МУК 4.1.3632-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств бензовиндифлупира в сое (семена, масло) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 17.08.2020)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 17 августа 2020 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БЕНЗОВИНДИФЛУПИРА В СОЕ (СЕМЕНА, МАСЛО) МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3632-20
1. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, Л.Г. Бондарева).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 17 августа 2020 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения в сое (семена, масло) концентрации бензовиндифлупира в диапазоне 0,01 — 0,20 мг/кг (семена сои) и 0,02 — 0,40 мг/кг (масло сои).
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические и токсикологические свойства
2.1. Бензовиндифлупир. N-[(1RS, 4SR)-9-(дихлорметилен)-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-металнафтален-5-ил]-3-(дифторметил)-1-метилпиразол-4-карбоксамид <1>. Брутто формула: C18H15Cl2F2N3O. Молекулярная масса: 398,23. Белый порошок без запаха. Температура плавления 148,4 +/- 0,5 °C. Плотность 1,466. Давление паров (25 °C) — менее 3,2·10-9 Па (3·10-9 мм рт. ст.). Растворимость в воде (25 °C, pH 6,7 — 7,5) 0,98 мг/дм3. Растворимость в органических растворителях (при 25 °C, г/дм3): ацетон — 350, дихлорметан — 450, метанол — 76, гексан — 270, октанол — 19, этилацетат — 190, толуол — 48. Коэффициент распределения в системе н-октанол — вода Kow logP = 4,3 +/- 0,3 (25 °C, pH 6,59). Гидролитически стабилен в стерильном буфере в темноте при pH 4,5 и 9 до 5 дней (50 °C).
<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2. Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (ЛД50) для мышей и крыс — 55,0 мг/кг. Малотоксичен для пчел. СК50 для рыб 0,0035 мг/л при экспозиции 96 ч.
2.3 Область применения. Фунгицид с профилактической активностью.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций мг/м3 | Показатель точности <2> (граница относительной погрешности), \pm \delta , %, P = 0,95 | Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , % | Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , % | Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, % | Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Соя (семена) | 0,01 — 0,20 | 50 | 5,4 | 7,6 | 15 | 21 |
| Соя (масло) | 0,02 — 0,40 | 50 | 3,9 | 5,5 | 11 | 15 |
<2> Соответствует расширенной неопределенности Uотн. (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2.
3.2. Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.
Полнота извлечения бензовиндифлупира, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95
IV. Метод измерений
4.1. Методика основана на определении бензовиндифлупира с использованием обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым (диодно-матричным) детектором после извлечения вещества из анализируемых образцов семян сои и масла сои (после растворения масла в гексане) смесью ацетонитрила с водой (80 : 20, по объему), очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
4.2. Идентификация бензовиндифлупира проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки.
4.2. Нижний предел измерения бензовиндифлупира в анализируемом объеме пробы — 1 нг.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором и термостатом колонки | Внесено в Госреестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные аналитические, предел допустимой погрешности 0,0005 г | ГОСТ Р 53228 |
| Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в Госреестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные общего назначения с пределом допустимой погрешности +/- 0,01 г | ГОСТ Р 53228 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1 |
| Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения от -35 °C до +55 °C | ГОСТ 28498 |
| Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 100, 500 и 1000 см3 | ГОСТ 1770 |
| Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 100, 500 и 1000 см3 | ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см3 | ГОСТ 29227 |
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Аналитический стандартный образец бензовиндифлупира | Содержание основного компонента не менее 95% |
| Ацетонитрил для хроматографии | Квалификация не ниже «химически чистый» |
| Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная) | ГОСТ Р 52501 |
| Калий углекислый (карбонат калия, поташ) химически чистый, прокаленный | ГОСТ 4221 |
| Натрий углекислый (карбонат натрия) химически чистый | ГОСТ 83 |
| Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) химически чистый | Квалификация не ниже «химически чистый» |
| н-Гексан (гексан) | Квалификация не ниже «для хроматографии» |
| Силикагель для колоночной хроматографии | - |
| Натрий сернокислый (сульфат) безводный химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Натрий хлористый (хлорид натрия) химически чистый (насыщенный водный раствор) | ГОСТ 4233 |
| Кислота соляная (хлороводородная) химически чистая | ГОСТ 3118 |
| Кислота серная химически чистая | ГОСТ 4204 |
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией и не требующих дополнительной очистки растворителей.
Вспомогательные устройства, материалы
Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, освоивший данную методику и подтвердившего экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1 Очистка растворителей.
8.1.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия).
8.1.2 Этилацетат.
8.1.2.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают. Раствор хранят в стеклянной посуде в течение 3 месяцев.
8.1.2.2. Очистка растворителя. Этилацетат промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Растворитель хранят в стеклянной посуде в течение 1 месяца.
8.1.3. Н-гексан. Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
8.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 650 см3 ацетонитрила и 350 см3 бидистиллированной или деионизованной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют. Подвижную фазу хранят не более 30 дней.
8.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ. Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 8.2) при скорости подачи растворителя 1,0 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
8.4. Приготовление смеси растворителей для экстракции и очистки экстракта.
8.4.1. Смесь ацетонитрил-вода (8 : 2, по объему). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 800 см3 ацетонитрила, 200 см3 деионизованной воды, перемешивают.
8.4.2. Смесь гексан-этилацетат (8 : 2, по объему). В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 400 см3 гексана, 100 см3 этилацетата, перемешивают.
8.4.3. Смесь гексан-этилацетат (7 : 3, по объему). В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 350 см3 гексана, 150 см3 этилацетата, перемешивают.
8.4.4. Смесь гексан-этилацетат (1 : 1, по объему). В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 250 см3 гексана, 250 см3 этилацетата, перемешивают.
Растворы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.5. Приготовление раствора соляной кислоты с концентрацией 1 моль/дм3. В колбу на 500 см3 помещают 100 — 150 см3 деионизованной воды. После чего мерным цилиндром приливают 45,5 см3 соляной кислоты (концентрированной). После охлаждения колбы до комнатной температуры доводят до метки деионизованной водой.
8.6. Подготовка колонки с силикагелем. Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию (5 г силикагеля в 30 см3 гексана). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают смесью гексан-этилацетат в объемном соотношении 7 : 3, затем 8 : 2 порциями по 30 см3. Скорость прохождения растворителя 1 — 2 капли в секунду. Колонка готова к работе.
8.7. Приготовление исходного раствора, градуировочных растворов и растворов внесения.
8.7.1. Исходный раствор бензовиндифлупира для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,0100 г бензовиндифлупира, добавляют 50 — 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике (при температуре от +4 до +6 °C) в течение 9 месяцев.
8.7.2. Раствор № 1 бензовиндифлупира для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 исходного раствора бензовиндифлупира (п. 8.7.1) с концентрацией 100 мкг/см3, разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор № 1 хранится в холодильнике (при температуре от +4 до +6 °C) в течение 6 месяцев.
8.7.3. Рабочие растворы № 2 — 6 бензовиндифлупира для градуировки (концентрация 0,05 — 1,0 мкг/см3). В 5 мерных колб вместимостью 100 см3 помещают 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; и 10,0 см3 рабочего раствора № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см3 (п.п. 8.7.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2 — 6 с концентрациями бензовиндифлупира 0,05, 0,1, 0,25, 0,5, 1,0 мкг/см3.
Растворы хранят в холодильнике при температуре от +4 до +6 °C в течение трех месяцев.
8.7.4. Приготовление растворов внесения (концентрации 1,0, 0,5, 0,25 и 0,1 мкг/см3). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 1,0, 2,5, 5,0 и 10,0 см3 рабочего раствора № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см3 (п. 8.7.2) и доводят до метки н-гексаном.
Растворы с концентрацией 1,0, 0,5, 0,25 и 0,1 мкг/см3 бензовиндифлупира в н-гексане используют для внесения при оценке полноты извлечения веществ методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.
8.8. Установление градуировочной характеристики. Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика от концентрации бензовиндифлупира в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание бензовиндифлупира в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq B , где
X — концентрация бензовиндифлупира в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора бензовиндифлупира, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10% при P = 0,95).
8.9. Проверка хроматографического поведения бензовиндифлупира на колонке с силикагелем. В круглодонную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 1 бензовиндифлупира с концентрацией 10 мкг/см3, упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Остаток растворяют 1 см3 этилацетата, вносят 4 см3 гексана, помещают на ультразвуковую баню на 30 с. Раствор наносят на колонку, приготовленную по п. 8.6. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (8 : 2 по объему) порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку 1 — 2 капли в секунду. Промывают колонку 25 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2, затем 50 см3 смеси гексан-этилацетат 7 : 3, элюат отбрасывают.
Затем колонку промывают 40 см3 смеси гексан-этилацетат (1 : 1 по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Фракционно (по 10 см3) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ, анализируют содержание бензовиндифлупира по п. 10.2. Фракции, содержащие бензовиндифлупир, объединяют и вновь анализируют.
IX. Отбор и хранение проб
9.1 Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами. <3>
<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 № 2051-79.
9.2. Пробы семян сои подсушивают и хранят при комнатной температуре не более 2 недель. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °C.
9.3. Образцы масла готовятся из семян способом горячей экстракции гексаном. Масло анализируется в день его изготовления. Из каждой исходной пробы готовится усредненный образец.
X. Выполнение определения
10.1 Подготовка образцов к измерению.
10.1.1. Семена сои. Образец измельченных семян сои (10 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 — 300 см3, затем добавляют 100 см3 смеси ацетонитрил-вода (подготовленной по п. 8.4.1), интенсивно встряхивают в течение 1 мин, затем помещают на ультразвуковую ванну на 15 минут.
Пробам дают отстояться. Затем смесь фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной бумажный фильтр низкой плотности. Растительные остатки повторно экстрагируют 50 см3 смеси ацетонитрил-вода (подготовленной по п. 8.4.1) на ультразвуковой ванне в течение 15 минут, раствор фильтруют на воронке Бюхнера.
Объединенный экстракт упаривают на роторном испарителе до водного остатка. После чего переносят водный остаток в мерную колбу на 50 см3 и доводят до метки водой. Перемешивают.
Полученный раствор помещают в делительную воронку вместимостью 500 см3, добавляют 2 см3 1М раствора соляной кислоты и 5 см3 насыщенного раствора хлорида натрия. Перемешивают. В эту же делительную воронку вносят 50 см3 н-гексана, интенсивно встряхивают в течение двух минут. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия толщиной 1,5 см, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке в колбу для отгонки. Процедуру экстракции водной фазы повторяют с использованием 30 см3 гексана. Объединенный органический экстракт в круглодонной колбе упаривают при температуре не выше 35 °C на роторном вакуумном испарителе досуха. Остаток, полученный в круглодонной колбе, растворяют в 1 см3 этилацетата, вносят 4 см3 гексана, помещают в ультразвуковую ванну на 30 с. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.6. Колбу промывают дважды смесью гексан-этилацетат (8 : 2, по объему) порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку 1 — 2 капли в секунду. Промывают колонку смесью гексан-этилацетат последовательно в объемных соотношениях 8 : 2 — порция 25 см3, затем 7 : 3 — порция 50 см3. Элюат отбрасывают. Бензовиндифлупир элюируют с колонки 30 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном отношении 1 : 1 со скоростью 1 — 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы и анализируют содержание бензовиндифлупира в условиях хроматографирования по п. 10.2.
10.1.2. Масло сои. Навеску масла массой 5 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 — 300 см3, затем добавляют 100 см3 гексана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин, затем помещают на ультразвуковую ванну на 15 минут. Масло растворяется в гексане полностью.
Смесь переносят в делительную воронку объемом 250 см3, добавляют 50 см3 ацетонитрила и интенсивно встряхивают в течение 1 минуты. Отделяют ацетонитрил от смеси. После чего проводят повторную экстракцию ацетонитрилом (30 см3).
Объединенный органический экстракт в круглодонной колбе упаривают при температуре не выше 35 °C на роторном вакуумном испарителе досуха.
Остаток, полученный в круглодонной колбе, растворяют в 1 см3 этилацетата, вносят 4 см3 гексана, помещают в ультразвуковую ванну на 30 с. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.6. Колбу промывают дважды смесью гексан-этилацетат (8 : 2, по объему) порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку 1 — 2 капли в секунду. Промывают колонку смесью гексан-этилацетат последовательно в объемных соотношениях 8 : 2 — порция 25 см3, затем 7 : 3 — порция 50 см3. Элюат отбрасывают. Бензовиндифлупир элюируют с колонки 30 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном отношении 1 : 1 со скоростью 1 — 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы и анализируют содержание бензовиндифлупира в условиях хроматографирования по п. 10.2.
10.2 Условия хроматографирования. Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
- жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором и термостатом колонки;
- хроматографическая колонка стальная (длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм), заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами (С-18 или С-8) для удерживания гидрофильных соединений, зернением 5 мкм;
- рабочая длина волны 254 нм;
- температура колонки 25 °C;
- подвижная фаза: ацетонитрил-бидистиллированная вода (65 : 35, по объему);
- скорость потока элюента 1,0 см3/мин;
- объем вводимой пробы 20 мм3;
- линейный диапазон детектирования 1 — 20 нг.
XI. Обработка результатов анализа
11.1 Содержание бензовиндифлупира в пробах семян и масла сои (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
X = \frac{A \cdot V \cdot 100}{mf} , где
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г;
A — содержание бензовиндифлупира в растворе, найденного по градуировочному графику, мкг/см3.
f — полнота извлечения вещества (табл. 3.2), выраженная в относительных единицах (величину полноты извлечения, выраженную в %, разделить на 100).
XII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , где (1)
X1, X2 — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. Оформление результатов
13.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95; где
\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где
\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «Содержание бензовиндифлупира в пробе семян сои — менее 0,01 мг/кг и пробе масла сои — менее 0,02 мг/кг» <4>.
<4> 0,01 мг/кг — предел обнаружения бензовиндифлупира в семенах сои; 0,02 мг/кг — предел обнаружения бензовиндифлупира в пробе масла сои.
XIV. Контроль качества результатов измерений
14.1. Организация контроля качества результатов определения осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725.
14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:
C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime} , где (3)
\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где (4)
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , где
\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:
\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}} , где (5)
\overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг;
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} (6)
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (7) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (7) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R)
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R , где (8)
X1, X2 — результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Библиографические ссылки
1. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
2. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
3. ГОСТ 6359 «Барографы метеорологические анероидные. Технические условия».
4. ГОСТ OIML R 111-1 «Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
5. ГОСТ 28498 «Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний».
6. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
7. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
8. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
9. ГОСТ 4221 «Реактивы. Калий углекислый. Технические условия».
10. ГОСТ 83 «Натрий углекислый (карбонат натрия). Технические условия».
11. ГОСТ 22300 «Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
12. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
13. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
14. ГОСТ 3118 «Реактивы. Кислота соляная. Технические условия».
15. ГОСТ 4204 «Реактивы. Кислота серная. Технические условия».
16. ГОСТ 12026 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».
17. ГОСТ 23932 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия».
18. ГОСТ 9147 «Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия».
19. ГОСТ 23932 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия».
20. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
21. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
22. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
23. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
24. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
25. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
26. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 № 2051-79.