---
title: "\"МУК 4.1.3513-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глифосата в зеленой массе растений, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зерне гороха, зерне кукурузы, семенах подсолнечника, рапса, льна, бобах сои, растительном масле, плодах и соке плодовых семечковых и плодовых косточковых, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3513-17"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3513-17"
---

## "МУК 4.1.3513-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глифосата в зеленой массе растений, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зерне гороха, зерне кукурузы, семенах подсолнечника, рапса, льна, бобах сои, растительном масле, плодах и соке плодовых семечковых и плодовых косточковых, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3513-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глифосата в зеленой массе растений, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зерне гороха, зерне кукурузы, семенах подсолнечника, рапса, льна, бобах сои, растительном масле, плодах и соке плодовых семечковых и плодовых косточковых, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 29.12.2017)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
29 декабря 2017 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ГЛИФОСАТА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ**
**РАСТЕНИЙ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР, ЗЕРНЕ**
**ГОРОХА, ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА, РАПСА, ЛЬНА,**
**БОБАХ СОИ, РАСТИТЕЛЬНОМ МАСЛЕ, ПЛОДАХ И СОКЕ ПЛОДОВЫХ**
**СЕМЕЧКОВЫХ И ПЛОДОВЫХ КОСТОЧКОВЫХ, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3513-17**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийский НИИ защиты растений" (В.И. Долженко, А.С. Комарова, Т.Д. Черменская) и ООО "Инновационный центр защиты растений" (И.А. Цибульская, А.А. Далинова).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. N 1).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Свидетельство об аттестации методики измерений N 01.5.04.235/01.00043/2016.

<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации глифосата в зеленой массе растений, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зерне гороха, зерне кукурузы, семенах подсолнечника, рапса, льна, бобах сои, растительном масле, плодах и соке плодовых семечковых и плодовых косточковых, ягодах и соке винограда в диапазоне концентраций 0,5 - 10,0 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Глифосат
<a id="p100013"></a>N-(фосфонометил)-глицин (ИЮПАК).
<a id="p100014"></a>Структурная формула:

<a id="p100015"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/4UacArtZ/img_0.png) 

<a id="p100016"></a>Брутто формула: C<sub>3</sub>H<sub>8</sub>NO<sub>5</sub>P.
<a id="p100017"></a>Молекулярная масса: 169,1.
<a id="p100018"></a>Бесцветные кристаллы без запаха. Температура плавления: (189,5 +/- 0,5) °C. Температура разложения 230 °C. Давление паров 1,31 ? 10-2 мПа·(при 25 °C). Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода Kow logP < -3,2.
<a id="p100019"></a>Растворимость в воде: 10,5 г/дм3 (pH 1,9, 20 °C). Нерастворим в большинстве органических растворителей, таких как ацетон, этанол, ксилен. Глифосат и все его соли нелетучи, не разлагаются фотохимически, и стабильны в водных растворах. Глифосат стабилен к гидролизу при pH 3, 6 и 9 (5 - 35 °C). pKa 2,34 (20 °C), 5,73 (20 °C), 10,2 (25 °C). Не горюч.
<a id="p100020"></a>Острая пероральная токсичность для крыс и мышей (ЛД50) составляет 5 600 и 11 300 мг/кг соответственно. Ингаляционная токсичность (ЛС50) для крыс более 4,98 мг/л воздуха. Малотоксичен для человека, животных, птиц и пчел. Не обладает побочными эффектами.
<a id="p100021"></a>Область применения. Не селективный системный гербицид. Абсорбируется листьями и быстро перемещается по растению. Не активен при контакте с почвой. Используется для контроля однолетних и многолетних злаковых и широколиственных сорняков. Рекомендован для применения на зерновых, бобовых, масличных культурах, в виноградниках и плодовых садах.
<a id="p100022"></a>Механизм действия - ингибирование ферментов биосинтеза ароматических кислот, что предотвращает синтез основных ароматических аминокислот, необходимых для биосинтеза белка.
<a id="p100023"></a>Гигиенические нормативы для глифосата в России: МДУ в плодовых (семечковые, косточковые), овощах, картофеле - 0,3; виноград, ягоды (в том числе дикорастущие) - 0,1; зерно хлебных злаков - 20,0; кукуруза (зерно) - 1,0; соя (сухие бобы) - 20,0; подсолнечник (семена) - 7,0; рапс (зерно) - 10,0; горох (сухой) - 5,0; в масле рапса, подсолнечника, сои - не нормируется.


## 1. <a id="p100024"></a>Погрешность измерений


<a id="p100025"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в [табл. 1](#p100027), для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100026"></a>Таблица 1

<a id="p100027"></a>Метрологические параметры


<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="13%"><col width="10%"><col width="11%"><col width="13%"><col width="16%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100028"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100029"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100030"></a>Показатель точности <a href="#p100147">&lt;*&gt;</a> (границы относительной погрешности (P = 0,95), $\pm \delta$ , %</td><td><a id="p100031"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100032"></a>Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100033"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %</td><td><a id="p100034"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)</td></tr>
<tr><td><a id="p100035"></a>Зеленая масса</td><td><a id="p100036"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100037"></a>23</td><td><a id="p100038"></a>9</td><td><a id="p100039"></a>12</td><td><a id="p100040"></a>25</td><td><a id="p100041"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100042"></a>Зерно</td><td><a id="p100043"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100044"></a>23</td><td><a id="p100045"></a>9</td><td><a id="p100046"></a>12</td><td><a id="p100047"></a>25</td><td><a id="p100048"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100049"></a>Солома</td><td><a id="p100050"></a>1,25 - 25,0</td><td><a id="p100051"></a>23</td><td><a id="p100052"></a>9</td><td><a id="p100053"></a>12</td><td><a id="p100054"></a>25</td><td><a id="p100055"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100056"></a>Зерно гороха</td><td><a id="p100057"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100058"></a>23</td><td><a id="p100059"></a>9</td><td><a id="p100060"></a>12</td><td><a id="p100061"></a>25</td><td><a id="p100062"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100063"></a>Зерно кукурузы</td><td><a id="p100064"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100065"></a>23</td><td><a id="p100066"></a>9</td><td><a id="p100067"></a>12</td><td><a id="p100068"></a>25</td><td><a id="p100069"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100070"></a>Семена подсолнечника</td><td><a id="p100071"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100072"></a>23</td><td><a id="p100073"></a>9</td><td><a id="p100074"></a>12</td><td><a id="p100075"></a>25</td><td><a id="p100076"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100077"></a>Семена рапса</td><td><a id="p100078"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100079"></a>23</td><td><a id="p100080"></a>9</td><td><a id="p100081"></a>12</td><td><a id="p100082"></a>25</td><td><a id="p100083"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100084"></a>Семена льна</td><td><a id="p100085"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100086"></a>23</td><td><a id="p100087"></a>9</td><td><a id="p100088"></a>12</td><td><a id="p100089"></a>25</td><td><a id="p100090"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100091"></a>Бобы сои</td><td><a id="p100092"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100093"></a>23</td><td><a id="p100094"></a>9</td><td><a id="p100095"></a>12</td><td><a id="p100096"></a>25</td><td><a id="p100097"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100098"></a>Плоды семечковых (яблоки)</td><td><a id="p100099"></a>0,05 - 1,0</td><td><a id="p100100"></a>25</td><td><a id="p100101"></a>10</td><td><a id="p100102"></a>13</td><td><a id="p100103"></a>28</td><td><a id="p100104"></a>36</td></tr>
<tr><td><a id="p100105"></a>Сок семечковых (сок яблочный)</td><td><a id="p100106"></a>0,05 - 1,0</td><td><a id="p100107"></a>25</td><td><a id="p100108"></a>10</td><td><a id="p100109"></a>13</td><td><a id="p100110"></a>28</td><td><a id="p100111"></a>36</td></tr>
<tr><td><a id="p100112"></a>Плоды косточковых (вишня)</td><td><a id="p100113"></a>0,05 - 1,0</td><td><a id="p100114"></a>25</td><td><a id="p100115"></a>10</td><td><a id="p100116"></a>13</td><td><a id="p100117"></a>28</td><td><a id="p100118"></a>36</td></tr>
<tr><td><a id="p100119"></a>Сок косточковых (сок вишневый)</td><td><a id="p100120"></a>0,05 - 1,0</td><td><a id="p100121"></a>25</td><td><a id="p100122"></a>10</td><td><a id="p100123"></a>13</td><td><a id="p100124"></a>28</td><td><a id="p100125"></a>36</td></tr>
<tr><td><a id="p100126"></a>Ягоды винограда</td><td><a id="p100127"></a>0,05 - 1,0</td><td><a id="p100128"></a>25</td><td><a id="p100129"></a>10</td><td><a id="p100130"></a>13</td><td><a id="p100131"></a>28</td><td><a id="p100132"></a>36</td></tr>
<tr><td><a id="p100133"></a>Сок винограда</td><td><a id="p100134"></a>0,05 - 1,0</td><td><a id="p100135"></a>25</td><td><a id="p100136"></a>10</td><td><a id="p100137"></a>13</td><td><a id="p100138"></a>28</td><td><a id="p100139"></a>36</td></tr>
<tr><td><a id="p100140"></a>Масло растительное</td><td><a id="p100141"></a>0,5 - 10,0</td><td><a id="p100142"></a>23</td><td><a id="p100143"></a>9</td><td><a id="p100144"></a>12</td><td><a id="p100145"></a>25</td><td><a id="p100146"></a>34</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100147"></a>&lt;*&gt; соответствует расширенной неопределенности Uотн. (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2</td></tr>
</table>


<a id="p100148"></a>Таблица 2

<a id="p100149"></a>Полнота извлечения глифосата, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата
для n = 20, P = 0,95


| <a id="p100150"></a>Анализируемый объект | <a id="p100151"></a>Предел обнаружения, мг/кг | <a id="p100152"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) | <a id="p100153"></a>Полнота извлечения, % | <a id="p100154"></a>Стандартное отклонение, S | <a id="p100155"></a>Доверительный интервал среднего результата, +/- % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100156"></a>Зеленая масса | <a id="p100157"></a>0,5 | <a id="p100158"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100159"></a>90,7 | <a id="p100160"></a>7,87 | <a id="p100161"></a>3,45 |
| <a id="p100162"></a>Зерно | <a id="p100163"></a>0,5 | <a id="p100164"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100165"></a>84,1 | <a id="p100166"></a>5,87 | <a id="p100167"></a>2,57 |
| <a id="p100168"></a>Солома | <a id="p100169"></a>1,25 | <a id="p100170"></a>1,25 - 25,0 | <a id="p100171"></a>87,0 | <a id="p100172"></a>7,65 | <a id="p100173"></a>3,35 |
| <a id="p100174"></a>Зерно гороха | <a id="p100175"></a>0,5 | <a id="p100176"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100177"></a>87,0 | <a id="p100178"></a>6,67 | <a id="p100179"></a>2,92 |
| <a id="p100180"></a>Зерно кукурузы | <a id="p100181"></a>0,5 | <a id="p100182"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100183"></a>85,2 | <a id="p100184"></a>5,30 | <a id="p100185"></a>2,32 |
| <a id="p100186"></a>Семена подсолнечника | <a id="p100187"></a>0,5 | <a id="p100188"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100189"></a>90,2 | <a id="p100190"></a>5,08 | <a id="p100191"></a>2,23 |
| <a id="p100192"></a>Семена рапса | <a id="p100193"></a>0,5 | <a id="p100194"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100195"></a>90,0 | <a id="p100196"></a>6,28 | <a id="p100197"></a>2,75 |
| <a id="p100198"></a>Семена льна | <a id="p100199"></a>0,5 | <a id="p100200"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100201"></a>85,2 | <a id="p100202"></a>5,31 | <a id="p100203"></a>2,33 |
| <a id="p100204"></a>Бобы сои | <a id="p100205"></a>0,5 | <a id="p100206"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100207"></a>82,3 | <a id="p100208"></a>4,12 | <a id="p100209"></a>1,80 |
| <a id="p100210"></a>Плоды семечковых (яблоки) | <a id="p100211"></a>0,05 | <a id="p100212"></a>0,05 - 1,0 | <a id="p100213"></a>83,6 | <a id="p100214"></a>4,31 | <a id="p100215"></a>1,89 |
| <a id="p100216"></a>Сок семечковых (сок яблочный) | <a id="p100217"></a>0,05 | <a id="p100218"></a>0,05 - 1,0 | <a id="p100219"></a>84,7 | <a id="p100220"></a>5.77 | <a id="p100221"></a>2,53 |
| <a id="p100222"></a>Плоды косточковых (вишня) | <a id="p100223"></a>0,05 | <a id="p100224"></a>0,05 - 1,0 | <a id="p100225"></a>88,9 | <a id="p100226"></a>5,94 | <a id="p100227"></a>2,60 |
| <a id="p100228"></a>Сок косточковых (сок вишневый) | <a id="p100229"></a>0,05 | <a id="p100230"></a>0,05 - 1,0 | <a id="p100231"></a>84,5 | <a id="p100232"></a>3,38 | <a id="p100233"></a>1,48 |
| <a id="p100234"></a>Ягоды винограда | <a id="p100235"></a>0,05 | <a id="p100236"></a>0,05 - 1,0 | <a id="p100237"></a>85,2 | <a id="p100238"></a>7.63 | <a id="p100239"></a>3,34 |
| <a id="p100240"></a>Сок винограда | <a id="p100241"></a>0,05 | <a id="p100242"></a>0,05 - 1,0 | <a id="p100243"></a>83,4 | <a id="p100244"></a>4,60 | <a id="p100245"></a>2,02 |
| <a id="p100246"></a>Масло растительное | <a id="p100247"></a>0,5 | <a id="p100248"></a>0,5 - 10,0 | <a id="p100249"></a>88,8 | <a id="p100250"></a>6,84 | <a id="p100251"></a>3,00 |



## 2. <a id="p100252"></a>Метод измерений


<a id="p100253"></a>Метод основан на определении глифосата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием флуоресцентного детектора после извлечения из образцов раствором соляной кислоты и последующей дериватизации.
<a id="p100254"></a>Идентификация глифосата проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100255"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.


## 3. <a id="p100256"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы



#### <a id="p100257"></a>3.1 Средства измерений



| <a id="p100258"></a>Жидкостный хроматограф с флуоресцентным детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки |  |
| --- | --- |
| <a id="p100259"></a>Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 150 г, предел допустимой погрешности 5 мг |  |
| <a id="p100260"></a>Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 81/210 г, предел допустимой погрешности 0,1/0,3 мг |  |
| <a id="p100261"></a>Дозаторы пипеточные переменного объема от 10 до 100 мм3, 100 до 1 000 мм3 |  |
| <a id="p100262"></a>Колбы мерные на 100, 500 и 1 000 см3 | <a id="p100263"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100264"></a>Пробирки градуированные с притертыми пробками, объемом 5 см3 | <a id="p100265"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100266"></a>Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 | <a id="p100267"></a>ГОСТ 23932-90 |


<a id="p100268"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100269"></a>3.2 Реактивы



| <a id="p100270"></a>Ацетон, особой чистоты | <a id="p100271"></a>ТУ 2633-048-7811997 |
| --- | --- |
| <a id="p100272"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ | <a id="p100273"></a>ТУ 2634-002-04715285-12 |
| <a id="p100274"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) | <a id="p100275"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100276"></a>Глифосат с содержанием основного вещества 98,7% |  |
| <a id="p100277"></a>Калий фосфорнокислый однозамещенный, хч | <a id="p100278"></a>[ГОСТ 4198-75](https://bukva.ai/docs/gost-4198-75) |
| <a id="p100279"></a>Кислота соляная, хч | <a id="p100280"></a>ГОСТ 3118-77 |
| <a id="p100281"></a>Натрий тетраборнокислый, 10-водный, чда | <a id="p100282"></a>[ГОСТ 4199-76](https://bukva.ai/docs/gost-4199-76) |
| <a id="p100283"></a>9-флуоренилметилхлорформиат, 98% |  |
| <a id="p100284"></a>Этилацетат, хч | <a id="p100285"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |


<a id="p100286"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


#### <a id="p100287"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы



| <a id="p100288"></a>Аналитическая колонка заполненная сорбентом с привитыми бифункциональными полярными группами C18, (250 x 4,6) мм, 5 мкм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100289"></a>Воздушный испаритель с термостатом |  |
| <a id="p100290"></a>Мельница зерновая, 20 000 об./мин |  |
| <a id="p100291"></a>Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см3 |  |
| <a id="p100292"></a>Устройство перемешивающее (50 - 200 колебаний в минуту) | <a id="p100293"></a>ТУ 4389-007-44330709-11 |
| <a id="p100294"></a>Центрифуга со скоростью вращения 4 000 об./мин |  |


<a id="p100295"></a>*Примечание.* Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100296"></a>Требования безопасности


<a id="p100297"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100298"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
<a id="p100299"></a>Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.
<a id="p100300"></a>4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать Федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением" (утв. Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.


## 5. <a id="p100301"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100302"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.


## 6. <a id="p100303"></a>Условия измерений


<a id="p100304"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100305"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100306"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100307"></a>Подготовка к определению



#### <a id="p100308"></a>7.1 Кондиционирование колонки


<a id="p100309"></a>Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,5 - 1,0 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.


#### <a id="p100310"></a>7.2 Приготовление растворов


<a id="p100311"></a>7.2.1. 0,1 н раствор соляной кислоты: 8,1 см3 концентрированной соляной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 000 см3, содержащую 200 см3 бидистиллированной воды, перемешивают и доводят объем до метки бидистиллированной водой.
<a id="p100312"></a>7.2.2. 0,025 М раствор натрия тетраборнокислого: 4,88 г натрия тетраборнокислого 10-водного помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки бидистиллированной водой.
<a id="p100313"></a>7.2.3. 0,001 М раствор 9-флуоренилметилхлорформиата: 31,8 мг 9-флуоренилметилхлорформиата помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном.
<a id="p100314"></a>7.2.4. 0,01 М раствор калия фосфорнокислого однозамещенного: 1,36 г KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> помещают в мерную колбу вместимостью 1 000 см3, содержащую 200 см3 дистиллированной воды, перемешивают и доводят объем до метки бидистиллированной водой.


#### <a id="p100315"></a>7.3 Приготовление основного и градуировочных растворов


<a id="p100316"></a>7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску глифосата (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки бидистиллированной водой.
<a id="p100317"></a>7.3.1.1. Исходный раствор для градуировки с концентрацией 10 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 2,0 см3 основного раствора и доводят до метки бидистиллированной водой. 2,0 см3 исходного раствора для градуировки переносят в градуированные пробирки вместимостью 5 см3 и проводят дериватизацию по [п. 9.3](#p100348).
<a id="p100318"></a>7.3.2. Приготовление градуировочных растворов. Градуировочные растворы с концентрациями глифосата 0,002; 0,005; 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя 0,025 М раствор натрия тетраборнокислого.
<a id="p100319"></a>7.3.2.1. Раствор N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1,0 см3 исходного раствора для градуировки и доводят до метки 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого.
<a id="p100320"></a>7.3.2.2. Раствор N 2 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого.
<a id="p100321"></a>7.3.2.3. Раствор N 3 с концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого.
<a id="p100322"></a>7.3.2.4. Раствор N 4 с концентрацией 0,02 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора N 2 и доводят объем до метки 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого.
<a id="p100323"></a>7.3.2.5. Раствор N 5 с концентрацией 0,01 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 2 и доводят объем до метки 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого.
<a id="p100324"></a>7.3.2.6. Раствор N 6 с концентрацией 0,005 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 3 и доводят объем до метки 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого.
<a id="p100325"></a>7.3.2.7. Раствор N 7 с концентрацией 0,002 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 4 и доводят объем до метки 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого.
<a id="p100326"></a>Основной, исходный и градуировочные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 7 дней.
<a id="p100327"></a>При изучении полноты определения глифосата используют растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему бидистиллированной водой.


#### <a id="p100328"></a>7.4 Построение градуировочного графика


<a id="p100329"></a>Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация глифосата в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации глифосата в градуировочном растворе.
<a id="p100330"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100331"></a>C = K·S, где

<a id="p100332"></a>S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100333"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100334"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100335"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<a id="p100336"></a> $\frac{|C - C_{\text{К}}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.}$ , где

<a id="p100337"></a>C - аттестованное значение массовой концентрации глифосата в градуировочном растворе;
<a id="p100338"></a>Cк - результат контрольного измерения массовой концентрации глифосата в градуировочном растворе;
<a id="p100339"></a> $\lambda_{\text{контр}.}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( $\lambda_{\text{контр}.} = 10\%$ при P = 0,95).


## 8. <a id="p100340"></a>Отбор проб и хранение


<a id="p100341"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Пробы семян подсолнечника, рапса, льна, зерна кукурузы и бобов сои хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Отбор проб зерна проводят в соответствии с [ГОСТ Р 50436-92](https://bukva.ai/docs/gost-r-50436-92) (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна"; гороха в соответствии с [ГОСТ 6201-68](https://bukva.ai/docs/gost-6201-68) "Горох шлифованный. Технические условия". Пробы гороха, зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Отбор проб яблок производят в соответствии с [ГОСТ 27572-87](https://bukva.ai/docs/gost-27572-87) "Яблоки свежие для промышленной переработки" и [ГОСТ 16270-70](https://bukva.ai/docs/gost-16270-70) "Яблоки свежие ранних сортов созревания. Технические условия", вишни - в соответствии с [ГОСТ 21921-76](https://bukva.ai/docs/gost-21921-76) "Вишня свежая. Технические условия" и [ГОСТ Р 56672-15](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-56672-2015) "Вишня свежая для промышленной переработки. Технические условия"; винограда - в соответствии с [ГОСТ 32786-14](https://bukva.ai/docs/gost-32786-2014) "Виноград столовый свежий. Технические условия".
<a id="p100342"></a>Зеленую массу хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до анализа. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев. Пробы яблок и яблочного сока, винограда и виноградного сока хранят до анализа в герметичной таре в морозильной камере при температуре не выше -18 °C, в холодильнике сок хранят при температуре 0 - 4 °C в стеклянной таре с притертой пробкой в течение недели.


## 9. <a id="p100343"></a>Проведение определения



#### <a id="p100344"></a>9.1 Определение глифосата в зеленой массе растений, зерне

и соломе зерновых колосовых культур, зерне гороха, зерне
кукурузы, семенах подсолнечника, рапса, льна, бобах сои,
растительном масле

<a id="p100345"></a>Образец измельченных проб растительной продукции 5 г (соломы - 2 г) помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3 и добавляют 30 см3 0,1 н раствора соляной кислоты. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при скорости 4 000 об./мин. Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 300 мм3 с помощью пипетки переносят в пробирки, добавляют 4,7 см3 0,025 М раствора натрия тетраборнокислого и перемешивают вручную. 2,0 см3 раствора образца переносят в градуированные пробирки вместимостью 5 см3 и проводят дериватизацию по [п. 9.3](#p100348).


#### <a id="p100346"></a>9.2 Определение глифосата в плодах и соке плодовых

семечковых (яблоки) и плодовых косточковых (вишня), ягодах
и соке винограда

<a id="p100347"></a>Образец измельченных проб растительной продукции или сока 15 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3 и добавляют 30 см3 0,1 н раствора соляной кислоты. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при скорости 4 000 об./мин. Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 900 мм3 с помощью пипетки переносят в пробирки, добавляют 4,1 см3 0,025 М раствора натрия тетраборнокислого и перемешивают вручную. 2,0 см3 раствора образца переносят в градуированные пробирки вместимостью 5 см3 и проводят дериватизацию по [п. 9.3](#p100348).


#### <a id="p100348"></a>9.3 Дериватизация


<a id="p100349"></a>К 2,0 см3 приготовленного для дериватизации раствора глифосата [(п. 7.3.1.1)](#p100317) или образца добавляют 1 см3 0,001 М ацетонового раствора 9-флуоренилметилхлорформиата, перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Пробирки с реакционной смесью помещают в воздушный испаритель для удаления ацетона в токе воздуха при температуре 40 °C. Водный остаток трижды обрабатывают 1,5 см3 этилацетата для удаления избытка 9-флуоренилметилхлорформиата, этилацетат отбрасывают. Остаток этилацетата удаляют в токе воздуха. Водный остаток доводят до 2 см3 0,025 М раствором натрия тетраборнокислого, переносят в виалы для хроматографирования и анализируют на содержание глифосата по [п. 9.4](#p100350).


#### <a id="p100350"></a>9.4 Условия хроматографирования


<a id="p100351"></a>Высокоэффективный жидкостной хроматограф с флуорометрическим детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми бифункциональными полярными группами C18, (250 ? 4,6) мм, 5 мкм. Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,01 М KH2PO4 в соотношении 20:80. Скорость потока элюента: 1 см3/мин. Длина волны: $\lambda_{\text{тах}}$ возбуждения 270 нм; $\lambda_{\text{тах}}$ эмиссии 313 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3.


## 10. <a id="p100352"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100353"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание глифосата в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

<a id="p100354"></a> $X = \frac{S_{x} \cdot K \cdot V}{P}$ , где

<a id="p100355"></a>Sx - площадь пика глифосата на хроматограмме испытуемого образца, (EU);
<a id="p100356"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100357"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
<a id="p100358"></a>P - навеска анализируемого образца, г.
<a id="p100359"></a>Содержание остаточных количеств глифосата в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100360"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор глифосата с концентрацией 0,1 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.


## 11. <a id="p100361"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100362"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

<a id="p100363"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , где

<a id="p100364"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100365"></a>r - значение предела повторяемости $(r = 2,8\sigma_{r})$ .
<a id="p100366"></a>При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100367"></a>Оформление результатов


<a id="p100368"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100369"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ , мг/кг при вероятности P = 0,95, где

<a id="p100370"></a> $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100371"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100372"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100373"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100374"></a>В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100375"></a>"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,5 мг/кг <*>, где <*> 0,5 мг/кг - предел обнаружения глифосата в семенах подсолнечника).


## 13. <a id="p100376"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100377"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100378"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100379"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода "добавок".
<a id="p100380"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100381"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime}$ , где

<a id="p100382"></a> $\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

<a id="p100383"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta$ , где

<a id="p100384"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100385"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100386"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100387"></a>Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

<a id="p100388"></a>Кк = X' - X - Cд, где

<a id="p100389"></a>X', X, Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100361)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
<a id="p100390"></a>Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

<a id="p100391"></a> $\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}$ (1)

<a id="p100392"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
<a id="p100393"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100394"></a>|Кк| <= К, (2)

<a id="p100395"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100396"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100394) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100394) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
<a id="p100397"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100398"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

<a id="p100399"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R$ , где (3)

<a id="p100400"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
<a id="p100401"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.



<a id="p100402"></a>

---