---
title: "\"МУК 4.1.3407-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств клотианидина в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3407-16"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3407-16"
---

## "МУК 4.1.3407-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств клотианидина в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3407-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств клотианидина в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 29.12.2016)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
29 декабря 2016 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КЛОТИАНИДИНА В ЯБЛОКАХ,**
**ВИНОГРАДЕ, ЯБЛОЧНОМ И ВИНОГРАДНОМ СОКАХ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3407-16**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийский НИИ защиты растений" (В.И. Долженко, А.С. Комарова, В.В. Человечкова) и ООО "Инновационный центр защиты растений" (И.А. Цибульская, Т.Д. Черменская).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. N 2).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2016 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Свидетельство о метрологической аттестации N 01.5.04.230/01.00043/2016.

<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации клотианидина в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Клотианидин
<a id="p100013"></a>(Е)-1-(2-хлор-1,3-тиазол-5-илметил)-3-метил-2-нитрогуанидин (IUPAC).

<a id="p100014"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/YEBVzCPV/img_0.png) 

<a id="p100015"></a>Молекулярная масса: 249,7.
<a id="p100016"></a>Брутто формула: C<sub>6</sub>H<sub>8</sub>ClN<sub>5</sub>O<sub>2</sub>S.
<a id="p100017"></a>Клотианидин представляет собой порошок без цвета и запаха. Температура плавления 176,8 °C. Давление пара - 1,3 x 10-4 мПа (25 °C). Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода Kow lgP = 0,7 (25 °C), pKa = 11,09 (20 °C).
<a id="p100018"></a>Растворимость в воде (20 °C) - 0,304 (pH 4), 0,34 (pH 10) г/дм3. Растворимость (г/дм3, 25 °C) в гептане < 0,00104, в ксилоле - 0,028, дихлорметане - 1,32, метаноле - 6,26, октаноле - 0,938, ацетоне - 15,2, этилацетате - 2,03.
<a id="p100019"></a>Краткая токсикологическая характеристика. Острая оральная токсичность для крыс LD50 > 5 000 мг/кг, ингаляционная токсичность для крыс LC50 (4 ч) > 6,1 мг/л. Не мутаген, не онкоген для крыс и мышей, не тератоген для крыс и кроликов. При прямом контакте опасен для пчел, не опасен при использовании в качестве протравителя и в случае обработок не непосредственно на цветущие культуры.
<a id="p100020"></a>Область применения. Инсектицид из группы неоникотиноидов для борьбы с сосущими и грызущими насекомыми на рисе, кукурузе, рапсе, овощных и фруктовых культурах. Используется для протравливания семян, обработки почвы и вегетирующей культуры.


## 1. <a id="p100021"></a>Погрешность измерений


<a id="p100022"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100023"></a>Таблица 1

<a id="p100024"></a>Метрологические параметры


<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="13%"><col width="12%"><col width="15%"><col width="15%"><col width="16%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100025"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100026"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100027"></a>Показатель точности <a href="#p100060">&lt;*&gt;</a> (границы относительной погрешности (P = 0,95), $\pm \delta$ , %</td><td><a id="p100028"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100029"></a>Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100030"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %</td><td><a id="p100031"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)</td></tr>
<tr><td><a id="p100032"></a>Яблоки</td><td><a id="p100033"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100034"></a>23</td><td><a id="p100035"></a>7</td><td><a id="p100036"></a>11</td><td><a id="p100037"></a>20</td><td><a id="p100038"></a>31</td></tr>
<tr><td><a id="p100039"></a>Виноград</td><td><a id="p100040"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100041"></a>23</td><td><a id="p100042"></a>7</td><td><a id="p100043"></a>11</td><td><a id="p100044"></a>20</td><td><a id="p100045"></a>31</td></tr>
<tr><td><a id="p100046"></a>Яблочный сок</td><td><a id="p100047"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100048"></a>23</td><td><a id="p100049"></a>7</td><td><a id="p100050"></a>11</td><td><a id="p100051"></a>20</td><td><a id="p100052"></a>31</td></tr>
<tr><td><a id="p100053"></a>Виноградный сок</td><td><a id="p100054"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100055"></a>23</td><td><a id="p100056"></a>7</td><td><a id="p100057"></a>11</td><td><a id="p100058"></a>20</td><td><a id="p100059"></a>31</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100060"></a>&lt;*&gt; Соответствует расширенной неопределенности Uотн. (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2</td></tr>
</table>


<a id="p100061"></a>Таблица 2

<a id="p100062"></a>Полнота извлечения клотианидина, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для n = 20,
P = 0,95


| <a id="p100063"></a>Анализируемый объект | <a id="p100064"></a>Предел обнаружения, мг/кг | <a id="p100065"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | <a id="p100066"></a>Полнота извлечения, % | <a id="p100067"></a>Стандартное отклонение, % | <a id="p100068"></a>Доверительный интервал среднего результата, +/- % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100069"></a>Яблоки | <a id="p100070"></a>0,01 | <a id="p100071"></a>0,01 - 0,1 | <a id="p100072"></a>89,8 | <a id="p100073"></a>5,59 | <a id="p100074"></a>2,45 |
| <a id="p100075"></a>Виноград | <a id="p100076"></a>0,01 | <a id="p100077"></a>0,01 - 0,1 | <a id="p100078"></a>89,3 | <a id="p100079"></a>6,05 | <a id="p100080"></a>2,65 |
| <a id="p100081"></a>Яблочный сок | <a id="p100082"></a>0,01 | <a id="p100083"></a>0,01 - 0,1 | <a id="p100084"></a>91,5 | <a id="p100085"></a>5,83 | <a id="p100086"></a>2,56 |
| <a id="p100087"></a>Виноградный сок | <a id="p100088"></a>0,01 | <a id="p100089"></a>0,01 - 0,1 | <a id="p100090"></a>84,4 | <a id="p100091"></a>2,49 | <a id="p100092"></a>1,09 |



## 2. <a id="p100093"></a>Метод измерений


<a id="p100094"></a>Методика основана на определении клотианидина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового (УФ) детектора после извлечения из образцов водным ацетоном, последующей очистки в системе несмешивающихся растворителей и на патроне для твердофазной экстракции.
<a id="p100095"></a>Идентификация клотианидина проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100096"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.


## 3. <a id="p100097"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы



#### <a id="p100098"></a>3.1 Средства измерений



| <a id="p100099"></a>Весы лабораторные, наибольший предел взвешивания 150 г, предел допустимой погрешности 5 мг |  |
| --- | --- |
| <a id="p100100"></a>Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 81/210 г, предел допустимой погрешности 0,1/0,3 мг |  |
| <a id="p100101"></a>Жидкостный хроматограф с УФ-детектором, снабженном дегазатором и термостатом колонки |  |
| <a id="p100102"></a>Колбы мерные на 10, 100 см3 | <a id="p100103"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100104"></a>Микродозаторы одноканальные переменного объема от 100 до 1 000 мм3 и от 1 до 5 см3 |  |
| <a id="p100105"></a>Цилиндры мерные на 10, 50 и 100 см3 | <a id="p100106"></a>ГОСТ 23932-90 |


<a id="p100107"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100108"></a>3.2 Реактивы



| <a id="p100109"></a>Ацетон, осч | <a id="p100110"></a>ТУ 2633-048-7811997 |
| --- | --- |
| <a id="p100111"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ | <a id="p100112"></a>ТУ 2634-002-04715285-12 |
| <a id="p100113"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) | <a id="p100114"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100115"></a>Гексан, чда | <a id="p100116"></a>ТУ 2631-001-54260861-13 |
| <a id="p100117"></a>Кислота ортофосфорная 98%, хч | <a id="p100118"></a>ГОСТ 6552-80 |
| <a id="p100119"></a>Клотианидин с содержанием основного вещества 99,9% |  |
| <a id="p100120"></a>Натрий сернокислый безводный, хч | <a id="p100121"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) |
| <a id="p100122"></a>Натрий хлористый, чда | <a id="p100123"></a>ГОСТ 4233-77 |
| <a id="p100124"></a>Патроны для твердофазной экстракции, заполненные гидрофильным слабокислотным сорбентом на основе силикагеля, с постоянной активностью, 0,6 г | <a id="p100125"></a>ТУ 4215-002-0545-931-94 |
| <a id="p100126"></a>Смесь N 1: гексан-этилацетат в соотношении 1:1 по объему |  |
| <a id="p100127"></a>Смесь N 2: ацетон-вода в соотношении 3:1 по объему |  |
| <a id="p100128"></a>Смесь N 3: ацетонитрил-0,005М ортофосфорная кислота в соотношении 20:80 по объему |  |
| <a id="p100129"></a>Хлористый метилен, хч | <a id="p100130"></a>ТУ 2631-019-4449317 |
| <a id="p100131"></a>Этилацетат, хч | <a id="p100132"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |


<a id="p100133"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


#### <a id="p100134"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы



| <a id="p100135"></a>Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100136"></a>Баня ультразвуковая с рабочей частотой 37 кГц |  |
| <a id="p100137"></a>Воронки делительные вместимостью 250 см3 | <a id="p100138"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100139"></a>Воронки химические диаметром 56 мм | <a id="p100140"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100141"></a>Колбы конические плоскодонные вместимостью 100 см3 | <a id="p100142"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100143"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 100 см3 | <a id="p100144"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100145"></a>Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар |  |


<a id="p100146"></a>*Примечание.* Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100147"></a>Требования безопасности


<a id="p100148"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100149"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
<a id="p100150"></a>Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-15.


## 5. <a id="p100151"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100152"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, владеющий методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, имеющий опыт работы, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100225).


## 6. <a id="p100153"></a>Условия измерений


<a id="p100154"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100155"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100156"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100157"></a>Подготовка к определению



#### <a id="p100158"></a>7.1 Кондиционирование колонки


<a id="p100159"></a>Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (смесь N 3) (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.


#### <a id="p100160"></a>7.2 Кондиционирование патрона для твердофазной экстракции


<a id="p100161"></a>Патрон промывают 2 см3 этилацетата, затем 3 см3 смеси N 1.


#### <a id="p100162"></a>7.3 Приготовление растворов


<a id="p100163"></a>7.3.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98%-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в деионизированной воде и доводят объем до метки.
<a id="p100164"></a>7.3.2. Насыщенный раствор хлористого натрия: в плоскодонную колбу вместимостью 2 дм3 помещают 400 г хлористого натрия, добавляют 1 дм3 теплой дистиллированной воды и перемешивают до окончания растворения соли. Полученный раствор сливают декантацией в чистую колбу, не растворившийся остаток соли отбрасывают.


#### <a id="p100165"></a>7.4 Приготовление основного и градуировочных растворов


<a id="p100166"></a>7.4.1. Основной раствор клотианидина с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску клотианидина (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
<a id="p100167"></a>7.4.2. Приготовление градуировочных растворов. Градуировочные растворы с концентрациями клотианидина 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя исходный раствор и смесь N 3, а также ацетонитрил).
<a id="p100168"></a>Исходный раствор с концентрацией 2,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,4 см3 основного раствора и доводят до метки смесью N 3.
<a id="p100169"></a>7.4.2.1. Раствор N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 исходного раствора и доводят объем до метки смесью N 3.
<a id="p100170"></a>7.4.2.2. Раствор N 2 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2,5 см3 исходного раствора и доводят объем до метки смесью N 3.
<a id="p100171"></a>7.4.2.3. Раствор N 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 исходного раствора и доводят объем до метки смесью N 3.
<a id="p100172"></a>7.4.2.4. Раствор N 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 исходного раствора и доводят объем до метки смесью N 3.
<a id="p100173"></a>7.4.2.5. Раствор N 5 с концентрацией 1 мкг/см3 (для проверки поведения клотианидина на патроне для ТФЭ): в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора с концентрацией 0,5 мг/см3 и доводят до метки ацетонитрилом.
<a id="p100174"></a>Основной и исходный раствор клотианидина можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 6 месяцев, градуировочные растворы - в течение недели.
<a id="p100175"></a>При изучении полноты определения клотианидина используют ацетонитрильные растворы веществ, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.


#### <a id="p100176"></a>7.5 Построение градуировочного графика


<a id="p100177"></a>Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация клотианидина в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации клотианидина в градуировочном растворе.
<a id="p100178"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100179"></a>C = KS, где

<a id="p100180"></a>S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100181"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100182"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100183"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<a id="p100184"></a> $\frac{|C - C_{\text{к}}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.}$ , где

<a id="p100185"></a>C - аттестованное значение массовой концентрации клотианидина в градуировочном растворе;
<a id="p100186"></a>Cк - результат контрольного измерения массовой концентрации клотианидина в градуировочном растворе;
<a id="p100187"></a> $\lambda_{\text{контр}.}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( $\lambda_{\text{контр}.} = 10\%$ при P = 0,95).


#### <a id="p100188"></a>7.6 Проверка хроматографического поведения клотианидина

на патроне для твердофазной экстракции

<a id="p100189"></a>В круглодонную колбу емкостью 25 см3 отбирают 1 см3 стандартного раствора клотианидина в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3, приготовленного по [п. 7.4.2.5](#p100173). Отдувают растворитель током воздуха. Остаток растворяют в 1 см3 смеси N 1 и переносят на подготовленный патрон [(п. 7.2)](#p100160). Колбу обмывают 1 см3 смеси N 1 и смыв тоже переносят на патрон. Промывают патрон 10 см3 смеси N 1, элюат отбрасывают. Затем элюируют 10 см3 этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по [п. 9.2](#p100199).
<a id="p100190"></a>Фракции, содержащие клотианидин, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100191"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.


## 8. <a id="p100192"></a>Отбор проб и хранение


<a id="p100193"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ 32786-14](https://bukva.ai/docs/gost-32786-2014) "Виноград столовый свежий. Технические условия" и с [ГОСТ 27572-87](https://bukva.ai/docs/gost-27572-87) "Яблоки свежие для промышленной переработки". Пробы ягод винограда и яблок хранят до анализа в герметично закрытом двойном полиэтиленовом пакете в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение 6 месяцев. Пробы виноградного и яблочного сока хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в стеклянной таре с притертой пробкой в течение недели.


## 9. <a id="p100194"></a>Проведение определения



#### <a id="p100195"></a>9.1 Подготовка проб


<a id="p100196"></a>9.1.1. Экстракция клотианидина из яблок и винограда. Навеску 10 г измельченной матрицы помещают в плоскодонную колбу вместимостью 100 см3 и дважды порциями по 30 см3 экстрагируют смесью N 2 в ультразвуковой бане по 10 мин. Экстракт пропускают через химическую воронку, заполненную безводным сульфатом натрия (3 г), и упаривают до водного остатка на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 40 °C. Водный остаток доводят до 50 см3 насыщенным раствором хлористого натрия, переносят в делительную воронку и дважды порциями по 15 см3 экстрагируют хлористым метиленом. Объединенные органические фракции пропускают через химическую воронку, заполненную безводным сульфатом натрия (3 г) и упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 40 °C. Сухой остаток чистят на патроне для твердофазной экстракции на основе силикагеля [(п. 9.1.3)](#p100198).
<a id="p100197"></a>9.1.2. Экстракция клотианидина из яблочного и виноградного соков. Навеску 10 г сока доводят до 50 см3 насыщенным раствором хлористого натрия, переносят в делительную воронку и дважды порциями по 15 см3 экстрагируют хлористым метиленом. Объединенные органические фракции пропускают через химическую воронку, заполненную безводным сульфатом натрия (3 г), и упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 40 °C. Сухой остаток чистят на патроне для твердофазной экстракции на основе силикагеля (п. 9.1.3).
<a id="p100198"></a>9.1.3. Очистка на патроне для твердофазной экстракции. Сухой остаток, полученный по [п. 9.1.1](#p100196) и [п. 9.1.2](#p100197), растворяют в 1 см3 смеси N 1, наносят на предварительно кондиционированный патрон [(п. 7.2)](#p100160), колбу ополаскивают 1 см3 смеси N 1 и так же наносят на патрон. Патрон промывают 10 см3 смеси N 1, элюат отбрасывают. Клотианидин элюируют 8 см3 этилацетата, элюат собирают, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 вводят в хроматограф.


#### <a id="p100199"></a>9.2 Условия хроматографирования


<a id="p100200"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф с УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (A) и 0,005 М ортофосфорной кислоты (B) в градиентном режиме: 0 - 1 мин - 5% A, 1 - 8 мин - увеличение A от 5 до 30%, 8 - 10 мин - 30% A, 10 - 10,1 мин - уменьшение A от 30 до 5%, 10,1 - 13 мин - 5% A. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 270 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3.


## 10. <a id="p100201"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100202"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание клотианидина в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

<a id="p100203"></a> $X = S_{x} \cdot K \cdot \frac{V}{P}$ , где

<a id="p100204"></a>Sx - площадь пика клотианидина на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);
<a id="p100205"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100206"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
<a id="p100207"></a>P - навеска анализируемого образца, г.
<a id="p100208"></a>Содержание остаточных количеств клотианидина в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100209"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор клотианидина с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют смесью N 3.


## 11. <a id="p100210"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100211"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

<a id="p100212"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , где

<a id="p100213"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100214"></a>r - значение предела повторяемости $(r = 2,8\sigma_{r})$ .
<a id="p100215"></a>При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100216"></a>Оформление результатов


<a id="p100217"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100218"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ , мг/кг при вероятности P = 0,95, где

<a id="p100219"></a> $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100220"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100221"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100}$ , где

<a id="p100222"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100024)), %.
<a id="p100223"></a>В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100224"></a>"содержание вещества в пробе менее нижней границы определения" (например: менее 0,01 мг/кг, где 0,01 мг/кг - предел обнаружения клотианидина в яблоках).


## 13. <a id="p100225"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100226"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100227"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100228"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100229"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100230"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X'}$ , где

<a id="p100231"></a> $\pm \Delta_{\text{л},X}$ $( \pm \Delta_{\text{л},X'})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг, при этом:

<a id="p100232"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta$ , где

<a id="p100233"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100234"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100}$ , где

<a id="p100235"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100024)), %.
<a id="p100236"></a>Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

<a id="p100237"></a> $K_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}}$ , где

<a id="p100238"></a> $\overline{X}\prime$ , $\overline{X}$ , Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100210)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
<a id="p100239"></a>Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

<a id="p100240"></a> $K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X'}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}$ (1)

<a id="p100241"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).
<a id="p100242"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100243"></a>|Kк| <= K, (2)

<a id="p100244"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100245"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100243) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100243) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
<a id="p100246"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100247"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

<a id="p100248"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R$ , где (3)

<a id="p100249"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
<a id="p100250"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100024)), %.



<a id="p100251"></a>

---