---
title: "\"МУК 4.1.3235-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлуфензопира в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3235-14"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3235-14"
---

## "МУК 4.1.3235-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлуфензопира в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3235-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлуфензопира в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 22.12.2014)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
22 декабря 2014 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИФЛУФЕНЗОПИРА В ВОДЕ,**
**ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ КУКУРУЗЫ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3235-14**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений" (В.И. Долженко, И.А. Цибульская, Т.Д. Черменская, А.С. Комарова, В.В. Человечкова).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. N 2).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 22 декабря 2014 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Свидетельство о метрологической аттестации N 01.5.04.183/01.00043/2014.
<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации дифлуфензопира в диапазоне концентраций в воде 0,001 - 0,01 мг/дм3, в почве, зерне и масле кукурузы 0,01 - 0,1 мг/кг, зеленой массе 0,05 - 0,5 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Дифлуфензопир
<a id="p100013"></a>2-{(EZ)-1-[4-(3,5-difluorophenyl)semicarbazono]ethyl}nicotinic acid (ИЮПАК).
<a id="p100014"></a>Структурная формула:

<a id="p100015"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/oGXAiviD/img_0.png) 

<a id="p100016"></a>Брутто формула: C15H12F2N4O3.
<a id="p100017"></a>Молекулярная масса: 334,28.
<a id="p100018"></a>Химически чистое вещество представляет собой белое кристаллическое вещество.
<a id="p100019"></a>Температура плавления: 135 °C.
<a id="p100020"></a>Давление пара при 25 °C: 0,01 МПа.
<a id="p100021"></a>Растворимость в воде: 5 850 мг/дм3 (при 20 °C).
<a id="p100022"></a>Константа диссоциации (рКа) при 25 °C: 3,18 (слабая кислота).
<a id="p100023"></a>Стабильность к гидролизу при 20 °C: DT50 = 13 дней (pH 5), 24 дня (pH 7), 26 дней (pH 9). Период полураспада в почве: DT50 = 14 дней.
<a id="p100024"></a>Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LD50 для млекопитающих более 5 000 мг/кг, острая дермальная токсичность LD50 для млекопитающих превышает 5 000 мг/кг. Оказывает раздражающее действие на слизистую глаз. Умеренно токсичен для пчел.
<a id="p100025"></a>Область применения препарата: системный гербицид для борьбы с широким спектром сорняков в послевсходовый период.
<a id="p100026"></a>Механизм действия: ингибирование транспорта ауксина.
<a id="p100027"></a>Гигиенические нормативы для дифлуфензопира в России не установлены.


## 1. <a id="p100028"></a>Погрешность измерений


<a id="p100029"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100030"></a>Таблица 1

<a id="p100031"></a>Метрологические параметры


<table>
<colgroup><col width="11%"><col width="19%"><col width="21%"><col width="16%"><col width="12%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100032"></a>Объект анализа</td><td><a id="p100033"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)</td><td><a id="p100034"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100035"></a>Показатель внутрилабораторной прецизионности, $\sigma_{R\text{л}}$ , %</td><td><a id="p100036"></a>Показатель воспроизводимости, $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100037"></a>Показатель точности <a href="#p100068">&lt;*&gt;</a> (границы относительной погрешности), $\pm \delta$ , %</td></tr>
<tr><td><a id="p100038"></a>Вода</td><td><a id="p100039"></a>0,001 - 0,01</td><td><a id="p100040"></a>7</td><td><a id="p100041"></a>8</td><td><a id="p100042"></a>12</td><td><a id="p100043"></a>24</td></tr>
<tr><td><a id="p100044"></a>Почва</td><td><a id="p100045"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100046"></a>8</td><td><a id="p100047"></a>9</td><td><a id="p100048"></a>11</td><td><a id="p100049"></a>22</td></tr>
<tr><td><a id="p100050"></a>Зерно</td><td><a id="p100051"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100052"></a>8</td><td><a id="p100053"></a>9</td><td><a id="p100054"></a>11</td><td><a id="p100055"></a>22</td></tr>
<tr><td><a id="p100056"></a>Масло</td><td><a id="p100057"></a>0,01 - 0,1</td><td><a id="p100058"></a>8</td><td><a id="p100059"></a>9</td><td><a id="p100060"></a>11</td><td><a id="p100061"></a>22</td></tr>
<tr><td><a id="p100062"></a>Зеленая масса</td><td><a id="p100063"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100064"></a>7</td><td><a id="p100065"></a>9</td><td><a id="p100066"></a>12</td><td><a id="p100067"></a>23</td></tr>
<tr><td colspan="6"><a id="p100068"></a>&lt;*&gt; Соответствует расширенной неопределенности Uотн. при коэффициенте охвата k = 2.</td></tr>
</table>


<a id="p100069"></a>Таблица 2

<a id="p100070"></a>Полнота извлечения дифлуфензопира, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата
для n = 20, P = 0,95


| <a id="p100071"></a>Анализируемый объект | <a id="p100072"></a>Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) | <a id="p100073"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) | <a id="p100074"></a>Полнота извлечения, % | <a id="p100075"></a>Стандартное отклонение, S | <a id="p100076"></a>Доверительный интервал среднего результата, +/- % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100077"></a>Вода | <a id="p100078"></a>0,001 | <a id="p100079"></a>0,001 - 0,01 | <a id="p100080"></a>83,8 | <a id="p100081"></a>5,14 | <a id="p100082"></a>7,21 |
| <a id="p100083"></a>Почва | <a id="p100084"></a>0,01 | <a id="p100085"></a>0,01 - 0,1 | <a id="p100086"></a>82,7 | <a id="p100087"></a>2,35 | <a id="p100088"></a>3,30 |
| <a id="p100089"></a>Зерно | <a id="p100090"></a>0,01 | <a id="p100091"></a>0,01 - 0,1 | <a id="p100092"></a>79,8 | <a id="p100093"></a>1,61 | <a id="p100094"></a>2,25 |
| <a id="p100095"></a>Масло | <a id="p100096"></a>0,01 | <a id="p100097"></a>0,01 - 0,1 | <a id="p100098"></a>83,6 | <a id="p100099"></a>3,18 | <a id="p100100"></a>4,45 |
| <a id="p100101"></a>Зеленая масса | <a id="p100102"></a>0,05 | <a id="p100103"></a>0,05 - 0,5 | <a id="p100104"></a>83,3 | <a id="p100105"></a>4,53 | <a id="p100106"></a>6,87 |



## 2. <a id="p100107"></a>Метод измерений


<a id="p100108"></a>Методика основана на определении дифлуфензопира методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового (УФ) детектора после его концентрирования из образцов воды на патроне с гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными группами и извлечения из образцов почвы, зеленой массы, зерна и масла кукурузы щелочным водным ацетоном с последующей очисткой в системе несмешивающихся растворителей и на патронах для твердофазной экстракции.
<a id="p100109"></a>Идентификация дифлуфензопира проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100110"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.


## 3. <a id="p100111"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы



### <a id="p100112"></a>3.1. Средства измерений



<table>
<colgroup><col width="66%"><col width="34%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100113"></a>Жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки</td><td><a id="p100114"></a>номер в Госреестре средств измерений 42816-09</td></tr>
<tr><td><a id="p100115"></a>Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг</td><td><a id="p100116"></a>ГОСТ 24104-01</td></tr>
<tr><td><a id="p100117"></a>Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г</td><td><a id="p100118"></a>ГОСТ 24104-01</td></tr>
<tr><td><a id="p100119"></a>Колбы мерные на 10, 100 и 250 см3</td><td><a id="p100120"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100121"></a>Микродозаторы одноканальные переменного объема от 200 до 1 000 мм3 и от 1 до 5 см3</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100122"></a>Цилиндры мерные на 50 и 100 см3</td><td><a id="p100123"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100124"></a>Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.</td></tr>
</table>



### <a id="p100125"></a>3.2. Реактивы



| <a id="p100126"></a>Ацетон, осч | <a id="p100127"></a>ТУ 2633-032-78119972-11 |
| --- | --- |
| <a id="p100128"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ | <a id="p100129"></a>ТУ 2634-002-04715285-42 |
| <a id="p100130"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) | <a id="p100131"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100132"></a>Дифлуфензопир с содержанием основного вещества 97,6% |  |
| <a id="p100133"></a>Кислота ортофосфорная, хч | <a id="p100134"></a>ГОСТ 6552-80 |
| <a id="p100135"></a>Кислота соляная, хч | <a id="p100136"></a>ГОСТ 3118-77 |
| <a id="p100137"></a>Кислота трифторуксусная, хч, 99% |  |
| <a id="p100138"></a>Метанол, хч | <a id="p100139"></a>[ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) |
| <a id="p100140"></a>Метилен хлористый, хч | <a id="p100141"></a>ТУ 2631-019-44493179-98 |
| <a id="p100142"></a>Натрий серно-кислый безводный, хч | <a id="p100143"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) |
| <a id="p100144"></a>Натрий углекислый кислый, хч | <a id="p100145"></a>[ГОСТ 4201-79](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79) |
| <a id="p100146"></a>н-Гексан, хч | <a id="p100147"></a>ТУ 2631-003-05807999-98 |
| <a id="p100148"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 30:70 |  |
| <a id="p100149"></a>Смесь N 1: этилацетат-метанол в соотношении 9:1 по объему |  |
| <a id="p100150"></a>Смесь N 2: этилацетат-метанол в соотношении 2:1 по объему |  |
| <a id="p100151"></a>Смесь N 3: трифторуксусная кислота-вода в соотношении 1:199 по объему |  |
| <a id="p100152"></a>Этилацетат, хч | <a id="p100153"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |


<a id="p100154"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


### <a id="p100155"></a>3.3. Вспомогательные устройства и материалы



<table>
<colgroup><col width="66%"><col width="34%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100156"></a>Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи С18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100157"></a>Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100158"></a>Воронки делительные вместимостью 250 см3</td><td><a id="p100159"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100160"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 25, 100 см3</td><td><a id="p100161"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93">ГОСТ 9737-93</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100162"></a>Патроны для твердофазной экстракции: N 1 - заполненные гидрофильным слабокислотным сорбентом на основе силикагеля и N 2 - гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными группами, по 0,4 г</td><td><a id="p100163"></a>ТУ 4215-002-0545-931-94</td></tr>
<tr><td><a id="p100164"></a>Установка для отдувки растворителей током азота</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100165"></a>Устройство перемешивающее (50 - 200 колебаний в минуту)</td><td><a id="p100166"></a>ТУ 4389-007-44330709-11</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100167"></a>Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.</td></tr>
</table>



## 4. <a id="p100168"></a>Требования безопасности


<a id="p100169"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100170"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
<a id="p100171"></a>Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.


## 5. <a id="p100172"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100173"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100266).


## 6. <a id="p100174"></a>Условия измерений


<a id="p100175"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100176"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100177"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100178"></a>Подготовка к определению



### <a id="p100179"></a>7.1. Кондиционирование колонки


<a id="p100180"></a>Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.


### <a id="p100181"></a>7.2. Кондиционирование патрона N 1 с гидрофильным слабокислотным сорбентом с постоянной активностью


<a id="p100182"></a>Патрон промывают 2 см3 смеси N 2, затем 3 см3 этилацетата.


### <a id="p100183"></a>7.3. Кондиционирование патрона N 2 с гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными группами


<a id="p100184"></a>Патрон последовательно промывают 2 см3 этилацетата, 2 см3 метанола, 3 см3 смеси N 3.


### <a id="p100185"></a>7.4. Приготовление растворов


<a id="p100186"></a>7.4.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98% ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
<a id="p100187"></a>7.4.2. Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 30:70 по объему, используя мерные цилиндры.
<a id="p100188"></a>7.4.3. 0,1 N раствор соляной кислоты: 1 см3 концентрированной соляной кислоты помещают в мерную колбу объемом 100 см3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
<a id="p100189"></a>7.4.4. 0,5% раствор натрия углекислого кислого: 0,5 г натрия углекислого кислого помещают в мерную колбу объемом 100 см3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.


### <a id="p100190"></a>7.5. Приготовление основного и градуировочных растворов


<a id="p100191"></a>7.5.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску дифлуфензопира (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в метаноле и доводят объем до метки метанолом.

##### <a id="p100192"></a>7.5.2 Приготовление градуировочных растворов

<a id="p100193"></a>Градуировочные растворы с концентрациями дифлуфензопира 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 30:70).
<a id="p100194"></a>7.5.2.1. Раствор N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.
<a id="p100195"></a>7.5.2.2. Раствор N 2 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100196"></a>7.5.2.3. Раствор N 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100197"></a>7.5.2.4. Раствор N 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100198"></a>7.5.2.5. Раствор N 5 с концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100199"></a>Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 5 дней, градуировочные растворы использовать в день приготовления.
<a id="p100200"></a>При изучении полноты определения дифлуфензопира используют ацетоновые растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетоном.


### <a id="p100201"></a>7.6. Построение градуировочного графика


<a id="p100202"></a>Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация дифлуфензопира в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации дифлуфензопира в градуировочном растворе.
<a id="p100203"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100204"></a>**C = KS,**

<a id="p100205"></a>где S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100206"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100207"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100208"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<a id="p100209"></a> $\frac{|C - C_{K}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.},$ 

<a id="p100210"></a>где C - аттестованное значение массовой концентрации дифлуфензопира в градуировочном растворе;
<a id="p100211"></a>CK - результат контрольного измерения массовой концентрации дифлуфензопира в градуировочном растворе;
<a id="p100212"></a> $\lambda_{\text{контр}.}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. ( $\lambda_{\text{контр}.} = 10\%$ при P = 0,95).


### <a id="p100213"></a>7.7. Проверка хроматографического поведения дифлуфензопира на патроне N 1


<a id="p100214"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают 1 см3 стандартного раствора дифлуфензопира с концентрацией 1 мкг/см3. Отдувают растворитель током азота. Остаток растворяют в 1 см3 этилацетата и переносят на подготовленный патрон [(п. 7.2)](#p100181). Колбу обмывают 1 см3 этилацетата и смыв тоже переносят на патрон. Промывают патрон 10 см3 смеси N 1, элюат отбрасывают. Затем элюируют дифлуфензопир смесью N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по [п. 9.6](#p100239).
<a id="p100215"></a>Фракции, содержащие дифлуфензопир, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100216"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту вымывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.


### <a id="p100217"></a>7.8. Проверка хроматографического поведения дифлуфензопира на патроне N 2


<a id="p100218"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают 1 см3 стандартного раствора дифлуфензопира с концентрацией 1 мкг/см3. Отдувают растворитель током азота. Остаток растворяют в 10 см3 смеси N 3 и переносят на подготовленный патрон [(п. 7.3)](#p100183). Колбу обмывают 5 см3 смеси N 3 и смыв тоже переносят на патрон. Патрон просушивают в течение 2 мин, затем элюируют дифлуфензопир порциями этилацетата по 2 см3 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы и анализируют по [п. 9.6](#p100239).
<a id="p100219"></a>Фракции, содержащие дифлуфензопир, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100220"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту вымывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.
<a id="p100221"></a>*Примечание.* Проверку хроматографического поведения дифлуфензопира следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.


## 8. <a id="p100222"></a>Отбор проб и хранение


<a id="p100223"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ Р 51592-2000](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000) "Вода. Общие требования к отбору проб"; [ГОСТ 28168-89](https://bukva.ai/docs/gost-28168-89) "Почвы. Отбор проб"; [ГОСТ 13634-90](https://bukva.ai/docs/gost-13634-90) "Кукуруза. Требования при заготовках и поставках" и [ГОСТ 8808-91](https://bukva.ai/docs/gost-8808-91) "Масло кукурузное. ТУ".
<a id="p100224"></a>Зерно кукурузы хранят в полотняных мешочках при комнатной температуре. Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб измельченного зерна методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше 40 °C. Пробы масла хранят при 4 - 6 °C в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре не более 30 суток.
<a id="p100225"></a>Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
<a id="p100226"></a>Зеленую массу для хранения помещают в герметичной полиэтиленовой упаковке в морозильную камеру с температурой -18 °C.


## 9. <a id="p100227"></a>Проведение определения



### <a id="p100228"></a>9.1. Экстракция дифлуфензопира из воды


<a id="p100229"></a>К 50 см3 воды добавляют 0,25 см3 трифторуксусной кислоты и наносят на подготовленный по [п. 7.3](#p100183) патрон N 2. Патрон просушивают 2 мин, затем элюируют дифлуфензопир тремя порциями этилацетата по 2 см3. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 вводят в хроматограф.


### <a id="p100230"></a>9.2. Экстракция дифлуфензопира из почвы, зеленой массы и зерна кукурузы


<a id="p100231"></a>Навеску измельченной пробы (10 +/- 0,1) г, зеленой массы 5 г помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, добавляют 10 см3 0,5%-го раствора натрия углекислого кислого и 30 см3 ацетона. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют. Надосадочную жидкость декантируют в круглодонную колбу. Экстракцию повторяют 5 см3 0,5%-го раствора натрия углекислого кислого и 15 см3 ацетона. Объединенные фракции упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C до водного остатка. Остаток доводят до 50 см3 0,5%-м раствором натрия углекислого кислого, переносят в делительную воронку и очищают по [п. 9.4](#p100234).


### <a id="p100232"></a>9.3. Экстракция дифлуфензопира из масла кукурузы


<a id="p100233"></a>К навеске масла (10 +/- 0,1) г добавляют 10 см3 гексана и переносят в делительную воронку. Дифлуфензопир дважды экстрагируют порциями 0,5%-го раствора натрия углекислого кислого по 25 см3. Объединенные щелочные экстракты очищают по [п. 9.4](#p100234).


### <a id="p100234"></a>9.4. Очистка в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100235"></a>Щелочной экстракт последовательно промывают двумя порциями по 10 см3 гексана и двумя порциями по 10 см3 хлористого метилена. В случае плохого разделения слоев можно перенести эмульсию в центрифужную пробирку и центрифугировать в течение 5 мин при скорости 4 000 об./мин. Водный слой подкисляют 0,1 N соляной кислотой до pH = 1 и дифлуфензопир экстрагируют двумя порциями по 30 см3 хлористого метилена. Метиленовые фракции собирают в круглодонную колбу, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток подвергают очистке на патроне N 1 по [п. 9.5](#p100236).


### <a id="p100236"></a>9.5. Очистка на патроне N 1


<a id="p100237"></a>Сухой остаток, полученный по [п. 9.4](#p100234), растворяют в 1 см3 этилацетата, наносят на предварительно кондиционированный патрон [(п. 7.2)](#p100181), колбу ополаскивают 1 см3 этилацетата и также наносят на патрон. Патрон промывают 10 см3 смеси N 1, элюат отбрасывают. Дифлуфензопир элюируют 5 см3 смеси N 2, элюат собирают, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 вводят в хроматограф.
<a id="p100238"></a>*Примечание.* Ввиду нестабильности аналита хранение экстрактов подготовленных проб не допускается. Пробоподготовку и анализ следует проводить в один день.


### <a id="p100239"></a>9.6. Условия хроматографирования


<a id="p100240"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи С18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза: ацетонитрил и 0,005 М ортофосфорная кислота в соотношении 30:70 (от 0 до 1 мин); далее градиент от 30:70 до 70:30 (от 1 до 8 мин). Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 287 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания дифлуфензопира (5,1 +/- 0,1) мин.


## 10. <a id="p100241"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100242"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание дифлуфензопира в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

<a id="p100243"></a> $X = \frac{S_{x} \cdot K \cdot V}{P} \cdot \frac{100}{f} ,$ 

<a id="p100244"></a>где Sx - площадь пика дифлуфензопира на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);
<a id="p100245"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100246"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
<a id="p100247"></a>P - навеска анализируемого образца, г;
<a id="p100248"></a>f - полнота извлечения дифлуфензопира, приведенная в [табл. 2](#p100070), %.
<a id="p100249"></a>Содержание остаточных количеств дифлуфензопира в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100250"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор дифлуфензопира с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.


## 11. <a id="p100251"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100252"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости [(1)](#p100281):

<a id="p100253"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,$ 

<a id="p100254"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100255"></a>r - значение предела повторяемости $(r = 2,8\sigma_{r})$ .
<a id="p100256"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100281) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100257"></a>Оформление результатов


<a id="p100258"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100259"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ мг/кг при вероятности P = 0,95,

<a id="p100260"></a>где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100261"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100262"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} ,$ 

<a id="p100263"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100264"></a>В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100265"></a>"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,01 мг/кг <*>, где <*> - 0,01 мг/кг - предел обнаружения дифлуфензопира в почве).


## 13. <a id="p100266"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100267"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-2-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100268"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100269"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100270"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100271"></a> $\text{С}_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime},$ 

<a id="p100272"></a>где $\pm \Delta_{\text{л},\text{Х}}( \pm \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

<a id="p100273"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,$ 

<a id="p100274"></a>где $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100275"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \text{Х}}{100} ,$ 

<a id="p100276"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100277"></a>Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

<a id="p100278"></a>Кк = X' - X - Cд,

<a id="p100279"></a>где X', X, Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100251)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
<a id="p100280"></a>Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

<a id="p100281"></a> $\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .$ (1)

<a id="p100282"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
<a id="p100283"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100284"></a>|Кк| <= К, (2)

<a id="p100285"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100286"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100284) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100284) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
<a id="p100287"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100288"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

<a id="p100289"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R,$ (3)

<a id="p100290"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
<a id="p100291"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.



<a id="p100292"></a>

---