---
title: "\"МУК 4.1.3234-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств прогексадиона-кальция в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3234-14"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3234-14"
---

## "МУК 4.1.3234-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств прогексадиона-кальция в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3234-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств прогексадиона-кальция в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 22.12.2014)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
22 декабря 2014 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОГЕКСАДИОНА-КАЛЬЦИЯ**
**В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3234-14**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ФБГНУ Всероссийский НИИ защиты растений Федерального агентства научных организаций, Санкт-Петербург, Пушкин (В.И. Долженко, И.А. Цибульская, А.О. Берестецкий, Е.В. Полуэктова).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. N 2).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 22 декабря 2014 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Свидетельство о метрологической аттестации N 01.5.04.181/01.00043/2014.
<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации прогексадиона-кальция в зерне зерновых культур в диапазоне концентраций 0,025 - 0,5 мг/кг, в соломе 0,25 - 2,5 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Прогексадион-кальция.
<a id="p100013"></a>Структурная формула:

<a id="p100014"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/GDch0nGb/img_0.png) 

<a id="p100015"></a>Кальций 3-оксидо-5-оксо-4-пропионилциклогекса-3-енкарбоксилат (IUPAC).
<a id="p100016"></a>Молекулярная масса: 250,3.
<a id="p100017"></a>Брутто формула: C10H10CaO5.
<a id="p100018"></a>Химически чистое вещество представляет собой мелкодисперсный белый порошок без запаха.
<a id="p100019"></a>Температура плавления > 360 °C.
<a id="p100020"></a>Давление пара 1,33 x 10-2 мРа (20 °C).
<a id="p100021"></a>Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода Kow log P = -2,90.
<a id="p100022"></a>Растворимость в воде (мг/дм3, 20 °C): 174.
<a id="p100023"></a>Растворимость в органических растворителях (мг/дм3, 20 °C): метанол - 1,11; ацетон - 0,038.
<a id="p100024"></a>Стабилен в водных растворах (ДТ50 составляет 5 дней при pH 5,0 и температуре 20 °C и 83 дня при pH 9,0). Устойчив к нагреванию до 200 °C и воздействию солнечного света. рКа 5,15.
<a id="p100025"></a>Краткая токсикологическая характеристика. Острая оральная токсичность для крыс и мышей > 5 000 мг/кг. При подкожном введении крысам LD50 > 2 000 мг/кг. Оказывает слабое раздражающее действие на глаза, но не раздражает кожу (кролики). Ингаляционная токсичность для крыс LD50 составляет 4,21 мг на 1 литр воздуха.
<a id="p100026"></a>Область применения. Регулятор роста растений. Используется в качестве средства от полегания мелкозерновых злаков. Также может быть использован как замедлитель роста дерна, земляных орехов и цветов или для ингибирования удлинения новых побегов фруктовых деревьев.
<a id="p100027"></a>В России для прогексадиона-кальция установлены гигиенические нормативы для плодовых семечковых культур - МДУ 0,5 мг/кг.

1. <a id="p100028"></a>Метрологическая характеристика метода

<a id="p100029"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100030"></a>Таблица 1

<a id="p100031"></a>Метрологические параметры


| <a id="p100032"></a>Объект анализа | <a id="p100033"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) | <a id="p100034"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , % | <a id="p100035"></a>Показатель внутрилабораторной прецизионности, $\sigma_{R\text{л}}$ , % | <a id="p100036"></a>Показатель воспроизводимости, $\sigma_{R}$ , % | <a id="p100037"></a>Показатель точности [<*>](#p100051) (границы относительной погрешности), $\pm \delta$ , % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100038"></a>Зерно | <a id="p100039"></a>0,025 - 0,5 | <a id="p100040"></a>7 | <a id="p100041"></a>9 | <a id="p100042"></a>12 | <a id="p100043"></a>23 |
| <a id="p100044"></a>Солома | <a id="p100045"></a>0,25 - 2,5 | <a id="p100046"></a>7 | <a id="p100047"></a>8 | <a id="p100048"></a>11 | <a id="p100049"></a>22 |



<a id="p100050"></a>

---

<a id="p100051"></a><*> Соответствует расширенной неопределенности UОТН. при коэффициенте охвата k = 2.

<a id="p100052"></a>Таблица 2

<a id="p100053"></a>Полнота извлечения прогексадиона, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата
для n = 20, P = 0,95


| <a id="p100054"></a>Анализируемый объект | <a id="p100055"></a>Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) | <a id="p100056"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | <a id="p100057"></a>Среднее значение определения, % | <a id="p100058"></a>Стандартное отклонение, S | <a id="p100059"></a>Доверительный интервал среднего результата, +/- % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100060"></a>Зерно | <a id="p100061"></a>0,025 | <a id="p100062"></a>0,025 - 0,5 | <a id="p100063"></a>80,2 | <a id="p100064"></a>6,6 | <a id="p100065"></a>5,5 |
| <a id="p100066"></a>Солома | <a id="p100067"></a>0,25 | <a id="p100068"></a>0,25 - 2,5 | <a id="p100069"></a>79,5 | <a id="p100070"></a>6,7 | <a id="p100071"></a>5,6 |


2. <a id="p100072"></a>Метод измерения

<a id="p100073"></a>Методика основана на определении прогексадиона-кальция по свободной кислоте прогексадиону методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового (УФ) детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем с последующей очисткой экстрактов на концентрирующих патронах для твердофазной экстракции, заполненных ионообменной смолой.
<a id="p100074"></a>Идентификация прогексадиона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки. Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. <a id="p100075"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы


#### <a id="p100076"></a>3.1 Средства измерений



| <a id="p100077"></a>Жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки |  |
| --- | --- |
| <a id="p100078"></a>Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг | <a id="p100079"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100080"></a>Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г | <a id="p100081"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100082"></a>Колбы мерные на 10, 100 и 1 000 см3 | <a id="p100083"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100084"></a>Микродозаторы одноканальные переменного объема от 200 до 1 000 мм3 и от 1 до 5 см3 |  |
| <a id="p100085"></a>Пипетки градуированные объемом 1, 2, 5 и 10 см3 | <a id="p100086"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100087"></a>Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 | <a id="p100088"></a>ГОСТ 23932-90 |


<a id="p100089"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100090"></a>3.2 Реактивы



| <a id="p100091"></a>Ацетонитрил, класс 5, осч | <a id="p100092"></a>ТУ 2634-002-54260861-13 |
| --- | --- |
| <a id="p100093"></a>Натрий фосфорнокислый 1-замещенный 2-водный (дигидрофосфат натрия), ч | <a id="p100094"></a>[ГОСТ 245-76](https://bukva.ai/docs/gost-245-76) |
| <a id="p100095"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) | <a id="p100096"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100097"></a>Хлористый метилен, хч | <a id="p100098"></a>ТУ 2631-019-44493179-98 |
| <a id="p100099"></a>н-Гексан, хч | <a id="p100100"></a>ТУ 2631-003-05807999-98 |
| <a id="p100101"></a>Метанол, хч | <a id="p100102"></a>[ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) |
| <a id="p100103"></a>Натрия гидроксид, чда | <a id="p100104"></a>ГОСТ 4328-77 |
| <a id="p100105"></a>Натрий хлористый, чда | <a id="p100106"></a>ГОСТ 4233-77 |
| <a id="p100107"></a>Натрий сернокислый безводный, хч | <a id="p100108"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) |
| <a id="p100109"></a>Серная кислота, осч | <a id="p100110"></a>[ГОСТ 14262-78](https://bukva.ai/docs/standart-gost-14262-78) |
| <a id="p100111"></a>Ортофосфорная кислота, хч | <a id="p100112"></a>ГОСТ 6562-80 |
| <a id="p100113"></a>Муравьиная кислота, ч | <a id="p100114"></a>[ГОСТ 5848-73](https://bukva.ai/docs/gost-5848-73) |
| <a id="p100115"></a>Стандарт прогексадиона с содержанием основного компонента 99,6% |  |
| <a id="p100116"></a>Трифторуксусная кислота, ч | <a id="p100117"></a>ТУ 6-09-3877-80 |


<a id="p100118"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


#### <a id="p100119"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы



| <a id="p100120"></a>Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи С18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100121"></a>Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции |  |
| <a id="p100122"></a>Ванна ультразвуковая | <a id="p100123"></a>ТУ 3.836.008 |
| <a id="p100124"></a>Воронки лабораторные В-75-110 | <a id="p100125"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100126"></a>Воронки делительные объемом 250 и 500 см3 | <a id="p100127"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100128"></a>Воронка Бюхнера |  |
| <a id="p100129"></a>Гомогенизатор | <a id="p100130"></a>МРТУ 42-1505-5-63 |
| <a id="p100131"></a>Колбы плоскодонные на шлифах КШ 250 29/32 ТС | <a id="p100132"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100133"></a>Колбы-концентраторы емкостью 100 и 250 см3 | <a id="p100134"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100135"></a>Насос водоструйный | <a id="p100136"></a>ГОСТ 10696-75 |
| <a id="p100137"></a>Патроны анионообменные для твердофазной экстракции, масса сорбента 0,5 г |  |
| <a id="p100138"></a>Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар |  |
| <a id="p100139"></a>Стаканы химические объемом 100, 200 и 500 см3 | <a id="p100140"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100141"></a>Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 000 об./мин |  |
| <a id="p100142"></a>Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см3 |  |


<a id="p100143"></a>*Примечание.* Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. <a id="p100144"></a>Требования безопасности

<a id="p100145"></a>4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
<a id="p100146"></a>При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками необходимо соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
<a id="p100147"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

5. <a id="p100148"></a>Требования к квалификации операторов

<a id="p100149"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100242).

6. <a id="p100150"></a>Условия измерений

<a id="p100151"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
<a id="p100152"></a> $\cdot$ процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
<a id="p100153"></a> $\cdot$ выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. <a id="p100154"></a>Подготовка к определению


#### <a id="p100155"></a>7.1 Кондиционирование колонки


<a id="p100156"></a>Перед началом работы аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,3 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.


#### <a id="p100157"></a>7.2 Приготовление растворов


<a id="p100158"></a>7.2.1. Приготовление 0,005 М раствора ортофосфорной кислоты: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 200 см3 воды для лабораторного анализа, прибавляют 0,5 г 98%-й ортофосфорной кислоты и доводят объем до метки водой.
<a id="p100159"></a>7.2.2. Приготовление подвижной фазы: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 250 см3 ацетонитрила и доводят объем до метки раствором 0,005 М ортофосфорной кислоты.

##### <a id="p100160"></a>7.2.3 Приготовление 2,5 М раствора серной кислоты.

<a id="p100161"></a>В мерную колбу объемом 1 дм3 добавляют 800 см3 бидистиллированной воды, 141,24 см3 серной кислоты и доводят до метки бидистиллированной водой.

##### <a id="p100162"></a>7.2.4 Экстракционная смесь.

<a id="p100163"></a>В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 990 см3 ацетонитрила и добавляют 10 см3 2,5 М раствора серной кислоты.

##### <a id="p100164"></a>7.2.5 Приготовление 5%-го раствора фосфорнокислого натрия.

<a id="p100165"></a>В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 50 г натрия фосфорнокислого 1-замещенного 2-водного, растворяют при перемешивании в 600 см3 дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки.

##### <a id="p100166"></a>7.2.6 Приготовление 10 М раствора ортофосфорной кислоты.

<a id="p100167"></a>В мерную колбу объемом 200 см3 добавляют 95,18 см3 бидистиллированной воды, затем осторожно добавляют 104,82 см3 концентрированной ортофосфорной кислоты.

##### <a id="p100168"></a>7.2.7 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.

<a id="p100169"></a>В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 320 г кристаллического хлористого натрия, растворяют при перемешивании в 600 см3 бидистиллированной воды и доводят объем раствора до метки.

##### <a id="p100170"></a>7.2.8 Приготовление 0,1 н раствора гидроксида натрия.

<a id="p100171"></a>В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 4 г кристаллического гидроксида натрия и растворяют при перемешивании в 800 см3 бидистиллированной воды, доводя объем раствора до метки.
<a id="p100172"></a>7.2.9. Приготовление элюента N 1 (метанол - 0,1 н гидроксид натрия в соотношении 20:80).
<a id="p100173"></a>В мерной колбе объемом 100 см3 смешивают 20 см3 метанола и 80 см3 0,1 н раствора гидроксида натрия. Полученную смесь перемешивают.
<a id="p100174"></a>7.2.10. Приготовление элюента N 2 (1%-й водный раствор муравьиной кислоты).
<a id="p100175"></a>В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 990 см3 бидистиллированной воды и добавляют 10 см3 муравьиной кислоты при перемешивании.

##### <a id="p100176"></a>7.2.11 Приготовление 50%-го раствора метанола.

<a id="p100177"></a>В мерную колбу объемом 100 см3 вносят 50 см3 метанола и доводят до метки бидистиллированной водой, полученную смесь перемешивают.
<a id="p100178"></a>7.2.12. Приготовление элюента N 3 (1%-й раствор муравьиной кислоты в 50%-ом метаноле).
<a id="p100179"></a>В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 99 см3 смеси метанол-вода в соотношении 50:50 по объему и добавляют 1 см3 муравьиной кислоты.
<a id="p100180"></a>7.2.13. Приготовление элюента N 4 (1%-й раствор муравьиной кислоты в метаноле).
<a id="p100181"></a>В мерную колбу вместимостью 100 см3 добавляют 99 см3 метанола и при перемешивании добавляют 1 см3 муравьиной кислоты.


#### <a id="p100182"></a>7.3 Приготовление основного и градуировочных растворов


<a id="p100183"></a>7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,1 мг/см3: точную навеску прогексадиона (10 +/- 0,1 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.
<a id="p100184"></a>Градуировочные растворы с концентрациями 0,125, 0,25, 0,5, 1,0 и 2,5 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы.
<a id="p100185"></a>7.3.2. Раствор N 1 с концентрацией 2,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 2,5 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100186"></a>7.3.3. Раствор N 2 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1,0 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100187"></a>7.3.4. Раствор N 3 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора N 2 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100188"></a>7.3.5. Раствор N 4 с концентрацией 0,25 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора N 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100189"></a>7.3.6. Раствор N 5 с концентрацией 0,125 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора N 4 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100190"></a>Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 4 недель, градуировочные растворы - в течение суток.
<a id="p100191"></a>При изучении полноты определения для внесения в матрицу используют ацетонитрильные растворы прогексадиона с концентрациями 1,0 и 10,0 мкг/см3, которые готовят из основного стандартного раствора [(п. 7.3.1)](#p100183) с концентрацией 0,1 мг/см3 методом последовательного разбавления ацетонитрилом.


#### <a id="p100192"></a>7.4 Построение градуировочного графика


<a id="p100193"></a>Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация прогексадиона в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации прогексадиона в градуировочном растворе.
<a id="p100194"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100195"></a>**C = KS,**

<a id="p100196"></a>где S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100197"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100198"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100199"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<a id="p100200"></a> $\frac{|C - C_{\text{к}}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.},$ 

<a id="p100201"></a>где C - аттестованное значение массовой концентрации прогексадиона в градуировочном растворе,
<a id="p100202"></a>Cк - результат контрольного измерения массовой концентрации прогексадиона в градуировочном растворе,
<a id="p100203"></a> $\lambda_{\text{контр}}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. ( $\lambda_{\text{контр}.} = 10\%$ при P = 0,95).


#### <a id="p100204"></a>7.5 Подготовка анионообменных патронов

для твердофазной экстракции

<a id="p100205"></a>Патрон промывают 10 см3 1%-го раствора муравьиной кислоты в метаноле и подсушивают током воздуха. Затем патроны последовательно промывают 5 см3 метанола и 5 см3 воды. Нельзя допускать высыхания верхнего слоя сорбента.

8. <a id="p100206"></a>Отбор проб и хранение

<a id="p100207"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ Р 50436-92](https://bukva.ai/docs/gost-r-50436-92) (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна". Пробы зерна и соломы для определения остатков прогексадиона в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Перед анализом пробы зерна доводят до стандартной влажности и измельчают.

9. <a id="p100208"></a>Проведение определения


#### <a id="p100209"></a>9.1 Экстракция


<a id="p100210"></a>Образец измельченного зерна массой (5 +/- 0,1) г или соломы массой (1 +/- 0,1) г помещают в центрифужные пробирки вместимостью 50 см3, добавляют 35 см3 экстракционной смеси, приготовленной по [п. 7.2.4](#p100162), интенсивно перемешивают в течение 10 мин и центрифугируют при 4 000 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость декантируют и переносят в испарительную колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют дважды с 35 и 30 см3 смеси, после чего объединенный экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре бани не выше 45 °C до объема 10 см3.
<a id="p100211"></a>К полученному экстракту добавляют 50 см3 5%-го раствора дигидрофосфата натрия и переносят в делительную воронку. Испарительную колбу обмывают 50 см3 новой порции 5%-го раствора дигидрофосфата натрия и переносят в ту же делительную воронку. Затем в нее добавляют 50 см3 н-гексана и встряхивают несколько минут. Водный слой отделяют (органический - отбрасывают) и доводят до pH 3 с помощью 10 М ортофосфорной кислоты, после чего добавляют 30 см3 насыщенного раствора хлорида натрия. Прогексадион переэкстрагируют дважды хлористым метиленом порциями по 50 см3, встряхивая делительную воронку в течение 2 - 3 мин. Органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г) в испарительную колбу объемом 250 см3, осушитель промывают 10 - 15 см3 хлористого метилена и вносят в ту же испарительную колбу. Полученный раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C.


#### <a id="p100212"></a>9.2 Очистка на анионообменных патронах

для твердофазной экстракции

<a id="p100213"></a>Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов зерна или соломы, растворяют в 10 см3 0,1 н раствора гидроксида натрия, помещая образцы в ультразвуковую ванну на 2 - 3 мин. Раствор вносят в кондиционированный анионообменный патрон со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в секунду. После нанесения раствора патрон промывают 10 см3 0,1 н раствора гидроксида натрия, элюат отбрасывают. Затем патрон промывают последовательно 10 см3 элюента N 1 и 10 см3 метанола, элюат отбрасывают. Патрон подсушивают током воздуха. После этого патрон последовательно промывают по 10 см3 элюентов N 2 и 3. Патрон подсушивают током воздуха, после чего прогексадион элюируют 10 см3 элюента N 4. Элюат упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 45 °C. Сухой остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ (приготовленной по [п. 7.2.2](#p100159)) и анализируют на содержание прогексадиона. 10 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.


#### <a id="p100214"></a>9.3 Условия хроматографирования


<a id="p100215"></a>Жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором. Элюирование в системе ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота в соотношении 25:75 по объему. Скорость потока 0,3 см3/мин. Дозируемый объем 10 мм3. Колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи С18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки 40 °C. Детектирование на длине волны 275 нм. Время удерживания прогексадиона 2,65 +/- 0,055 мин. Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций 0,125 - 2,5 мкг/см3.

10. <a id="p100216"></a>Обработка результатов анализа

<a id="p100217"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание прогексадиона-кальция в зерне (или соломе) X (мг/кг) вычисляют по формуле:

<a id="p100218"></a> $X = \frac{S_{x} \cdot K \cdot V}{P} \cdot \frac{100}{f} \cdot F,$ 

<a id="p100219"></a>где Sx - площадь пика прогексадиона на хроматограмме испытуемого образца, (AU-сек);
<a id="p100220"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100221"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
<a id="p100222"></a>P - навеска (объем воды) анализируемого образца, г (см3);
<a id="p100223"></a>f - полнота извлечения прогексадиона, приведенная в [табл. 2](#p100053);
<a id="p100224"></a>F - фактор пересчета содержания прогексадиона в его кальциевую соль (250,3/212,2 = 1,18).
<a id="p100225"></a>Содержание остаточных количеств прогексадиона-кальция в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100226"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор прогексадиона с концентрацией 2,5 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

11. <a id="p100227"></a>Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

<a id="p100228"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

<a id="p100229"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,$ 

<a id="p100230"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100231"></a>r - значение предела повторяемости $(r = 2,8 \cdot \sigma_{r})$ .
<a id="p100232"></a>При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. <a id="p100233"></a>Оформление результатов

<a id="p100234"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100235"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг}$ при вероятности P = 0,95,

<a id="p100236"></a>где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100237"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100238"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100}$ 

<a id="p100239"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100240"></a>В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100241"></a>"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,05 мг/кг*, где * - 0,05 мг/кг - предел обнаружения прогексадиона-кальция в зерне).

13. <a id="p100242"></a>Контроль качества результатов измерений

<a id="p100243"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100244"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100245"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100246"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100247"></a> $\text{С}_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},\text{Х}} + \Delta_{\text{л},\text{Х }\prime},$ 

<a id="p100248"></a>где $\pm \Delta_{\text{л},\text{Х}}$ $(\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

<a id="p100249"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,$ 

<a id="p100250"></a>где $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100251"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} ,$ 

<a id="p100252"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100253"></a>Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

<a id="p100254"></a>Kк = X' - X - Cд,

<a id="p100255"></a>где X', X, Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100227)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
<a id="p100256"></a>Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

<a id="p100257"></a> $K = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{Х }\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{Х}}^{2}} .$ (1)

<a id="p100258"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).
<a id="p100259"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100260"></a>|Kк| <= K, (2)

<a id="p100261"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100262"></a>При невыполнении [условия (2)](#p100260) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (2)](#p100260) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
<a id="p100263"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100264"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

<a id="p100265"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R,$ (3)

<a id="p100266"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
<a id="p100267"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.



<a id="p100268"></a>

---