---
title: "\"МУК 4.1.3605-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение витамина B9 (фолиевой кислоты) в обогащенных пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3605-20"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3605-20"
---

## "МУК 4.1.3605-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение витамина B9 (фолиевой кислоты) в обогащенных пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3605-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение витамина B9 (фолиевой кислоты) в обогащенных пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 29.07.2020)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
29 июля 2020 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА B9 (ФОЛИЕВОЙ КИСЛОТЫ)**
**В ОБОГАЩЕННЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3605-20**

<a id="p100005"></a>Методические указания разработаны ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (В.Ю. Ананьев, А.А. Гарбузова, М.В. Зароченцев, О.В. Андросова, А.А. Константинов, И.П. Семенова, А.В. Холстов, М.М. Дударев).


### <a id="p100006"></a>I. Общие положения и область применения


<a id="p100007"></a>1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения витамина B9 (фолиевой кислоты) в обогащенной продукции: плодоовощной, хлебобулочной, молочной, мясной - в диапазоне 15 - 300 мкг/100 г продукта.
<a id="p100008"></a>1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы организациями, аккредитованными в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья, пищевых продуктов.

#### <a id="p100009"></a>1.3 Общепринятое название: фолиевая кислота.

<a id="p100010"></a>Синонимы: витамин B9, птероилглютаминовая кислота, фолат.

<a id="p100011"></a> ![I. Общие положения и область применения](https://i.bukva.ai/GDch0nlV/img_0.png) 

<a id="p100012"></a>Рис. 1. Структурная формула фолиевой кислоты

<a id="p100013"></a>Эмпирическая формула: C<sub>19</sub>H<sub>19</sub>N<sub>7</sub>O<sub>6</sub>; молекулярная масса = 441,4; CAS N 59-30-3.
<a id="p100014"></a>Физико-химические свойства: представляет собой мелкокристаллический порошок желтого цвета без запаха и вкуса, практически нерастворим в воде, 95%-м этиловом спирте и органических растворителях. Хорошо растворим в разбавленных растворах щелочей и кислот. На свету разлагается.

#### <a id="p100015"></a>1.4 МУК носят рекомендательный характер.



### <a id="p100016"></a>II. Метод измерений


<a id="p100017"></a>2.1. Методика основана на определении витамина B9 (фолиевой кислоты) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) на обращенной фазе со спектрофотометрическим детектором.
<a id="p100018"></a>Нижний предел обнаружения витамина B9 (фолиевой кислоты) составляет 0,25 мкг/мл анализируемого раствора.


### <a id="p100019"></a>III. Метрологические характеристики


<a id="p100020"></a>3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций (по [ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002)).

<a id="p100021"></a>Таблица 1

<a id="p100022"></a>Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного
контроля точности, повторяемости, воспроизводимости


<table>
<colgroup><col width="17%"><col width="10%"><col width="12%"><col width="13%"><col width="14%"><col width="16%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100023"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100024"></a>Диапазон измеряемых концентраций, мкг/100 г</td><td><a id="p100025"></a>Показатель точности (границы относительной погрешности), $\pm \delta$ , %, P = 0,95</td><td><a id="p100026"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100027"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100028"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %</td><td><a id="p100029"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, %, (P = 0,95)</td></tr>
<tr><td><a id="p100030"></a>Молочная продукция</td><td rowspan="4"><a id="p100031"></a>15 - 300</td><td><a id="p100032"></a>25</td><td><a id="p100033"></a>0,4</td><td><a id="p100034"></a>0,6</td><td><a id="p100035"></a>1</td><td><a id="p100036"></a>2</td></tr>
<tr><td><a id="p100037"></a>Мясная продукция</td><td><a id="p100038"></a>40</td><td><a id="p100039"></a>3,9</td><td><a id="p100040"></a>5,5</td><td><a id="p100041"></a>11</td><td><a id="p100042"></a>15</td></tr>
<tr><td><a id="p100043"></a>Хлебобулочные изделия</td><td><a id="p100044"></a>30</td><td><a id="p100045"></a>2,4</td><td><a id="p100046"></a>3,4</td><td><a id="p100047"></a>7</td><td><a id="p100048"></a>10</td></tr>
<tr><td><a id="p100049"></a>Плодоовощная продукция</td><td><a id="p100050"></a>25</td><td><a id="p100051"></a>1,7</td><td><a id="p100052"></a>2,4</td><td><a id="p100053"></a>5</td><td><a id="p100054"></a>7</td></tr>
</table>


<a id="p100055"></a>Таблица 2

<a id="p100056"></a>Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для всего
диапазона измерений (n = 20)


<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="14%"><col width="19%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100057"></a>Анализируемый объект</td><td colspan="5"><a id="p100058"></a>Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td><a id="p100059"></a>предел обнаружения, мкг/100 г</td><td><a id="p100060"></a>диапазон определяемых концентраций, мг/100 г</td><td><a id="p100061"></a>полнота извлечения вещества, %</td><td><a id="p100062"></a>стандартное отклонение, %</td><td><a id="p100063"></a>доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100064"></a>Молочная продукция</td><td rowspan="4"><a id="p100065"></a>15</td><td rowspan="4"><a id="p100066"></a>15 - 300</td><td><a id="p100067"></a>89,2</td><td><a id="p100068"></a>0,7</td><td><a id="p100069"></a>0,6</td></tr>
<tr><td><a id="p100070"></a>Мясная продукция</td><td><a id="p100071"></a>72,1</td><td><a id="p100072"></a>3,6</td><td><a id="p100073"></a>5,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100074"></a>Хлебобулочные изделия</td><td><a id="p100075"></a>83,8</td><td><a id="p100076"></a>2,3</td><td><a id="p100077"></a>2,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100078"></a>Плодоовощная продукция</td><td><a id="p100079"></a>92,4</td><td><a id="p100080"></a>1,7</td><td><a id="p100081"></a>2,3</td></tr>
</table>



### <a id="p100082"></a>IV. Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы



#### <a id="p100083"></a>4.1 Средства измерений и вспомогательное оборудование



| <a id="p100084"></a>Жидкостный хроматограф со спектрофотометрическим детектором, имеющим возможность работы на длине волны поглощения 286 нм, и двумя насосами для работы в градиентном режиме |  |
| --- | --- |
| <a id="p100085"></a>Весы лабораторные | <a id="p100086"></a>[ГОСТ OIML R 76-1](https://bukva.ai/docs/gost-oiml-r-76-1-2011) |
| <a id="p100087"></a>pH-метр со стеклянным электродом диапазоном измерения pH 0 - 14 ед. |  |
| <a id="p100088"></a>Колбы мерные вместимостью 100, 250 и 1000 мл | <a id="p100089"></a>[ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100090"></a>Цилиндры мерные вместимостью 50, 100 мл | <a id="p100091"></a>[ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100092"></a>Кран-дозатор с петлей не менее 0,02 см3 или автосемплер |  |
| <a id="p100093"></a>Колонка хроматографическая, заполненная стационарной фазой октадецилсиланом (C18), размером не более 4,0*120 мм; зернение частиц не более 5 мкм |  |
| <a id="p100094"></a>Перемешивающее устройство - орбитальный шейкер с частотой вращения 50 - 300 об/мин |  |
| <a id="p100095"></a>Центрифуга лабораторная с охлаждением камеры ротора до 4 °C и скоростью вращения не менее 5000 об/мин |  |
| <a id="p100096"></a>Колбы конические стеклянные вместимостью 250 мл с притертой пробкой |  |
| <a id="p100097"></a>Стаканы центрифужные полипропиленовые вместимостью 50 мл, типа "Фалькон" |  |
| <a id="p100098"></a>Шприцевой микрофильтр с диаметром пор 0,45 мкм |  |
| <a id="p100099"></a>Бумага фильтровальная "Синяя лента" | <a id="p100100"></a>ГОСТ 12026 |



#### <a id="p100101"></a>4.2 Реактивы



| <a id="p100102"></a>Фолиевая кислота с содержанием основного вещества не менее 97% |  |
| --- | --- |
| <a id="p100103"></a>Кислота соляная, хч, концентрированная | <a id="p100104"></a>ГОСТ 3118 |
| <a id="p100105"></a>Вода дистиллированная | <a id="p100106"></a>[ГОСТ Р 58144](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-r-58144-2018) |
| <a id="p100107"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч |  |
| <a id="p100108"></a>Натрий уксуснокислый 3-водный, чда или ч | <a id="p100109"></a>[ГОСТ 199](https://bukva.ai/docs/gost-199-78) |
| <a id="p100110"></a>Натрия гидроокись, чда или хч | <a id="p100111"></a>ГОСТ 4328 |
| <a id="p100112"></a>Кислота трихлоруксусная, ч |  |


<a id="p100113"></a>Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.


### <a id="p100114"></a>V. Требования безопасности


<a id="p100115"></a>5.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности - по ГОСТ 12.1.004 и ГОСТ 12.1.018.
<a id="p100116"></a>Требования электробезопасности при работе с приборами - по ГОСТ 12.1.019 и в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора.
<a id="p100117"></a>5.2. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы с данным оборудованием, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля точности измерений.


### <a id="p100118"></a>VI. Отбор проб


<a id="p100119"></a>6.1. Отбор проб пищевой продукций проводят с учетом требований нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта.


### <a id="p100120"></a>VII. Условия выполнения измерений



#### <a id="p100121"></a>7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- <a id="p100122"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 85%;
- <a id="p100123"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


### <a id="p100124"></a>VIII. Подготовка к проведению анализа


<a id="p100125"></a>8.1. Перед выполнением измерений должны быть проведены следующие работы: подготовка измерительной аппаратуры, приготовление растворов, построение градуировочного графика, отбор и подготовка проб к анализу.
<a id="p100126"></a>8.1.1. Приготовление раствора гидроокиси натрия с молярной концентрацией (NaOH) = 0,01 моль/дм3.
<a id="p100127"></a>Взвешивают (0,40 +/- 0,01) г гидроокиси натрия, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки. Раствор годен при комнатной температуре в течение 1 месяца.
<a id="p100128"></a>8.1.2. Приготовление раствора гидроокиси натрия с молярной концентрацией (NaOH) = 2 моль/дм3.
<a id="p100129"></a>Взвешивают (80,00 +/- 0,01) г гидроокиси натрия, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки. Раствор годен при комнатной температуре в течение 2 месяцев.
<a id="p100130"></a>8.1.3. Приготовление водного раствора соляной кислоты (HCl) = 0,1 моль/дм3.
<a id="p100131"></a>Аликвоту 8,0 см3 концентрированной соляной кислоты плотностью 1,19 г/см3 помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Раствор годен при комнатной температуре в течение 2 месяцев.
<a id="p100132"></a>8.1.4. Приготовление 15% водного раствора хлористого натрия (15% NaCl).
<a id="p100133"></a>Взвешивают (15 +/- 0,01) г хлористого натрия, растворяют в 85 см3 дистиллированной воды. Раствор годен при комнатной температуре в течение 1 месяца.

##### <a id="p100134"></a>8.1.5 Приготовление насыщенного раствора уксуснокислого натрия.

<a id="p100135"></a>Взвешивают (100,0 +/- 0,01) г уксуснокислого натрия, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки. Раствор годен при комнатной температуре в течение 2 месяцев.
<a id="p100136"></a>8.1.6. Приготовление раствора трихлоруксусной кислоты с массовой концентрацией 0,5 г/см3.
<a id="p100137"></a>Взвешивают (50,0 +/- 0,01) г трихлоруксусной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки. Раствор годен при комнатной температуре в течение 2 месяцев.

#### <a id="p100138"></a>8.2 Приготовление подвижной фазы.

<a id="p100139"></a>Для приготовления подвижной фазы используют дистиллированную воду, pH которой доводится до значения (2,9 +/- 0,05) ед. соляной кислотой по [п. 8.1.3](#p100130), и ацетонитрил. Используется градиент подвижной фазы согласно [табл. 4](#p100198).

#### <a id="p100140"></a>8.3 Приготовление градуировочных растворов.

<a id="p100141"></a>8.3.1. Приготовление основного стандартного раствора фолиевой кислоты 2000 мкг/см3.
<a id="p100142"></a>Готовят основной стандартный раствор фолиевой кислоты концентрацией 2000 мкг/см3, взвешивая (200 +/- 0,15) мг фолиевой кислоты и растворяя в мерной колбе на 100 см3 раствором 0,01 М NaOH. Полученный раствор можно хранить в холодильнике в течение 1 месяца.
<a id="p100143"></a>8.3.2. Приготовление рабочего стандартного раствора фолиевой кислоты 200 мкг/см3.
<a id="p100144"></a>Из основного стандартного раствора фолиевой кислоты готовят рабочий стандартный раствор фолиевой кислоты концентрацией 200 мкг/см3. Для этого отбирают 10 см3 основного стандартного раствора, переносят в мерную колбу на 100 см3 и доводят раствором 0,01 М NaOH до метки. Полученный раствор можно хранить в холодильнике в течение 1 недели.

##### <a id="p100145"></a>8.3.3 Приготовление градуировочных растворов фолиевой кислоты.

<a id="p100146"></a>Градуировочные растворы фолиевой кислоты готовят по схеме, представленной в [табл. 3](#p100148). Аликвотные части рабочего стандартного раствора фолиевой кислоты переносят в мерные колбы объемом 100 см3 и доводят до метки 0,01 М NaOH. Градуировочные растворы используют в день приготовления.

<a id="p100147"></a>Таблица 3

<a id="p100148"></a>Схема приготовления градуировочных
растворов фолиевой кислоты


| <a id="p100149"></a>N градуировочного раствора | <a id="p100150"></a>Концентрация фолиевой кислоты в градуировочном растворе, мкг/см3 | <a id="p100151"></a>Аликвотная часть рабочего стандартного раствора фолиевой кислоты, см3 |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100152"></a>1 | <a id="p100153"></a>0,5 | <a id="p100154"></a>0,25 |
| <a id="p100155"></a>2 | <a id="p100156"></a>1,0 | <a id="p100157"></a>0,5 |
| <a id="p100158"></a>3 | <a id="p100159"></a>2,0 | <a id="p100160"></a>1,0 |
| <a id="p100161"></a>4 | <a id="p100162"></a>4,0 | <a id="p100163"></a>2,0 |
| <a id="p100164"></a>5 | <a id="p100165"></a>6,0 | <a id="p100166"></a>3,0 |



#### <a id="p100167"></a>8.4 Установление градуировочной характеристики.

<a id="p100168"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации фолиевой кислоты в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 градуировочным растворам фолиевой кислоты.
<a id="p100169"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора N 1 - 5 и анализируют согласно [п. 9.4](#p100188). Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
<a id="p100170"></a>Устанавливают площади пиков фолиевой кислоты для каждого градуировочного раствора, на основании которых строят градуировочную зависимость.

#### <a id="p100171"></a>8.5 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

<a id="p100172"></a>Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
<a id="p100173"></a>При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов для градуировки, содержание фолиевой кислоты в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,5 до 6,0 мкг/см3.
<a id="p100174"></a>Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:

<a id="p100175"></a> $A = \frac{X - C}{C} \cdot 100 \leq B,$ 

<a id="p100176"></a>где X - концентрация фолиевой кислоты в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
<a id="p100177"></a>C - известная концентрация градуировочного раствора фолиевой кислоты, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
<a id="p100178"></a>B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10% при P = 0,95).
<a id="p100179"></a>Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов фолиевой кислоты, предусмотренных [п. 8.3.3](#p100145). При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно [п. 8.4](#p100167).
<a id="p100180"></a>Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.


### <a id="p100181"></a>IX. Выполнение измерений



#### <a id="p100182"></a>9.1 Пробоподготовка плодоовощной продукции и хлебобулочных изделий.

<a id="p100183"></a>Измельченный образец массой 20 - 30 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, добавляют 100 см3 экстрагирующего раствора (0,01 М раствор NaOH), тщательно перемешивают, затем встряхивают на перемешивающем устройстве при 150 - 200 об/мин в течение 60 мин. Содержимое конической колбы переносят количественно в мерную колбу объемом 250 см3 и доводят экстрагирующим раствором до метки. Полученный экстракт переносят в центрифужные стаканы объемом 50 см3. Стаканы устанавливают в лабораторную центрифугу для центрифугирования. Условия центрифугирования: скорость не менее 5000 об/мин, время - 20 мин. Надосадочную жидкость фильтруют сначала через бумажный фильтр "Синяя лента", а затем через шприцевой микрофильтр с размером пор 0,45 мкм. Полученный экстракт анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100188).

#### <a id="p100184"></a>9.2 Пробоподготовка молока и молочных продуктов.

<a id="p100185"></a>Образец массой 40 - 60 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют ацетонитрил в количестве 40 см3, интенсивно перемешивают в течение 1 - 2 мин, затем доводят до метки ацетонитрилом. Пробе дают отстояться 15 - 20 мин, экстракт количественно переносят в центрифужные стаканы вместимостью 50 см3. Стаканы устанавливают в лабораторную центрифугу для центрифугирования. Условия центрифугирования: скорость не менее 5000 об/мин, время - 20 мин. Надосадочную жидкость фильтруют сначала через бумажный фильтр "Синяя лента", а затем через шприцевой микрофильтр с размером пор 0,45 мкм. Полученный экстракт анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100188).

#### <a id="p100186"></a>9.3 Пробоподготовка мясных изделий.

<a id="p100187"></a>Измельченный образец массой 10 - 15 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3 и добавляют 150 см3 раствора соляной кислоты по [п. 8.1.3](#p100130). Колбу выдерживают на водяной кипящей бане в течение 30 мин, затем охлаждают до комнатной температуры, добавляют 5 см3 насыщенного раствора натрия уксуснокислого и 5 см3 раствора трихлоруксусной кислоты 0,5 г/см3 (для осаждения белков и других посторонних примесей). Содержимое колбы фильтруют через фильтр "Синяя лента", фильтрат количественно переносят в мерную колбу объемом 250 см3 и доводят водой до метки. Отбирают 50 - 100 см3 фильтрата и доводят раствором NaOH (по [п. 8.1.2](#p100128)) до pH = 5 - 6 (контроль по лакмусовой бумаге). Раствор пропускают через шприцевой фильтр с размером пор 0,45 мкм. Полученный экстракт анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4.

#### <a id="p100188"></a>9.4 Условия хроматографирования.

<a id="p100189"></a>Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
- <a id="p100190"></a>хроматографическая колонка, длиной 120 мм, внутренним диаметром 4,0 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернение 5 мкм;
- <a id="p100191"></a>длина волны поглощения 286 нм;
- <a id="p100192"></a>подвижная фаза: ацетонитрил - вода с pH = 2,9 и градиентным элюированием в соответствии с программой ([табл. 4](#p100198) и [5](#p100219));
- <a id="p100193"></a>скорость потока элюента 0,5 мл/мин;
- <a id="p100194"></a>объем вводимой пробы 20 мм3.
<a id="p100195"></a>Ориентировочное время удерживания фолиевой кислоты 11 - 12 мин.
<a id="p100196"></a>Подготовленную пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз.

<a id="p100197"></a>Таблица 4

<a id="p100198"></a>Условия градиентного элюирования при построении
градуировочного графика


<table>
<colgroup><col width="16%"><col width="46%"><col width="39%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100199"></a>Время анализа, мин</td><td colspan="2"><a id="p100200"></a>Соотношение буферов, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100201"></a>Подвижная фаза A - бидистиллированная вода (pH = 2,9 ед.)</td><td><a id="p100202"></a>Подвижная фаза B - ацетонитрил</td></tr>
<tr><td><a id="p100203"></a>0</td><td><a id="p100204"></a>95</td><td><a id="p100205"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100206"></a>5</td><td><a id="p100207"></a>95</td><td><a id="p100208"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100209"></a>10</td><td><a id="p100210"></a>70</td><td><a id="p100211"></a>30</td></tr>
<tr><td><a id="p100212"></a>13</td><td><a id="p100213"></a>20</td><td><a id="p100214"></a>80</td></tr>
<tr><td><a id="p100215"></a>20</td><td><a id="p100216"></a>95</td><td><a id="p100217"></a>5</td></tr>
</table>


<a id="p100218"></a>Таблица 5

<a id="p100219"></a>Условия градиентного элюирования при проведении анализа проб


<table>
<colgroup><col width="16%"><col width="46%"><col width="39%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100220"></a>Время анализа, мин</td><td colspan="2"><a id="p100221"></a>Соотношение буферов, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100222"></a>Подвижная фаза A - бидистиллированная вода (pH = 2,9 ед.)</td><td><a id="p100223"></a>Подвижная фаза B - ацетонитрил</td></tr>
<tr><td><a id="p100224"></a>0</td><td><a id="p100225"></a>95</td><td><a id="p100226"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100227"></a>5</td><td><a id="p100228"></a>95</td><td><a id="p100229"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100230"></a>10</td><td><a id="p100231"></a>70</td><td><a id="p100232"></a>30</td></tr>
<tr><td><a id="p100233"></a>13</td><td><a id="p100234"></a>20</td><td><a id="p100235"></a>80</td></tr>
<tr><td><a id="p100236"></a>20</td><td><a id="p100237"></a>95</td><td><a id="p100238"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100239"></a>25</td><td><a id="p100240"></a>95</td><td><a id="p100241"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100242"></a>28</td><td><a id="p100243"></a>50</td><td><a id="p100244"></a>50</td></tr>
<tr><td><a id="p100245"></a>30</td><td><a id="p100246"></a>20</td><td><a id="p100247"></a>80</td></tr>
<tr><td><a id="p100248"></a>38</td><td><a id="p100249"></a>20</td><td><a id="p100250"></a>80</td></tr>
<tr><td><a id="p100251"></a>40</td><td><a id="p100252"></a>50</td><td><a id="p100253"></a>50</td></tr>
<tr><td><a id="p100254"></a>43</td><td><a id="p100255"></a>95</td><td><a id="p100256"></a>5</td></tr>
</table>


<a id="p100257"></a>*Примечание.* Допускается использование других хроматографических условий, обеспечивающих разделение компонентов в пробе и специфичность.


### <a id="p100258"></a>X. Обработка результатов измерений



#### <a id="p100259"></a>10.1 Расчет концентрации фолиевой кислоты (мкг/100 г продукта) проводится по формуле:


<a id="p100260"></a> $X = \frac{C \cdot V_{1} \cdot 100}{m} ,$ 

<a id="p100261"></a>где C - концентрация фолиевой кислоты, найденная по градуировочному графику, мкг/см3;
<a id="p100262"></a>V1 - общий объем экстракта, см3 (250);
<a id="p100263"></a>m - масса навески, г;
<a id="p100264"></a>100 - расчет на 100 г продукта.


### <a id="p100265"></a>XI. Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100266"></a>11.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

<a id="p100267"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,$ (1)

<a id="p100268"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мкг/100 г;
<a id="p100269"></a>r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100022), при этом $r = 2,8 \cdot \sigma_{r}$ .
<a id="p100270"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100267) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


### <a id="p100271"></a>XII. Оформление результатов



#### <a id="p100272"></a>12.1 Результат анализа представляют в виде:


<a id="p100273"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ , мкг/100 г при вероятности P = 0,95,

<a id="p100274"></a>где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мкг/100 г;
<a id="p100275"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мкг/100 г:

<a id="p100276"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} ,$ 

<a id="p100277"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100022)), %.


### <a id="p100278"></a>XIII. Контроль качества результатов измерений


<a id="p100279"></a>13.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002).






## <a id="p100280"></a>БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ


1. <a id="p100281"></a>ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".
2. <a id="p100282"></a>ГОСТ 12.1.005 "Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".
3. <a id="p100283"></a>ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".
4. <a id="p100284"></a>ГОСТ 12.1.010 "Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования".
5. <a id="p100285"></a>ГОСТ 12.1.018 "Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования".
6. <a id="p100286"></a>ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
7. <a id="p100287"></a>ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".
8. <a id="p100288"></a>ГОСТ 12.4.021 "Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования".
9. <a id="p100289"></a>[ГОСТ OIML R 76-1](https://bukva.ai/docs/gost-oiml-r-76-1-2011) "Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".
10. <a id="p100290"></a>[ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".
11. <a id="p100291"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-6](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".
12. <a id="p100292"></a>ГОСТ 12026 "Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия".
13. <a id="p100293"></a>[ГОСТ Р 58144](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-r-58144-2018) "Вода дистиллированная. Технические условия".
14. <a id="p100294"></a>ГОСТ 3118 "Реактивы. Кислота соляная. Технические условия".
15. <a id="p100295"></a>ГОСТ 4328 "Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия".
16. <a id="p100296"></a>[ГОСТ 199](https://bukva.ai/docs/gost-199-78) "Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия".
17. <a id="p100297"></a>[ГОСТ 28498](https://bukva.ai/docs/gost-28498-90) "Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний".
18. <a id="p100298"></a>[ГОСТ 29169](https://bukva.ai/docs/gost-29169-91) "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой".



<a id="p100299"></a>

---