МУК 4.1.3410-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств валифеналата в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, винограде и виноградном соке и его метаболитов (IR 5839 и PCBA) в воде и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 29.12.2016)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 29 декабря 2016 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ВАЛИФЕНАЛАТА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, БОТВЕ И КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, ВИНОГРАДЕ И ВИНОГРАДНОМ СОКЕ И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (IR 5839 И PCBA) В ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3410-16

1. Разработаны сотрудниками ФГБНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» и ООО «Инновационный центр защиты растений» (В.И. Долженко, И.А. Цибульская, А.С. Комарова, Т.Д. Черменская).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. № 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2016 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.5.04.233/01.00043/2016.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовой концентрации валифеналата в воде в диапазоне концентраций 0,002 — 0,02 мг/л, в почве, ботве и клубнях картофеля, винограде и виноградном соке в диапазоне концентраций 0,01 — 0,1 мг/кг и его метаболитов в воде в диапазоне концентраций 0,002 — 0,02 мг/л, в почве в диапазоне концентраций 0,01 — 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Валифеналат

N-(изопропоксикарбонил)-L-валил-(3RS)-3-(4-хлорфенил)- \beta -аланинат (ИЮПАК).

Брутто формула: C₁₉H₂₇ClN₂O₅.

Молекулярная масса: 398,9.

Эквимолярная смесь диастереомеров (S,S- и S,R-).

Белое кристаллическое вещество без запаха.

Растворимость в воде 24,1 мг/л (pH от 4,9 до 5,9), 45,5 мг/л (pH от 9,5 до 9,8). Растворимость: в ацетоне — 29,3 г/л, дихлорэтане — 14,4 г/л, этилацетате — 25,4 г/л, н-гептане — 25 мг/л, метаноле — 28,8 г/л, ксилоле — 2,31 г/л.

pKa = -1,78 (25 °C).

Гидролитическая стабильность: стабилен при pH 4 и 50 °C, медленно при pH 7 и 25 °C, быстро при pH 9 и 50 °C. Основной продукт гидролиза при pH 9 IR-5839. Оба метаболита стабильны к гидролизу при нормальных условиях.

Валифеналат имеет очень низкую персистентность в почве и быстро образует главный метаболит IR-5839, который, в свою очередь, также быстро деградирует до 4-хлорбензойной кислоты.

Валифеналат не обладает острой пероральной, дермальной и ингаляционной токсичностью, не является ирритантом.

IR-5839

Брутто формула: C18H25ClN2O5.

Молекулярная масса: 385.

Пероральная токсичность для крыс ЛД50 > 2 000 мг/кг. Не генотоксичен.

4-хлорбензойная кислота (PCBA)

Брутто формула: C7H5ClO2.

Молекулярная масса: 156,7.

pKa = 3,98 (25 °C)

Пероральная токсичность для крыс ЛД50 1 170 мг/кг. Не генотоксична.

Гигиенические нормативы для валифеналата и его метаболитов в России не установлены.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры для 4-хлорбензойной кислоты

Таблица 2

Метрологические параметры для IR-5839

Таблица 3

Метрологические параметры для валифеналата

Таблица 4

Полнота извлечения 4-хлорбензойной кислоты, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95

Таблица 5

Полнота извлечения IR-5839, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95

Таблица 6

Полнота извлечения валифеналата, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95

2. Метод измерений

Метод основан на определении валифеналата и его метаболитов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием масс-спектрометрического детектора после извлечения из образцов ацетонитрилом и очистки ацетонитрильного экстракта на патронах для твердофазной экстракции (ТФЭ).

Идентификация проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа с масс-детектированием.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1 Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2 Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3 Вспомогательные устройства и материалы

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, владеющий методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1 Кондиционирование колонки

Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 — 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2 Кондиционирование патронов

7.2.1. Кондиционирование патрона № 1 с гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными группами. Патрон промывают 2,5 см3 ацетонитрила, затем 3 см3 воды, подкисленной муравьиной кислотой до pH 2.

7.2.2. Кондиционирование патрона № 2 с гидрофильным слабокислотным сорбентом с постоянной активностью. Патрон последовательно промывают 2,5 см3 смеси № 6, затем 3 см3 смеси № 4.

7.3 Приготовление растворов

7.3.1. Фаза A — 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле: 1 см3 муравьиной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3 и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.3.2. Фаза B — 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде: 1 см3 муравьиной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3 и доводят объем до метки бидистиллированной водой.

7.3.3. Подвижная фаза для растворения проб: смешивают фазу A и фазу B в соотношении 1:1 по объему.

7.4 Приготовление основных и градуировочных растворов

7.4.1 Приготовление основных растворов валифеналата и его

метаболитов

7.4.1.1. Основной раствор валифеналата с концентрацией 1,0 мг/см3: точную навеску валифеналата (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.

7.4.1.2. Основной раствор IR-5839 с концентрацией 1,0 мг/см3: точную навеску IR-5839 (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.

7.4.1.3. Основной раствор 4-хлорбензойной кислоты с концентрацией 1,0 мг/см3: точную навеску 4-хлорбензойной кислоты (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.

7.4.2 Приготовление градуировочных растворов валифеналата

и его метаболитов

Градуировочные растворы с концентрациями 2, 5, 10, 50 и 100 нг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя в качестве растворителя подвижную фазу.

7.4.2.1. Раствор валифеналата № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,1 см3 основного раствора валифеналата и доводят до метки ацетонитрилом.

7.4.2.2. Раствор IR-5839 № 2 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,1 см3 основного раствора IR-5839 и доводят до метки ацетонитрилом.

7.4.2.3. Раствор 4-хлорбензойной кислоты № 3 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,1 см3 основного раствора 4-хлорбензойной кислоты и доводят до метки ацетонитрилом.

7.4.2.4. Раствор № 4 с концентрацией 100 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают по 1,0 см3 раствора № 1, № 2 и № 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.5. Раствор № 5 с концентрацией 50 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают по 0,5 см3 раствора № 1, № 2 и № 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.6. Раствор № 6 с концентрацией 10 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1,0 см3 раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.7. Раствор № 7 с концентрацией 5 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.8. Раствор № 8 с концентрацией 2 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,2 см3 раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.9. Раствор валифеналата № 9 с концентрацией 100 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.10. Раствор валифеналата № 10 с концентрацией 50 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.11. Раствор валифеналата № 11 с концентрацией 10 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1,0 см3 раствора № 9 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.12. Раствор валифеналата № 12 с концентрацией 5 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 9 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.13. Раствор валифеналата № 13 с концентрацией 2 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,2 см3 раствора № 9 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение 7 дней, градуировочные растворы использовать в день приготовления.

При изучении полноты определения валифеналата и его метаболитов используют растворы веществ, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.5 Построение градуировочного графика

Для каждого из градуировочных растворов регистрируют хроматограммы в условиях, указанных в п. 9.7, и определяют абсолютное время удерживания и площадь пиков валифеналата, IR-5839 и 4-хлорбензойной кислоты (в усл. ед.), соответствующих MRM (399 \rightarrow 116) , MRM (385 \rightarrow 144) , и MRM (155 \rightarrow 111) соответственно. Одновременно в режиме автоматической обработки данных определяют соотношение площадей пиков для валифеналата, соответствующих MRM (399 \rightarrow 155) и MRM (399 \rightarrow 144) (S155/S144); для IR-5839 — MRM (385 \rightarrow 186) и MRM (385 \rightarrow 116) (S186/S116), для 4-хлорбензойной кислоты — MRM (155 \rightarrow 35) .

Для построения градуировочного графика (площадь пика — концентрация валифеналата или его метаболитов в растворе) в хроматограф вводят по 2 мм3 градуировочных растворов (не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций) в условиях, указанных в п. 9.7. Затем измеряют площади пиков, и строят график зависимости площади пика от концентрации в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

C = KS, где

S — площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

\frac{|\text{С } - \text{С}_{K}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.} , где

C — аттестованное значение массовой концентрации валифеналата или его метаболитов в градуировочном растворе;

Cк — результат контрольного измерения массовой концентрации валифеналата или его метаболитов в градуировочном растворе;

\lambda_{\text{контр}.} — норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( \lambda_{\text{контр}.} = 10\% при P = 0,95).

7.6 Проверка хроматографического поведения валифеналата

и его метаболитов на патроне № 1

В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают по 1 см3 стандартных растворов валифеналата и его метаболитов с концентрацией 1 мкг/см3. Растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 1 см3 ацетонитрила, добавляют 9 см3 воды, подкисленной муравьиной кислотой до pH 2, и переносят на подготовленный патрон (п. 7.2.1). Промывают патрон 3 см3 смеси № 1, 3 см3 смеси № 2, элюат отбрасывают. Затем элюируют валифеналат и метаболиты смесью № 3 со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по п. 9.7.

Фракции, содержащие валифеналат и метаболиты, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.

7.7 Проверка хроматографического поведения валифеналата

и его метаболитов на патроне № 2

В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают по 1 см3 стандартных растворов валифеналата и его метаболитов с концентрацией 1 мкг/см3. Растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 1 см3 смеси № 4 и переносят на подготовленный патрон (п. 7.2.2). Колбу обмывают 1 см3 смеси № 4 и смыв тоже переносят на патрон. Промывают патрон 5 см3 смеси № 5, элюат отбрасывают. Затем элюируют валифеналат и метаболиты смесью № 6 со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по п. 9.7.

Фракции, содержащие валифеналат и метаболиты, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.

Примечание. Проверку хроматографического поведения веществ на патронах для ТФЭ следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ Р 31861-12 «Вода. Общие требования к отбору проб»; ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб»; ГОСТ 32786-14 «Виноград столовый свежий. Технические условия»; ГОСТ 7194-81 «Картофель свежий. Правила приемки и методы определения качества». Отобранные пробы хранят до анализа в герметичной п/э упаковке в морозильной камере при -18 °C. Пробы картофеля перед анализом, не размораживая, измельчают на терке или в гомогенизаторе.

Пробы ягод винограда хранят до анализа в герметично закрытом двойном полиэтиленовом пакете в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 6 месяцев. Пробы виноградного сока хранят до анализа в герметичной таре в морозильной камере при температуре -18 °C в течение месяца, в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в стеклянной таре с притертой пробкой в течение недели.

Пробы воды хранят в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в герметично закрытой стеклянной таре не более месяца.

Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

9. Проведение определения

9.1 Определение валифеналата, IR-5839 и 4-хлорбензойной

кислоты в воде

Из пробы воды (100 мл), подкисленной до pH 2 муравьиной кислотой, отбирают 10 мл и наносят на подготовленный патрон № 1 (п. 7.2.1). Промывают патрон 3 см3 смеси № 1 и 3 см3 смеси № 2. Элюируют 6 см3 смеси № 3, элюат собирают в круглодонную колбу емкостью 25 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по п. 9.7.

9.2 Определение валифеналата, IR-5839 и 4-хлорбензойной

кислоты в почве

Навеску почвы (10 г) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, добавляют 3 см3 воды, 8 г безводного сернокислого натрия, 2 г натрия хлористого и 30 см3 ацетонитрила. Пробирку плотно закрывают, помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют. Экстракт декантируют. Экстракцию повторяют еще раз с 20 см3 ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту, соответствующую 1 г, переносят в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток подвергают очистке на патроне № 1 по п. 9.5.

9.3 Определение валифеналата в ботве, клубнях картофеля

и винограде

Навеску растительного материала (10 г) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, добавляют 8 г безводного сернокислого натрия, 2 г натрия хлористого и 30 см3 ацетонитрила. Пробирку плотно закрывают, помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют. Экстракт декантируют. Экстракцию повторяют еще раз с 20 см3 ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту, соответствующую 1 г, переносят в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток подвергают очистке на патроне № 2 по п. 9.6.

9.4 Определение валифеналата в виноградном соке

Из представительной пробы сока отбирают 1 г, добавляют 8 см3 воды, 1 см3 ацетонитрила и наносят на подготовленный патрон № 1 (п. 7.2.1). Промывают патрон 5 см3 смеси № 2. Элюируют валифеналат 5 см3 смеси № 3, элюат собирают в круглодонную колбу емкостью 25 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по п. 9.7.

9.5 Очистка на патроне № 1

Сухой остаток, полученный по п. 9.2, растворяют в 1 см3 ацетонитрила, добавляют 9 см3 воды и наносят на предварительно кондиционированный патрон (п. 7.2.1). Промывают патрон 3 см3 смеси № 1 и 3 см3 смеси № 2. Элюируют 6 см3 смеси № 3, элюат собирают в круглодонную колбу емкостью 25 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по п. 9.7.

9.6 Очистка на патроне № 2

Сухой остаток, полученный по п. 9.3, растворяют в 1 см3 смеси № 4 и наносят на предварительно кондиционированный патрон (п. 7.2.2). Колбу ополаскивают еще 1 см3 смеси № 4, который также наносят на патрон. Патрон промывают 6 см3 смеси № 5, элюат отбрасывают. Валифеналат элюируют 5 см3 смеси № 6, элюат собирают, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C, остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по п. 9.7.

9.7 Условия хроматографирования

9.7.1 Хроматографические условия измерений содержания

валифеналата и его метаболитов

Хромато-масс-спектрометр, состоящий из высокоэффективного жидкостного хроматографа и масс-спектрометра с тройным квадруполем.

Аналитическая колонка, заполненная сорбентом C18 (100 x 2,1) мм, 2,2 мкм. Температура колонки (45 +/- 1) °C. Скорость потока элюента 0,3 см3/мин. Объем вводимой пробы 2 мм3.

Режим элюирования для валифеналата и его метаболитов — градиентный:

Время удерживания 4-хлорбензойной кислоты — (2,7 +/- 0,1) мин; IR-5839 — (3,0 +/- 0,1) мин; валифеналата — (3,5 +/- 0,1) мин.

Режим элюирования для валифеналата — градиентный:

Время удерживания валифеналата — (2,9 +/- 0,1) мин.

9.7.2 Масс-спектрометрические условия измерений

валифеналата и его метаболитов

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание валифеналата или его метаболитов в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

X = S_{x} \cdot K \cdot \frac{V}{P} , где

Sx — площадь пика аналита на хроматограмме испытуемого образца, (усл. ед.);

K — градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V — объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;

P — навеска анализируемого образца, г.

Содержание остаточных количеств валифеналата или его метаболитов в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор валифеналата или его метаболитов с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

Суммарное содержание валифеналата в воде или почве ( X_{\Sigma Val} , мг/дм3 или мг/кг) вычисляют с учетом метаболитов:

X_{\Sigma Val} = X_{Val} + 1,04X_{IR - 5839} + 2,55X_{PCBA} , где

XVal — содержание валифеналата в пробе, мг/дм3 или мг/кг;

XIR-5839 — содержание IR-5839 в пробе, мг/дм3 или мг/кг;

XPCBA — содержание PCBA в пробе, мг/дм3 или мг/кг.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq r , где

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (r = 2,8\sigma_{r}) .

При невыполнении этого условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, где

\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее нижней границы определения» (например: менее 0,01 мг/кг, где 0,01 мг/кг — предел обнаружения валифеналата в винограде).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

C_{\partial} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime} , где

\pm \Delta_{\text{л},X} ( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:

\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

K_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\partial} , где

\overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} (1)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|Kк| <= K, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq R , где (3)

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.