---
title: "\"МУК 4.1.3291-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств касугамицина в воде, почве, зеленой массе, соломе и зерне риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3291-15"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3291-15"
---

## "МУК 4.1.3291-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств касугамицина в воде, почве, зеленой массе, соломе и зерне риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3291-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств касугамицина в воде, почве, зеленой массе, соломе и зерне риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 28.07.2015)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
28 июля 2015 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КАСУГАМИЦИНА В ВОДЕ,**
**ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, СОЛОМЕ И ЗЕРНЕ РИСА МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3291-15**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийского НИИ защиты растений" (И.А. Цибульская, Т.Д. Черменская, А.С. Комарова, В.В. Человечкова).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 мая 2015 г. N 1).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 28 июля 2015 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Свидетельство о метрологической аттестации
N 01.5.04.194/01.00043/2015

<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения остаточных количеств касугамицина в диапазоне концентраций в воде 0,001 - 0,01 мг/дм3, в почве - 0,05 - 0,5 мг/кг, в зеленой массе и соломе - 1,0 - 10,0 мг/кг, в зерне риса 0,1 - 1,0 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Касугамицин.

<a id="p100013"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/kuQ3YijC/img_0.png) 

<a id="p100014"></a>[5-амино-2-метил-6-(2,3,4,5,6-пентагидроксициклогексилокси)тетрагидропиран-3-ил]амино- $\alpha$ -иминоуксусная кислота (IUPAC).
<a id="p100015"></a>C<sub>14</sub>H<sub>25</sub>N<sub>3</sub>O<sub>9</sub>.
<a id="p100016"></a>Молекулярная масса 379,4.
<a id="p100017"></a>Химически чистое вещество представляет собой бесцветное кристаллическое вещество.
<a id="p100018"></a>Температура плавления: 202 - 204 °C.
<a id="p100019"></a>Давление пара при 25 °C: < 1,3 x 10-2 мПа.
<a id="p100020"></a>Растворимость (в г/дм3 при 25 °C): вода - 228; метанол - 0,003; в ацетоне и ксилоле < 0,001.
<a id="p100021"></a>Стабилен при комнатной температуре. Стабилен в слабых кислотах и нестабилен в сильных кислотах и щелочах. DT50 (50 °C) 47 дней (pH 5), 14 дней (pH 9).

<a id="p100022"></a>Краткая токсикологическая характеристика

<a id="p100023"></a>Острая пероральная токсичность LD<sub>50</sub> для крыс более 5 000 мг/кг, острая дермальная токсичность LD<sub>50</sub> для кроликов превышает 2 000 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и тератогенными свойствами, не влияет на репродукцию крыс.

<a id="p100024"></a>Область применения препарата

<a id="p100025"></a>Системный фунгицид и бактерицид, получаемый ферментацией Streptomyces kasugaensis. Используется для контроля грибных и бактериальных заболеваний на рисе, овощных и плодовых культурах.
<a id="p100026"></a>Не фитотоксичен для риса, томатов, сахарной свеклы, картофеля и др.
<a id="p100027"></a>В России для касугамицина гигиенические нормативы не установлены.


## 1. <a id="p100028"></a>Погрешность измерений


<a id="p100029"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100030"></a>Таблица 1

<a id="p100031"></a>Метрологические параметры


<table>
<colgroup><col width="11%"><col width="15%"><col width="13%"><col width="13%"><col width="13%"><col width="18%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100032"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100033"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)</td><td><a id="p100034"></a>Показатель точности <a href="#p100074">&lt;*&gt;</a> (границы относительной погрешности), $\pm \delta$ , % (P = 0,95)</td><td><a id="p100035"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100036"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100037"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %</td><td><a id="p100038"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)</td></tr>
<tr><td><a id="p100039"></a>Вода</td><td><a id="p100040"></a>0,001 - 0,01</td><td><a id="p100041"></a>23</td><td><a id="p100042"></a>8</td><td><a id="p100043"></a>12</td><td><a id="p100044"></a>22</td><td><a id="p100045"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100046"></a>Почва</td><td><a id="p100047"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100048"></a>23</td><td><a id="p100049"></a>8</td><td><a id="p100050"></a>12</td><td><a id="p100051"></a>22</td><td><a id="p100052"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100053"></a>Зерно</td><td><a id="p100054"></a>0,1 - 1,0</td><td><a id="p100055"></a>22</td><td><a id="p100056"></a>7</td><td><a id="p100057"></a>11</td><td><a id="p100058"></a>20</td><td><a id="p100059"></a>31</td></tr>
<tr><td><a id="p100060"></a>Солома</td><td><a id="p100061"></a>1,0 - 10,0</td><td><a id="p100062"></a>22</td><td><a id="p100063"></a>7</td><td><a id="p100064"></a>11</td><td><a id="p100065"></a>20</td><td><a id="p100066"></a>31</td></tr>
<tr><td><a id="p100067"></a>Зеленая масса</td><td><a id="p100068"></a>1,0 - 10,0</td><td><a id="p100069"></a>22</td><td><a id="p100070"></a>7</td><td><a id="p100071"></a>11</td><td><a id="p100072"></a>20</td><td><a id="p100073"></a>31</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100074"></a>&lt;*&gt; Соответствует расширенной неопределенности Uот при коэффициенте охвата k = 2.</td></tr>
</table>


<a id="p100075"></a>Таблица 2

<a id="p100076"></a>Полнота извлечения, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата


<table>
<colgroup><col width="13%"><col width="21%"><col width="18%"><col width="15%"><col width="16%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100077"></a>Анализируемый объект</td><td colspan="5"><a id="p100078"></a>Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td><a id="p100079"></a>Предел количественного определения, мг/кг (мг/дм3)</td><td><a id="p100080"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)</td><td><a id="p100081"></a>Полнота извлечения вещества, %</td><td><a id="p100082"></a>Стандартное отклонение, %</td><td><a id="p100083"></a>Доверительный интервал среднего результата, +/- %</td></tr>
<tr><td><a id="p100084"></a>Вода</td><td><a id="p100085"></a>0,001</td><td><a id="p100086"></a>0,001 - 0,01</td><td><a id="p100087"></a>77,1</td><td><a id="p100088"></a>2,16</td><td><a id="p100089"></a>3,03</td></tr>
<tr><td><a id="p100090"></a>Почва</td><td><a id="p100091"></a>0,05</td><td><a id="p100092"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100093"></a>78,1</td><td><a id="p100094"></a>1,69</td><td><a id="p100095"></a>2,37</td></tr>
<tr><td><a id="p100096"></a>Зерно</td><td><a id="p100097"></a>0,1</td><td><a id="p100098"></a>0,1 - 1,0</td><td><a id="p100099"></a>78,0</td><td><a id="p100100"></a>2,31</td><td><a id="p100101"></a>3,24</td></tr>
<tr><td><a id="p100102"></a>Солома</td><td><a id="p100103"></a>1,0</td><td><a id="p100104"></a>1,0 - 10,0</td><td><a id="p100105"></a>78,1</td><td><a id="p100106"></a>2,17</td><td><a id="p100107"></a>3,04</td></tr>
<tr><td><a id="p100108"></a>Зеленая масса</td><td><a id="p100109"></a>1,0</td><td><a id="p100110"></a>1,0 - 10,0</td><td><a id="p100111"></a>77,2</td><td><a id="p100112"></a>1,84</td><td><a id="p100113"></a>2,58</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100114"></a>Метод измерений


<a id="p100115"></a>Методика основана на определении касугамицина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов подкисленным метанолом, для почвы - раствором щелочи и последующей очистки на патроне для твердофазной экстракции.
<a id="p100116"></a>Идентификация касугамицина проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100117"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.


## 3. <a id="p100118"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы



### <a id="p100119"></a>3.1. Средства измерений



| <a id="p100120"></a>Жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки |  |
| --- | --- |
| <a id="p100121"></a>Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допускаемой погрешности 0,1 мг | <a id="p100122"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100123"></a>Весы технические с пределом взвешивания до 150 г и пределом допускаемой погрешности 0,1 г | <a id="p100124"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100125"></a>Колбы мерные на 10, 100 см3 | <a id="p100126"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100127"></a>Микродозаторы одноканальные переменного объема от 100 до 1 000 мм3 и от 1 до 5 см3 |  |
| <a id="p100128"></a>Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 | <a id="p100129"></a>ГОСТ 23932-90 |


<a id="p100130"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100131"></a>3.2. Реактивы



| <a id="p100132"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ | <a id="p100133"></a>ТУ 2634-002-54260861-2013 |
| --- | --- |
| <a id="p100134"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) | <a id="p100135"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100136"></a>Метанол, хч | <a id="p100137"></a>[ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) |
| <a id="p100138"></a>Касугамицин, аналитический стандарт с содержанием д.в. 90,0% |  |
| <a id="p100139"></a>Кислота ортофосфорная, хч | <a id="p100140"></a>ГОСТ 6552-80 |
| <a id="p100141"></a>Кислота соляная, хч | <a id="p100142"></a>ГОСТ 3118-77 |
| <a id="p100143"></a>Натрия гидроокись, хч | <a id="p100144"></a>ГОСТ 4328-77 |
| <a id="p100145"></a>Подвижная фаза: 0,001%-й раствор соляной кислоты в метаноле |  |


<a id="p100146"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


### <a id="p100147"></a>3.3. Вспомогательные устройства и материалы



| <a id="p100148"></a>Аналитическая колонка, заполненная сорбентом для очень полярных и водорастворимых соединений, работающая в режиме гидрофильной жидкостной хроматографии, (50 x 2,1) мм, 1,7 мкм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100149"></a>Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции |  |
| <a id="p100150"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25, 100, 250 см3 | <a id="p100151"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100152"></a>Патроны N 1 для твердофазной экстракции, заполненные октадецильной фазой для полярных аналитов, по 0,5 г |  |
| <a id="p100153"></a>Патроны N 2 для твердофазной экстракции, заполненные сильным катионообменником, по 0,4 г | <a id="p100154"></a>ТУ 4215-002-0545-931-94 |
| <a id="p100155"></a>Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см3 |  |
| <a id="p100156"></a>Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, с пределом вакуума до 10 мбар |  |
| <a id="p100157"></a>Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 000 об./мин |  |
| <a id="p100158"></a>Устройство перемешивающее (50 - 200 колебаний в мин) | <a id="p100159"></a>ТУ 4389-007-44330709-2011 |


<a id="p100160"></a>*Примечание.* Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100161"></a>Требования безопасности


<a id="p100162"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100163"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
<a id="p100164"></a>Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.


## 5. <a id="p100165"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100166"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100259).


## 6. <a id="p100167"></a>Условия измерений


<a id="p100168"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100169"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100170"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100171"></a>Подготовка к определению



### <a id="p100172"></a>7.1. Кондиционирование колонки


<a id="p100173"></a>Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.


### <a id="p100174"></a>7.2. Подготовка патронов для очистки экстрактов


<a id="p100175"></a>Патрон N 1 или N 2 для твердофазной экстракции промывают последовательно 3 см3 метанола и 3 см3 воды, после чего они готовы к работе.


### <a id="p100176"></a>7.3. Приготовление растворов


<a id="p100177"></a>7.3.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98%-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
<a id="p100178"></a>7.3.2. Для приготовления 0,005 М гидроксида натрия в мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 0,2 г натрия гидроокиси и доводят объем бидистиллированной водой до метки.
<a id="p100179"></a>7.3.3. Для приготовления 0,01%-го раствора соляной кислоты в метаноле в мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 0,1 см3 концентрированной соляной кислоты и доводят объем метанолом до метки.
<a id="p100180"></a>7.3.4. Для приготовления 0,001%-го раствора соляной кислоты в метаноле в мерную колбу объемом 100 см3 помещают 10 см3 0,01%-го раствора соляной кислоты в метаноле и доводят объем метанолом до метки.
<a id="p100181"></a>7.3.5. Для приготовления 1 N соляной кислоты в мерную колбу объемом 10 см3 помещают 1,7 см3 концентрированной соляной кислоты и доводят объем водой до метки.


### <a id="p100182"></a>7.4. Приготовление основного и градуировочных растворов


<a id="p100183"></a>7.4.1. Основной раствор с концентрацией 1,0 мг/см3: точную навеску касугамицина (50 +/- 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в метаноле и доводят объем до метки тем же растворителем.
<a id="p100184"></a>Градуировочные растворы с концентрациями касугамицина 0,2; 0,4; 0,8; 1,5; 2,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя в виде растворителя подвижную фазу.
<a id="p100185"></a>7.4.2. Раствор N 1 с концентрацией 2,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.
<a id="p100186"></a>7.4.3. Раствор N 2 с концентрацией 1,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,15 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.
<a id="p100187"></a>7.4.4. Раствор N 3 с концентрацией 0,8 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 4 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100188"></a>7.4.5. Раствор N 4 с концентрацией 0,4 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100189"></a>7.4.6. Раствор N 5 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100190"></a>Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
<a id="p100191"></a>При изучении полноты определения касугамицина в воде, почве, зеленой массе, соломе и зерне риса используют растворы вещества в подвижной фазе, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему растворителем.


### <a id="p100192"></a>7.5. Построение градуировочного графика


<a id="p100193"></a>Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация касугамицина в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации касугамицина в градуировочном растворе. Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100194"></a>**C = K·S,**

<a id="p100195"></a>где S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100196"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100197"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100198"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<a id="p100199"></a> $\frac{|C - C_{K}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}},$ 

<a id="p100200"></a>где C - аттестованное значение массовой концентрации касугамицина в градуировочном растворе,
<a id="p100201"></a>CK - результат контрольного измерения массовой концентрации касугамицина в градуировочном растворе,
<a id="p100202"></a> $\lambda_{\text{контр}}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( $\lambda_{\text{контр}} = 10\%$ при P = 0,95).


### <a id="p100203"></a>7.6. Проверка хроматографического поведения касугамицина на патроне N 1


<a id="p100204"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают 1 см3 стандартного раствора касугамицина с концентрацией 10 мкг/см3. Отдувают растворитель током воздуха. Остаток растворяют в 1 см3 воды и переносят на подготовленный патрон N 1 [(п. 7.2)](#p100174). Колбу обмывают 1 см3 воды и смыв тоже переносят на патрон. Промывают патрон 10 см3 воды. Элюаты от нанесения и промывки собирают фракциями по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по [п. 9.6](#p100226).
<a id="p100205"></a>Фракции, содержащие касугамицин, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100206"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.


### <a id="p100207"></a>7.7. Проверка хроматографического поведения касугамицина на патроне N 2


<a id="p100208"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают 1 см3 стандартного раствора касугамицина с концентрацией 10 мкг/см3. Отдувают растворитель током воздуха. Остаток растворяют в 5 см3 воды и переносят на подготовленный патрон N 2 [(п. 7.2)](#p100174). Промывают патрон 5 см3 воды, элюат отбрасывают. Затем элюируют касугамицин 6 см3 1 N соляной кислоты со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по [п. 9.6](#p100226).
<a id="p100209"></a>Фракции, содержащие касугамицин, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100210"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.
<a id="p100211"></a>*Примечание.* Проверку хроматографического поведения касугамицина следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.


## 8. <a id="p100212"></a>Отбор проб и хранение


<a id="p100213"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ Р 31861-12](https://bukva.ai/docs/gost-31861-2012) "Вода. Общие требования к отбору проб"; [ГОСТ 28168-89](https://bukva.ai/docs/gost-28168-89) "Почвы. Отбор проб"; [ГОСТ 13586.3-83](https://bukva.ai/docs/gost-13586-3-83) "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб" и [ГОСТ 6293-90](https://bukva.ai/docs/gost-6293-90) "Рис. Требования при заготовке и поставке". Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Перед анализом пробы зерна доводят до стандартной влажности и измельчают.
<a id="p100214"></a>Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.


## 9. <a id="p100215"></a>Проведение определения



### <a id="p100216"></a>9.1. Определение касугамицина в воде


<a id="p100217"></a>Пробу воды (200 см3) количественно переносят на подготовленный патрон N 1 [(п. 7.2)](#p100174). Промывают патрон 5 см3 воды. Элюат собирают в круглодонную колбу емкостью 250 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют на содержание касугамицина по [п. 9.6](#p100226).


### <a id="p100218"></a>9.2. Определение касугамицина в почве


<a id="p100219"></a>10 г почвы помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3 и добавляют 30 см3 0,005 М раствора натрия гидроксида. Пробирку плотно закрывают, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 10 мин, центрифугируют при скорости 4 000 об./мин в течение 10 мин. Аликвоту экстракта - 12 см3 далее очищают по [п. 9.4](#p100222).


### <a id="p100220"></a>9.3. Определение касугамицина в зеленой массе, соломе и зерне риса


<a id="p100221"></a>Навеску измельченной пробы (10 г - зерно; 2 г - зеленая масса, солома) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3 и добавляют 40 см3 0,01% соляной кислоты в метаноле. Пробирку плотно закрывают, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 10 мин, центрифугируют при скорости 4 000 об./мин в течение 10 мин. Аликвоту (8 см3 - зерно; 4 см3 - зеленая масса, солома) помещают в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [п. 9.5](#p100224).


### <a id="p100222"></a>9.4. Очистка на патроне N 2


<a id="p100223"></a>Аликвоту экстракта почвы, полученную по [п. 9.2](#p100218), количественно переносят на подготовленный патрон [(п. 7.2)](#p100174). Промывают патрон 5 см3 воды. Касугамицин элюируют 3 см3 1 N соляной кислоты. Элюат количественно переносят в круглодонную колбу емкостью 25 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют на содержание касугамицина по [п. 9.6](#p100226).


### <a id="p100224"></a>9.5. Очистка на патроне N 1


<a id="p100225"></a>Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов [(п. 9.3)](#p100220), количественно переносят двумя порциями воды по 1 см3 на подготовленный патрон N 1 [(п. 7.2)](#p100174). Промывают патрон 5 см3 воды. Элюаты объединяют, количественно переносят в круглодонную колбу емкостью 25 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют на содержание касугамицина по [п. 9.6](#p100226).


### <a id="p100226"></a>9.6. Условия хроматографирования


<a id="p100227"></a>Жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки.
<a id="p100228"></a>Аналитическая колонка, заполненная сорбентом для очень полярных и водорастворимых соединений, работающая в режиме гидрофильной жидкостной хроматографии, (50 x 2,1) мм, 1,7 мкм.
<a id="p100229"></a>Температура колонки (30 +/- 1) °C.
<a id="p100230"></a>Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (A) и 0,005 М ортофосфорной кислоты (B) в градиентном режиме: от 100% к 40% компонента A за 5 мин.
<a id="p100231"></a>Скорость потока элюента 0,2 см3/мин.
<a id="p100232"></a>Рабочая длина волны УФ-детектора 220 нм.
<a id="p100233"></a>Объем вводимой пробы 10 мм3.
<a id="p100234"></a>Время удерживания касугамицина составляет (4,3 +/- 0,1) мин.


## 10. <a id="p100235"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100236"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание касугамицина в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

<a id="p100237"></a> $X = \frac{S_{x} \cdot K \cdot V}{P} ,$ 

<a id="p100238"></a>где Sх - площадь пика касугамицина на хроматограмме испытуемого образца, (AU);
<a id="p100239"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100240"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
<a id="p100241"></a>P - навеска (г) или объем (см3) анализируемой части образца (для воды 200 см3, для почвы 4 г, для зерна 2 г, для соломы и зеленой массы 0,2 г).
<a id="p100242"></a>Содержание остаточных количеств касугамицина в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100243"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор касугамицина с концентрацией 10,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.


## 11. <a id="p100244"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100245"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости [(1)](#p100274):

<a id="p100246"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq r,$ 

<a id="p100247"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100248"></a>r - значение предела повторяемости, $(r = 2,8\sigma_{r})$ .
<a id="p100249"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100274) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100250"></a>Оформление результатов


<a id="p100251"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100252"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ , мг/кг, при вероятности P = 0,95,

<a id="p100253"></a>где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100254"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг.

<a id="p100255"></a> $\Delta = \frac{\delta \times X}{100} ,$ 

<a id="p100256"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100257"></a>В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100258"></a>"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,1 мг/кг*, где * - 0,1 мг/кг - предел обнаружения касугамицина в зерне).


## 13. <a id="p100259"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100260"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-2-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100261"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100262"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100263"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100264"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime},$ 

<a id="p100265"></a>где $\pm \Delta_{\text{л},\text{Х}}$ $( \pm \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

<a id="p100266"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84 \cdot \Delta,$ 

<a id="p100267"></a>где $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100268"></a> $\Delta = \frac{\delta \times X}{100} ,$ 

<a id="p100269"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100270"></a>Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

<a id="p100271"></a>Kк = X' - X - Cд,

<a id="p100272"></a>где X', X, Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100244)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
<a id="p100273"></a>Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

<a id="p100274"></a> $K = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .$ (1)

<a id="p100275"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).
<a id="p100276"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100277"></a>|Kк| <= K, (2)

<a id="p100278"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100279"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100277) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100277) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
<a id="p100280"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100281"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

<a id="p100282"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{X_{1} + X_{2}} \leq R,$ (3)

<a id="p100283"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
<a id="p100284"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.



<a id="p100285"></a>

---