---
title: "\"МУК 4.1.3142-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3142-13"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3142-13"
---

## "МУК 4.1.3142-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения. Методические указания"

# "МУК 4.1.3142-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 26 ноября 2013 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Вр.и.о. руководителя<br>
Федеральной службы<br>
по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главного государственного<br>
санитарного врача<br>
Российской Федерации<br>
**А.Ю.ПОПОВА**<br>
26 ноября 2013 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОД ОБНАРУЖЕНИЯ ФЕНИЛБУТАЗОНА В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ**
**ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.3142-13**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

<div align="center">

с момента утверждения

</div>


1. <a id="p100006"></a>Разработаны ФГБУ "НИИ питания" РАМН (О.И. Передеряев, М.Н. Богачук, А.Д. Малинкин, И.Б. Перова, М.А. Макаренко, В.В. Бессонов, К.И. Эллер).
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому надзору Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Протокол от 29 октября 2013 г. N 3).
3. <a id="p100008"></a>Утверждены вр.и.о. руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой 26 ноября 2013 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.

<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок качественного определения фенилбутазона в мясе и субпродуктах убойных животных и птицы, а также продуктах их переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии тандемной масс-спектрометрией (предел обнаружения 0,05 мг/кг).
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Название действующего вещества по ИСО: фенилбутазон.
<a id="p100013"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-бутил-1,2-дифенил-3,5-пиразолидин-3,5-дион.
<a id="p100014"></a>**CAS N: 50-33-9.**
<a id="p100015"></a>Молекулярная масса: 308,37.

<div align="center">

<a id="p100016"></a>Структурная формула:

<a id="p100017"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/kuQ3Yc8f/img_0.png) 

</div>


<a id="p100018"></a>Фенилбутазон является производным пиразолона и относится к нестероидным противовоспалительным средствам. Применяется в медицинской практике как противовоспалительное, анальгезирующее и жаропонижающее средство. Доступен в России как лекарственное средство под торговым наименованием бутадион.
<a id="p100019"></a>Фенилбутазон также применяется в ветеринарии как нестероидное противовоспалительное и обезболивающее лекарственное средство. В пищевых продуктах фенилбутазон не должен обнаруживаться в пределах обнаружения метода (0,05 мг/кг). Обнаружение фенилбутазона в пищевых продуктах связано с несоблюдением регламента его использования.
<a id="p100020"></a>Физические свойства: белый кристаллический порошок, без запаха, температура плавления 105 °C, растворимость в воде (~0,7 мг/см3), в этаноле (~50 мг/см3), свободно растворим в диэтиловом эфире и ацетоне. Максимум поглощения в подкисленном этаноле 239,5 нм (коэффициент экстинкции 15488).


## 1. <a id="p100021"></a>Метод измерений


<a id="p100022"></a>Метод основан на определении фенилбутазона методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с тандемной масс-спектрометрией.


## 2. <a id="p100023"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



#### <a id="p100024"></a>2.1 Средства измерений



| <a id="p100025"></a>Система жидкостной хроматографии, оснащенная насосом с возможностью градиентного элюирования и масс-спектрометрическим детектором (тройной квадруполь) |  |
| --- | --- |
| <a id="p100026"></a>Хроматографическая колонка для обращенно-фазовой хроматографии с силикагелем, химически связанным с октадецилсиланом (линейные размеры 250 x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм) |  |
| <a id="p100027"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 100 г и погрешностью +/- 0,0001 г | <a id="p100028"></a>ГОСТ 24104 |
| <a id="p100029"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 3000 г и погрешностью +/- 0,1 г | <a id="p100030"></a>ГОСТ 24104 |
| <a id="p100031"></a>Колбы мерные наливные объемом 50, 100, 200 и 500 см3 | <a id="p100032"></a>[ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100033"></a>Цилиндры мерные лабораторные с носиком 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 500 см3 | <a id="p100034"></a>[ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100035"></a>Пипетка 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 | <a id="p100036"></a>[ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |


<a id="p100037"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100038"></a>2.2 Реактивы



| <a id="p100039"></a>Фенилбутазон (содержание основного вещества не менее 95%) |  |
| --- | --- |
| <a id="p100040"></a>Ацетонитрил, ос.ч. | <a id="p100041"></a>ТУ 6-09-14-2167-84 |
| <a id="p100042"></a>Диэтиловый эфир, х.ч. | <a id="p100043"></a>ТУ 2600-001-43852015-05 |
| <a id="p100044"></a>Петролейный эфир, ч. | <a id="p100045"></a>ТУ 6-09-124483 |
| <a id="p100046"></a>Этанол | <a id="p100047"></a>[ГОСТ Р 51723-01](https://bukva.ai/docs/gost-r-51723-2001) |
| <a id="p100048"></a>Раствор аммиака 25%-й, ос.ч. | <a id="p100049"></a>[ГОСТ 24147-80](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-24147-80) |
| <a id="p100050"></a>Кислота соляная, ос.ч. | <a id="p100051"></a>[ГОСТ 14261-77](https://bukva.ai/docs/gost-14261-77) |
| <a id="p100052"></a>Кислота муравьиная, ч. | <a id="p100053"></a>[ГОСТ 5848-73](https://bukva.ai/docs/gost-5848-73) |
| <a id="p100054"></a>Тетрагидрофуран (содержание основного вещества 99,9%), импортный |  |
| <a id="p100055"></a>Гексан, х.ч. | <a id="p100056"></a>СТП ТУ СОМР 2-008-06 |
| <a id="p100057"></a>Азот, ос.ч., 1-й сорт<br>(объемная доля азота 99,999%) | <a id="p100058"></a>ГОСТ 9293-74 |
| <a id="p100059"></a>Вода дистиллированная | <a id="p100060"></a>ГОСТ 6709 |


<a id="p100061"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


#### <a id="p100062"></a>2.3 Вспомогательные устройства, материалы



| <a id="p100063"></a>Центрифуга для пробирок объемом не менее 50 см3 и относительной силой центрифугирования не менее 4000 |  |
| --- | --- |
| <a id="p100064"></a>Центрифуга для пробирок объемом не менее 1,5 см3 и относительной силой центрифугирования не менее 10000 |  |
| <a id="p100065"></a>Шейкер для встряхивания пробирок объемом не менее 50 см3 |  |
| <a id="p100066"></a>Лабораторная мельница для измельчения проб мяса и субпродуктов убойных животных и птицы, а также продуктов их переработки массой не менее 150 г |  |
| <a id="p100067"></a>Секундомер, обеспечивающий измерение времени с точностью не менее 10 с |  |
| <a id="p100068"></a>Ротационный испаритель |  |
| <a id="p100069"></a>Стаканы вместимостью 50 и 500 см3 | <a id="p100070"></a>ГОСТ 25336 |
| <a id="p100071"></a>Колбы для выпаривания остроконечные объемом 50 см3 |  |
| <a id="p100072"></a>Автоматические пипетки с переменным объемом 0,1 - 1,0 см3 |  |
| <a id="p100073"></a>Полимерные пробирки объемом 50 см3 с герметичной крышкой |  |
| <a id="p100074"></a>Полимерные пробирки объемом 1,5 см3 с герметичной крышкой |  |


<a id="p100075"></a>*Примечание.* Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными и  лучшими техническими характеристиками.


## 3. <a id="p100076"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100077"></a>3.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф и масс-спектрометрический детектор.
<a id="p100078"></a>3.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.


## 4. <a id="p100079"></a>Требования к квалификации персонала


<div align="center">

<a id="p100080"></a>К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором.

</div>



## 5. <a id="p100081"></a>Условия измерений


<a id="p100082"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100083"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100084"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 6. <a id="p100085"></a>Отбор проб


<a id="p100086"></a>Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией по отбору проб для определения токсичных элементов для каждого конкретного вида продукции.


## 7. <a id="p100087"></a>Подготовка к определению



#### <a id="p100088"></a>7.1 Приготовление основного раствора стандарта

<div align="center">

фенилбутазона с концентрацией 50 мкг/см3

</div>


<a id="p100089"></a>Навеску фенилбутазона массой 0,010 г, взвешенную с погрешностью не более 0,0001 г, помещают в мерную колбу вместимостью 200 см3, добавляют 120 см3 этанола, перемешивают до полного растворения, доводят объем до метки этанолом и тщательно перемешивают.
<a id="p100090"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °C в течение 12 месяцев.


#### <a id="p100091"></a>7.2 Приготовление рабочего раствора стандарта

<div align="center">

фенилбутазона с концентрацией 1 мкг/см3

</div>


<a id="p100092"></a>Мерной пипеткой переносят 2 см3 основного раствора стандарта фенилбутазона в мерную колбу на 100 см3, доводят объем до метки этанолом и перемешивают.
<a id="p100093"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °C в течение 3 месяцев.


#### <a id="p100094"></a>7.3 Приготовление компонента A подвижной фазы


<a id="p100095"></a>В стакан объемом 500 см3 добавляют 400 см3 дистиллированной воды и, тщательно перемешивая, прибавляют 0,5 см3 муравьиной кислоты. Содержимое переносят в мерную колбу на 500 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.


#### <a id="p100096"></a>7.4 Приготовление 7,5%-го раствора аммиака


<a id="p100097"></a>В стакан объемом 50 см3 мерным цилиндром вместимостью 50 см3 вносят 15 см3 25%-го раствора аммиака и 35 см3 дистиллированной воды.


#### <a id="p100098"></a>7.5 Приготовление 6 Н соляной кислоты


<div align="center">

<a id="p100099"></a>В стакан объемом $50^{3}$ мерным цилиндром вместимостью 50 см3 отмеривают 30 см3 кислоты соляной и 20 см3 дистиллированной воды.

</div>



#### <a id="p100100"></a>7.6 Приготовление смеси тетрагидрофуран/гексан (60/240)


<a id="p100101"></a>В цилиндр объемом 500 см3 отмеривают 240 см3 гексана и доводят объем до 300 см3 тетрагидрофураном.


#### <a id="p100102"></a>7.7 Приготовление смеси ацетонитрил-водный раствор

<div align="center">

муравьиной кислоты (1:1)

</div>


<a id="p100103"></a>В мерную колбу вместимостью 50 см3 мерным цилиндром вместимостью 25 см3 отмеривают 25 см3 ацетонитрила, пипеткой вместимостью 1 см3 отмеривают 0,2 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.


## 8. <a id="p100104"></a>Извлечение фенилбутазона


<div align="center">

<a id="p100105"></a>Исследование каждого образца проводится в двух параллельных измерениях.

</div>


<a id="p100106"></a>А. Измельчение и гомогенизация пробы

- <a id="p100107"></a>Подвергают измельчению в лабораторной мельнице 150 г образца пищевого продукта.

<div align="center">

<a id="p100108"></a>Б. Извлечение фенилбутазона и очистка

</div>


- <a id="p100109"></a>В пробирку объемом 50 см3 отвешивают 5,0 г (навеска с точностью 0,1 г) гомогенизированной пробы.
- <a id="p100110"></a>Добавляют 5 см3 дистиллированной воды и 0,5 см3 7,5%-го раствора аммиака и встряхивают в течение 20 с.
- <a id="p100111"></a>В пробирку добавляют 10 см3 диэтилового эфира, закрывают и встряхивают в течение 10 с.
- <a id="p100112"></a>В пробирку добавляют 10 см3 петролейного эфира, закрывают и встряхивают в течение 30 с.
- <a id="p100113"></a>Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3000 в течение 5 мин при комнатной температуре.
- <a id="p100114"></a>Органический слой отбрасывают, оставшееся содержимое пробирки встряхивают в течение 10 с.
- <a id="p100115"></a>Добавляют 1 см3 6 Н соляной кислоты и перемешивают.
- <a id="p100116"></a>Добавляют 20 мл смеси тетрагидрофуран/гексан (60/240) и встряхивают на шейкере 10 мин.
- <a id="p100117"></a>Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3000 в течение 5 мин при комнатной температуре.
- <a id="p100118"></a>Упаривают 10 см3 полученного экстракта под вакуумом досуха при температуре 50 °C.
- <a id="p100119"></a>Сухой остаток перерастворяют в 500 мкл смеси ацетонитрил-водный раствор муравьиной кислоты (1:1).
- <a id="p100120"></a>Получившийся раствор центрифугируют в течение 5 мин при 10000, надосадочную жидкость отделяют и исследуют.


## 9. <a id="p100121"></a>Обнаружение фенилбутазона



#### <a id="p100122"></a>9.1 Условия проведения ВЭЖХ


<div align="center">

<a id="p100123"></a>Условия разделения методом ВЭЖХ приведены в табл. 1.

</div>


<a id="p100124"></a>Таблица 1


<table>
<colgroup><col width="37%"><col width="32%"><col width="31%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100125"></a>Параметр</td><td colspan="2"><a id="p100126"></a>Значение</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100127"></a>Насос</td></tr>
<tr><td><a id="p100128"></a>Состав подвижной фазы</td><td colspan="2"><a id="p100129"></a>Компонент A - 0,1%-й водный раствор<br>муравьиной кислоты,<br>компонент B - ацетонитрил</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100130"></a>Условия градиентного элюирования</td><td><a id="p100131"></a>Время, мин</td><td><a id="p100132"></a>Содержание компонента B, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100133"></a>0</td><td><a id="p100134"></a>50</td></tr>
<tr><td><a id="p100135"></a>10</td><td><a id="p100136"></a>95</td></tr>
<tr><td><a id="p100137"></a>15</td><td><a id="p100138"></a>95</td></tr>
<tr><td><a id="p100139"></a>15,5</td><td><a id="p100140"></a>50</td></tr>
<tr><td><a id="p100141"></a>22</td><td><a id="p100142"></a>50</td></tr>
<tr><td><a id="p100143"></a>Скорость потока</td><td colspan="2"><a id="p100144"></a>0,5 см3/мин</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100145"></a>Инжектор</td></tr>
<tr><td><a id="p100146"></a>Объем ввода</td><td colspan="2"><a id="p100147"></a>0,010 см3</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100148"></a>Термостат колонок</td></tr>
<tr><td><a id="p100149"></a>Температура</td><td colspan="2"><a id="p100150"></a>25 °C</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100151"></a>Хроматографические характеристики методики</td></tr>
<tr><td><a id="p100152"></a>Коэффициент емкости $(k\prime)$</td><td colspan="2"><a id="p100153"></a>Должен составлять не менее 2,5</td></tr>
</table>



#### <a id="p100154"></a>9.2 Условия детектирования на тандемном

<div align="right">

масс-спектрометрическом детекторе

</div>


<a id="p100155"></a>Условия детектирования на тандемном масс-спектрометрическом детекторе приведены в табл. 2.

<div align="center">

<a id="p100156"></a>Таблица 2

</div>



| <a id="p100157"></a>Параметр | <a id="p100158"></a>Значение |
| --- | --- |
| <a id="p100159"></a>Источник ионизации | <a id="p100160"></a>Электростатическое распыление |
| <a id="p100161"></a>Режим работы | <a id="p100162"></a>Регистрация дочерних положительных ионов после разрушения материнских ионов (регистрация "перехода") |
| <a id="p100163"></a>Материнские ионы | <a id="p100164"></a>309,4 Да |
| <a id="p100165"></a>Дочерние ионы | <a id="p100166"></a>160,3 и 120,1 Да |
| <a id="p100167"></a>Напряжение на фрагменторе | <a id="p100168"></a>110 В |
| <a id="p100169"></a>Энергия разрушения | <a id="p100170"></a>25 В для 160,3/172,3 и 30 В для 120,1/132,1 |



#### <a id="p100171"></a>9.3 Идентификация фенилбутазона


<div align="center">

<a id="p100172"></a>Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения с абсолютным временем удерживания стандарта фенилбутазона. Абсолютное время удерживания стандарта фенилбутазона устанавливают, анализируя рабочий раствор стандарта фенилбутазона.<br>
<a id="p100173"></a>*Пример* получаемой хроматограммы приведен на рисунке.

</div>


<a id="p100174"></a> ![9. Обнаружение фенилбутазона](https://i.bukva.ai/kuQ3Yc8f/img_1.png) 

<a id="p100175"></a>Рис. Хроматограмма исследуемого образца
с добавлением фенилбутазона на уровне 0,100 мг/кг
(верхняя линия - переход 309,4 - 160,3,

<div align="center">

нижняя - переход 309,4 - 120,1)

</div>



## 10. <a id="p100176"></a>Обработка результатов измерения


<a id="p100177"></a>При обнаружении в предлагаемых условиях на обоих предлагаемых переходах пиков, соответствующих по времени удерживания стандартному образцу фенилбутазона, делается вывод о его наличии в исследуемом образце.


## 11. <a id="p100178"></a>Оформление результатов измерений


<a id="p100179"></a>Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде следующей записи: "В исследуемом образце(ах)... фенилбутазон не обнаружен (предел обнаружения метода 0,05 мг/кг)" или "В исследуемом образце(ах)... обнаружен фенилбутазон (предел обнаружения метода 0,05 мг/кг)".
<a id="p100180"></a>Документ или запись удостоверяет лицо, проводившее измерения, а при необходимости - руководитель организации (предприятия), подпись которого заверяют печатью организации (предприятия).



<a id="p100181"></a>

---