---
title: "\"МУК 4.1.3132-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3132-13"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3132-13"
---

## "МУК 4.1.3132-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3132-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 12.11.2013)


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Врио руководителя<br>
Федеральной службы<br>
по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главного государственного<br>
санитарного врача<br>
Российской Федерации<br>
**А.Ю.ПОПОВА**<br>
12 ноября 2013 года

</div>



#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИФЛУБЕНЗУРОНА В ЯГОДАХ**
**И СОКЕ ЧЕРНОЙ СМОРОДИНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3132-13**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ГНУ "Всероссийский НИИ защиты растений Россельхозакадемии" (В.И. Долженко, И.А. Цибульская, А.О. Берестецкий, Е.В. Полуэктова); ГБОУ ДПО "Российская медицинская академия последипломного образования" Минздрава России (М.С. Орлов).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Протокол от 29 октября 2013 г. N 3).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой 12 ноября 2013 г.

<a id="p100008"></a>Свидетельство о метрологической аттестации N 01.5.04.134/01.00043/2013.
<a id="p100009"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины в диапазоне концентраций 0,001 - 0,01 мг/кг.
<a id="p100010"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100011"></a>Название действующего вещества по ИСО: дифлубензурон.
<a id="p100012"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 1-(4-хлорфенил)-3-(2,6-дифторбензоил)мочевина.
<a id="p100013"></a>N-{[(4-хлорфенил)амино]карбонил}-2,6-дифторбензамид (С.А.)
<a id="p100014"></a>Структурная формула:

<a id="p100015"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/3rbxVDeM/img_0.png) 

<a id="p100016"></a>Эмпирическая формула: $\text{С}_{14}H_{9}ClF_{2}N_{2}O_{2}$ .
<a id="p100017"></a>Молекулярная масса: 310,7.
<a id="p100018"></a>Бесцветное кристаллическое вещество (технический - кристаллы от белых до желтых).
<a id="p100019"></a>Температура плавления: 228 °C (техн.: 210 - 230 °C).
<a id="p100020"></a>Давление паров при 25 °C: $1,2 \times 10^{- 4}\text{мПа}$ .
<a id="p100021"></a>Коэффициент распределения н-октанол/вода: $\text{К}_{ow}logP = 3,89$ .
<a id="p100022"></a>Растворимость (г/л) при 20 °C: н-гексан - 0,063, толуол - 0,29, дихлорметан - 1,8, метанол - 1,1, вода - 0,08 мг/л (при pH 7 и 25 °C).
<a id="p100023"></a>Вещество стабильно в кислых средах (20 °C, pH 5 - 7, $DT_{50}>150\text{дней}$ ), разлагается в щелочных растворах (при pH 9 $DT_{50}$ 42 дня).
<a id="p100024"></a>Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность $(LD_{50})$ для мышей и крыс - более 4 640 мг/кг; острая дермальная токсичность $(LD_{50})$ для кроликов - более 2 000 мг/кг, для крыс - более 10 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность $(LC_{50})$ для крыс - более 2,88 мг/л. Токсичен для пчел. $(CK_{50})$ для рыб 130 - 150 мг/л при экспозиции 96 ч.
<a id="p100025"></a>Мутагенный и онкогенный эффекты при использовании препарата не наблюдались.
<a id="p100026"></a>Гигиенические нормативы для дифлубензурона в России в ягодах и соке черной смородины не установлены.
<a id="p100027"></a>Область применения: Несистемный регулятор роста насекомых с контактным и кишечным действием. Используется для уничтожения широкого диапазона насекомых-вредителей, питающихся листьями лесных и плодовых деревьев, а также плодами. Эффективен против яблонной плодожорки, листоверток и др.


## 1. <a id="p100028"></a>ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100029"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1. для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100030"></a>Таблица 1

<div align="right">

<a id="p100031"></a>Метрологические параметры

</div>



<table>
<colgroup><col width="11%"><col width="17%"><col width="20%"><col width="20%"><col width="15%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100032"></a>Объект анализа</td><td><a id="p100033"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)</td><td><a id="p100034"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r},%$</td><td><a id="p100035"></a>Показатель внутрилабораторной прецизионности, $\sigma_{R\text{л}},%$</td><td><a id="p100036"></a>Показатель воспроизводимости, $\sigma_{R},%$</td><td><a id="p100037"></a>Показатель точности <a href="#p100050">&lt;*&gt;</a> (границы относительной погрешности), $\pm \delta,%$</td></tr>
<tr><td><a id="p100038"></a>Ягоды</td><td><a id="p100039"></a>0,001 - 0,01</td><td><a id="p100040"></a>9</td><td><a id="p100041"></a>11</td><td><a id="p100042"></a>12</td><td><a id="p100043"></a>24</td></tr>
<tr><td><a id="p100044"></a>Сок</td><td><a id="p100045"></a>0,001 - 0,01</td><td><a id="p100046"></a>9</td><td><a id="p100047"></a>11</td><td><a id="p100048"></a>12</td><td><a id="p100049"></a>24</td></tr>
<tr><td colspan="6"><a id="p100050"></a>&lt;*&gt; Соответствует расширенной неопределенности $U_{\text{отн}.}$ при коэффициенте охвата k = 2.</td></tr>
</table>


<a id="p100051"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100052"></a>Полнота извлечения дифлубензурона, стандартное отклонение,<br>
доверительный интервал среднего результата<br>
для n = 20, P = 0,95

</div>



| <a id="p100053"></a>Анализируемый объект | <a id="p100054"></a>Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) | <a id="p100055"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) | <a id="p100056"></a>Полнота извлечения, % | <a id="p100057"></a>Стандартное отклонение, S | <a id="p100058"></a>Доверительный интервал среднего результата, $\pm \%$ |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100059"></a>Ягоды | <a id="p100060"></a>0,001 | <a id="p100061"></a>0,001 - 0,01 | <a id="p100062"></a>89,9 | <a id="p100063"></a>4,6 | <a id="p100064"></a>2,0 |
| <a id="p100065"></a>Сок | <a id="p100066"></a>0,001 | <a id="p100067"></a>0,001 - 0,01 | <a id="p100068"></a>92,0 | <a id="p100069"></a>4,2 | <a id="p100070"></a>1,8 |



## 2. <a id="p100071"></a>МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100072"></a>Методика основана на определении дифлубензурона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после его извлечения из образцов ацетонитрилом и очистке экстрактов на патронах для твердофазной экстракции (ТФЭ).
<a id="p100073"></a>Идентификация дифлубензурона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100074"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.


## 3. <a id="p100075"></a>СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ



### <a id="p100076"></a>3.1. Средства измерений



| <a id="p100077"></a>Жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки |  |
| --- | --- |
| <a id="p100078"></a>Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг | <a id="p100079"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100080"></a>Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г | <a id="p100081"></a>ГОСТ 24104-01 |
| <a id="p100082"></a>Колбы мерные на 10, 100 и 1 000 см3 | <a id="p100083"></a>ГОСТ 23932-90 |
| <a id="p100084"></a>Микродозаторы одноканальные переменного объема от 200 до 1 000 мм3 и от 1 до 5 см3 Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 | <a id="p100085"></a>ГОСТ 23932-90 |


<a id="p100086"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100087"></a>3.2. Реактивы



| <a id="p100088"></a>Ацетонитрил, х.ч. | <a id="p100089"></a>ТУ 6-09-3534-87 |
| --- | --- |
| <a id="p100090"></a>Вода бидистиллированная, деионизированная | <a id="p100091"></a>[ГОСТ Р 52501-05](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100092"></a>Дифлубензурон, аналитический стандарт 99,9% |  |
| <a id="p100093"></a>Диэтиловый эфир, ч. | <a id="p100094"></a>ОСТ 84-2006-88 |
| <a id="p100095"></a>н-Гексан, х.ч. | <a id="p100096"></a>ТУ 2631-003-05807999-98 |
| <a id="p100097"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил-вода (60:40, по объему) |  |
| <a id="p100098"></a>Элюент N 1: смесь вода-ацетонитрил (60:40, по объему) |  |
| <a id="p100099"></a>Элюент N 2: смесь гексан-диэтиловый эфир (80:20, по объему) |  |
| <a id="p100100"></a>Элюент N 3: смесь гексан-диэтиловый эфир (55:45, по объему) |  |
| <a id="p100101"></a>Элюент N 4: смесь вода-ацетонитрил (70:30, по объему) |  |


<a id="p100102"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


### <a id="p100103"></a>3.3. Вспомогательные устройства и материалы



| <a id="p100104"></a>Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100105"></a>Аппарат для встряхивания проб | <a id="p100106"></a>ТУ 64-1-1081-73 |
| <a id="p100107"></a>Вакуумный водоструйный насос | <a id="p100108"></a>ГОСТ 10696-75 |
| <a id="p100109"></a>Воронки химические конусные | <a id="p100110"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100111"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 50 и 100 см3 | <a id="p100112"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100113"></a>Колбы плоскодонные конические вместимостью 100 см3 | <a id="p100114"></a>ГОСТ 25336-82 |
| <a id="p100115"></a>Патроны для ТФЭ с привитыми гексадецильными группами, 0,4 г |  |
| <a id="p100116"></a>Патроны для ТФЭ на основе силикагеля с постоянной активностью, 0,4 г |  |
| <a id="p100117"></a>Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см3 |  |
| <a id="p100118"></a>Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар |  |
| <a id="p100119"></a>Ультразвуковая ванна с рабочей частотой 35 кГц |  |
| <a id="p100120"></a>Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 000 об./мин |  |


<a id="p100121"></a>Примечание: Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100122"></a>ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ


<a id="p100123"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100124"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.


## 5. <a id="p100125"></a>ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ


<a id="p100126"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100207).


## 6. <a id="p100127"></a>УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100128"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100129"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100130"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100131"></a>ПОДГОТОВКА К ОПРЕДЕЛЕНИЮ



### <a id="p100132"></a>7.1. Кондиционирование колонки


<a id="p100133"></a>Перед началом анализа колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.


### <a id="p100134"></a>7.2. Приготовление растворов


<div align="center">

<a id="p100135"></a>7.2.1. Для приготовления элюента N 1 смешивают в мерной колбе на 100 см3 40 см3 ацетонитрила и 60 см3 бидистиллированной воды, используя мерные цилиндры.<br>
<a id="p100136"></a>7.2.2. Для приготовления элюента N 2 смешивают в мерной колбе на 100 см3 80 см3 гексана и 20 см3 диэтилового эфира, используя мерные цилиндры.

</div>

<a id="p100137"></a>7.2.3. Для приготовления элюента N 3 смешивают в мерной колбе на 100 см3 55 см3 гексана и 45 см3 диэтилового эфира, используя мерные цилиндры.
<a id="p100138"></a>7.2.4. Для приготовления элюента N 4 смешивают в мерной колбе на 100 см3 30 см3 ацетонитрила и 70 см3 бидистиллированной воды, используя мерные цилиндры.
<a id="p100139"></a>7.2.5. Для приготовления подвижной фазы в мерную колбу на 1 дм3 вносят 600 см3 ацетонитрила и доводят водой объем раствора до метки, встряхивая в течение 2 мин.


### <a id="p100140"></a>7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов


<a id="p100141"></a>7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску дифлубензурона (50 +/- 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
<a id="p100142"></a>Градуировочные растворы с концентрациями дифлубензурона 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил-вода в соотношении 60:40).

<div align="center">

<a id="p100143"></a>7.3.2. Раствор N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.

</div>

<a id="p100144"></a>7.3.3. Раствор N 2 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100145"></a>7.3.4. Раствор N 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
<a id="p100146"></a>7.3.5. Раствор N 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

<div align="center">

<a id="p100147"></a>Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

</div>

<a id="p100148"></a>При изучении полноты извлечения дифлубензурона в ягодах и соке смородины используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.


### <a id="p100149"></a>7.4. Построение градуировочного графика


<a id="p100150"></a>Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация дифлубензурона в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе.
<a id="p100151"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

<a id="p100152"></a>C = KS, где

<div align="center">

<a id="p100153"></a>S - площадь пика градуировочного раствора.

</div>

<a id="p100154"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100155"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100156"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<div align="center">

<a id="p100157"></a> $\frac{|C - C_{K}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}}$ , где

</div>


<a id="p100158"></a>C - аттестованное значение массовой концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе;
<a id="p100159"></a> $C_{K}$ - результат контрольного измерения массовой концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе;
<a id="p100160"></a> $\lambda_{\text{контр}}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. ( $\lambda_{\text{контр}} = 10%$ при P = 0,95).


### <a id="p100161"></a>7.5. Проверка хроматографического поведения дифлубензурона на патроне на основе силикагеля с постоянной активностью


<a id="p100162"></a>Патрон кондиционируют, последовательно промывая элюентом N 3 и гексаном (по 6 см3). В испарительную колбу емкостью 50 см3 отбирают 0,1 см3 раствора дифлубензурона в ацетонитриле концентрации 10 мкг/см3, добавляют 3 см3 элюента N 2 и помещают колбу в ультразвуковую ванну на 2 мин. Раствор вносят в кондиционированный патрон. Колбу обмывают 3 см3 элюента N 2 и также вносят в патрон. Затем патрон промывают 6 см3 элюента N 3. Отбирают фракции по 3 см3 каждая, упаривают, сухой остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ в ультразвуковой ванне (10 с) и анализируют на содержание дифлубензурона по [п. 9.3](#p100180).
<a id="p100163"></a>Фракции, содержащие дифлубензурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 9.3](#p100180). Рассчитывают содержание дифлубензурона в элюате, определяя полноту вымывания вещества и необходимый для очистки экстракта объем элюента.


### <a id="p100164"></a>7.6. Проверка хроматографического поведения дифлубензурона на патроне с гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецильными группами


<a id="p100165"></a>Кондиционирование патрона проводят так же, как описано в [п. 7.5](#p100161). В круглодонную колбу емкостью 50 см3 вносят 10 см3 воды, добавляют 0,1 см3 раствора дифлубензурона в ацетонитриле концентрации 10 мкг/см3, перемешивают и полученную смесь вносят в кондиционированный патрон. Патрон промывают 6 см3 элюента N 4 и 6 см3 ацетонитрила. Отбирают фракции по 3 см3 каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ в ультразвуковой ванне (10 с) и анализируют на содержание дифлубензурона по [п. 9.3](#p100180). Фракции, содержащие дифлубензурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 9.3](#p100180). Рассчитывают содержание дифлубензурона в элюате, определяя полноту вымывания вещества и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
<a id="p100166"></a>Примечание: профиль вымывания дифлубензурона с патрона может меняться при использовании новой партии патронов и растворителей.


### <a id="p100167"></a>7.7. Подготовка приборов и средств измерения


<a id="p100168"></a>Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.


## 8. <a id="p100169"></a>ОТБОР ПРОБ


<a id="p100170"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с [ГОСТ 6829-89](https://bukva.ai/docs/gost-6829-89) (СТ СЭВ 6534-88) "Смородина черная свежая. Требования при заготовках, поставках и реализации".


## 9. <a id="p100171"></a>ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ



### <a id="p100172"></a>9.1. Определение дифлубензурона в ягодах смородины


<a id="p100173"></a>9.1.1. Экстракция. Для экстракции дифлубензурона навеску массой (10 +/- 0,1) г ягод помещают в пробирку емкостью 50 см3, добавляют 30 см3 ацетонитрила, измельчают, перемешивают 1 - 2 мин вручную либо на встряхивателе, центрифугируют 10 мин при 4 000 об./мин, супернатант декантируют в мерный цилиндр на 100 см3. Экстракцию повторяют два раза. Объем объединенных растворов доводят ацетонитрилом до 100 см3. Для последующего анализа отбирают 20 см3 раствора (или аликвоту 20% экстракта) и переносят в испарительную колбу объемом 50 см3. Растворитель упаривают из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пунктам 9.1.2 и [9.1.3](#p100175).
<a id="p100174"></a>9.1.2. Очистка на патроне с привитыми гексадецильными группами. Экстракт растворяют в 2 см3 ацетонитрила и добавляют 8 см3 воды. Кондиционируют патрон, как описано в [п. 7.5](#p100161), и вводят в него экстракт (скорость потока не более 2 мл/мин). Обмывают колбу с остатком экстракта элюентом N 4 (6 см3), промывают патрон этим раствором, элюат отбрасывают. Патрон подсушивают током воздуха 1 мин. Аналит смывают в испарительную колбу объемом 50 см3 ацетонитрилом (объем 3 см3). Растворитель отгоняют из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Далее очистку экстракта проводят по п. 9.1.3.
<a id="p100175"></a>9.1.3. Очистка на патроне с гидрофильным сорбентом с постоянной активностью. Патрон кондиционируют по [п. 7.5](#p100161). Экстракт, очищенный по [п. 9.1.2](#p100174), растворяют в 2 см3 элюента N 2 и вносят в кондиционированный патрон. Колбу обмывают 5 см3 элюента N 2 и также вносят в патрон. Элюат отбрасывают. Аналит смывают элюентом N 3 (3 см3) в испарительную колбу объемом 50 см3. Растворитель упаривают из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C.
<a id="p100176"></a>Для проведения анализа растворяют сухой остаток в 1,2 см3 ацетонитрила в ультразвуковой ванне (10 с) и добавляют 0,8 см3 воды. После перемешивания в ультразвуковой ванне (10 с) 10 мм3 раствора вводят в хроматограф и проводят анализ по [п. 9.3](#p100180).


### <a id="p100177"></a>9.2. Определение дифлубензурона в соке смородины


<a id="p100178"></a>Патрон с привитыми гексадецильными группами кондиционируют, как описано в [п. 7.6](#p100164), и вводят в него 2 см3 сока (скорость вытекания раствора с патрона должна быть не более 2 см3/мин). Промыть колбу с остатком сока и картридж 6 см3 элюента N 4. Патрон подсушивают током воздуха 1 мин. Аналит смывают в испарительную колбу объемом 50 см3 ацетонитрилом (объем 3 см3). Растворитель упаривают из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C.
<a id="p100179"></a>Для проведения анализа растворяют сухой остаток в 1,2 см3 ацетонитрила в ультразвуковой ванне (10 с) и добавляют 0,8 см3 воды. После перемешивания в ультразвуковой ванне (10 с) 10 мм3 раствора вводят в хроматограф и проводят анализ по п. 9.3.


### <a id="p100180"></a>9.3. Условия хроматографирования


<a id="p100181"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 60:40 (по объему). Скорость потока элюента: 0,25 см3/мин. Рабочая длина волны ультрафиолетового детектора 260 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3.


## 10. <a id="p100182"></a>ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА


<a id="p100183"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание дифлубензурона в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

<div align="center">

<a id="p100184"></a> $X = \frac{S_{x} \cdot K \cdot V}{P} \cdot \frac{100}{f}$ , где

</div>


<a id="p100185"></a> $S_{x}$ - площадь пика дифлубензурона на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);
<a id="p100186"></a>K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100187"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
<a id="p100188"></a>P - навеска анализируемого образца, г;
<a id="p100189"></a>f - полнота извлечения дифлубензурона, приведенная в [табл. 2](#p100052), %.
<a id="p100190"></a>Содержание остаточных количеств дифлубензурона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.
<a id="p100191"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор дифлубензурона 1 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой.


## 11. <a id="p100192"></a>ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ


<a id="p100193"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

<a id="p100194"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , где (1)

<a id="p100195"></a> $X_{1}$ , $X_{2}$ - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100196"></a>r - значение предела повторяемости $(r = 2,8\sigma_{r})$ .
<a id="p100197"></a>При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100198"></a>ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ


<div align="center">

<a id="p100199"></a>Результат анализа представляют в виде:

</div>


<a id="p100200"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ мг/кг при вероятности P = 0,95, где

<a id="p100201"></a> $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100202"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<div align="center">

<a id="p100203"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

</div>


<a id="p100204"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100205"></a>В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
<a id="p100206"></a>содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,001 мг/кг*, где * - 0,001 мг/кг - предел обнаружения дифлубензурона в ягодах смородины).


## 13. <a id="p100207"></a>КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100208"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100209"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100210"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100211"></a>Величина добавки $C_{\text{д}}$ должна удовлетворять условию:

<div align="center">

<a id="p100212"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime}$ , где

</div>


<a id="p100213"></a> $\pm \Delta_{\text{л},X}$ , $( \pm \Delta_{\text{л},X\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг;
<a id="p100214"></a>при этом:

<a id="p100215"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta$ , где

<div align="center">

<a id="p100216"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

</div>


<a id="p100217"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100218"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100219"></a>Результат контроля процедуры $K_{\text{к}}$ рассчитывают по формуле:

<div align="center">

<a id="p100220"></a> $K_{\text{к}} = X\prime - X - C_{\text{д}}$ , где

</div>


<a id="p100221"></a>X', X, $C_{\text{д}}$ - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100192)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
<a id="p100222"></a>Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

<a id="p100223"></a> $K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}$ .

<a id="p100224"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры $(K_{\text{к}})$ с нормативом контроля (K).
<a id="p100225"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<div align="center">

<a id="p100226"></a> $|K_{\text{к}}| \leq K$ , (2)

</div>


<a id="p100227"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100228"></a>При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
<a id="p100229"></a>13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
<a id="p100230"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R):

<a id="p100231"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R$ , где (3)

<div align="center">

<a id="p100232"></a> $X_{1}$ , $X_{2}$ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;<br>
<a id="p100233"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

</div>




<a id="p100234"></a>

---