МУК 4.1.3411-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств боскалида в зеленой массе, корнеплодах сахарной свеклы, зерне гороха, кукурузы, бобах сои и растительном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 29.12.2016)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 29 декабря 2016 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БОСКАЛИДА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, КОРНЕПЛОДАХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ, ЗЕРНЕ ГОРОХА, КУКУРУЗЫ, БОБАХ СОИ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАСЛЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3411-16

1. Разработаны сотрудниками ФГБНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» (В.И. Долженко, О.К. Остроухова) и ООО «Инновационный центр защиты растений» (И.А. Цибульская).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. № 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2016 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.5.04.231/01.00043/2016.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации боскалида в зеленой массе, корнеплодах сахарной свеклы, зерне гороха и кукурузы, бобах сои и растительном масле в диапазоне концентраций 0,01 — 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Боскалид (ISO)

2-хлор-N-(4-хлорбифенил-2-ил) никотинамид (IUPAC).

Структурная формула:

Брутто формула: C18H12Cl2N2O.

Молекулярная масса: 343,2.

Химически чистый препарат — белое кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 142,8 — 143,8 °C.

Давление паров: 7,2 x 10-4 МПа (25 °C). Плотность 1,38 (20 °C).

Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log P = 2,96 (pH 7,0 — 7,2).

Растворимость в воде 4,64 г/дм3 (pH 6, 20 °C); в органических растворителях (г/дм3, 25 °C): в ацетоне 160 — 200, ацетонитриле 40 — 50, метаноле 40 — 50, дихлорметане 200 — 250.

Устойчив в водном растворе при отсутствии света при 50 °C (pH 4,7 и 9) в течение 5 дней, при 25 °C (pH 5,7 и 9) — в течение 30 дней.

В почве период полураспада DT50 — от 108 дней до 1 года.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая оральная токсичность для крыс LD50 > 5 000 мг/кг, острая дермальная токсичность для крыс LD50 > 2 000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность для крыс LC50 (4 ч) > 6,7 мг/дм3. Не мутаген, не онкоген для крыс и мышей, не тератоген для крыс.

Область применения. Высокоэффективный контактный фунгицид длительного действия, применяется для борьбы с комплексом болезней овощных, масличных и зернобобовых культур.

Гигиенические нормативы. ВМДУ боскалида для импортируемой продукции в овощах со съедобными корнями — 2,0 мг/кг, в горохе — 3,0 мг/кг, в семенах масличных культур — 1,0 мг/кг.

МДУ для зерна кукурузы, бобов сои и масла не установлены.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологическая характеристика метода

Таблица 2

Полнота извлечения боскалида, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95

2. Метод измерений

Методика основана на определении боскалида методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием электронно-захватного детектора после экстракции из образцов водно-органическим растворителем, очистки экстракта на патронах для твердофазной экстракции (ТФЭ).

Идентификация боскалида проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, материалы и вспомогательные устройства

3.1 Средства измерений

3.2 Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3 Вспомогательные устройства и материалы

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005-88, ГОСТ 12.1.007-76). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004-90.

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением» (утв. Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы в области газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
• выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Отбор проб и хранение

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 13634-90 «Кукуруза. Требования при заготовках и поставках» и с ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное. ТУ». Отбор проб бобов сои для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».

Зерно кукурузы и бобы сои хранят в полотняных мешочках при комнатной температуре. Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб измельченного зерна методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше 40 °C или холодным отжимом бобов сои с помощью лабораторного пресса. Пробы масла хранят при 4 — 6 °C в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре не более 30 суток.

Отбор проб свеклы проводится в соответствии с ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая». Для длительного хранения аналитические пробы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C и хранят в герметично закрытой полиэтиленовой таре.

Отбор проб зерна гороха проводят в соответствии с ГОСТ 28674-90 «Горох. Требования по заготовке и поставке». Для длительного хранения зерно гороха подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы гороха доводят до стандартной влажности и измельчают.

8. Подготовка к выполнению определений

8.1 Кондиционирование колонки

Капиллярную и/или насадочную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C до установления стабильной нулевой линии.

8.2 Приготовление растворов

Для экстракции боскалида из матрицы используется раствор ацетон:вода = 8:2.

В плоскодонную колбу на 250 см3 вносят 80 см3 ацетона и 20 см2 дистиллированной воды, раствор перемешивают.

8.3 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей проводят в соответствии с типовыми методиками.

8.4 Приготовление основного и градуировочных растворов

8.4.1. Основной раствор с концентрацией 100 мкг/см3: точную навеску боскалида (10 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки тем же растворителем.

8.4.2. Раствор с концентрацией боскалида 10 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см3 основного раствора и доводят объем до метки ацетоном.

Этот раствор используют для проверки хроматографического поведения боскалида на патроне.

Градуировочные растворы боскалида с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления основного раствора по объему, используя гексан.

8.4.3. Раствор № 1 с концентрацией боскалида 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 основного раствора и доводят объем до метки гексаном.

8.4.4. Раствор № 2 с концентрацией боскалида 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.5. Раствор № 3 с концентрацией боскалида 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.6. Раствор № 4 с концентрацией боскалида 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы — в течение 14 дней.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют основной раствор боскалида, разбавленный гексаном до соответствующей концентрации.

8.5 Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации боскалида в градуировочном растворе (мкг/см3).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

\frac{|C - C_{\text{к}}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.} , где

C — аттестованное значение массовой концентрации боскалида в градуировочном растворе;

Cк — результат контрольного измерения массовой концентрации боскалида в градуировочном растворе;

\lambda_{\text{контр}.} — норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( \lambda_{\text{контр}.} = 10\% при P = 0,95).

8.6 Кондиционирование патрона для твердофазной экстракции

Патроны для ТФЭ непосредственно перед употреблением промывают последовательно 5 см3 ацетона и 10 см3 дистиллированной воды, после чего они готовы к работе.

8.7 Проверка хроматографического поведения боскалида

на патроне для ТФЭ

В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают 1 см3 раствора боскалида с концентрацией 10 мкг/см3. Отдувают растворитель током азота. Остаток растворяют в 5 см3 воды и переносят на подготовленный патрон. Колбу обмывают 2 см3 воды и смыв тоже переносят на патрон. Боскалид элюируют 10 см3 хлористого метилена. Элюаты от нанесения и промывки собирают фракциями по 2 см3. Из полученного раствора удаляют хлористый метилен током азота до сухого остатка, который растворяют в 0,1 см3 ацетона, затем в 0,9 см3 гексана и 1 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф. Фракции, содержащие боскалид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.

Примечание. Проверку хроматографического поведения боскалида следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.

8.8 Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

9. Проведение определения

9.1 Экстракция боскалида из корнеплодов сахарной свеклы,

зеленой массы, зерна гороха, кукурузы и бобов сои

Анализируемый объект измельчают, берут навеску (10,0 +/- 0,1) г, помещают в коническую колбу на 250 см3, заливают 50 см3 водного ацетона (8:2 по объему) и экстрагируют боскалид в ультразвуковой бане в течение 10 мин; экстракцию повторяют еще раз 30 см3 экстрагента. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр средней плотности, фильтр обмывают 10 см3 водного ацетона. Объединенный фильтрат упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до водного остатка.

Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.

9.2 Экстракция боскалида из растительного масла

Навеску масла (10,0 +/- 0,1) г растворяют в 40 см3 ацетона в плоскодонной колбе объемом 100 см3, добавляют 10 см3 воды и помещают в ультразвуковую ванну на 5 мин. Затем экстракт фильтруют через двойной бумажный фильтр средней плотности, смоченный водой, в круглодонную колбу на 100 см3. Водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до полного удаления ацетона.

Полученный водный раствор помещают на 30 мин в холодильник (4 — 6 °C), после чего фильтруют через предварительно смоченный водой бумажный фильтр в колбу на 50 см3.

Фильтр промывают 10 см3 воды. Полученные растворы объединяют и далее очистку проводят на патроне для ТФЭ по п. 9.3.

9.3 Очистка экстрактов на патроне для ТФЭ

Водные растворы, полученные по п. 9.1 и 9.2, пропускают через кондиционированные (по п. 8.5) патроны со скоростью не более 1 — 2 см3/мин. Патрон подсушивают током азота и элюируют боскалид 5 см3 хлористого метилена. Из полученного раствора удаляют хлористый метилен током азота до сухого остатка, который растворяют в 0,1 см3 ацетона, затем в 0,9 см3 гексана и 1 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.

9.4 Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с электронно-захватным детектором и кварцевой капиллярной колонкой длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с толщиной слоя неподвижной фазы (35% дифенилсилоксана + 65% диметилсилоксана) — 0,25 мкм.

Температура колонки программируется от 190 °C (1 мин) до 300 °C (4 мин) со скоростью 25 °C/мин, температура испарителя 300 °C, детектора 350 °C.

Расход газа-носителя (азот) через колонку 1,067 см3/мин (в режиме постоянного потока), поддув в детектор 20 см3/мин. Деление потока 1:20. Объем вводимой пробы 1 мм3.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание боскалида в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

X = \frac{H_{2} \cdot C \cdot V}{H_{1} \cdot P} , где

H₁ - площадь пика боскалида в стандартном растворе, мв·с;

H2 — площадь пика боскалида в анализируемой пробе, мв·с;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

P — навеска анализируемого образца, г;

C — концентрация боскалида в стандартном растворе, мкг/см3.

Содержание остаточных количеств боскалида в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор боскалида 1 мкг/см3, разбавляют гексаном.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}|}{X_{1} + X_{2}} \cdot 100 \leq r , где

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (r = 2,8\sigma_{r}) .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, где

\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее нижней границы определения» (например: менее 0,01, где 0,01 мг/кг — предел определения боскалида в зерне гороха).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime} , где

\pm \Delta_{\text{л},X} , ( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}} , где

\overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} (1)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|Kк| <= K, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq R , где (3)

X₁ и X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.