---
title: "\"МУК 4.1.3496-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств протиоконазола по его основному метаболиту протиоконазолу-дестио в картофеле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3496-17"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3496-17"
---

## "МУК 4.1.3496-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств протиоконазола по его основному метаболиту протиоконазолу-дестио в картофеле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3496-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств протиоконазола по его основному метаболиту протиоконазолу-дестио в картофеле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 29.12.2017)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
29 декабря 2017 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОТИОКОНАЗОЛА**
**ПО ЕГО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ ПРОТИОКОНАЗОЛУ-ДЕСТИО**
**В КАРТОФЕЛЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ**
**ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3496-17**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, М.В. Ларькина, О.Е. Егорченкова, С.К. Рогачева).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. N 1).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для измерения концентрации протиоконазола по его метаболиту протиоконазолу-дестио в картофеле в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.
<a id="p100010"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100011"></a>Протиоконазол
<a id="p100012"></a>Химический класс: триазолы.
<a id="p100013"></a>2-[(RS)-2-гидрокси-2-(1-хлорциклопропил)-3-(2-хлорфенил)пропил]-2H-1,2,4-триазол-3(4H)-тион (IUPAC).
<a id="p100014"></a>Структурная формула:

<a id="p100015"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/fYlMDziA/img_0.png) 

<a id="p100016"></a>Эмпирическая формула: C<sub>14</sub>H<sub>15</sub>Cl<sub>2</sub>N<sub>3</sub>OS.
<a id="p100017"></a>Молекулярная масса: 344,3.
<a id="p100018"></a>Белое или светло-бежевое твердое вещество без запаха. Температура плавления: 139,1 - 144,5 °C. Давление паров при 20 °C: << 4 x 10-7 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow logP = 4,16 (pH 4); 3,82 (pH 7) и 2,0 (pH 9). Растворимость (г/дм3) при 20 °C: ацетон - более 250, этилацетат - более 250, дихлорметан - 88, ацетонитрил - 69; растворимость в воде - 0,005 (pH 4); 0,3 (pH 8) и 2,0 (pH 9).
<a id="p100019"></a>Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой (DT50 = 120 дней) и щелочной (DT50 > 1 года) средах. В присутствии света в водных фотолитических условиях протиоконазол достаточно быстро деградирует с периодом полураспада 47,7 часа. Основным продуктом фотодеградации является протиоконазол-дестио, его содержание составляет до 56%.
<a id="p100020"></a>В почве в полевых условиях протиоконазол подвергается быстрой деградации, ДТ50 составляет 1,3 - 2,8 дня (в среднем 1,7 дня), ДТ90 - 4,4 - 9,3 дня (в среднем 5,8 дня). Отмечена заметная сорбция протиоконазола почвой. Основным почвенным метаболитом является протиоконазол-дестио. ДТ50 протиоконазола-дестио в почве в полевых условиях составляет 16,3 - 72,3 дня (в среднем 42 дня), ДТ90 - 54,1 - 240 дней (в среднем 140 дней). Протиоконазол-дестио детектирован на пределе обнаружения (6 мкг/кг) в 10 - 20-сантиметровом слое. Максимальные его уровни наблюдались в период от 1 до 28 дней после применения, полное исчезновение (менее 6 мкг/кг) - после 55 - 240 дней.
<a id="p100021"></a>Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - более 6 200 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - более 4 990 мг/м3 воздуха.
<a id="p100022"></a>Протиоконазол не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз.
<a id="p100023"></a>Основной метаболит протиоконазола: протиоконазол-дестио (SXX 0665)
<a id="p100024"></a> $\alpha - (1 - \text{хлорциклопропил}) - \alpha - (2 - \text{хлорфенил})\text{метил} - 1\text{Н} - 1,2,4 - \text{триазол} - 1 - \text{этанол}$ (IUPAC).
<a id="p100025"></a>Структурная формула:

<a id="p100026"></a> ![рис. 2](https://i.bukva.ai/fYlMDziA/img_1.png) 

<a id="p100027"></a>Эмпирическая формула: C<sub>14</sub>H<sub>15</sub>Cl<sub>2</sub>N<sub>3</sub>O.
<a id="p100028"></a>Молекулярная масса: 312,2.
<a id="p100029"></a>Бесцветный порошок без запаха. Температура плавления: 108,5 °C. Давление паров при 20 °C: 2,7 x 10-7 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow logP = 3,04.
<a id="p100030"></a>Растворимость (г/дм3) при 20 °C: гексан - 3, толуол - 84, ацетон - 100, ацетонитрил - 43, дихлорметан - более 200, вода - 0,051. Стабилен в кислой и щелочной средах.
<a id="p100031"></a>Область применения препарата. Протиоконазол - фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза эргостерина. Вещество обладает защитным, искореняющим и лечебным действием.


## 1. <a id="p100032"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100033"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100034"></a>Таблица 1

<a id="p100035"></a>Значения характеристики погрешности,
нормативов оперативного контроля точности,
повторяемости, воспроизводимости


| <a id="p100036"></a>Анализируемый объект | <a id="p100037"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | <a id="p100038"></a>Показатель точности (граница относительной погрешности), $\pm \delta$ , %, P = 0,95 | <a id="p100039"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , % | <a id="p100040"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , % | <a id="p100041"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, % | <a id="p100042"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, %, (P = 0,95) |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100043"></a>Картофель | <a id="p100044"></a>от 0,01 до 0,1 вкл. | <a id="p100045"></a>50 | <a id="p100046"></a>1,5 | <a id="p100047"></a>2,1 | <a id="p100048"></a>4 | <a id="p100049"></a>6 |


<a id="p100050"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

<a id="p100051"></a>Таблица 2


<table>
<colgroup><col width="16%"><col width="13%"><col width="19%"><col width="17%"><col width="14%"><col width="22%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100052"></a>Анализируемый объект</td><td colspan="5"><a id="p100053"></a>Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td><a id="p100054"></a>предел обнаружения, мг/кг</td><td><a id="p100055"></a>диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100056"></a>средняя полнота извлечения вещества, %</td><td><a id="p100057"></a>стандартное отклонение, %</td><td><a id="p100058"></a>доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100059"></a>Картофель</td><td><a id="p100060"></a>0,01</td><td><a id="p100061"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100062"></a>84,7</td><td><a id="p100063"></a>2,3</td><td><a id="p100064"></a>1,2</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100065"></a>Метод измерений


<a id="p100066"></a>Метод основан на экстракции метаболита протиоконазола-дестио из образцов картофеля водным раствором ацетона, очистке экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с оксидом алюминия с последующим измерением содержания протиоконазола-дестио методом капиллярной газожидкостной хроматографии при программировании температуры с термоионным детектором (ТИД) и/или масс-селективным детектором. Контроль протиоконазола в образцах картофеля осуществляется по содержанию протиоконазола-дестио. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.


## 3. <a id="p100067"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100068"></a>3.1. Средства измерений



| <a id="p100069"></a>Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле 5 x 10-13 г/с, предназначенный для работы с капиллярной колонкой |  |
| --- | --- |
| <a id="p100070"></a>Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором и автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой |  |
| <a id="p100071"></a>Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности +/- 0,1 мг | <a id="p100072"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100073"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 420 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,01 г | <a id="p100074"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100075"></a>Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 100, 250 и 1 000 см3 | <a id="p100076"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100077"></a>Меры массы | <a id="p100078"></a>ГОСТ OIML R 111-1-09 |
| <a id="p100079"></a>Микрошприц вместимостью 10 мм3 |  |
| <a id="p100080"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см3 | <a id="p100081"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100082"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 100 и 250 см3 | <a id="p100083"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |


<a id="p100084"></a>*Примечание.* Допускается использование других средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100085"></a>3.2. Реактивы



| <a id="p100086"></a>Протиоконазол, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 96,5% |  |
| --- | --- |
| <a id="p100087"></a>Азот газообразный (чистота 99,999%) в баллонах | <a id="p100088"></a>ТУ 6-21-39-96 |
| <a id="p100089"></a>Ацетон, осч | <a id="p100090"></a>ГОСТ 2603-79 |
| <a id="p100091"></a>Гексан, осч | <a id="p100092"></a>ТУ 6-09-06-657-84 |
| <a id="p100093"></a>Вода для лабораторного анализа (деионизованная или бидистиллированная) | <a id="p100094"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100095"></a>Калий марганцовокислый (перманганат калия), хч | <a id="p100096"></a>ГОСТ 20490-75 |
| <a id="p100097"></a>Калий углекислый (карбонат калия), хч, прокаленный | <a id="p100098"></a>[ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76) |
| <a id="p100099"></a>Кальций хлористый (хлорид кальция), хч, насыщенный водный раствор | <a id="p100100"></a>[ГОСТ 450-77](https://bukva.ai/docs/gost-450-77) |
| <a id="p100101"></a>Кислота серная (концентрированная), хч | <a id="p100102"></a>ГОСТ 4204-77 |
| <a id="p100103"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч | <a id="p100104"></a>[ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80) |
| <a id="p100105"></a>Натрий сернокислый (сульфат натрия) безводный, хч | <a id="p100106"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) |
| <a id="p100107"></a>Натрий углекислый (карбонат), хч | <a id="p100108"></a>ГОСТ 83-79 |
| <a id="p100109"></a>Натрий хлористый, хч, насыщенный водный раствор | <a id="p100110"></a>ГОСТ 4233-77 |
| <a id="p100111"></a>Оксид алюминия нейтральный, 1 степени активности, для колоночной хроматографии (200 - 400 меш) |  |
| <a id="p100112"></a>Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) | <a id="p100113"></a>ТУ 6-09-4173-85 |
| <a id="p100114"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч | <a id="p100115"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |


<a id="p100116"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей.


### <a id="p100117"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы



| <a id="p100118"></a>Аппарат для встряхивания | <a id="p100119"></a>ТУ 64-1-2851-78 |
| --- | --- |
| <a id="p100120"></a>Баня ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц | <a id="p100121"></a>ТУ 2504-1799-75 |
| <a id="p100122"></a>Баня водяная |  |
| <a id="p100123"></a>Бумажные фильтры средней и высокой плотности | <a id="p100124"></a>ТУ 2642-001-05015242-07 |
| <a id="p100125"></a>Воронка Бюхнера | <a id="p100126"></a>ГОСТ 9147-80 |
| <a id="p100127"></a>Воронка делительная на 250 см3 |  |
| <a id="p100128"></a>Воронки конусные диаметром 40 - 45 мм | <a id="p100129"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100130"></a>Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90% | <a id="p100131"></a>ТУ 25-11-1645-84 |
| <a id="p100132"></a>Груша резиновая | <a id="p100133"></a>ТУ 9398-005-0576-9082-03 |
| <a id="p100134"></a>Гомогенизатор бытовой |  |
| <a id="p100135"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 100 и 250 см3 | <a id="p100136"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100137"></a>Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 150 и 250 см3 | <a id="p100138"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100139"></a>Колба Бунзена | <a id="p100140"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100141"></a>Колонка стеклянная для препаративной хроматографии длиной 25 см, внутренним диаметром 10 - 12 мм |  |
| <a id="p100142"></a>Насос водоструйный вакуумный |  |
| <a id="p100143"></a>Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30 |  |
| <a id="p100144"></a>Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающий вакуум до 10 мбар |  |
| <a id="p100145"></a>Стаканы химические с носиком вместимостью 100, 150 и 250 см3 | <a id="p100146"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100147"></a>Стекловата |  |
| <a id="p100148"></a>Стеклянные палочки |  |
| <a id="p100149"></a>Термометр с диапазоном измерений от 0 до 55 °C и ценой деления 0,1 °C | <a id="p100150"></a>[ГОСТ 28498-90](https://bukva.ai/docs/gost-28498-90) |
| <a id="p100151"></a>Установка для перегонки растворителей |  |
| <a id="p100152"></a>Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, содержащая сорбент: 50% - фенилполисилоксан и 50% - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,5 мкм) |  |
| <a id="p100153"></a>Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 5% - фенилполисилоксан и 95% - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм) |  |


<a id="p100154"></a>*Примечание.* Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100155"></a>Требования безопасности


<a id="p100156"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
<a id="p100157"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-15.
<a id="p100158"></a>4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением" (утв. приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.


## 5. <a id="p100159"></a>Требования к оператору


<a id="p100160"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.


## 6. <a id="p100161"></a>Условия измерений


<a id="p100162"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100163"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100164"></a>выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100165"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100166"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и раствора внесения, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для экстракции и очистки экстрактов на колонке с оксидом алюминия, подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения протиоконазола-дестио на нем.


### <a id="p100167"></a>7.1. Очистка органических растворителей



##### <a id="p100168"></a>7.1.1 Ацетон


<a id="p100169"></a>Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.


##### <a id="p100170"></a>7.1.2 Хлористый метилен и этилацетат


<a id="p100171"></a>7.1.2.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.
<a id="p100172"></a>7.1.2.2. Очистка растворителей. Каждый растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Раствор хранят в стеклянной посуде в течение 3 месяцев.

<a id="p100173"></a>7.1.3. н-Гексан

<a id="p100174"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.


### <a id="p100175"></a>7.2. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения


<a id="p100176"></a>7.2.1. Исходный раствор протиоконазола-дестио для градуировки (концентрация 200 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,02 +/- 0,0001) г протиоконазола-дестио, растворяют в 50 - 60 см3 ацетона, доводят им до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100177"></a>Раствор хранят в морозильнике при температуре не выше -18 °C в течение 3 месяцев.
<a id="p100178"></a>7.2.2. Рабочий раствор N 1 протиоконазола-дестио для градуировки и внесения (концентрация 20 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10,0 см3 исходного раствора протиоконазола-дестио для градуировки с концентрацией 200,0 мкг/см3 [(п. 7.2.1)](#p100176), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 1 для градуировки и внесения с концентрацией протиоконазола-дестио 20,0 мкг/см3.
<a id="p100179"></a>Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильнике при температуре не выше -18 °C в течение 1 месяца.
<a id="p100180"></a>7.2.3. Рабочие растворы N 2 - 8 протиоконазола-дестио для градуировки и внесения (концентрация 0,05 - 2 мкг/см3). В 7 мерных колбах вместимостью 100 см3 помещают 0,25; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 7,5 и 10,0 см3 рабочего раствора N 1 протиоконазола-дестио для градуировки с концентрацией 20,0 мкг/см3 [(п. 7.2.2)](#p100178), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 8 для градуировки и внесения с концентрациями протиоконазола-дестио 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0 мкг/см3.
<a id="p100181"></a>Растворы хранят в морозильнике при температуре не выше -18 °C в течение 1 недели.
<a id="p100182"></a>Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом "добавок".


### <a id="p100183"></a>7.3. Установление градуировочной характеристики


<a id="p100184"></a>Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации протиоконазола-дестио в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки (N 3 - 7) при измерении по [п. 9.4.1](#p100217) и 4 растворам для градуировки (N 1 - 4) при измерении по [п. 9.4.2](#p100227).
<a id="p100185"></a>В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100216). Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков протиоконазола-дестио.


### <a id="p100186"></a>7.4. Приготовление смеси ацетон-вода для экстракции


<a id="p100187"></a>Смесь ацетон-вода (объемное соотношение 80:20). В мерную колбу вместимостью 1 000 см3 помещают 800 см3 ацетона и 20 см3 воды, перемешивают.


### <a id="p100188"></a>7.5. Приготовление смеси гексан-этилацетат (85:15) для очистки экстрактов на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100189"></a>Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 85:15). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 85 см3 гексана и 15 см3 этилацетата, перемешивают.


### <a id="p100190"></a>7.6. Приготовление смеси гексан-этилацетат (6:4) для очистки экстрактов на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100191"></a>Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 6:4). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 60 см3 гексана и 40 см3 этилацетата, перемешивают.


### <a id="p100192"></a>7.7. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта


<a id="p100193"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 - 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию: 5 г оксида алюминия нейтрального III степени активности в 15 см3 смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 85:15), подготовленной по [п. 7.6](#p100190). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают смесью гексан-этилацетат в объемном соотношении 85:15 порцией 20 см3, скорость прохождения растворителя - 1 - 2 кап./с. Колонка готова к работе.


### <a id="p100194"></a>7.8. Проверка хроматографического поведения протиоконазола-дестио на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100195"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,2 см3 раствора N 1 протиоконазола-дестио с концентрацией 20 мкг/см3 [(п. 7.2.2)](#p100178), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 0,5 см3 этилацетата, помещая на ультразвуковую баню на 1 минуту, добавляют 2,5 см3 гексана, перемешивают, вновь помещают на ультразвуковую баню на 1 минуту и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.7](#p100192). Колбу обмывают дважды этой же смесью растворителей, порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1 - 2 кап./с. Промывают колонку 30 см3 смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 85:15, элюат отбрасывают.
<a id="p100196"></a>Затем колонку промывают 40 см3 смеси гексан-этилацетат (6:4, по объему) со скоростью 1 - 2 кап./с. Фракционно (по 10 см3) собирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 см3 ацетона, анализируют содержание протиоконазола-дестио по [п. 9.4](#p100216).
<a id="p100197"></a>Фракции, содержащие протиоконазол-дестио, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100198"></a>*Примечание.* Проверку хроматографического поведения протиоконазола-дестио следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.


## 8. <a id="p100199"></a>Отбор и хранение проб


<a id="p100200"></a>Отбор проб проводится в соответствии с правилами, определенными: [ГОСТ 7176-85](https://bukva.ai/docs/gost-7176-85) "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый, ТУ" и "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
<a id="p100201"></a>Отобранные пробы картофеля хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике в темноте не более 5 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C. Перед анализом пробы измельчают с помощью гомогенизатора.


## 9. <a id="p100202"></a>Выполнение определения



### <a id="p100203"></a>9.1. Экстракция


<a id="p100204"></a>Образец измельченных клубней картофеля массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, добавляют смесь ацетон-вода (80:20, по объему) в количестве 100 см3 и помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут. Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Экстракцию повторяют дважды, используя 70 см3 смеси ацетон-вода (80:20, по объему), выдерживая каждый раз по 2 мин на ультразвуковой бане и 20 мин на аппарате для встряхивания. Осадок на фильтре промывают 30 см3 той же смеси растворителей.
<a id="p100205"></a>Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 см3. Аликвоту (1/2 часть экстракта) помещают в колбу для упаривания на 150 см3, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до водного остатка (объем 15 - 25 см3) и подвергают очистке перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по [п. 9.2](#p100206), затем на колонке с оксидом алюминия по [п. 9.3](#p100211).


### <a id="p100206"></a>9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100207"></a>Водный остаток, полученный по [п. 9.1](#p100203), переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3. Колбу дополнительно обмывают 50 см3 деионизованной воды, которую также переносят в воронку, вносят 10 см3 насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, затем добавляют 50 см3 дихлорметана и интенсивно встряхивают в течение 5 мин. После полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщиной около 1 см), помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 см3. Экстракцию вещества повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 30 см3, встряхивая в течение 2 мин.
<a id="p100208"></a>Безводный сульфат натрия, помещенный на фильтре, дополнительно промывают 10 см3 дихлорметана.
<a id="p100209"></a>Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 - 15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.
<a id="p100210"></a>Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке с оксидом алюминия по [п. 9.3](#p100211).


### <a id="p100211"></a>9.3. Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100212"></a>Остаток, полученный по [п. 9.2](#p100206), находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 0,5 см3 этилацетата, вносят 2,5 см3 гексана и помещают на ультразвуковую баню на 60 с. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.7](#p100192).
<a id="p100213"></a>Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (85:15, по объему), приготовленной по п. 7.5.1, порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1 - 2 кап./с.
<a id="p100214"></a>Протиоконазол-дестио элюируют с колонки 40 см3 смеси гексан-этилацетат (6:4, по объему), приготовленной по п. 7.5.2, со скоростью 1 - 2 кап./с, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 см3, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 0,5 см3 (при анализе ГЖХ с термоионным детектором) или в 2 см3 (при анализе ГЖХ с масс-спектрометрическим детектором) ацетона и анализируют содержание протиоконазола-дестио по [п. 9.4](#p100216).
<a id="p100215"></a>Примечание. Объем элюата может быть изменен в соответствии с результатами проверки хроматографического поведения вещества на колонке по [п. 7.8](#p100194).


### <a id="p100216"></a>9.4. Условия хроматографирования



##### <a id="p100217"></a>9.4.1 Газовый хроматограф, снабженный

термоионным детектором (ТИД)

<a id="p100218"></a>Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, содержащая сорбент: 50% - фенилполисилоксан, 50% - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента - 0,5 мкм).
<a id="p100219"></a>    Температура детектора: 320 °C,
<a id="p100220"></a>                испарителя: 270 °C.
<a id="p100221"></a>Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 150 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 230 °C, выдержка 2 мин, затем нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 270 °C.
<a id="p100222"></a>Газ 1 (азот): давление 80 кПа, скорость 36,518 см/с, поток 1,778 см3/мин.
<a id="p100223"></a>Газ 2: деление потока 1:3; сброс 5,5 см3/мин.
<a id="p100224"></a>Хроматографируемый объем: 1 мм3.
<a id="p100225"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,2 - 2,0 нг.
<a id="p100226"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор протиоконазола-дестио с концентрацией 2,0 мкг/см3, разбавляют ацетоном, не более чем в 50 раз.


##### <a id="p100227"></a>9.4.2 Газовый хроматограф с масс-селективным детектором

(метод подтверждения)

<a id="p100228"></a>Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 5% - фенилполисилоксан, 95% - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).
<a id="p100229"></a>Температура детектора: квадруполь - 150 °C, источник - 230 °C; переходной камеры - 280 °C.
<a id="p100230"></a>Температура испарителя: 275 °C.
<a id="p100231"></a>Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 150 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 220 °C, выдержка 7 мин, нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 270 °C, выдержка 3 мин.
<a id="p100232"></a>Газ 1 (гелий): поток в колонке 1,3 см3/мин.
<a id="p100233"></a>Давление: 17,261 psi.
<a id="p100234"></a>Средняя линейная скорость: 48,385 см/с.
<a id="p100235"></a>Хроматографируемый объем: 1 мм3.
<a id="p100236"></a>Режим регистрации индивидуальных ионов (SIM), m/z: 186 (количественный), 83,125.
<a id="p100237"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,05 - 0,5 нг.
<a id="p100238"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор протиоконазола-дестио с концентрацией 0,5 мкг/см3, разбавляют ацетоном, не более чем в 50 раз.


## 10. <a id="p100239"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100240"></a>Содержание протиоконазола-дестио в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

<a id="p100241"></a> $X = \frac{A \cdot V \cdot K}{m} ,$ 

<a id="p100242"></a>где X - содержание протиоконазола-дестио в пробе, мг/кг;
<a id="p100243"></a>A - концентрация протиоконазола-дестио в растворе, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
<a id="p100244"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
<a id="p100245"></a>K - коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, K = 2;
<a id="p100246"></a>m - масса образца, г.
<a id="p100247"></a>При установлении уровня протиоконазола полученное значение содержания протиоконазола-дестио (X) умножают на 1,1.


## 11. <a id="p100248"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100249"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

<a id="p100250"></a> $\frac{2|X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,$ (1)

<a id="p100251"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100252"></a>r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100035), при этом $r = 2,8\sigma_{r}$ .
<a id="p100253"></a>При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100254"></a>Оформление результатов


<a id="p100255"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100256"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ или мг/кг при вероятности P = 0,95,

<a id="p100257"></a>где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100258"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100259"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} ,$ 

<a id="p100260"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100035)), %.
<a id="p100261"></a>Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100262"></a>"содержание протиоконазола-дестио в пробе менее 0,01 мг/кг [<*>](#p100264)".

<a id="p100263"></a>

---

<a id="p100264"></a><*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения протиоконазола-дестио в картофеле.


## 13. <a id="p100265"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100266"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-2-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

#### <a id="p100267"></a>13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

<a id="p100268"></a>Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
<a id="p100269"></a>При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание протиоконазола-дестио в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,2 до 2,0 мкг/см3 (метод ГЖХ с термоионным детектором), 0,05 - 0,5 мкг/см3 (метод ГЖХ с масс-спектрометрическим детектором).
<a id="p100270"></a>Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

<a id="p100271"></a> $A = \frac{(X - C)}{C} \cdot 100 \leq B,$ 

<a id="p100272"></a>где X - концентрация протиоконазола-дестио в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
<a id="p100273"></a>C - известная концентрация градуировочного раствора протиоконазола-дестио, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
<a id="p100274"></a>B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10% при P = 0,95).
<a id="p100275"></a>Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов протиоконазола-дестио, предусмотренных МИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно [п. 7.3](#p100183).
<a id="p100276"></a>Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100277"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом "добавок".
<a id="p100278"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100279"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime},$ 

<a id="p100280"></a>где $\pm \Delta_{\text{л},\text{Х}}$ $( \pm \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

<a id="p100281"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,$ 

<a id="p100282"></a>где $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100283"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} ,$ 

<a id="p100284"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100035)), %.
<a id="p100285"></a>Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

<a id="p100286"></a> $K_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}},$ 

<a id="p100287"></a>где $\overline{X}\prime$ , $\overline{X}$ , Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100248)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
<a id="p100288"></a>Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

<a id="p100289"></a> $K = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .$ 

<a id="p100290"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).
<a id="p100291"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100292"></a>|Kк| <= K, (2)

<a id="p100293"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100294"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100292) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100292) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100295"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100296"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

<a id="p100297"></a> $\frac{2|X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R,$ (3)

<a id="p100298"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;
<a id="p100299"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100035)), %.



<a id="p100300"></a>

---