01 М раствора 9-флуоренилметилхлорформиата (FMOC).
В мерную колбу на 100 см3 вносят 0,259 г 9-флуоренилметилхлорформиата, растворяют в 50 см3 ацетона, доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают.
8.5 Приготовление 1 Н раствора гидроксида натрия.
В мерную колбу на 1000 см3 помещают 500 см3 деионизированной воды, порциями при перемешивании вносят 40 г гидроксида натрия, перемешивают до полного растворения вещества. Доводят до метки деионизированной водой. Раствор хранят в полиэтиленовой бутыли, срок хранения 2 месяца.
8.6 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.
8.6.1. Исходный раствор глифосата для градуировки (концентрация 100 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г глифосата, добавляют 50 — 70 см3 деионизированной воды, перемешивают. Добавляют 2 — 3 капли концентрированной соляной кислоты для консервации и доводят водой до метки. Раствор хранят в холодильнике при температуре (2 — 6 °C) не более месяца.
8.6.2. Исходный раствор аминометилфосфоновой кислоты (AMPA) для градуировки (концентрация 100 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г AMPA, добавляют 50 — 70 см3 деионизированной воды, перемешивают. Добавляют 2 — 3 капли концентрированной соляной кислоты для консервации и доводят водой до метки. Раствор хранят в холодильнике при температуре (2 — 6 °C) не более месяца.
Растворы № 1 — 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
8.6.3. Раствор № 1 глифосата и AMPA для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают по 10 см3 исходного раствора глифосата (п. 8.6.1) и AMPA (п. 8.6.2) с концентрациями 100 мкг/см3, добавляют 2 — 3 капли концентрированной соляной кислоты для консервации и доводят до метки деионизированной водой, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 1 с концентрацией глифосата и AMPA 10 мкг/см3. Раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре (2 — 6 °C) не более одного месяца.
8.6.4. Раствор № 2 глифосата и AMPA для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией глифосата и AMPA 10 мкг/см3 (п. 8.6.3), доводят до метки деионизированной водой, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 2 с концентрацией глифосата и AMPA 1 мкг/см3. Раствор № 2 хранят в холодильнике при температуре (2 — 6 °C) не более двух недель.
8.6.5. Рабочие растворы № 3 — 6 глифосата и AMPA для градуировки (концентрация 0,01 — 0,10 мкг/см3).
В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 1, 2, 5 и 10 см3 градуировочного раствора № 2 с концентрацией глифосата и AMPA 1,0 мкг/см3 (п. 8.6.4), доводят до метки деионизированной водой, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы для дериватизации № 3 — 6 с концентрациями глифосата и AMPA 0,01, 0,02, 0,05 и 0,1 мкг/см3 соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике при температуре (2 — 6 °C) не более недели.
8.6.6. Рабочие растворы № 3а — 6а производных глифосата и AMPA для градуировки (концентрация 0,001 — 0,010 мкг/см3).
Операцию дериватизации проводят в стеклянных пробирках на 10 см3 с притертой пробкой или полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см3.
В 4 пробирки помещают по 0,2 см3 каждого из четырех рабочих растворов глифосата и AMPA № 3 — 6 (п. 8.6.5), прибавляют по 0,8 см3 деионизованной воды, а затем по 1 см3 0,025 М раствора тетрабората натрия, приготовленного по п. 8.3, и по 1 см3 0,01 М раствора 9-флуоренилметилхлорформиата (FMOC), приготовленного по п. 8.4, тщательно перемешивают и выдерживают 15 минут при температуре 50 °C в сушильном шкафу. После охлаждения в течение 10 минут при комнатной температуре проводят очистку толуолом. В каждую пробирку вносят по 4 см3 толуола, закрывают крышкой и тщательно перемешивают, после расслоения фаз верхний слой толуола удаляют пипеткой. Операцию очистки с помощью толуола повторяют еще раз. Для анализа берут нижний слой. Получают рабочие растворы производных глифосата и AMPA № 3а — 6а с концентрациями 0,001, 0,002, 0,005 и 0,01 мкг/см3 соответственно.
Дериватизированные градуировочные растворы готовят в день их использования.
8.7 Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.
Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А — 2,2 мМ раствора ацетата аммония в воде, компонент Б — ацетонитрил) 1:1 и скорости подачи растворителя 0,4 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
8.8 Подготовка концентрирующих патронов для очистки экстрактов.
Патроны устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума.
Концентрирующие патроны промывают с помощью разрежения, создаваемого водоструйным насосом, со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 — 2 капли в секунду: последовательно 2 см3 метанола, затем 2 см3 деионизированной воды. Патроны готовят непосредственно перед использованием.
8.9 Установление градуировочных характеристик.
Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика (I) от концентрации глифосата и AMPA в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 10 мм3 каждого градуировочного раствора № 3а — 6а и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
8.10 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание глифосата и AMPA в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,001 до 0,01 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq B,
где X — концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <3>.
<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среди для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 № 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности, Москва — 2018. 64 с.; ГОСТ Р 31861; ГОСТ 17.4.3.01; ГОСТ 17.4.4.02; ГОСТ 12071.
9.2. Образцы воды и почвы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °C.
9.3 Перед началом анализа образцы размораживают.
X. Выполнение определения
10.1 Вода.
10.1.1 Очистка воды.
Пробу воды объемом 10 см3 пропускают через подготовленный патрон для твердофазной экстракции по п. 8.8 со скоростью прохождения через него 1 — 2 капли в сек. Отбрасывают первые 8 см3 и собирают 2 см3 в пробирку.
10.1.2 Дериватизация.
Операцию проводят в стеклянных пробирках на 10 см3 с притертой пробкой или полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см3.
В пробирку помещают 1 см3 очищенной по п. 10.1.1 воды, добавляют 1 см3 0,025 М раствора тетрабората натрия, приготовленного по п. 8.3, и 1 см 0,01 М раствора 9-флуоренилметилхлорформиата, приготовленного по п. 8.4, хорошо перемешивают. Затем выдерживают в сушильном шкафу при температуре 50 °C в течение 15 минут. После извлечения из шкафа охлаждают 10 минут при комнатной температуре.
Далее добавляют 4 см3 толуола и перемешивают 30 секунд, после разделения фаз верхний толуольный слой удаляют. Снова добавляют 4 см3 толуола и перемешивают 30 секунд. После разделения фаз аккуратно пипеткой берут аликвоту из нижнего слоя в виалу с пластиковой вставкой для анализа методом ВЭЖХ-МС/МС в условиях хроматографирования по п. 10.3.
10.2 Почва.
Образец почвы массой (10 +/- 0,1) г помещают в полипропиленовый стакан на 250 см3 и добавляют 100 см3 1 Н раствора гидроксида натрия, приготовленного по п. 8.5, перемешивают вручную в течение 30 секунд и встряхивают 30 минут на шейкере. После экстракции аликвоту экстракта объемом 10 см3 очищают по аналогии с водой с помощью патронов для твердофазной экстракции по п. 10.1.1, предварительно доведя pH экстракта до 9 с помощью соляной кислоты (контроль по индикаторной бумаге). Затем дериватизируют согласно п. 10.1.2. До помещения в виалу экстракт фильтруют через шприцевой фильтр с размером пор 0,45 мкм, доводят pH до 1,5 с помощью соляной кислоты (контроль по индикаторной бумаге) и выдерживают 1 час при комнатной температуре. Затем помещают в виалу со специальной пластиковой вставкой и анализируют методом ВЭЖХ-МС/МС в условиях хроматографирования по п. 10.3.
10.3 Условия проведения анализа.
Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации, оснащенным соосной подачей горячего азота для эффективной десольвации ионов при следующих режимных параметрах:
- источник ионизации: электростатическое распыление (электроспрей);
- режим работы: регистрация дочерних отрицательных ионов после разрушения материнских ионов (регистрация «перехода»).
Параметры масс-спектрометрического детектора:
- материнский ион (масса/заряд) 390,2;
- дочерний ион (масса/заряд) 167,8;
- напряжение на фрагментаторе 100 В;
- энергия разрушения (соударения) 6 В.
- материнский ион (масса/заряд) 332;
- дочерний ион (масса/заряд) 109,8;
- напряжение на фрагментаторе 100 В;
- энергия разрушения (соударения) 6 В;
- скорость сканирования 200 мс;
- давление на распылителе 45 psi;
- скорость осушающего газа 1 (азот) 8 дм3/мин;
- температура газа 1: 325 °C;
- скорость газа 2 (азот) 11 дм3/мин;
- температура газа 2: 400 °C;
- температура квадруполей (1 и 3) 100 °C;
- напряжение на капилляре 4500 В.
- хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;
- температура колонки 50 °C;
- скорость потока элюента 0,4 см3/мин;
- объем вводимой пробы 10 мм3;
- подвижная фаза: компонент А — 2,2 мМ раствор ацетата аммония в воде; компонент Б — ацетонитрил.
- начало с 90% элюента А + 10% элюента Б;
- переход на 40% элюента А + 60% элюента Б — с 1 до 4 мин;
- переход 90% элюента А + 10% элюента Б — с 4 до 7 мин.
Линейный диапазон детектирования 10 — 100 пг.
Ориентировочное время выхода: глифосат (производное) — 3,05 мин, AMPA (производное) — 3,74 мин.
Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,01 мкг/см3, разбавляют деионизованной водой (не более чем в 10 раз), что расширяет диапазон определяемых концентраций до 0,1 мг/дм3 (вода) и 1 мг/кг (почва).
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Содержание глифосата и AMPA в пробах почвы (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
X = \frac{C \cdot V_{\text{кон}} \cdot 100}{m \cdot f} ,
где C — концентрация глифосата или AMPA, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков производных глифосата или AMPA, мкг/см3;
Vкон — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
f — полнота извлечения вещества, приведенная в табл. 3.2 (в %).
Для выражения содержания метаболита AMPA в эквиваленте действующего вещества полученное содержание кислоты умножают на коэффициент К, равный соотношению молекулярных масс действующего вещества и метаболита (169,1/111,04 = 1,52).
XII. Оформление результатов
12.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг (мг/дм3) при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг (мг/дм3);
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг (мг/дм3);
\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание глифосата и AMPA в пробах воды — менее 0,001 мг/дм3, в пробах почвы — менее 0,01 мг/кг» <4>.
<4> 0,001 мг/дм3 и 0,01 мг/кг — пределы обнаружения глифосата и AMPA в пробах воды и почвы соответственно.
XIII. Контроль качества результатов измерений
13.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 — 6.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:
C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime},
где \pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг (мг/дм3), при этом:
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,
где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг (мг/дм3);
\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:
\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}},
где \overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг (мг/дм3).
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} .
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости R:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R,
где X1, X2 - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг (мг/дм3);
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. ГОСТ Р ИСО 5725 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
2. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
3. ГОСТ OIML R 111-1 «Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
4. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
5. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
6. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
7. ГОСТ 9293 (ИСО 2435) «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
8. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия».
9. ГОСТ 4328 «Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия».
10. ГОСТ 6995 «Реактивы. Метанол-яд. Технические условия».
11. ГОСТ 3117 «Реактивы. Аммоний уксуснокислый. Технические условия».
12. ГОСТ 3118 «Реактивы. Кислота соляная. Технические условия».
13. ГОСТ 5789 «Реактивы. Толуол. Технические условия».
14. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
15. ГОСТ ISO 7886-1 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
16. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
17. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
18. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
19. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
20. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
21. ГОСТ Р 31861 «Вода. Общие требования к отбору проб».
22. ГОСТ 17.4.3.01 «Охрана природы. Почва. Общие требования к отбору проб».
23. ГОСТ 17.4.4.02 «Почвы. Методы отбора и подготовка проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа».
24. ГОСТ 12071 «Грунты. Отбор, упаковка, транспортирование и хранение образцов».
25. «Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).
26. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности, Москва, 2018. 64 с.