---
title: "\"МУК 4.1.3328-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуопиколида в семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3328-15"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3328-15"
---

## "МУК 4.1.3328-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуопиколида в семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3328-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуопиколида в семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 28.12.2015)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
28 декабря 2015 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУОПИКОЛИДА В СЕМЕНАХ,**
**МАСЛЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ**
**ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3328-15**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии" (Л.В. Дубовая, А.М. Макеев).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 17 декабря 2015 г. N 2).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 28 декабря 2015 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Свидетельство о метрологической аттестации от 17.07.2015 N РОСС RU.0001.310430/0238.17.07.15.

<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовых концентраций флуопиколида в семенах и масле подсолнечника в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг, в зеленой массе - в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Название действующего вещества по ИСО: флуопиколид.
<a id="p100013"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 2,6-дихлор-N-[3-хлор-5-(трифторметил)-2-пиридилметил]бензамид.
<a id="p100014"></a>Структурная формула:

<a id="p100015"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/Pt8CkF7N/img_0.png) 

<a id="p100016"></a>Эмпирическая формула: C<sub>14</sub>H<sub>8</sub>Cl<sub>3</sub>F<sub>3</sub>N<sub>2</sub>O.
<a id="p100017"></a>Молекулярная масса: 383,6.
<a id="p100018"></a>Бежевое твердое вещество со слабым фенольным запахом. Температура плавления: 150 °C. Давление паров при 20 °C: 3,03 x 10-4 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: KOW log P = 2,9. Растворимость (г/дм3) при 20 °C: ацетон - 74,7; этилацетат - 37,7; дихлорметан - 126; этанол - 19,2; н-гексан - 0,2; растворимость в воде - 0,0028.
<a id="p100019"></a>Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой и щелочной средах (DT50 = 365 дней).
<a id="p100020"></a>В присутствии света в водных фотолитических условиях флуопиколид достаточно устойчив с периодом полураспада 64,2 дня.
<a id="p100021"></a>Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - более 5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 5 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - более 5 160 мг/м3 воздуха.
<a id="p100022"></a>Флуопиколид не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз, не обладает эмбриотоксическим или тератогенным действием. LC50 для рыб - 0,75 мг/дм3 (96 ч). Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей, дафний и почвенных микроорганизмов.
<a id="p100023"></a>Область применения препарата. Флуопиколид - контактно-системный фунгицид, проявляющий активность против грибов классов Оомицеты и Аскомицеты.
<a id="p100024"></a>Применяется в России в качестве фунгицида системного действия в составе смесевых препаратов для обработки посадок картофеля против фитофтороза при норме расхода 75 - 100 г д.в./га и четырехкратной обработке за сезон.


## 1. <a id="p100025"></a>Погрешность измерений


<a id="p100026"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в [табл. 1](#p100028) для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100027"></a>Таблица 1

<a id="p100028"></a>Метрологические параметры


| <a id="p100029"></a>Анализируемый объект | <a id="p100030"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | <a id="p100031"></a>Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), $\pm \delta$ , % | <a id="p100032"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , % | <a id="p100033"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , % | <a id="p100034"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, % | <a id="p100035"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % (P = 0,95) |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100036"></a>Зеленая масса подсолнечника | <a id="p100037"></a>0,05 - 0,5 | <a id="p100038"></a>50 | <a id="p100039"></a>2,7 | <a id="p100040"></a>3,8 | <a id="p100041"></a>7,6 | <a id="p100042"></a>10,6 |
| <a id="p100043"></a>Семена подсолнечника | <a id="p100044"></a>0,02 - 0,2 | <a id="p100045"></a>50 | <a id="p100046"></a>2,6 | <a id="p100047"></a>3,6 | <a id="p100048"></a>7,3 | <a id="p100049"></a>10,2 |
| <a id="p100050"></a>Масло подсолнечника | <a id="p100051"></a>0,02 - 0,2 | <a id="p100052"></a>50 | <a id="p100053"></a>2,9 | <a id="p100054"></a>4,1 | <a id="p100055"></a>8,1 | <a id="p100056"></a>11,5 |


<a id="p100057"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в [табл. 2](#p100059).

<a id="p100058"></a>Таблица 2

<a id="p100059"></a>Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата


<table>
<colgroup><col width="20%"><col width="14%"><col width="19%"><col width="15%"><col width="14%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100060"></a>Анализируемый объект</td><td colspan="5"><a id="p100061"></a>Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td><a id="p100062"></a>предел обнаружения, мг/кг</td><td><a id="p100063"></a>диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100064"></a>средняя полнота извлечения, %</td><td><a id="p100065"></a>стандартное отклонение, %</td><td><a id="p100066"></a>доверительный интервал среднего результата, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100067"></a>Зеленая масса подсолнечника</td><td><a id="p100068"></a>0,05</td><td><a id="p100069"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100070"></a>87,4</td><td><a id="p100071"></a>3,06</td><td><a id="p100072"></a>+/- 1,62</td></tr>
<tr><td><a id="p100073"></a>Семена подсолнечника</td><td><a id="p100074"></a>0,02</td><td><a id="p100075"></a>0,02 - 0,2</td><td><a id="p100076"></a>86,1</td><td><a id="p100077"></a>2,77</td><td><a id="p100078"></a>+/- 1,47</td></tr>
<tr><td><a id="p100079"></a>Масло подсолнечника</td><td><a id="p100080"></a>0,02</td><td><a id="p100081"></a>0,02 - 0,2</td><td><a id="p100082"></a>84,5</td><td><a id="p100083"></a>3,06</td><td><a id="p100084"></a>+/- 1,63</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100085"></a>Метод измерений


<a id="p100086"></a>Методика основана на определении флуопиколида методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора после извлечения вещества из растительных образцов водным раствором метанола, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
<a id="p100087"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
<a id="p100088"></a>Избирательность метода обеспечивается подбором хроматографической колонки и условий программирования температуры колонки.


## 3. <a id="p100089"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



#### <a id="p100090"></a>3.1 Средства измерений



| <a id="p100091"></a>Газовый хроматограф с электронозахватным детектором |  |
| --- | --- |
| <a id="p100092"></a>Весы аналитические с пределом взвешивания до 110 г и допустимой погрешностью 0,0001 г | <a id="p100093"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100094"></a>Весы лабораторные с пределом взвешивания до 160 г и допустимой погрешностью 0,005 г | <a id="p100095"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100096"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2 | <a id="p100097"></a>ГОСТ 1770-74 |
| <a id="p100098"></a>Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5; 1-2-2-10 | <a id="p100099"></a>ГОСТ 29227-91 |
| <a id="p100100"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 | <a id="p100101"></a>ГОСТ 1770-74 |
| <a id="p100102"></a>Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-250; 1-500; 1-1000 | <a id="p100103"></a>ГОСТ 1770-74 |
| <a id="p100104"></a>Микрошприц для ввода образцов для газового хроматографа вместимостью 1 - 10 мм3 | <a id="p100105"></a>ТУ 64-1-2850 |


<a id="p100106"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100107"></a>3.2 Реактивы



| <a id="p100108"></a>Флуопиколид, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,2% |  |
| --- | --- |
| <a id="p100109"></a>Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистиллированная) | <a id="p100110"></a>ГОСТ Р 52501-05 |
| <a id="p100111"></a>Гелий газообразный, очищенный (или азот) | <a id="p100112"></a>ТУ 0271-135-31323949-05 |
| <a id="p100113"></a>н-Гексан, хч | <a id="p100114"></a>ТУ 2631-003-05807999-98 |
| <a id="p100115"></a>Калий углекислый, хч | <a id="p100116"></a>[ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76) |
| <a id="p100117"></a>Кальция хлорид, хч | <a id="p100118"></a>ГОСТ 4161-77 |
| <a id="p100119"></a>Кислота серная концентрированная, хч | <a id="p100120"></a>ГОСТ 4204-77 |
| <a id="p100121"></a>Натрия сульфат безводный, хч | <a id="p100122"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) |
| <a id="p100123"></a>Натрий углекислый, хч | <a id="p100124"></a>ГОСТ 83-79 |
| <a id="p100125"></a>Натрия хлорид, хч | <a id="p100126"></a>ГОСТ 4233-77 |
| <a id="p100127"></a>Спирт метиловый (метанол), хч | <a id="p100128"></a>ГОСТ 6995-77 |
| <a id="p100129"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч | <a id="p100130"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |


<a id="p100131"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.


#### <a id="p100132"></a>3.3 Вспомогательные устройства, материалы



| <a id="p100133"></a>Аппарат для встряхивания проб | <a id="p100134"></a>ТУ 64-1-2851-78 |
| --- | --- |
| <a id="p100135"></a>Ванна ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц |  |
| <a id="p100136"></a>Воронка Бюхнера | <a id="p100137"></a>ГОСТ 9147-80 |
| <a id="p100138"></a>Воронки делительные вместимостью 100 и 250 см3 | <a id="p100139"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100140"></a>Воронки лабораторные, стеклянные | <a id="p100141"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100142"></a>Колба Бунзена вместимостью 250 см3 | <a id="p100143"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100144"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 50, 100 см3 | <a id="p100145"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100146"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 250 см3 | <a id="p100147"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100148"></a>Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с нанесенной пленкой диметилполисилоксана толщиной 0,5 мкм |  |
| <a id="p100149"></a>Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм |  |
| <a id="p100150"></a>Мельница электрическая лабораторная | <a id="p100151"></a>ТУ 46-22-236-79 |
| <a id="p100152"></a>Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар |  |
| <a id="p100153"></a>Стаканы химические вместимостью 100 и 250 см3 | <a id="p100154"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100155"></a>Стекловата |  |
| <a id="p100156"></a>Силикагель для колоночной хроматографии с размером частиц 0,063 - 0,200 мм и размером пор 60А |  |
| <a id="p100157"></a>Установка для перегонки растворителей с дефлегматором | <a id="p100158"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) (ИСО 641-75) |
| <a id="p100159"></a>Фильтры бумажные средней плотности | <a id="p100160"></a>ТУ 6-09-1678-86 |


<a id="p100161"></a>*Примечание.* Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100162"></a>Требования безопасности


<a id="p100163"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
<a id="p100164"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.
<a id="p100165"></a>4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.


## 5. <a id="p100166"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100167"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа и уложившиеся в нормативы контроля.


## 6. <a id="p100168"></a>Условия измерений


<a id="p100169"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100170"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 + 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100171"></a>выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100172"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100173"></a>Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и раствора внесения, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем, проверка хроматографического поведения флуопиколида на колонке.


#### <a id="p100174"></a>7.1 Подготовка органических растворителей



##### <a id="p100175"></a>7.1.1 Очистка н-гексана.

<a id="p100176"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

##### <a id="p100177"></a>7.1.2 Очистка этилацетата.

<a id="p100178"></a>Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (5 +/- 0,1) г натрия углекислого в конической колбе растворяют в (40 - 60) см3 деионизованной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора - 1 неделя.
<a id="p100179"></a>Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют. Срок хранения - 1 неделя.


#### <a id="p100180"></a>7.2 Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100181"></a>Капиллярную кварцевую колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °C и скорости газа-носителя 2 см3/мин в течение 8 - 10 часов.


#### <a id="p100182"></a>7.3 Приготовление градуировочных растворов


<a id="p100183"></a>7.3.1. Исходный градуировочный раствор флуопиколида с массовой концентрацией 100 мкг/см3.
<a id="p100184"></a>В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,010 +/- 0,0001) г флуопиколида, растворяют в 40 - 50 см3 ацетона, доводят этим же растворителем объем до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -12 °C не более 3 месяцев.
<a id="p100185"></a>7.3.2. Градуировочный раствор флуопиколида с массовой концентрацией 1 мкг/см3 (раствор N 1).
<a id="p100186"></a>В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1 см3 исходного градуировочного раствора флуопиколида с массовой концентрацией 100 мкг/см3 [(п. 7.3.1)](#p100183), разбавляют ацетоном и доводят объем до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2 - 5, а также для внесения в образцы семян, масла и зеленой массы подсолнечника при оценке полноты извлечения флуопиколида. Градуировочный раствор N 1 хранят при температуре не выше -12 °C не более месяца.
<a id="p100187"></a>7.3.3. Градуировочные растворы флуопиколида с массовой концентрацией 0,01 - 0,1 мкг/см3 (растворы N 2 - 5).
<a id="p100188"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см3 градуировочного раствора флуопиколида с массовой концентрацией 1 мкг/см3 [(п. 7.3.2)](#p100185), доводят объем раствора до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы N 2 - 5 с массовой концентрацией флуопиколида 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/см3 соответственно. Растворы готовят непосредственно перед использованием.


#### <a id="p100189"></a>7.4 Установление градуировочной характеристики


<a id="p100190"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ·с) от массовой концентрации флуопиколида в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 градуировочным растворам.
<a id="p100191"></a>В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора [(п. 7.3.3)](#p100187) и анализируют при условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100217). Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости r.
<a id="p100192"></a>По полученным данным строят градуировочную характеристику.


#### <a id="p100193"></a>7.5 Приготовление смесей гексан-этилацетат для очистки

экстрактов на колонке с силикагелем

<a id="p100194"></a>7.5.1. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 9 : 1). В мерную колбу вместимостью 250 см3 помещают 25 см3 этилацетата, доводят до метки гексаном, перемешивают. Срок хранения раствора - 1 неделя.
<a id="p100195"></a>7.5.2. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 8 : 2). В мерную колбу вместимостью 250 см3 помещают 50 см3 этилацетата, доводят до метки гексаном, перемешивают. Срок хранения раствора - 1 неделя.


#### <a id="p100196"></a>7.6 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта


<a id="p100197"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля в 15 см3 гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 см3 ацетона и 10 см3 гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.


#### <a id="p100198"></a>7.7 Проверка хроматографического поведения флуопиколида

на колонке с силикагелем

<a id="p100199"></a>При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля или растворителей проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания флуопиколида из колонки с силикагелем.
<a id="p100200"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,1 см3 градуировочного раствора флуопиколида с массовой концентрацией 1 мкг/см3 в ацетоне [(п. 7.3.2)](#p100185) и отдувают растворитель током теплого воздуха. Остаток растворяют в 3 см3 смеси гексан-этилацетат (9 : 1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по [п. 7.6](#p100196). Пропускают через колонку 30 см3 смеси гексан-этилацетат (9 : 1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 40 см3 смеси гексан-этилацетат (8 : 2, по объему), отбирая последовательно по 5 см3 элюата. Каждую фракцию упаривают досуха, остатки растворяют в 1 см3 ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание флуопиколида по [п. 9.4](#p100217).
<a id="p100201"></a>По результатам обнаружения флуопиколида в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-этилацетат (8 : 2, по объему), необходимый для полного вымывания вещества из колонки.
<a id="p100202"></a>*Примечание.* Проверку хроматографического поведения флуопиколида следует проводить в обязательном порядке, поскольку профиль вымывания вещества может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.


## 8. <a id="p100203"></a>Отбор и хранение проб


<a id="p100204"></a>Отбор проб производят в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", [ГОСТ 22391-89](https://bukva.ai/docs/gost-22391-89) "Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках", ГОСТ 1129-13 "Масло подсолнечное. Технические условия" и "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
<a id="p100205"></a>Образцы зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более суток; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °C до анализа. Пробы семян высушивают до стандартной влажности (в соответствии с ГОСТ 10852-86) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу. Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °C. В некоторых случаях масло получают из семян подсолнечника экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа. Перед проведением анализа зеленую массу измельчают, а семена размалывают на мельнице.


## 9. <a id="p100206"></a>Выполнение определения



#### <a id="p100207"></a>9.1 Экстракция флуопиколида


<a id="p100208"></a>Приготовление водного раствора метанола с объемной долей 80%.
<a id="p100209"></a>В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают 100 см3 деионизованной воды и доводят объем раствора в колбе до метки метанолом, перемешивают. Срок хранения раствора - 1 неделя.
<a id="p100210"></a>9.1.1. Семена подсолнечника. Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см3, добавляют 50 см3 водного раствора метанола с объемной долей 80% и помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 см3. Осадок на фильтре промывают 25 см3 водного раствора метанола с объемной долей 80%. Объединенный фильтрат переносят в мерный цилиндр на 100 см3, доводят общий объем раствора до 100 см3 приведенным выше растворителем, перемешивают. Аликвоту раствора объемом 50 см3, эквивалентную 5 г образца, переносят в делительную воронку вместимостью 100 см3. В воронку вносят 15 см3 гексана, насыщенного метанолом, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения фаз гексановый слой отбрасывают, а водно-метанольную фракцию переносят в круглодонную колбу. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [п. 9.2](#p100213).
<a id="p100211"></a>9.1.2. Масло подсолнечника. К образцу масла массой 5 г, помещенного в плоскодонную колбу вместимостью 250 см3, приливают 15 см3 гексана и перемешивают. К раствору добавляют 50 см3 водного раствора метанола с объемной долей 80% и колбу помещают на встряхиватель на 30 мин. Верхний водно-метанольный слой декантируют в делительную воронку вместимостью 250 см3. К оставшемуся в колбе маслянистому остатку приливают 30 см3 водного раствора метанола с объемной долей 80% и операцию экстракции повторяют в течение 20 мин. К объединенной водно-метанольной фазе, находящейся в делительной воронке, добавляют 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, 15 см3 гексана, насыщенного метанолом, и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения фаз гексановый слой отбрасывают, а водно-метанольную фракцию переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по [п. 9.2](#p100213).
<a id="p100212"></a>9.1.3. Зеленая масса подсолнечника. Измельченный образец массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 - 300 см3, вносят 100 см3 водного раствора метанола с объемной долей 80% и помещают на встряхиватель на 40 мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр средней плотности в колбу вместимостью 250 см3. Осадок на фильтре промывают 50 см3 водного раствора метанола с объемной долей 80%. Объединенный фильтрат переносят в мерный цилиндр на 250 см3, доводят общий объем раствора до 200 см3 указанным выше растворителем, перемешивают. Аликвоту раствора объемом 20 см3, эквивалентную 2 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см3 и добавляют 10 см3 деионизованной воды. Далее проводят очистку экстракта по [п. 9.2](#p100213).


#### <a id="p100213"></a>9.2 Очистка экстракта перераспределением в системе

несмешивающихся растворителей

<a id="p100214"></a>Отобранные экстракты зеленой массы, семян и масла, полученные по [п. 9.1.1](#p100210), [9.1.2](#p100211) и [9.1.3](#p100212) и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (6 - 8 см3) при температуре не выше 30 °C. К водному остатку добавляют 20 см3 деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см3. В воронку вносят 30 см3 гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Операцию экстракции водной фазы проводят еще дважды, используя 30 и 20 см3 гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C и подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем по [п. 9.3](#p100215).


#### <a id="p100215"></a>9.3 Очистка экстракта на колонке с силикагелем


<a id="p100216"></a>Остаток в круглодонной колбе, полученный по [п. 9.2](#p100213), растворяют в 2 см3 смеси гексан-этилацетат (9 : 1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.6](#p100196). Колбу обмывают 2 см3 смеси гексан-этилацетат (9 : 1, по объему), которую также наносят на колонку. Промывают колонку 25 см3 смеси гексан-этилацетат (9 : 1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Флуопиколид элюируют с колонки 25 см3 смеси гексан-этилацетат (8 : 2, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухие остатки экстрактов зеленой массы, семян и масла растворяют в 10 см3 ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и растворы анализируют на содержание флуопиколида по [п. 9.4](#p100217).


#### <a id="p100217"></a>9.4 Условия хроматографирования


<a id="p100218"></a>Газовый хроматограф с электронозахватным детектором, снабженный приспособлениями для капиллярной колонки.
<a id="p100219"></a>Хроматографическая кварцевая капиллярная колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с нанесенной пленкой диметилполисилоксана толщиной 0,5 мкм.


| <a id="p100220"></a>Температура: | <a id="p100221"></a><a id="p100222"></a>детектора - 300 °C;<br>испарителя - 270 °C. |
| --- | --- |


<a id="p100223"></a>Температура термостата колонки - программированная. Начальная температура - 190 °C, выдержка 1 мин; нагрев со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 245 °C, выдержка 0 мин; нагрев со скоростью 3 градуса в минуту до 265 °C, выдержка 6 мин; нагрев со скоростью 15 градусов в минуту до 280 °C, выдержка 5 мин.


| <a id="p100224"></a>Расход газов: | <a id="p100225"></a><a id="p100226"></a>газа-носителя (гелий, азот) - 2,3 см3/мин;<br>поток поддува - 30 см3/мин. |
| --- | --- |


<a id="p100227"></a>Деление потока: 1 : 4.
<a id="p100228"></a>Объем вводимой пробы: 1 мм3.
<a id="p100229"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,01 - 0,1 нг.
<a id="p100230"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,1 мкг/см3, разбавляют ацетоном.


## 10. <a id="p100231"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100232"></a>Содержание флуопиколида в пробе (X, мг/кг) рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

<a id="p100233"></a> $X = \frac{C \cdot V}{m}$ , где

<a id="p100234"></a>C - концентрация флуопиколида, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
<a id="p100235"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
<a id="p100236"></a>m - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с силикагелем и последующего хроматографического определения, г.


## 11. <a id="p100237"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100238"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

<a id="p100239"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , где (1)

<a id="p100240"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100241"></a>r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100028), при этом $r = 2\sigma_{r}$ .
<a id="p100242"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100239) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100243"></a>Оформление результатов


<a id="p100244"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100245"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг}$ при вероятности P = 0,95, где

<a id="p100246"></a> $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100247"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100248"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100249"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100028)), %.
<a id="p100250"></a>В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100251"></a>"содержание флуопиколида в пробах зеленой массы подсолнечника - менее 0,05 мг/кг" <*>;
<a id="p100252"></a>"содержание флуопиколида в пробах семян и масла подсолнечника - менее 0,02 мг/кг" <**>.

<a id="p100253"></a>

---

<a id="p100254"></a><*> 0,05 мг/кг - предел обнаружения;
<a id="p100255"></a><**> 0,02 мг/кг - предел обнаружения.


## 13. <a id="p100256"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100257"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100258"></a>13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии опытов.
<a id="p100259"></a>При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание флуопиколида в которых должно охватывать весь диапазон от 0,01 до 0,1 мкг/см3.
<a id="p100260"></a>Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого градуировочного раствора, используемого для контроля, сохраняется соотношение:

<a id="p100261"></a> $\text{А } = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq B$ , где (2)

<a id="p100262"></a>X - содержание флуопиколида в пробе при контрольном измерении, мкг;
<a id="p100263"></a>C - известное содержание флуопиколида в градуировочном растворе, взятом для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг;
<a id="p100264"></a>B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10% при P = 0,95).
<a id="p100265"></a>Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов флуопиколида, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно [п. 7.3](#p100182).
<a id="p100266"></a>Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100267"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100268"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100269"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}$ , где

<a id="p100270"></a> $\pm \Delta_{\text{л},\text{Х}}( \pm \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг.
<a id="p100271"></a>Допустимо характеристику погрешности результатов анализа при внедрении методики в лаборатории устанавливать с последующим уточнением по мере накопления информации на основе выражения:

<a id="p100272"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta$ , где

<a id="p100273"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100274"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100275"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100028)), %.
<a id="p100276"></a>Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.
<a id="p100277"></a>Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:

<a id="p100278"></a> $\text{К}_{\text{к}} = \overline{\text{Х}}\prime - \overline{\text{Х}} - C_{\text{д}}$ , где

<a id="p100279"></a> $\overline{\text{Х}}\prime$ , $\overline{\text{Х}}$ , Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100237)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг;
<a id="p100280"></a>Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

<a id="p100281"></a> $\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}}$ 

<a id="p100282"></a>Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
<a id="p100283"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100284"></a>|Кк| <= К, (3)

<a id="p100285"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100286"></a>При невыполнении [условия (3)](#p100284) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (3)](#p100284) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100287"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100288"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предел воспроизводимости (R):

<a id="p100289"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R$ , где (4)

<a id="p100290"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;
<a id="p100291"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, [табл. 1](#p100028)), %.



<a id="p100292"></a>

---